一种抑制三阴性乳腺癌的药物和功能食品的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及细胞生物学和制药领域，具体地说，涉及一种抑制三阴性乳腺癌的药 物和功能食品。
【背景技术】
[0002] 三阴性乳腺癌(TNBC)是指癌组织免疫组织化学检查结果为雌激素受体(ER)、孕激 素受体(PR)和原癌基因 Her-2均为阴性的乳腺癌。这类乳腺癌占所有乳腺癌病理类型的 10.0%~20.8%，具有特殊的生物学行为和临床病理特征，预后较其他类型差。
[0003] 三阴性乳腺癌作为一种乳腺癌特殊亚型，具有侵袭力强、远处转移风险大等特点， 目前没有任何靶向药物，且易于复发转移。临床上目前尚无针对性的治疗方案。多数患者接 受蒽环类、环磷酰胺等广谱化疗治疗，一旦复发转移，可选择的药物极少，患者预后极差。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种抑制三阴性乳腺癌的药物和功能食品。
[0005] 为了实现本发明目的，本发明的一种抑制三阴性乳腺癌的药物，所述药物的有效 成分为矢车菊素-3-0-葡萄糖苷<^5^]11(1;[11-3-0-8111(3081(16,036)。036的结构式如下 ：
[0007] 所述药物还包括药学上可接受的辅料或辅助性成分。
[0008] 所述药物为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、泡腾片、注射剂等 剂型。
[0009] 本发明的抑制三阴性乳腺癌的药物，所述药物的单次剂量单元为矢车菊素-3-0-葡萄糖苷50~150mg/Kg体重。
[0010] 本发明还提供一种抑制三阴性乳腺癌的功能食品，所述功能食品中含有矢车菊 素-3-0-匍萄糖苷。
[0011] 本发明还提供一种抑制三阴性乳腺癌的组合物，所述组合物中包含矢车菊素 ?ο-葡萄糖苷。
[0012] 本发明进一步提供矢车菊素-3-0-葡萄糖苷在制备抑制三阴性乳腺癌的药物、功 能食品和保健品中的应用。
[0013]本发明采用细胞培养的方法，证明C3G能够抑制三阴性乳腺癌细胞系的生长。使用 免疫组化方法在三阴性乳腺癌病人石蜡切片中进一步验证了 C3G的抑制作用，并利用MST技 术证实C3G与雌激素受体ERa36直接相互作用。实验表明，C3G能够在人三阴性乳腺癌细胞系 MDA-MB-231、MDA-MB-436、BT20细胞内（in vitro)显著促进癌细胞的凋亡，而对其他非三阴 性乳腺癌和正常乳腺细胞系没有作用。在本发明的一个【具体实施方式】中，提供一种针对三 阴性乳腺癌的功能食品，该食品能够在人三阴性乳腺癌裸鼠移植模型上（in vivo)显著降 低肿瘤的大小和恶性程度，可作为治疗TNBC的辅助性功能食品、保健品，用于TNBC相关疾病 的防治。
[0014] 本发明首次揭示了矢车菊素 -3-0-葡萄糖苷具有抑制三阴性乳腺癌的功效，在此 基础上开发出抑制三阴性乳腺癌的药物和辅助性功能食品、保健品，对三阴性乳腺癌的预 防和治疗具有重要的临床意义。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明实施例1中矢车菊素-3-0-葡萄糖苷促进三阴性乳腺癌细胞凋亡的实 验结果。
[0016] 图2为本发明实施例1中利用MST技术验证C3G与雌激素受体ERa36的相互作用结 果。
[0017] 图3为本发明实施例1中利用免疫组化法检测三阴性乳腺癌病人中ERa36的表达水 平。
[0018] 图4为本发明实施例1中验证C3G对三阴性乳腺癌裸鼠模型的肿瘤抑制。
【具体实施方式】
[0019] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[0020] 本发明中涉及到的百分号"％"，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分 比，除另有规定外，是指l〇〇mL溶液中含有溶质的克数。
[0021 ]以下实施例中使用的矢车菊素-3-0-葡萄糖苷购自挪威Polyphenols公司，HPLC检 测〇36含量大于97%。
[0022]实施例1矢车菊素-3-0-葡萄糖苷促进三阴性乳腺癌细胞的凋亡
[0023] 1、体外实验
[0024] CCK-8法检测细胞生长抑制：
[0025] 利用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)进行细胞增殖和细胞毒性的快速高灵 敏检测。检测原理:在电子耦合试剂存在的情况下，水溶性四唑盐WST-8可以被线粒体内的 一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大， 则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
[0026] 将三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-436、BT20传代接种至96孔板，待细胞长 到适宜浓度，分别用低浓度150μΜ，高浓度500μΜ的矢车菊-3-0-葡糖苷处理24h、48h、72h后， 每孔加入1〇μ1 CCK-8溶液，37°C，5%C02条件下孵育2小时，用酶标仪在450nm波长下测定吸 光度。
[0027]结果如图1所示，体外实验表明，当C3G浓度为500μΜ时能明显抑制三阴性乳腺癌细 胞MDA-MB-231、MDA-MB-436、BT20的生长，而对其他非三阴性乳腺癌细胞MCF-7、SK-BR-3以 及正常乳腺上皮细胞MCF-10A没有作用。
[0028]利用MST技术验证C3G与雌激素受体ERa36的相互作用，用微量热泳动仪MST进行检 测。结果如图2所示，C3G与ERa36蛋白有直接结合作用，解离常数KD值为31.4 ± 1.88μΜ。
[0029] 另外，在三阴性乳腺癌病人中ERa36的表达水平也很高，进一步利用免疫组化法检 测了ERa36的表达。在随机选取的32例三阴性乳腺癌病人中，有24例表达ERa36,如图3所示， ERa36表达在细胞膜上。
[0030] 2、体内实验
[0031 ]①首先建立乳腺癌肿瘤模型，将培养至对数生长期的MDA-MB-231-luc细胞2 X 106 个注入6周龄的平均体重为18g的裸鼠体内，使之成瘤。
[0032]②给小鼠饲喂矢车菊素-3-0-葡萄糖苷的饲料观察其对肿瘤的抑制作用，共设三 组：
[0033] 空白对照组:注入等体积PBS，饲喂普通饲料；
[0034] 肿瘤模型组:每只小鼠注入2X 106个MDA-MB-231-luc细胞，饲喂普通饲料；
[0035] 矢车菊素-3-0-葡萄糖苷处理组:每只小鼠注入2X106个MDA-MB-231-luc细胞，饲 喂含矢车菊素_3-〇_葡萄糖苷的饲料，平均每只小鼠每天施药量为2mg。
[0036] ③实验结果如图4所示，裸鼠食用含C3G的饲料6周后肿瘤体积明显缩小。
[0037] 实施例2矢车菊素-3-0-葡萄糖苷在制备抑制三阴性乳腺癌的药物中的应用
[0038] 矢车菊素 -3-0-葡萄糖苷分子中存在高度分子共辄体系，具酸性与碱性基团，易溶 于水、甲醇、乙醇、稀碱与稀酸等极性溶剂中；不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，遇醋酸铅试剂 会沉淀，并能被活性炭吸附。在紫外与可见光区域均具较强吸收，紫外区最大吸收波长在 280nm附近，可见光区域最大吸收波长在500~550nm范围内。其颜色随pH值的变化而变化， pH〈7呈红色，pH在7~8时呈紫色，ρΗ>11时呈蓝色。
[0039]根据矢车菊素 -3-0-葡萄糖苷的上述理化性质，制备抑制三阴性乳腺癌的药物，所 述药物的单次剂量单元为矢车菊素 -3-0-葡萄糖苷50~150mg/Kg体重。
[0040]实施例3矢车菊素 -3-0-葡萄糖苷在制备抑制三阴性乳腺癌的功能食品中的应用 [0041 ]功能食品的各成分组成如下：
[0042] 水 70 ~80g/Kg
[0043] 蛋白 180 ~220g/Kg
[0044] 脂肪 40 ~60g/Kg
[0045] 粗纤维 40 ~50g/Kg
[0046] 粗灰分 50 ~65g/Kg
[0047] |丐 12~14g/Kg
[0048] 憐8 ~10g/Kg
[0049] 镁2 ~4g/Kg
[0050] 钾5 ~7g/Kg [0051 ]钠 2 ~4g/Kg
[0052]铁150~200mg/Kg
[0053] 锰75~lOOmg/Kg
[0054] 铜 150 ~200mg/Kg
[0055] 锌 60 ~80mg/Kg
[0056] 鹏5 ~7mg/Kg
[0057] 硒0·1~0·2mg/Kg
[0058] 矢车菊素-3-0-葡萄糖苷200~1000mg/Kg
[0059] 结果表明，功能食品中矢车菊素-3-0-葡萄糖苷的有效剂量为200~1000mg/Kg，其 中最佳剂量为420mg/Kg。
[0060] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种抑制三阴性乳腺癌的药物，其特征在于，所述药物的有效成分为矢车菊素-3-0-葡萄糖苷。2. 根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料或辅 助性成分。3. 根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶 液剂、乳剂、混悬剂、泡腾片、注射剂。4. 根据权利要求1-3任一项所述的药物，其特征在于，所述药物的单次剂量单元为矢车 菊素-3-0-葡萄糖苷50~150mg/Kg体重。5. 一种抑制二阴性乳腺癌的功能食品，其特征在于，所述功能食品中含有矢车菊素-3-0-葡萄糖苷。6. -种抑制三阴性乳腺癌的组合物，其特征在于，所述组合物中包含矢车菊素-3-0-葡 萄糖苷。7. 矢车菊素-3-0-葡萄糖苷在制备抑制三阴性乳腺癌的药物和功能食品中的应用。
【专利摘要】本发明提供一种抑制三阴性乳腺癌的药物和功能食品，所述药物和功能食品中的有效成分为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。本发明首次揭示了矢车菊素-3-O-葡萄糖苷具有抑制三阴性乳腺癌的功效，在此基础上开发出抑制三阴性乳腺癌的药物和辅助性功能食品、保健品，对三阴性乳腺癌的预防和治疗具有重要的临床意义。
【IPC分类】A61K31/7048, A23L33/10, A61P15/14, A61P35/00
【公开号】CN105616433
【申请号】CN201510997713
【发明人】李向东, 郭仰东, 王丽
【申请人】中国农业大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月25日