桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术制药工程技术领域，尤其涉及一种桑叶中降糖小分子活性组 分的提取方法。
【背景技术】
[0002] 桑叶，桑科中植物桑的干燥叶，味苦、甘，性寒。在古代，中医就以桑叶作中药治疗 消渴症;现代桑叶也常配伍与中药复方应用于临床治疗。研究表明，桑叶是上好的功能产 品，具有提高免疫力、降血糖、抗肿瘤、抗病毒、抗肥胖、延缓衰老等功能。现阶段，已分别研 究了桑叶中多糖、生物碱、黄酮等对降血糖起到较显著的作用，但桑叶中小分子物质对降血 糖的作用却很少被报道。
[0003] 大量研究表明PPARy与2型糖尿病的发生相关性很大。PPARy是核受体超家族成 员，被激活后可以促进脂肪细胞的分化，通过相关调节使对胰岛素敏感的小脂肪细胞的数 量增加，脂联素分泌增多，改善胰岛素抵抗，使机体对胰岛素的敏感性增强，是目前人们研 究抗糖药物的一种有效途径。
【发明内容】
[0004] 本发明针对以上现有技术，提供一种低成本、快速、简洁地从桑叶中提取具有降糖 活性的小分子组分的方法。
[0005] 为达到上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：
[0006] -种桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，该方法包括以下步骤：
[0007] (1)取洗净并干燥的桑叶，粉碎，得到桑叶粉；
[0008] (2)放入干燥洁净的容器中，加入蒸馏水，震荡混匀，然后加热至75-100 °C煎煮2-4h，过滤；
[0009] (3)取滤渣重复步骤(2)1-3次，合并所得滤液，得粗提液；
[0010] (4)在粗提液中加入乙醚进行萃取脱脂处理，萃取完成后取上层水液，浓缩至原体 积的 1/2-1/4;
[0011] (5)加入2-4倍体积的无水乙醇浸提，离心，所得上清液烘干，然后依次用无水乙 醇、丙酮、乙醚洗涤2-4次，烘干得粗提物；
[0012] (6)在粗提物中加入蒸馏水进行复溶，使用25000-35000分子量的超滤膜进行超 滤，收集滤过液，烘干，得到目的小分子活性组分。
[0013] 所述步骤(2)中桑叶粉或滤渣与蒸馏水的料液比为1: (20-40) (g/mL)。
[0014]所述步骤(4)中乙醚与粗提液的体积比为1:(10-20)。
[0015]所述步骤(6)中粗提物与蒸馏水的料液比为1: (10-20)(g/mL)。
[0016] 所述步骤(6)中超滤的条件为:室温20-30°C，驱动压力0.25MPa。
[0017]本发明采用水提醇沉法，加上中间步骤的乙醚萃取脱脂，粗提桑叶中的有效活性 成分;然后通过超滤技术分离上述初提物，进一步获取桑叶中的小分子活性组分。由于水提 醇沉法得到的上清液含有较多的多糖、蛋白质等大分子复合物，具有较强的吸水性，故单凭 烘干无法除去其中的水分，会使沉淀产物含有较多的水分，影响产物性状(呈胶状，而非粉 末状固体)和纯度(无法进行精确的定量分析）。醇沉后用无水乙醇洗涤，除去一部分水分； 再用可溶于水的丙酮洗涤，确保水分除净;最后用无水乙醚洗涤沉淀物，除去残存的乙醇、 丙酮和溶于其中的水分，这样就可以有效除去醇沉上清中的水分，得到较纯的粉末状粗提 活性组分，以利于工业化大规模进一步地分离纯化。采用超滤技术分离上述粗提活性组分 得到的小分子活性组分，运用Hela高通量细胞筛选模型，检测其有效组分活性，结果显示其 含有PPAR γ配体的激活效应，能激活PPAR γ信号通路，可作为PPAR γ激活剂，且安全有效， 毒性较低，不会引起并发症。
[0018] 本发明提供了一种低成本、快速、简洁地提取桑叶中活性小分子组分的方法，该活 性小分子组分被证明可作为抗糖尿药物的有效活性组分，且安全有效，毒性较低。本发明适 用于活性小分子抗糖尿药物的提取，可有效降低降糖活性小分子药物的成本，且方法简便， 能够有效满足工业化大规模生产需求。
【具体实施方式】
[0019] 以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示 性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语 具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。
[0020] 实施例1:桑叶中降糖小分子活性组分的提取
[0021] 1.桑叶中有效成分的粗提
[0022] (1)称取洗净并干燥的桑叶50g，粉碎，得到桑叶粉；
[0023] (2)放入干燥洁净的锥形瓶中，加入1L蒸馏水，即料液比1:20(g/mL)，震荡均勾，将 样品于100°C煎煮2h，过滤；
[0024] (3)取滤渣按步骤(2)重复提取2次，合并所得滤液，得粗提液；
[0025] (4)在粗提液中加入200mL乙醚进行脱脂处理，离心，留滤液，浓缩至原体积的1/4;
[0026] (5)加入3倍体积的无水乙醇浸提，静置过夜，离心，取上清液初步烘干，然后用无 水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤3次，烘干，称重，初提物的得率为9.24%。
[0027] 2.超滤技术提取初提物中的目的小分子有效成分
[0028]加适量水复溶初提物，粗提物与蒸馏水的料液比为1:10(g/mL)，使用30000分子量 的超滤膜，在25°C的温度下，驱动压力为0.25MPa进行超滤，截留初提物中的多糖、蛋白质等 大分子物质，取滤过液，烘干，为目的小分子组分，计算得率为60 %。
[0029]实施例2:利用Hela细胞模型检测目的小分子组分活性
[0030]将得到的目的小分子组分用DMS0溶解，配成5g/L的样品，运用Hela高通量细胞筛 选模型检测样品活性的高低。结果如表1所示。
[0031 ]表1提取样品与罗格列酮激活倍数的比较
[0033]实施例3:利用Hela细胞模型检测目的小分子组分活性
[0034]在得到的目的小分子组分中混入2%的壳寡糖，然后用DMS0溶解，配成5g/L的样 品，运用Hela高通量细胞筛选模型检测样品活性的高低，活性并未见明显变化。结果如表2 所示。
[0035]表2含壳寡糖样品与罗格列酮激活倍数的比较
[0037] 由以上实施例可知，本发明可以简洁、快速地获取桑叶中PPARy激活剂，并且安全 有效，较罗格列酮毒性低，可应用于规模化生产抗糖尿药物中。接下去我们将大规模制备该 抗糖尿小分子活性组分，并进一步分离纯化，以获得高纯度的抗糖尿小分子活性物质，并进 一步研究其抗糖尿作用机理或作用途径，为人类的健康贡献微薄力量。
[0038] 以上所述，仅为本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员 来说，在不脱离本发明的核心技术的前提下，还可以做出改进和润饰，这些改进和润饰也应 属于本发明的专利保护范围。与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都 应认为是包括在权利要求书的范围内。
【主权项】
1. 一种桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 取洗净并干燥的桑叶，粉碎，得到桑叶粉； (2) 放入干燥洁净的容器中，加入蒸馏水，震荡混匀，然后加热至75-100°C煎煮2-4h，过 滤； (3) 取滤渣重复步骤(2) 1-3次，合并所得滤液，得粗提液； (4) 在粗提液中加入乙醚进行萃取脱脂处理，萃取完成后取上层水液，浓缩至原体积的 1/2-1/4; (5) 加入2-4倍体积的无水乙醇浸提，离心，所得上清液烘干，然后依次用无水乙醇、丙 酮、乙醚洗涤2-4次，烘干得粗提物； (6) 在粗提物中加入蒸馏水进行复溶，使用25000-35000分子量的超滤膜进行超滤，收 集滤过液，烘干，得到目的小分子活性组分。2. 根据权利要求1所述的桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，其特征在于:所述步 骤(2)中桑叶粉或滤渣与蒸馏水的料液比为1: (20-40)。3. 根据权利要求1所述的桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，其特征在于:所述步 骤(4)中乙醚与粗提液的体积比为1:(10-20)。4. 根据权利要求1所述的桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，其特征在于:所述步 骤(6)中粗提物与蒸馏水的料液比为1: (10-20)。5. 根据权利要求1所述的桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，其特征在于:所述步 骤(6)中超滤的条件为:室温20-30 °C，驱动压力0 · 25MPa。
【专利摘要】本发明提供一种桑叶中降糖小分子活性组分的提取方法，包括以下步骤：取桑叶粉碎，得桑叶粉；桑叶粉中加入蒸馏水，震荡混匀，在75-100℃煎煮2-4h，过滤，取滤渣重复1-3次，合并滤液得粗提液；粗提液中加入乙醚萃取脱脂，完成后取上层水液并浓缩至1/2-1/4；加入无水乙醇浸提，离心，取上清液烘干，然后依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，烘干；加入蒸馏水复溶，25000-35000分子量超滤膜超滤，收集滤过液，烘干，得到目的小分子活性组分。本发明提供了一种低成本、快速、简洁地提取桑叶中活性小分子组分的方法，该活性小分子组分被证明可作为抗糖尿药物的有效活性组分，且安全有效，毒性较低。
【IPC分类】A61P3/10, A61K127/00, A61K36/605
【公开号】CN105616504
【申请号】CN201610115139
【发明人】吕正兵, 舒建洪, 白静, 李倩, 宋如鋆, 任飞
【申请人】杭州蚕宝生物技术有限公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年3月1日