含有多不饱和脂肪酸的组合物及其使用方法
【专利说明】
[0001 ]本申请是2006年5月23日提交的、发明名称为"含有多不饱和脂肪酸的组合物及其 使用方法"的中国专利申请200680026945.4的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明提供提高或增强神经细胞或脑细胞对憐脂、突触、突触蛋白和突触膜的合 成及水平的方法；治疗患有记忆障碍、记忆损伤、神经障碍或者脑疾病或病症的个体的方 法，其包括向所述个体给药包含《-3脂肪酸、CO-6脂肪酸、尿巧、其代谢前体或它们的组合 的组合物。
【背景技术】
[0003] 痴呆是一种脑病症，其严重影响一个人进行日常活动的能力。老年人中痴呆的最 常见形式是阿尔茨海默病(AD)，其最初设及控制思维、记忆和语言的脑的部分。很多权威观 点认为记忆和认知（思维）功能下降是衰老的正常后果。患有ARCD的人经历记忆和学习、注 意和专注、思维、语言的运用W及其他精神功能的衰退。本领域迫切需要治疗运些疾病和病 症的方法。
【发明内容】
[0004] 本发明提供提高或增强神经细胞或脑细胞对憐脂、突触、突触蛋白和突触膜的合 成及水平的方法；治疗患有记忆障碍、记忆损伤、神经障碍或者脑疾病或病症的个体的方 法，其包括向所述个体给药包含《-3脂肪酸、CO-6脂肪酸、尿巧、其代谢前体或它们的组合 的组合物。
[0005] 在一个实施方案中，本发明提供提高患有年龄相关的记忆障碍的个体的神经细胞 或脑细胞的突触膜的量的方法，其包括向所述个体给药《-3脂肪酸或其代谢前体，从而提 高患有年龄相关的记忆障碍的个体的神经细胞或脑细胞的突触膜的量。
[0006] 在另一实施方案中，本发明提供提高患有年龄相关的记忆障碍的个体的神经细胞 或脑细胞的突触膜的量的方法，其包括向所述个体给药《-6脂肪酸或其代谢前体，从而提 高患有年龄相关的记忆障碍的个体的神经细胞或脑细胞的突触膜的量。
[0007] 在另一实施方案中，本发明提供提高患有年龄相关的记忆障碍的个体的神经细胞 或脑细胞的突触膜的量的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧 憐酸或CDP-胆碱;和(b) 0-3脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，从而提高患有年龄相关的 记忆障碍的个体的神经细胞或脑细胞的突触膜的量。
[000引在另一实施方案中，本发明提供提高患有年龄相关的记忆障碍的个体的神经细胞 或脑细胞的突触膜的量的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧 憐酸或CDP-胆碱;和(b) CO-6脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，从而提高患有年龄相关的 记忆障碍的个体的神经细胞或脑细胞的突触膜的量。
[0009]在另一实施方案中，本发明提供治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆丧失的 个体的方法，其包括向所述个体给药《-3脂肪酸或其代谢前体，其中所述CO-3脂肪酸或其 代谢前体增加所述神经细胞对憐脂的合成，从而治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆 丧失的个体。
[0010] 在另一实施方案中，本发明提供治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆丧失的 个体的方法，其包括向所述个体给药《-6脂肪酸或其代谢前体，其中所述CO-6脂肪酸或其 代谢前体增加所述神经细胞对憐脂的合成，从而治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆 丧失的个体。
[0011] 在另一实施方案中，本发明提供治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆丧失的 个体的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧憐酸或CDP-胆碱;和 (b) 0-3脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，其中所述组合物增加所述神经细胞对憐脂的 合成，从而治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆丧失的个体。
[0012] 在另一实施方案中，本发明提供治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆丧失的 个体的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧憐酸或CDP-胆碱;和 (b) 0-6脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，其中所述组合物增加所述神经细胞对憐脂的 合成，从而治疗患有阿尔茨海默病、记忆损伤或记忆丧失的个体。
[0013] 在另一实施方案中，本发明提供治疗患有选自皮克氏病、路易体病、亨廷顿病和最 小认知损伤(MCI)的记忆障碍的个体的方法，其包括向所述个体给药0-3脂肪酸或其代谢 前体，其中所述《-3脂肪酸或其代谢前体增加所述神经细胞对憐脂的合成，治疗患有选自 皮克氏病、路易体病、亨廷顿病和MCI的记忆障碍的个体。
[0014] 在另一实施方案中，本发明提供治疗患有选自皮克氏病、路易体病、亨廷顿病和 MCI的记忆障碍的个体的方法，其包括向所述个体给药0-6脂肪酸或其代谢前体，其中所述 ?-6脂肪酸或其代谢前体增加所述神经细胞对憐脂的合成，从而治疗患有选自皮克氏病、 路易体病、亨廷顿病和MCI的记忆障碍的个体。
[0015] 在另一实施方案中，本发明提供治疗患有选自皮克氏病、路易体病和亨廷顿病的 记忆障碍的个体的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧憐酸或 CDP-胆碱;和(b) CO-3脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，其中所述组合物增加所述神经细 胞对憐脂的合成，从而治疗患有记忆障碍的个体。
[0016] 在另一实施方案中，本发明提供治疗患有选自皮克氏病、路易体病和亨廷顿病的 记忆障碍的个体的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧憐酸或 CDP-胆碱;和(b) CO-6脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，其中所述组合物增加所述神经细 胞对憐脂的合成，从而治疗患有记忆障碍的个体。
[0017] 在另一实施方案中，本发明提供增加患有年龄相关的记忆障碍的个体的脑中突触 的尺寸或数目的方法，其包括向所述个体给药《-3脂肪酸或其代谢前体，从而增加患有年 龄相关的记忆障碍的个体的脑中突触的尺寸或数目。
[0018] 在另一实施方案中，本发明提供增加患有年龄相关的记忆障碍的个体的脑中突触 的尺寸或数目的方法，其包括向所述个体给药《-6脂肪酸或其代谢前体，从而增加患有年 龄相关的记忆障碍的个体的脑中突触的尺寸或数目。
[0019] 在另一实施方案中，本发明提供增加患有年龄相关的记忆障碍的个体的脑中突触 的尺寸或数目的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧憐酸或 CDP-胆碱;和(b) CO-3脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，从而增加患有年龄相关的记忆障 碍的个体的脑中突触的尺寸或数目。
[0020] 在另一实施方案中，本发明提供增加患有年龄相关的记忆障碍的个体的脑中突触 的尺寸或数目的方法，其包括向所述个体给药包含(a)尿巧、其酷基衍生物、尿巧憐酸或 CDP-胆碱;和(b) CO-6脂肪酸或其代谢前体的药物组合物，从而增加患有年龄相关的记忆障 碍的个体的脑中突触的尺寸或数目。
[0021] 在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括O-3脂肪酸和胆碱的给 药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括《-3脂肪酸和胆碱盐的给药。在 另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括《-6脂肪酸和胆碱的给药。在另一实 施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括《 -6脂肪酸和胆碱盐的给药。
[0022] 在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括包含CO-3脂肪酸、尿巧和 胆碱的组合物的给药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括包含《-3脂 肪酸、尿巧和胆碱盐的组合物的给药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包 括包含《-6脂肪酸、尿巧和胆碱的组合物的给药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和 组合物均包括包含《-6脂肪酸、尿巧和胆碱盐的组合物的给药。
[0023] 在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括O-6脂肪酸和O-3脂肪酸 的给药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括《-6脂肪酸、0-3脂肪酸和 尿巧的给药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括《-6脂肪酸、0-3脂肪 酸和胆碱的给药。
[0024] 在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括O-6脂肪酸、O-3脂肪酸 和胆碱盐的给药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括《-6脂肪酸、0-3 脂肪酸、尿巧和胆碱的给药。在另一实施方案中，本发明的任一方法和组合物均包括《-6脂 肪酸、《-3脂肪酸、尿巧和胆碱盐的给药。
【附图说明】
[0025] 图1:DHA提高PC12细胞中的憐脂合成。PC12细胞与脂肪酸培养过夜，然后在含有Ci4 标记的胆碱的培养基中培养。图解W每微克(yg)DNA的每分钟衰变数(dpm)描述了向憐脂酷 胆碱中渗入标记。DHA:二十二碳六締酸。OA:油酸。PA:栋桐酸。*-p<0.05。
[0026] 图2 :DHA对憐脂合成的增加是剂量依赖性的。*-p<0.05。**-9<0.0 Ol。
[0027] 图3: A.花生四締酸提高細SY-5Y细胞中的憐脂合成。DHA:二十二碳六締酸。AA:花 生四締酸。PA:栋桐酸。*:p<0.05。**: p<0.0 OUB. AA对憐脂合成的增加是剂量依赖性的。
[002引图4:在整体动物研究中，DHA和UMP协同提高脑憐脂水平。*:显著性地高于对照组 (单因素方差分析(one-way ANOVA)) eA.每毫克(mg)蛋白质的憐脂pmol数。UMP+DHA显著性 地高于对照（P<0. 05)(单因素方差分析[F(3,28) = 4.12 ;p = 0.015])。双因素方差分析 (two-way AN0VA)也显示与对照组相比，DHA的统计学显著性的影响[F(l ,28) = 8.78;p = 0.006] dB.每y曲NA的憐脂pmol数。UMP+DHA显著性地高于对照(P = 0.0 20)(单因素方差分析 [F(3，28) = 3.215; P = 0.038 ])。对照沙鼠和UMP+DHA沙鼠的绝对值分别为885 ± 45和1094 ± 33pmol/mg DNA。
[0029] 图5: DHA对脑CDP-胆碱水平(A)和CDP-乙醇胺水平(B)的影响。8只沙鼠的组接受对 照饮食或含UMP的饮食，经管饲法给予DHA(在5%阿拉伯树胶载体溶液中）或只给予5%阿拉 伯树胶溶液，持续28天。在第29天，采集脑并测定CDP-胆碱。数据表达为平均值± SEM。使用 单因素或双因素方差分析，接着化k巧检验进行统计学分析。a:当与对照饮食加载体组的值 相比时，P<〇. 05; b:当与UMP饮食加载体组的值相比时，P<0.05。
[0030] 图6: UMP饮食和DHA对脑NF-70 (A)和NF-M (B)水平的影响，沙鼠接受图5图例中描述 的饮食，持续21天(左边的组)或28天(右边的组）。在第22天和第29天，采集脑并测定NF-70。 值表达为平均值±561。使用单因素方差分析和化k巧检验进行统计学分析，A.与对照饮食+ 载体组的值相比，**:?<〇.〇1;***:?<〇.〇〇1;8).冲<〇.〇5;*冲<〇.〇1。细胞骨架蛋白0-微管蛋 白水平在组间未观察到显著性差异。
[0031] 图7: UMP饮食和DHA对脑PSD-95和突触蛋白-1水平的影响。A)沙鼠或者接受对照饮 食加上通过管饲法给药的5 %阿拉伯树胶，或者接受含有UMP(0.5% )的饮食加上通过管饲 法给药的溶于载体中的DHA(300mg/kg)，持续7天（左边的组)或21天(右边的组）。在接下来 的一天，采集脑并测定PSD-95(A)或突触蛋白-1(B)dA.值表达为平均值±561。使用单因素 方差分析，接着Tukey检验进行统计学分析。当与对照饮食加载体组的值相比时，**:P< 0.01;***:P<0.001;B).冲<0.05;*冲<0.01。
[0032] 图8:成年沙鼠海马中树突棘密度提高，上左图为对照组影像，上右图为UMP+DHA组 影像。
[0033] 图9:尿巧和/或DHA对学习的影响。
[0034] 图10:DHA对培养的海马神经元中憐脂合成的影响。纵轴:I4C DPM/50山样品。
【具体实施方式】
[0035] 本发明提供提高或增强神经细胞或脑细胞对憐脂、突触、突触蛋白和突触膜的合 成及水平的方法；治疗患有记忆障碍、记忆损伤、神经障碍或者脑疾病或病症的个体的方 法，其包括向所述个体给药包含《-3脂肪酸、CO-6脂肪酸、尿巧、其代谢前体或它们的组合 的组合物。
[0036] 在另一实施方案中，本发明提供提高个体的神经细胞的憐脂水平的方法，其包括 向所述个体给药《-3脂肪酸或其代谢前体，从而提高个体的神经细胞的憐脂水平。在另一 实施方案中，所述个体患有记忆障碍。在另一实施方案中，所述障碍是年龄相关的。每种可 能性代表本发明的一个独立的实施方案。
[0037] 在本发明的方法和组合物的另一实施方案中，0-3脂肪酸、0-6脂肪酸、尿巧、胆 碱、胆碱盐或其组合在药物组合物中给药。
[0038] 在本发明的方法和组合物的另一实施方案中，给药的组合物提高所述个体的神经 细胞或脑细胞对憐脂的合成。在另一实施方案中，《-3脂肪酸提高所述个体的神经细胞或 脑细胞对憐脂的合成。在另一实施方案中，《-6脂肪酸提高所述个体的神经细胞或脑细胞 对憐脂的合成。在另一实施方案中，尿巧、其酷基衍生物、尿巧憐酸或CDP-胆碱提高所述个 体的神经细胞或脑细胞对憐脂的合成。在另一实施方案中，胆碱提高所述个体的神经细胞 或脑细胞对憐脂的合成。在另一实施方案中，胆碱盐提高所述个体的神经细胞或脑细胞对 憐脂的合成。每种可能性代表本发明的一个独立的实施方案。
[0039] 在另一实施方案中，本发明提供提高个体的脑细胞的憐脂水平的方法，其包括向 所述个体给药《-3脂肪酸或其代谢前体，从而提高个体的脑细胞的憐脂水平。在另一实施 方案中，所述个体患有记忆障碍。在另一实施方案中，所述障碍是年龄相关的。每种可能性 代表本发明的一个独立的实施方案。
[0040] 在另一实施方案中，本发明提供提高或增强个体的神经细胞或脑细胞对憐脂的合 成的方法，其包括向所述个体给药《-3脂肪酸或其代谢前体，从而提高或增强个体的神经 细胞或脑细胞对憐脂的合成。在另一实施方案中，所述个体患有记忆障碍。在另一实施方案 中，所述障碍是年龄相关的。每种可能性代表本发明的一个独立的实施方案。
[0041] 如本文所提供的，实施例1和5中给出的结果表明，向神经和脑细胞给药二十二碳 六締酸(DHA)(-种0-3脂肪酸)提高了它们的憐脂合成，如通过标记胆碱的引入增加所证 明的。给药《-3脂肪酸提高了总憐脂、憐脂酷胆碱和憐脂酷乙醇胺的水平(实施例2)，表明 该作用不限于特定的憐脂。PC12细胞显示神经元细胞的不同功能且在本领域中常被用作神 经元细胞的细胞系模型。实施例11中给出的结果表明，《-3脂肪酸提高短期培养物中的神 经元中的憐脂合成。
[0042] 在另一实施方案中，本发明提供提高个体的神经细胞或脑细胞的突触膜的量的方 法，其包括向所述个体给药《-3脂肪酸或其代谢前体，从而提高个体的神经细胞或脑细胞 的突触膜的量。在另一实施方案中，所述个体患有记忆障碍。在另一实施方案中，所述障碍 是年龄相关的。每种可能性代表本发明的一个独立的实施方案。
[0043] 通过本发明的方法和组合物提高的憐脂在另一实施方案中是憐脂酸。术语"憐脂 酸"在另一实施方案中与术语"憐脂"同义。在另一实施方案中，所述憐脂是憐脂酷胆碱（" PC";实施例1)。在另一实施方案中，所述憐脂是憐脂酷乙醇胺("PE";实施例2)。在另一实施 方案中，所述憐脂是憐脂酷丝氨酸（"PS")。在另一实施方案中，所述憐脂是憐脂酷肌醇（" PI")。在另一实施方案中，所述憐脂是銷憐脂。在另一实施方案中，所述憐脂是憐酸甘油醋。 在另一实施方案中，所述憐脂是本领域已知的任何其他憐脂。每种可能性代表本发明的一 个独立的实施方案。
[0044] 在另一实施方案中，通过本发明的方法大大提高的PI作为一种或多种第二信使分 子的储库。在另一实施方案中，所述第二信使分子是1，4,5-S憐酸肌醇（IP3)。在另一实施 方案中，所述第二信使分子是二酷基甘油(DAG)。在另一实施方案中，通过本发明的方法和 组合物提高蛋白激酶C(PKC)信号转导。在另一实施方案中，通过本发明的方法和组合物激 活IP3的下游信号转导途径。在另一实施方案中，通过本发明的方法和组合物提高细胞内巧 水平。在另一实施方案中，通过本发明的方法和组合物激活DAG的下游信号转导途径。在另 一实施方案中，通过本发明的方法和组合物激活PKC的下游信号转导途径。在另一实施方案 中，通过本发明的方法和组合物激活细胞内巧的下游信号转导途径。
[0045] 在另一实施方案中，通过本发明的方法和组合物提高的銷憐脂作为神经酷胺源。 每种可能性代表本发明的一个独立的实施方案。
[0046] 在另一实施方案中，本发明的方法和组合物中的DHA和/或UMP作为细胞憐脂的大 量前体。在另一实施方案中，UMP通过激活从尿巧形成的UMP的P2Y受体发挥作用。在另一实 施方案中，DHA通过激活突触融合蛋白-3发挥作用。在另一实施方案中，应用运些机理的组 厶 1=1 O
[0047] 在另一实施方案中，如通过本文的数据所表明的，给药DHA和/或UMP有效治疗和/ 或预防W突触形成或髓銷形成受损为特征的病症。每种可能性代表本发明的一个独立的实 施方案。
[0048] 如本文所提供的，向其喀晚代谢与人类相似的沙鼠给药多不饱和脂肪酸和/或尿 巧提高神经突神经原纤维蛋白NF-70和NF-M、突触后密度蛋白PSD-95 W及囊泡蛋白突触融 合蛋白1的水平(实施例7)。因此，给药多不饱和脂肪酸提高脑细胞和神经细胞中的突触膜 的水平。在另一实施方案中，在本文使用的条件下，本发明的方法和组合物还在提高神经元 信号转导中有用。在另一实施方案中，在本文使用的条件下，本发明的方法和组合物还在增 强神经功能中有用。在另一实施方案中，在本文使用的条件下，本发明的方法和组合物还在 提高神经突向外生长中有用。每种可能性代表本发明的一个独立的实施方案。
[0049] 本发明的方法和组合物中使用的0-3脂肪酸在另一实施方案中是0-3多不饱和 脂肪酸(PUFA)。在另一实施方案中，所述CO-3脂肪酸是DHA(实施例1-2) dDHA是一种CO-3、多 不饱和的22-碳脂肪酸，也称为4，7，10，13，16，19-二十二碳六締酸。
[0050] 在另一实施方案中，所述CO -3脂肪酸是a-亚麻酸(9，12，15-十八碳S締酸）。在另 一实施方案中，所述《-3脂肪酸是十八碳四締酸(6,9,12,15-十八碳四締酸）。在另一实施 方案中，所述《 -3脂肪酸是二十碳S締酸化TA; 11，14,17-二十碳S締酸）。在另一实施方案 中，所述《-3脂肪酸是二十碳四締酸(8,11,14,17-二十碳四締酸）。在另一实施方案中，所 述《-3脂肪酸是二十碳五締酸巧?4;5,8，11，14，17-二十碳五締酸）。在另一实施方案中，所 述《-3脂肪酸是二十碳六締酸(也称为叮?4";5,7,9，11，14，17-二十碳六締酸）。在另一实 施方案中，所述《 -3脂肪酸是二十二碳五締酸(DPA;7，10，13，16，19-二十二碳五締酸）。在 另一实施方案中，所述《-3脂肪酸是二十四碳六締酸（6,9,12,15,18,21-二十四碳六締 酸）。在另一实施方案中，所述《-3脂肪酸是本领域已知的任何其他CO-3脂肪酸。每种CO-3 脂肪酸代表本发明的一个独立的实施方案。
[0051] 在另一实施方案中，所述0-3脂肪酸是抗炎多不饱和脂肪酸。在另一实施方案中， 所述抗炎多不饱和脂肪酸是二十碳五締酸化PA;5,8,11,14,17-二十碳五締酸）。在另一实 施方案中，所述抗炎多不饱和脂肪酸是DHA。在另一实施方案中，所述抗炎多不饱和脂肪酸 是本领域已知的任何其他抗炎多不饱和脂肪酸。每种可能性代表本发明的一个独立的实施 方案。
[0052] 如本文所提供的，DHA、EPA和AA都提高脑憐脂水平(实施例8)。因此，本文所述的作 用不是特定多不饱和脂肪酸特有的，而是在本文使用的条件下可推广至《 -3和CO -6多不饱 和脂肪酸家族。
[0053] 在另一实施方案中，所述CO-3脂肪酸是DHA的代谢前体。在另一实施方案中，所述 代谢前体是EPA)。在另一实施方案中，所述代谢前体是二十二碳五締酸(DPA; 7，10，13，16， 19-二十二碳五締酸）。每种可能性代表本发明的一个独立的实施方案。
[0054] 在另一实施方案中，"代谢前体"是指提高血流或组织中脂肪酸浓度的化合物。在 另一实施方案中，"代谢前体"是指被所述个体的组织或酶代谢为脂肪酸的化合物。在另一 实施方案中，"代谢前体"是指被祀细胞代谢为脂肪酸的化合物。每种可能性代表本发明的 一个独立的实施方案。
[0055] 在本发明的方法和组合物的另一实施方案中，O-3脂肪酸的代谢前体是a-亚麻 酸，其作为EPA(二十碳五締酸)和DHA(二十二碳六締酸)的前体。在另一实施方案中，所述代 谢前体是本领域已知的任何其他《-3脂肪酸前体。每种CO-3脂肪酸前体代表本发明的一个 独立的实施方案。
[0056] "多不饱和脂肪酸"在另一实施方案中指CO -3脂肪酸。在另一实施方案中，该术语 是指《-6脂肪酸。在另一实施方案中，该术语是指具有两个或更多个双键的脂肪酸。在另一 实施方案中，该术语是指具有两个双键的脂肪酸。在另一实施方案中，该术语是指具有=个 双键的脂肪酸。在另一实施方案中，该术语是指具有超过=个双键的脂肪酸。每种可能性代 表本发明的一个独立的实施方案。
[0057] 在另一实施方案中，本发明提供提高个体的神经细胞或脑细胞的突触膜的量的方 法，其包括向所述个体给药