直肠腺癌的分子标记物grik3的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体地设及直肠腺癌的分子标记物GRIK3。
【背景技术】
[0002] 直肠腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一。在美国及西方国家，其发病率位居恶性 肿瘤的第3位，也是肿瘤导致死亡的第=大常见原因。在中国，其发病率和死亡率居各种恶 性肿瘤的前列，且呈逐年上升的趋势，可能与W下几点原因相关：（1)饮食结构的调整，生活 质量提高后人们摄入的动物脂肪蛋白质增多使粪便中的甲基胆蔥等能诱发直肠癌的物质 增多，而能增加大便体积、加快大便通过速度并能减少有害物质吸收的饮食纤维物质摄入 相对减少；（2)目前食物中致癌添加剂的增多也使各种有毒物质在体内积累，大大增加了直 肠癌的发病率；（3)因各种普查的实施与医疗水平的提高，使直肠腺癌的检出率也有所增 加。直肠腺癌患者中青年人所占比例比较高，可达12%-15%，因其早期临床症状不明显，临 床发现时多数患者已发展为中晚期。
[0003] 目前临床上直肠腺癌早期诊断主要依赖于直肠指检、血CEA检测、粪便隐血检查、 直肠镜或结肠镜检查、盆腔磁共振检查、腹盆腔CT、直肠镜内B超、胸部CT或胸部X线检查。而 临床上的治疗外科手术为主，辅W化疗、放疗或祀向治疗等的综合治疗。手术治疗主要是根 据癌肿所在部位、大小、活动度、细胞分化程度、术前的排便控制能力及术前临床分期等因 素进行局部切除，腹会阴联合直肠癌根治术，永久性乙状结肠造口、经腹直肠癌切除术，经 腹直肠癌切除、近端造口、远端封闭手术。直肠腺癌患者即使进行手术切除，其五年生存率 也明显不高。因此迫切需要除手术W外新的有效治疗方法，来提高患者的生存率或生存质 量。
[0004] 随着分子生物学技术的发展，国内外研究者不断探索直肠腺癌新的生物标志物， W对传统肿瘤标志物进行有效补充，从而对直肠腺癌患者的病情监测、预后判断W及实施 个体化综合治疗、新型抗肿瘤药物的研发和应用，具有重要的理论意义和临床价值。
【发明内容】
[0005] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种直肠腺癌的分子标记物， 为直肠腺癌的诊断和治疗提供一种分子手段。
[0006] 为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] 本发明提供了 GRIK3基因在制备治疗直肠腺癌的药物中的应用。
[000引进一步，所述的药物包含GRIK3基因和/或其表达产物的抑制剂。所述抑制剂包括 抑制GRIK3基因表达的物质、抑制GRIK3基因表达产物稳定性的物质、和/或抑制GRIK3基因 表达产物活性的物质。
[0009] 进一步，本发明所述抑制剂包括:通过干扰RNA抑制GRIK3基因表达的双链核糖核 酸，或基于GRIK3抗原蛋白的肿瘤疫苗，或用于抑制GRIK3蛋白活性的蛋白质。
[0010] 优选的，所述抑制剂是针对GRIK3基因的siRNA。
[0011] 本发明还提供了一种用于治疗直肠腺癌的药物，所述药物包含GRIK3基因和/或其 表达产物抑制剂。所述抑制剂包括抑制GRIK3基因表达的物质、抑制GRIK3基因表达产物稳 定性的物质、和/或抑制GRIK3基因表达产物活性的物质。
[0012] 进一步，本发明所述抑制剂包括:通过干扰RNA抑制GRIK3基因表达的双链核糖核 酸，或基于GRIK3抗原蛋白的肿瘤疫苗、或用于抑制GRIK3蛋白活性的蛋白质。
[0013] 本发明的药物还可与其他治疗直肠腺癌的药物联用，多种药物联合使用可W实现 协同效应，大大提高治疗的成功率，同时也会因减少个别药物的剂量从而减少毒副反应。
[0014] 本发明所述的"治疗直肠腺癌的药物"包括能够括抑制细胞生长、促进细胞调亡的 物质。
[0015] 本发明提供了 GRIK3在制备诊断直肠腺癌的产品中的应用。
[0016] 进一步，上面所提到的产品能够通过检测直肠组织中GRIK3基因的表达水平来诊 断直肠腺癌。
[0017] 进一步，所述通过检测直肠腺癌组织中GRIK3基因的表达水平:通过RT-PCR、实时 定量PCR、免疫检测、原位杂交或忍片进行检测。
[0018] 其中，所述用RT-PCR来诊断直肠腺癌的产品至少包括一对特异扩增GRIK3基因的 引物;所述用实时定量PCR诊断直肠腺癌的产品至少包括一对特异扩增GRIK3基因的引物； 所述用免疫检测诊断直肠腺癌的产品包括:与GRIK3蛋白特异性结合的抗体;所述用原位杂 交诊断直肠腺癌的产品包括:与GRIK3基因的核酸序列杂交的探针;所述用忍片诊断直肠腺 癌的产品包括:蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括与GRIK3蛋白特异性结合的抗体， 基因忍片包括与GRIK3基因的核酸序列杂交的探针。
[0019] 优选地，所述产品包括忍片、试剂盒。
[0020] 本发明提供了一种诊断直肠腺癌的产品，所述产品能够通过检测直肠组织中 GRIK3基因的表达水平来诊断直肠腺癌。
[0021] 进一步，所述产品包括忍片、试剂盒。其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白质忍片； 所述基因忍片包括固相载体W及固定在固相载体的寡核巧酸探针，所述寡核巧酸探针包括 用于检测GRIK3基因转录水平的针对GRIK3基因的寡核巧酸探针;所述蛋白质忍片包括固相 载体W及固定在固相载体的GRIK3蛋白的特异性抗体;所述试剂盒包括基因检测试剂盒和 蛋白免疫检测试剂盒;所述基因检测试剂盒包括用于检测GRIK3基因转录水平的试剂;所述 蛋白免疫检测试剂盒包括GRIK3蛋白的特异性抗体。
[0022] 进一步，所述固相载体包括无机载体和有机载体，所述无机载体包括但不限于有 娃载体、玻璃载体、陶瓷载体等;所述有机载体包括聚丙締薄膜、尼龙膜等。
[0023] 进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或忍片方法 检测GRIK3基因表达水平过程中所需的试剂。优选地，所述试剂包括针对GRIK3基因的引物 和/或探针。根据SEQ ID NO. 1所示的核巧酸序列信息设计出可W用于检测GRIK3基因表达 水平的引物和探针。
[0024] 与GRIK3基因的核酸序列杂交的探针可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它 衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核巧酸序列特异性结合， 任何长度都可W。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的 长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂 交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超 过30个碱基对，与目的核巧酸序列互补的长度W15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序 列最好少于4个碱基对，W免影响杂交效率。
[0025] 进一步，所述GRIK3蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述GRIK3蛋 白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰，例如，嵌合抗体、SCFv Jab、 尸(曰6'）2少乂等。只要所述片段能够保留与61?11(3蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗 体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可W使用任何方法来制备所述抗体。
[0026] 本发明的药物还可包括药学上可接受的载体，运类载体包括(但并不限于）：稀释 剂如乳糖、氯化钢、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合剂如淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊 精、薦糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、簇甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙締醇、聚乙二醇、聚 乙締比咯烧酬、海藻酸及海藻酸盐、黄原胶、径丙基纤维素和径丙基甲基纤维素等;表面活 性剂如聚氧化乙締山梨聚糖脂肪酸醋、十二烷基硫酸钢、硬脂酸单甘油醋、十六烧醇等;致 湿剂如甘油、淀粉等;吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱±、硅胶、高岭±和皂粘±等;润滑剂如硬 脂酸锋、单硬脂酸甘油醋、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸巧和儀、聚乙二醇、棚酸粉末、氨化植物 油、硬脂富马酸钢、聚氧乙締单硬脂酸醋、单月桂薦糖酸醋、月桂醇硫酸钢、月桂醇硫酸儀、 十二烷基硫酸儀等;填充剂如甘露醇(粒状或粉状）、木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤薛糖、微晶 纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、薦糖、糊精、淀粉、海藻酸钢、海带多糖粉末、琼脂粉 末、碳酸巧和碳酸氨钢等;崩解剂如交联乙締化咯烧酬、簇甲基淀粉钢、低取代径丙基甲基、 交联簇甲基纤维素钢、大豆多糖等。
[0027] 本发明的药物可W使用不同的添加剂进行制备，例如矫味剂、泡腾剂、稳定剂、杀 菌剂、等渗剂、馨合剂、生物利用度剂等中的一种或几种。所述矫味剂包括但不限于甘露醇、 木糖醇、甜菊武、乳糖、果糖、薦糖、蛋白糖、麦芽糖醇、甘草甜素、环己氨基横酸钢、明胶、阿 斯己甜、香蕉香精、渡萝香精、香兰素、香澄香精、枯子香精、薄荷香精、人参香精、草替香精