一种脱细胞真皮基质的用途及其使用方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医学生物材料领域，具体涉及一种脱细胞真皮基质的用途，更具体地，涉及使用所述脱细胞真皮基质制备用于矫正老视的角膜植入物的用途及其使用方法。
【背景技术】
[0002]老视是随年龄增加而逐渐发生的近视力下降的生理性过程。随着年龄增加，晶体核逐渐硬化，晶体的可塑性及弹性逐渐减弱，故调节功能逐渐减弱，大约在40-45左右，近距离工作或阅读就发生困难，这种由于年龄所致的生理性调节减弱，称为老视。在老龄化社会中老视问题尤为突出，因此涌现出各种增加近视力的辅助手段，例如佩戴老视眼镜、老视角膜接触镜，晶体囊袋内植入可调节人工晶体，角膜激光手术等。
[0003 ]角膜内植入式镜片是近来新兴的技术，它植入角膜后引起角膜表面曲率变化，进而改变屈光力。多种材料被试用于制备角膜内植入式镜片，但均为人工合成材料。这类材料植入角膜后都可能面临角膜生物相容性不良，角膜混浊导致透光度下降，角膜溃疡等问题，一旦发生上述问题需要取出镜片，并对角膜造成较为严重的损伤。
[0004]脱细胞真皮基质是将动物皮或人尸体皮肤，经一系列物理、化学方法，去除表皮和真皮中的细胞成分，保留极低免疫原性的真皮基质成分而得的一种生物材料。1995年美国生命细胞公司首先报道了脱细胞真皮基质的制备方法。同时，开展了其在临床应用中的作用，最早作为一种真皮替代物用于烧伤、创伤引起的真皮缺损替代修复，但其后研究发现脱细胞真皮基质除可用于烧、创伤创面外，还可用于粘膜的修补及软组织充填。
[0005]现有技术中，还没有使用脱细胞真皮基质制备角膜植入式镜片的报道。
【发明内容】
[0006]基于以上，本发明的目的是提供一种角膜植入物，所述角膜植入物由脱细胞真皮基质材料制备而成，能够表现出良好的生物相容性、透光性以及良好的力学性质，进一步地，本发明的角膜植入物还具备良好的屈光性能，并在所述角膜植入物的植入眼内就地实现屈光可塑性。
[0007]—方面，本发明提供了一种脱细胞真皮基质在制备用于矫正老视的角膜植入物中的用途，其中，所述脱细胞真皮基质由真皮乳头层制备获得，厚度为30?ΙΟΟμπι，并且所述角膜植入物具有屈光力；
[0008]优选地，所述脱细胞真皮基质由包括以下步骤的方法制备获得:
[0009]I)取皮，取包括表皮层和真皮层的断层皮肤；
[0010]2)将步骤I)获得的断层皮肤处理为冻干片，然后去除50-200μπι的表皮层，暴露下方乳头层，切取100-800μηι的乳头层，得到真皮基质；
[0011 ] 优选地，在-15到-80 V的温度下将所述断层皮肤处理为冻干片，更优选地，在-270C的温度下将所述断层皮肤处理为冻干片；
[0012]3)使用固定剂固定步骤2)得到的真皮基质，固定时间为1-3小时，固定后使用蒸馏水洗涤;所述固定剂为含有1.5g/100ml戊二醛的0.0lM的磷酸钠缓冲液；
[0013]优选地，固定时间为2小时；
[0014]4)使用碱性溶液去除步骤3)得到的真皮基质中的细胞成分，处理时间为10小时-60小时，得到脱细胞真皮基质；
[0015]优选地，处理时间为20-30小时；
[0016]优选地，所述碱性溶液为选自碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、氢氧化铵、碱金属醇化物、有机胺或其混合物中的一种或多种的水溶液;更优选地，所述碱性溶液的当量浓度为1.5-2.0N;进一步优选地，所述碱性溶液为当量浓度1.5-2.0N的NaOH或 Κ0Η;
[0017]5)使用缓冲液或蒸馏水洗涤步骤4)得到的脱细胞真皮基质10-50分钟;优选地，洗涤时间为30分钟;优选地，所述缓冲液为0.0IM磷酸钠水溶液；
[0018]6)将步骤5)得到的脱细胞真皮基质在孵育液中孵育10-30小时；所述孵育液为
0.5g/ml的天门冬氨酸水溶液、0.5g/ml的谷氨酸水溶液或0.1M的甘氨酸水溶液，优选为
0.5g/ml的天门冬氨酸水溶液或0.1M的甘氨酸水溶液;优选地，所述孵育液的pH值为7.4 ；
[0019]7)将步骤6)得到的脱细胞真皮基质切割，使其厚度为30?ΙΟΟμπι，并具有屈光力；
[0020]优选地，所述切割使用飞秒激光切割技术进行；
[0021]或者，所述方法包括以下步骤:
[0022]I)取皮，取包括表皮层和真皮层的断层皮肤；
[0023]优选地，所述断层皮肤从尸体中获得；
[0024]2)使用固定剂固定步骤I)取得的断层皮肤，固定时间为1-3小时，固定后使用蒸馏水洗涤;所述固定剂为含有1.5g/100mL戊二醛的0.0lM的磷酸钠缓冲液；
[0025]优选地，所述固定时间为2小时；
[0026]3)使用碱性溶液去除步骤2)得到的皮肤中的细胞成分，处理时间为10小时-60小时，得到脱细胞的断层皮肤；
[0027]优选地，处理时间为20-30小时；
[0028]优选地，所述碱性溶液为选自碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、氢氧化铵、碱金属醇化物、有机胺或其混合物中的一种或多种的水溶液;更优选地，所述碱性溶液的当量浓度为1.5-2.0N;进一步优选地，所述碱性溶液为当量浓度1.5-2.0N的NaOH或 Κ0Η;
[0029]4)使用缓冲液或蒸馏水洗涤步骤3)得到的脱细胞的断层皮肤10-50分钟；
[0030]优选地，洗涤时间为30分钟;优选地，所述缓冲液为0.0lM的磷酸钠水溶液；
[0031]5)将步骤4)获得的脱细胞的断层皮肤处理为冻干片，然后去除50_200μπι的表皮层，暴露下方乳头层，切取100-800μηι的乳头层，得到脱细胞真皮基质；
[0032]优选地，在-15到-80。。的温度下将所述断层皮肤处理为冻干片，更优选地，温度为-27。。；
[0033]6)将步骤5)得到的脱细胞真皮基质在孵育液中孵育10-30小时；所述孵育液为
0.5g/ml的天门冬氨酸水溶液、0.5g/ml的谷氨酸水溶液或0.1M的甘氨酸水溶液，优选地，所述孵育液为0.5g/ml的天门冬氨酸水溶液或0.1M甘氨酸水溶液；
[0034]优选地，所述孵育液的pH值为7.4
[0035]7)将得到的脱细胞真皮基质切割，使其厚度为30?ΙΟΟμπι，并具有屈光力；
[0036]优选地，所述切割使用飞秒激光切割技术进行。
[0037]优选地，所述角膜植入物为圆形;优选地，所述角膜植入物的直径为3?5mm。
[0038]优选地，所述角膜植入物的厚度和/或屈光力是根据需求随时可调整的；更优选地，所述角膜植入物的厚度和/或屈光力是根据拟植入的角膜的屈光需求随时可调整的;进一步优选地，所述厚度和/或屈光力的调整使用飞秒激光切割技术进行。
[0039]另一方面，本发明提供了一种用于矫正老视的角膜植入物，其中，所述角膜植入物由脱细胞真皮基质制备获得，所述角膜植入物的厚度为30?ΙΟΟμπι，并具有屈光力。
[0040]优选地，所述角膜植入物为圆形;优选地，所述角膜植入物的直径为3?5mm。
[0041]优选地，所述角膜植入物的厚度和/或屈光力是根据需求随时可调整的；更优选地，所述角膜植入物的厚度和/或屈光力是根据拟植入的角膜的屈光需求随时可调整的;进一步优选地，所述厚度和/或屈光力的调整使用飞秒激光切割技术进行。
[0042]再一方面，本发明提供了一种角膜植入物的制备方法，所述方法包括以下步骤:
[0043]根据本发明的方法制备厚度为30-100μπι，并具备屈光力的脱细胞真皮基质，得到所述角膜植入物。
[0044]优选地，所述角膜植入物为圆形;优选地，所述角膜植入物的直径为3?5mm。
[0045]优选地，所述角膜植入物的厚度和/或屈光力是根据需求随时可调整的；更优选地，所述角膜植入物的厚度和/或屈光力是根据拟植入的角膜的屈光需求随时可调整的;进一步优选地，所述厚度和/或屈光力的调整使用飞秒激光切割技术进行。
[0046]优选地，所述调整是通过包括以下步骤的方法进行的:
[0047]I)测定所述角膜植入物拟植入者眼睛近注视时，在角膜上的投射区域，定位为植入区域；
[0048]2)测定所述植入区域的角膜屈光力，及所述拟植入者眼睛所需求的近注视屈光力，从而计算所述植入物需求的屈光力；
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