含溶菌酶的治疗脚气药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及制药领域，具体涉及一种治疗脚气的药物。
【背景技术】
[0002] 脚气在医学上又称"足癣"，俗称"香港脚"，是足部真菌感染。表现为趾间或足底皮 肤瘙痒、红斑、丘疹、脱皮，或有水泡，严重可糜烂，渗出。如不及时控制会波及其他部位，弓丨 起体癣、股癣或"灰指甲"。医学上通常将脚气分三型：糜烂型、水疱型、角化型脚气。糜烂型 好发于第三与第四，第四与第五趾间。初起趾间潮湿，浸渍发白或起小水疱，干涸脱肩后，剥 去皮肩为湿润、潮红的糜烂面，有奇痒，易继发感染。水疱型好发于足缘部。初起为壁厚饱满 的小水疱，有的可融合成大疱，疱液透明，周围无红晕。自觉奇痒，搔抓后常因继发感染而引 起丹毒、淋巴管炎等。角化型好发于足跟。主要表现为皮肤粗厚而干燥，角化脱肩、搔痒，易 发生皲裂。本型无水疱及化脓，病程缓慢，多年不愈。
[0003] 根据脚气可分为三型，治疗方法也因型而异。角化干燥型患者，用药应以霜剂、膏 剂为主；如果是水泡靡烂型的患者，即患处渗水，应先将患处处理得干一点，然后再用粉剂 药物进行治疗;还有一类患者属于混合型，即有的部位干燥、脱皮，有的部位靡烂流水，此时 就应根据具体情况用药。除了辨型用药，患者还应在医生的指导下足疗程用药。常以抗真菌 药物进行治疗，常用产品有达克宁、兰美抒、派瑞松、皮康王和足光散等。
[0004]临床药理研究表明，用药咲喃西林0.5g，硼酸5g，苯甲酸5g，水杨酸5g，縣酸5g，研 末后治疗脚气，对191例患者治疗的治愈率为99.48 %。用阿托品1.2g，制霉囷素5*IO6U，阿 司匹林1.5g，苦参5g，千里光5g，滑石粉5g。以上各药研末，混合均匀，每日于中午、晚间洗脚 晾干后，取适量药粉撒于患处，治疗患者154例，痊愈98例，显效42例，有效14例。31例治愈3 个月病情再次复发，经再次用上药治疗痊愈，总有效率1〇〇%。取苯甲酸、水杨酸、雄黄混合 均匀，过60目筛，每包30g，将药一包放入750g食醋内，搅匀待大部溶解。患部用温水洗透，去 掉老皮，擦干，浸入上述药液内Ih以上，晾干即可。经过临床观察验证渗透性强，作用持久， 使用简便，疗效显著。以温水泡洗双足，擦干后取75%酒精棉球反复涂擦患处，每晚1次，同 时将鞋清洗干净，晒干后，取75 %酒精棉球擦拭鞋内。本组经治疗全部获效，瘙痒及皮疹消 失。其中1次获愈者22例，2次获愈者9例。随访最短3个月复发，复发病例继用本法仍可治愈。
[0005] 近年来，有研究表明针灸和激光疗法同样可以治疗脚气。取患侧足三里、三阴交 穴，常规消毒。患者仰卧位，用28号2寸毫针，先针刺三阴交，针感向下传导，小腿向上抽动2 次，然后再针刺足三里，针感向足部传导为佳，直刺1寸-15寸，留针30min，间隔IOmin运针1 次，每日1次，5次统计疗效。治疗48例中，痊愈43例，占89.58% ;有效5例，占10.42%，总有效 率100%。采用DJZ-B型多功能CO2激光治疗机，功率30W-50W，连续可调，患足经过消毒处理 后，用C〇2激光理疗镜头距创面3cm_5cm，旋转照射，时间为15min-20min，每日一次，3d_5d后 干燥结痂，各种症状消失而痊愈。
[0006] 目前，市面上用于治疗脚气的药物主要为西药抗菌剂，长期使用容易产生耐药性。 因此，有必要研发一种来源天然、无毒副作用、无耐药性的药物代替抗菌剂使用。
[0007] 溶菌酶（lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶0-acetylmuramide glycanohydrlase)，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破 坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多 糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷 的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、 消炎、抗病毒等作用。溶菌酶(也称溶解酶)是一个分子量为14.4kDa的酶，它能够通过催化 肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖残基间和壳糊精中N-乙酰葡糖胺残基间的1， 4-β链的水解，而破坏细菌的细胞壁。在人体中，溶菌酶在细胞分泌液，如唾液、眼泪以及其 他一些体液中广泛存在;也存在于线粒体中的细胞质颗粒体中。此外，蛋清中也有大量的溶 菌酶。溶菌酶因能够专一的作用于目的微生物的细胞壁的盐基水解蛋白酶，被广泛的运用 于食品、饲料、医药等行业。
[0008] 溶菌酶（lysozyme)由18种129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白，分子量为 14.4KDa。化学性质非常稳定。当pH值为1.2~11.3范围内剧烈变化时，其结构几乎不变。在 酸性环境中，溶菌酶对热的稳定性很强；当PH值为4~7时100°C处理Imin仍能保持原酶活 性；当pH值为3时能耐100°C加热处理45min;在干燥条件下，溶菌酶可以长期在室温存放，其 纯品为白色或微黄色。黄色的结晶体或无定形粉末，无臭，味甜。易溶于水，遭碱易破坏，不 溶于丙酮和乙醚。作为医药用品，溶菌酶具有生物相容性好、对组织无刺激、无毒性等优点。
[0009] 溶菌酶广泛存在于家禽、鸟类的蛋清和哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿、乳汁、白 细胞及其他体液和组织(如肝、肾）细胞内；从大麦、无花果、木瓜和卷心菜、萝卜等植物中也 能分离出溶菌酶，其中以蛋清中含量为最高(约含0.3%)。而人乳、眼泪、唾液中的溶菌酶活 性远高于蛋清中（约为3倍)或其他来源的溶菌酶的活性。鸡蛋清中的溶菌酶是动物溶菌酶 的典型代表，是溶菌酶群中重要的研究对象，也是目前了解最清楚的溶菌酶之一。在哺乳动 物的乳汁中，人乳汁中的溶菌酶含量是牛乳的3000倍。按来源不同，可将溶菌酶分为蛋清溶 菌酶、动物溶菌酶、植物溶菌酶、微生物产生的溶菌酶和细菌噬菌体产生的溶菌酶;按作用 细胞壁不同，可将溶菌酶分为细菌细胞壁溶菌酶和真菌细胞壁溶菌酶。
[0010] 溶菌酶能够专一裂解目的细菌的细胞壁。它主要进攻肽聚糖，水解连接N-乙酰胞 壁酸和N-乙酰葡糖胺第四位碳原子的β-1，4糖苷键。整个过程是，首先溶菌酶通过其两个结 构域之间的"沟"结合到肽聚糖分子上；随后其底物在酶中形成过渡态的构象。根据 Phillips机制，溶菌酶与葡聚六糖结合。然后溶菌酶将葡聚六糖上的第四个糖扭曲为半椅 形构象。在这种扭曲状态(能量较高）中，糖苷键很容易就发生断裂。位于溶菌酶蛋白序列35 位的谷氨酸(Glu35)和52位的天冬氨酸(Asp52)的侧链对溶菌酶的活性非常关键。Glu35作 为糖苷键的质子供体，剪切底物的C-O键;而Asp52作为亲核试剂参与生成糖基酶中间体。随 后，糖基酶中间体与水分子发生反应，水解生成产物，而酶保持不变。
[0011] 溶菌酶的提取方法包括以下几种：1、直接结晶法:此法操作简单，成本低，但不能 用以分离微量的溶菌酶。2、离子交换层析法:此法具有简便、高效、成本低，且可自动化连续 操作的优点圈。3、亲和层析:亲和层析法分离纯化的倍数较高、质量较好，且可广泛应用于 各种来源的溶菌酶，用于浓缩和精制微量的溶菌酶。但是由于亲和吸附剂的制作较复杂，限 制了其在工业上的大规模利用。4、超滤与亲和层析结合:超滤与亲和层析结合提取溶菌酶， 是近年来开发的新方法。首先用超滤除去大部分杂蛋白，保留溶菌酶，此时溶菌酶还较粗， 再用亲和层析法得到精制产品。5、膜色谱技术:20世纪80年代末，出现了亲和膜色谱技术。 该技术兼具膜分离与亲和分离的特点。与传统的膜分离、亲和色谱相比，膜色谱技术不仅具 有纯化倍数高、压降小、分离时间短、生物大分子在分离过程中变性概率小，以及允许较快 的加料速度等特点，而且比柱亲和色谱更易实现规模化生产。6、超滤:与传统的生化分离技 术相比，超滤技术主要的优点是产品的高产出量。然而尽管超滤技术在反渗析及浓缩等过 程中得到广泛的应用，但是作为在生物工业领域中潜能很大的一种蛋白质分离技术，超滤 仍未被充分利用。7、反胶团提取:反胶团萃取是近年发展起来的一种新的萃取方法，它是利 用有机溶剂中加入少量表面活性剂形成的反胶团来提取的方法，为一些不能使用有机溶剂 萃取的酶和活性蛋白质等生物活性物质开拓了一种新的分离技术，扩大了有机溶剂萃取的 适用范围。8、生物分离技