咖啡酸在食管癌治疗中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及咖啡酸的新用途，尤其是涉及一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用。
【背景技术】
[0002]咖啡酸(Caffeic Acid)，又称3，4一二羟基肉桂酸，是一种从中药如丹参、野胡萝卜、光叶水苏、荞麦、木半夏、咖啡菊科植物等中提取的天然产物，具有以下作用:
1、抗菌抗病毒:具有较广泛的抑菌作用，但在体内能被蛋白质灭活。体外试验表明，有抗病毒活性，对牛痘和腺病毒抑制作用较强，其次为脊髓灰质炎I型和副流感m型病毒。
2、抗蛇毒:咖啡酸3微克剂量时能完全抑制20微克响尾蛇毒磷酸二酯酶，用作抗蛇毒剂。
3、其他作用:口服或腹腔注射时，咖啡酸可提高大鼠的中枢兴奋性；口服，可增加人胃中盐酸的分泌量，并能使脉搏变慢;可增强子宫的张力，此作用可被罂粟碱所拮抗，而阿托品则不能影响；可增进大鼠胆汁分泌。有升高白血球和血小板、止血及灭活维生素BI等作用。能抑制鼠脑组织匀浆脂质过氧化物的生成。有缩短血凝及出血时间的作用。
[0003]食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一，死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第二位，仅次于胃癌。化疗是治疗食管癌及术后患者的方法之一，但化疗药物对骨髓抑制较严重，容易引起白细胞减少等。
[0004]国内在中医文献中曾有报道，咖啡酸有一定抗肿瘤治疗及提高免疫力作用，但是，仅为个案报道。疗效不明显，治疗机理不清楚，数据不完整。目前咖啡酸用于食管癌肿瘤细胞治疗方面未见有文献报道。
【发明内容】
[0005]为解决上述问题，本发明的目的是提供一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用，具体地，是作为分子靶向药物在食管癌治疗中的应用。
[0006]为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案:
一种咖啡酸在食管癌治疗中的应用，作为食管癌肿瘤细胞内组蛋白去甲基化酶GASCl基因的抑制剂。
[0007]上述的咖啡酸在食管癌治疗中作为分子靶向药物，能够抑制食管癌肿瘤细胞的生长和/或抑制肿瘤的复发、转移，减小癌细胞繁殖。
[0008]上述的咖啡酸在食管癌治疗中作为表观遗传学药物，实现多个靶点治疗。
[0009]上述的食管癌肿瘤包括各种实体原发性肿瘤、转移性肿瘤或复发性肿瘤。
[0010]上述的咖啡酸可以制成任何可口服药用的剂型，这些剂型包括:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、丹剂、混悬剂。
[0011 ]上述的咖啡酸是现有技术，可以从市场上买到，也可以根据现有技术制备，符合药用标准。
[0012]分子靶向治疗，是在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点(该位点可以是一个基因片段)，来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞。
[0013]咖啡酸作为组蛋白去甲基化酶GASCl (Gene amplified in squamous cellcarcinoma I)的抑制剂，通过特异性阻断GASCl分子革E点可抑制干性核心转录因子S0X2核心启动子上组蛋白H3K9me3去甲基化，通过维持组蛋白H3K9me3的高甲基化状态抑制干性核心转录因子S0X2的转录活性及表达，影响其表观遗传修饰功效，从而在食管癌细胞增殖及干性维持中发挥抑制作用。
[0014]由于采用如上所述的技术方案，本发明具有如下优越性:
本发明利用咖啡酸作为分子靶向药物抑制食管癌肿瘤细胞的生长和/或抑制肿瘤的复发、转移，减小癌细胞繁殖，为食道癌提供了有效的治疗手段;表观遗传抗癌药物与传统化疗药物之间的联合应用，可实现多靶点治疗及最大限度发挥减毒增效作用。
【附图说明】
[0015]图1:人食管癌肿瘤细胞增值抑制率曲线图；
图2:人食管癌肿瘤细胞克隆形成实验示意图；
图3:人食管癌肿瘤细胞克隆形成实验柱状统计图；
图4:咖啡酸对人食管癌肿瘤细胞活性影响示意图；
图5:人食管癌肿瘤细胞克隆成球实验结果示意图；
图6:人食管癌肿瘤细胞球的自我更新示意图；
图7:免疫缺陷裸小鼠食管癌肿瘤体积随咖啡酸注射时间变化的统计图；
图8:不同浓度咖啡酸治疗后食管癌干细胞异体移植瘤活体随注射时间呈像信号强度变化图；
图9:不同浓度咖啡酸治疗后食管癌干细胞肺部转移瘤活体随注射时间呈像信号强度变化图；
图10:免疫缺陷裸小鼠肺部克隆成瘤数量比较散点图。
【具体实施方式】
[0016]参照以下实施例可以对本发明作进一步详细说明；但是，以下实施例仅仅是例证，本发明并不局限于这些实施例。
[0017]实施例1
1、人食管癌肿瘤细胞培养
(1)、细胞传代前提前做好培养瓶包被(培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被，效果较好)；
(2)、每日换液；
(3)、细胞汇合度达80?90%时传代，传代比例为1:8或1:10；
(4)、在细胞生长至铺满培养瓶80?％时，光学显微镜下观察细胞的生长情况并拍照;细胞传至第5代后，消化细胞，取6孔板，将细胞爬片置于6孔板内。取待用细胞缓慢滴加至细胞爬片上，覆盖至整个爬片。将6孔板置于培养箱内37 °C继续培养，随后取出6孔板，光学显微镜下观察爬片上的细胞贴壁是否良好，随后可用于干细胞标记物免疫细胞荧光(ICC) 检测；
(5)、细胞传至第5代后，消化细胞，进行ALDEFLUOR ?细胞检测。
[0018]2、食管癌CSC干性维持及自我更新能力的检测
贴壁培养的食管癌原代培养CSC细胞制成细胞悬液，15ml离心管lOOOr/min离心5min收集细胞，I XPBS洗细胞I次，再离心收集细胞，用干细胞培养基重悬细胞，调整细胞浓度至25000个细胞/ml。
[0019]初级细胞球培养:将重悬于干细胞培养基、细胞密度为25000细胞/ml的原代培养CSC加于24孔超低吸附培养皿中，每孔加细胞悬液0.5ml，用于细胞微球拍照、计数和初级细胞球ALDHbri+Eso/ALDHlow-Eso百分比检测；用于总RNA提取的细胞培养于在6孔超低吸附培养皿，每孔加细胞悬液Iml培养液，细胞密度为25000个细胞/ml。其间，在第3天更换新鲜干细胞培养基，