一种新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药领域，具体涉及一种新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]目前癌症的发病率高，因其早期诊断效率低，筛查手段有限，确诊时多数癌症患者已属于晚期。癌症患者的治疗包括彻底的肿瘤减灭辅以一线联合化疗方案，对60%?80%的初治癌症患者有一定疗效，但其中50%?80%的患者会在初治后复发。并且，化疗药物虽然能够有效的杀死肿瘤细胞，但是化学疗法最大的缺点是不能够将足够量的药剂输送到身体的病灶部位，并且化疗药物具有较强的毒副作用。而小分子药物具有快速从体内清除的特点因而又需要大量的药物。此外，还有一些患者因为无法耐受化疗药物的毒性反应而终止化疗，从而导致癌症进展迅速甚至死亡。因此，在保障患者生活质量的前提下提高化疗疗效是当前癌症治疗中亟待解决的问题。
[0003]阿霉素(doxorubicin，Dox)又称多柔比星，属于高效的广谱抗癌药物。在临床应用时，Dox主要通过插入细胞DNA，引发拓扑异构酶Π破坏DNA的三级结构来发挥药效的。迄今为止，Dox单独或与其他抗肿瘤药物联合用药，均被认为是治疗实体肿瘤，如:乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、肝癌等的一种强有力的化疗药物，亦是治疗卵巢癌极为有效的药物之一。但由于其心脏毒性等副作用使应用受限，阿霉素作为化疗药物，主要毒副作用有手足综合征、黏膜炎、骨髓抑制;对复发和难治性卵巢癌有一定的作用，特别是对铂类敏感患者，生存期及总费用较应用拓扑替康有明显优势，但对铂类耐药患者却不能提高生存率。因此，研究新的药物剂型，通过将药物靶向输送到肿瘤部位达到靶向治疗是当前亟待解决的问题。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于针对现有技术的不足，现提供一种以胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球为载体的新型负载阿霉素的纳米级药物载体及其制备方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为:一种新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米级药物载体，其创新点在于:由阿霉素和载体构成，所述载体为胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球，所述新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的颗粒直径为75-115nm。
[0006]本发明的另一个目的是公开一种新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备方法，其创新点在于:包括3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成、胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球的制备和负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备三个步骤，完成新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备;具体步骤如下:
3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成的具体步骤如下: (1)将5.16g氢氧化钠用双蒸馏水制成50ml水溶液，将5.0g间氨基苯硼酸一水合物溶解在氢氧化钠水溶液中；
(2)在10分钟内将5.2mL64.4mmol的丙烯酰氯搅拌下逐滴加入上述的冷却溶液中，搅拌30分钟，随后升到室温并继续搅拌2小时；
(3)将步骤(2)所得的混合物用盐酸调节pH到8，过滤得到沉淀物，选用25mL冷水进行洗涤，所述洗涤次数为3次，然后在真空环境下进行干燥；
(4)将步骤(3)干燥所得的沉淀物溶解于50mL乙醇水溶液中，所述乙醇水溶液中的乙醇与水的体积比为80:20，过滤，将过滤液静置过夜，过滤所得白色固体，在真空环境下进行干燥，得到白色固体，即完成了 3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成；
胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球的制备的具体步骤如下:
(5)将120mg胶原蛋白-1型和90mg3-丙稀酰胺基苯硼酸加热溶解于1mL蒸馈水中，所述加热温度为40-50°C ；自然冷却；
(6)将9.4mg的4，4-偶氮双加入到步骤(5)所得的冷却溶液中，再用氢氧化钠水溶液调节溶液的PH值到6.3;利用水浴锅将反应溶液加热到90°C，缓慢搅拌，反应混合物会慢慢变蓝，完成胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球的制备；
负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备的具体步骤如下:
(7)将制备的5mg/mL胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球溶液用氢氧化钠的水溶液调节PH值到8.4，所述胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球溶液为5ml;
(8)将ImL浓度为3mg/mL的盐酸阿霉素水溶液逐滴加入到纳米微球的水溶液中，搅拌下反应12小时，离心去上清，将沉淀物重新分散在水溶液中或5%葡萄糖的注射液中，即完成了负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备。
[0007]本发明的有益效果如下:
(I)本发明的载药纳米微球在不同PH值溶液中释放实验结果证明负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体作为阿霉素抗肿瘤药物的载体，可以有很好缓释的效果和肿瘤部位选择性释放的特性。空白的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球对细胞没有细胞毒性。载药纳米微球有较好的缓释功能及潜在降低毒副作用的可能。在相同的给药剂量下，载药纳米微球组对皮下移植瘤的增长有较好的抑制作用。
[0008](2)本发明制备方法制得的纳米微球粒径较均一，分散性好，温度在25-55°C之间，纳米载体稳定性好，由于阿霉素在酸碱溶液中存在方式不一样，在酸性溶液中，阿霉素是水溶性离子的形式，在碱性溶液中，阿霉素是非离子的疏水性中性形式，因而我们制备的纳米级药物载体在不同PH的液体中的释放试验表明在pH为7.4的溶液中，只有大约6%的阿霉素从纳米微球中释放出来。当溶液的pH降低到6.0时，释放量增多，约有19%的负载的阿霉素从纳米微球中释放出来。随着pH值的继续降低至5.0时，释放量继续增大，约有33%的负载的阿霉素从纳米微球中释放。当pH降低至4.0时，释放量明显增大，约有76%的负载的阿霉素从纳米微球中释放。因而我们可以得出，负载阿霉素的纳米微球在中性溶液中释放少量阿霉素，且释放缓慢，在酸性溶液中具有快速释放大量阿霉素。此种在中性溶液中释放少，在酸性溶液中快速释放的现象，在肿瘤的研究当中是有重大意义的，对于肿瘤组织有很好的选择性。通过释放实验结果，证明负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)作为阿霉素抗肿瘤药物的载体，可以有很好缓释的效果和肿瘤部位选择性释放的特性。
【具体实施方式】
[0009]以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
[0010]—种新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体，由阿霉素和纳米载体构成，载体为胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球，新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的颗粒直径为75-115nm。
[0011]实施例1
一种新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备方法，包括3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成、胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球的制备和负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备三个步骤，完成新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备；具体步骤如下:
3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成的具体步骤如下:
(1)将5.16g氢氧化钠用双蒸馏水制成50ml水溶液，将5.0g间氨基苯硼酸一水合物溶解在氢氧化钠水溶液中；
(2)在10分钟内将5.2ml64.4mmol的丙烯酰氯搅拌下逐滴加入上述的冷却溶液中，搅拌30分钟，随后升到室温并继续搅拌2小时；
(3)将步骤(2)所得的混合物用盐酸调节pH到8，过滤得到沉淀物，选用25mL冷水进行洗涤，洗涤次数为3次，然后在真空环境下进行干燥；
(4)将步骤(3)干燥所得的沉淀物溶解于50mL乙醇水溶液中，乙醇水溶液中的乙醇与水的体积比为80: 20，过滤，将过滤液静置过夜，过滤所得白色固体，在真空环境下进行干燥，得到白色固体，即完成了 3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成；
胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球的制备的具体步骤如下:
(5)将120mg胶原蛋白-1型和90mg3-丙稀酰胺基苯硼酸加热溶解于1mL蒸馈水中，加热温度为40°C ；自然冷却；
(6)将9.4mg的4，4-偶氮双加入到步骤(5)所得的冷却溶液中，再用氢氧化钠水溶液调节溶液的PH值到6.3;利用水浴锅将反应溶液加热到90°C，缓慢搅拌，反应混合物会慢慢变蓝，完成胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球的制备；
负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备的具体步骤如下:
(7)将制备的5mg/mL胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球溶液用氢氧化钠的水溶液调节PH值到8.4，胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)纳米微球溶液为5ml;
(8)将ImL浓度为3mg/mL的盐酸阿霉素水溶液逐滴加入到纳米微球的水溶液中，搅拌下反应12小时，离心去上清，将沉淀物重新分散在水溶液中或5%葡萄糖的注射液中，即完成了负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的制备。
[0012]本实施例下制备得到的新型负载阿霉素的胶原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的纳米级药物载体的颗粒直径为79.3nm。
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