一种三萜类化合物的医药用图
【技术领域】
[0001]本发明属于医学和药学技术领域，具体涉及一种五环三萜类化合物的新的医药用 途。
【背景技术】
[0002] 甲型流感病毒为常见流感病毒，对人类致病性高，不仅引起季节性流感，也曾多次 引起世界性大流行，如1918年的西班牙大流感，1957年的亚洲流感，1968年的香港流感，以 及2009年4月最初从墨西哥和美国爆发并在全球范围内广泛流行的甲型HlNl流感。由于甲 型流感的高致病性和高死亡率，无论是季节性还是世界性流行，都会造成严重的经济负担 和社会恐慌。
[0003] 疫苗虽然是防止病毒传染的最有效手段，但是由于甲型流感病毒容易变异且疫苗 生产需要一定周期，导致流感疫苗的防治作用不尽如人意。药物治疗仍然是流感治疗的主 要手段，尤其是在感染初期尽早采用抗流感病毒药物治疗，对于患者尤其是老人、儿童、有 心血管等基础疾病的易感人群的预后有重要意义。
[0004] 目前临床上用于抗流感病毒的药物有：（一）离子通道M2阻滞剂，如金刚烷胺 (Amantadine)、金刚乙胺(Rimantadine)等，此类药临床应用时间较长久，耐药毒株耐药较 多。（二)神经氨酸酶抑制剂，如：奥司他韦(Oseltamivir)、扎那米韦(Zanamivir )、帕拉米韦 (Peramivir)等，是目前主流的抗流感病毒药物。虽然报道较少，但是也出现了流感病毒对 该类药物耐药的临床报告。面对病毒的变异和耐药，目前的抗流感病毒药物远未满足临床 的需要。因此，寻找新的有效的安全性好的抗流感病毒药物。
[0005] 柴胡皂苷a(Saikosaponin A，SSa)、柴胡皂苷c(SSc)和柴胡皂苷d(SSd)等是从柴 胡属植物的地下部分分离出的主要活性成分，它们都是具有环氧醚键的五环三萜类化合 物，其中柴胡阜苷a和柴胡阜苷d互为异构体。Jianxin Chen等报道柴胡阜苷a体外和体内都 具有抗甲型流感病毒的作用：其中，柴胡皂苷a抑制H1N1PR8、H9N2和H5N1流感病毒株在A549 细胞中复制的 IC5。分别为 1 .98,2.21 和 2.07 μΜ (Jianxin Chen，Mubing Duan，et al.Saikosaponin a inhibits influenza A virus replication and lung immunopathology[ J]，Oncotarget，2015,6(40) :42541-42556)。但是该篇文献中也同时披 露柴胡皂苷a体外48小时7.6μΜ浓度下即对A549细胞表现出细胞毒性;而柴胡皂苷a的异构 体柴胡皂苷d的细胞毒作用浓度更低。因此，上述研究表明，以柴胡皂苷a、d为代表的这类成 分安全剂量窗口窄，不是理想的新药开发候选化合物。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种三萜类化合物抗流感 病毒的医药新用途。相较柴胡皂苷a，该类皂苷化合物细胞毒性小或甚至没有细胞毒性，安 全窗口大，更适合作为抗流感药物开发的候选化合物。
[0007] 为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：
[0008] 一种结构式I所示的三萜类化合物、其立体异构体、外消旋体、溶剂化物、多晶型 体，或结构式I所示的三萜类化合物、其立体异构体、外消旋体、溶剂化物、多晶型体的药学 上可以接受的盐在制备抗流感病毒药物中的用途，
[0009；
[0010] 其中，Ri选自H、直链或支链C1-C6烷氧基、甲酰基和乙酰基中的一种，或者选自0~2 个羟基被&-〇5脂肪酰基取代的鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖和木糖中的一种，或者选自由0~2个 羟基被C1-C 6脂肪酰基取代的鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖、木糖连接成的任意二糖、三糖或四糖； [0011 ] R2、1?5和1?6选自甲基或-CH2R 7，其中R7选自羟基、取代或未取代的直链或支链&-〇5烧 氧基、甲酰氧基或乙酰氧基；
[0012] R3和R4各自独立地选自羟基、取代或未取代的直链或支链心-以烷氧基、甲酰氧基 或乙酰氧基。
[0013] 优选的，R1选自H，或者0~2个羟基被&-〇4脂肪酰基取代的鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖 和木糖中的一种，或者选自由〇~2个羟基被(^-〇4脂肪酰基取代的鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖、 木糖连接成的任意二糖或三糖。
[0014] 优选的,R1选自H，或者0~1个羟基被&-〇4脂肪酰基取代的鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖 和木糖中的一种，或者选自由〇~1个羟基被(^-〇4脂肪酰基取代的鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖、 木糖连接成的任意二糖或三糖。
[0015]更优选的，R1选自H，或者0~1个羟基被心-心脂肪酰基取代的下述单糖、二糖和三 塘中的一种或多种：
[0016]
[0017]进一步优选的，Rl选自H、或者0~1个羟基被(^-(：4脂肪酰基取代的下述单糖、二糖 和三塘中的一种或多种：
[0018]
[0019] 优选的，R7选自羟基、直链或支链C1-C4烷氧基、甲酰氧基或乙酰氧基。
[0020] 更优选的，R7选自羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、甲酰氧基或乙酰氧基。 [0021 ]优选的，R3和R4各自独立地选自羟基、直链或支链C1-C4烷氧基、甲酰氧基或乙酰氧 基。
[0022] 更优选的，R3和R4各自独立地选自羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、甲酰基 或乙酰基。
[0023] 作为优选的实施方式，所述结构式I的三萜类化合物选自具有如下结构的化合物 中的一种或多种：
[0024]
[0025]
[0026] 作为本发明可以替代的一种实施方式，结构式I的三萜类化合物A环和B环还可以 是如下的结构：
[0027]
[0028] 其中，R3和R4如前所定义，R8选自H、羟基、直链或支链C1-C 4烷氧基。
[0029] 优选的，R8选自H、羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基;更选为H、羟基或甲氧 基。
[0030] 上述可以替代的实施方式中，优选具有如下结构的三萜类化合物：
[0032]
[0033] 本发明所提供的所述结构式I的三萜类化合物在制备抗流感病毒药物的用途，是 指所述结构式I的三萜类化合物、其立体异构体、外消旋体、溶剂化物、多晶型体，或结构式I 所示的三萜类化合物、其立体异构体、外消旋体、溶剂化物、多晶型体的药学上可以接受的 盐作为唯一活性成分，或者与其它具有抗流感病毒作用的物质共同作为活性成分，与药学 上可以接受的辅料经过常规方法制备得到所述抗流感病毒药物。
[0034] 所述其它具有抗流感病毒作用的物质选自金刚烷胺、金刚乙胺、奥司他韦、扎那米 韦和帕拉米韦中的一种或多种。
[0035] 所述药学上可以接受的辅料选自溶剂(如水、乙醇等）、填充剂(如淀粉、预胶化淀 粉、糖粉、糊精、乳糖、微晶纤维、硫酸钙等）、粘合剂(如水、乙醇、淀粉浆、糊精、糖粉、糖浆、 胶浆、聚乙二醇、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素等）、崩解剂 (如干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素 钠、碳酸氢钠、枸橼酸、硬脂酸镁、滑石粉等)和包衣材料中的一种或多种。
[0036] 所述抗流感药物包括口服制剂和非口服制剂。所述口服制剂包括但不限于片剂、 胶囊剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、口服液和颗粒剂。所述非口服制剂包括但不限于注射剂、 喷雾剂、滴鼻剂和栓剂。
[0037] 本发明所述的三萜类化合物在体外表现出较强的抗流感病毒活性，其中代表性化 合物体外抑制流感病毒WSN33的EC5q都小于利巴韦林，而上述化合物的细胞毒性都小于柴胡 皂苷a。因此，本发明有望为临床治疗流感提供新的选择。
【附图说明】
[0038]以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0039]图1显示了实施例2的各受试化合物抗流感病毒活性，纵坐标为相对Gluc活性，横 坐标为受试化合物的编号和名称。
[0040] 图2显示了实施例2的各受试化合物细胞毒性，纵坐标为相对细胞活性，横坐标为 受试化合物的编号和名称。
[0041] 图3显示了实施例3中编号2的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒性 测定结果。其中，3A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，3B显示的是不同浓度下细胞的 相对活性。
[0042]图4显示了实施例3中编号3的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒性 测定结果。其中，4A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，4B显示的是不同浓度下细胞的 相对活性。
[0043]图5显示了实施例3中编号5的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒性 测定结果。其中，5A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，5B显示的是不同浓度下细胞的 相对活性。
[0044] 图6显示了实施例3中编号19的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒 性测定结果。其中，6A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，6B显示的是不同浓度下细胞 的相对活性。
[0045] 图7显示了实施例3中编号11的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒 性测定结果。其中，7A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，7B显示的是不同浓度下细胞 的相对活性。
[0046] 图8显示了实施例3中编号15a的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒 性测定结果。其中，8A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，8B显示的是不同浓度下细胞 的相对活性。
[0047]图9显示了实施例3中编号15b的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒 性测定结果。其中，9A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，9B显示的是不同浓度下细胞 的相对活性。
[0048]图10显示了实施例3中编号22b的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞 毒性测定结果。其中，IOA显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，IOB显示的是不同浓度下 细胞的相对活性。
[0049] 图11显示了实施例3中编号23的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒 性测定结果。其中，IlA显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，IlB显示的是不同浓度下细 胞的相对活性。
[0050] 图12显示了实施例3中编号27的受试化合物不同浓度下抗流感病毒活性和细胞毒 性测定结果。其中，12A显示的是不同浓度下流感病毒相对活性，12B显示的是不同浓度下细 胞的相对活性。
【具体实施方式】
[0051] 以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅 用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0052] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药 材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。其中，部分试剂和中药材购买情况 如下：
[0053] 窄竹叶柴胡（Bupleurum marginatum var · Stenophyllum(WolfT)Shan et Li)产 自甘肃渭源。
[0054] 二甲基亚砜（DMSO)购自Sigma公司；DMEM、含EDTA的0· 25 %胰酶、FBS购自 Invitrogen公司；Coelenterazine-h购自Promega公司；CCK-8试剂盒购自上海碧云天生物 科技有限公司。
[0055] 293T-G1UC细胞和流感病毒株A/WSN/33由中国医学科学院生物技术研究所提供。 [0056]实施例1三萜类化合物的制备
[0057] 8.2kg窄竹叶柴胡干燥根粉碎后用10倍量加热至沸的70 %乙醇（含0.5 %氨水)浸 泡提取2次，