天麻植物提取物parishin在制备抗衰老药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种天麻抗衰老活性提取物的制备方法及其 在制备抗衰老药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 随着社会的发展，全球老龄化问题日益严峻。联合国发布的预测显示，世界60岁以 上老年人口将由2000年的10.0%，上升到2025年的15.1 %，2050年的21.7%。由此可见，世 界人口老龄化呈现加速发展的趋势，这将使衰老相关的疾病问题日益凸显。因此，发现和寻 找抗衰老及治疗老年性疾病的药物成为医药界亟待解决的问题。
[0003] 天然产物作为药物拥有取材天然，来源广泛;作用平稳;毒副作用相对较小;是药 物先导物的最佳来源之一等特点，因而被广泛研究。世界25种最畅销药品中有一半左右是 有天然产物衍生而来的。另外，我国中药资源十分丰富，很多中药都拥有悠久的应用历史， 因此从中药中寻找预防和治疗老年性疾病的成分有较大的优势。
[0004] 天麻(Gastrodia elata Β1.)为兰科多年生寄生植物的干燥块茎，产于云南、四 川、山西及贵州等地。其块根具有重要的药用价值，是我国的名贵中药，主要用于头痛眩晕、 肢体麻木及癫痫等疾病的治疗。其主要成分为多酚及其苷类化合物，具有众多的生物活性， 一直被广泛研究。
[0005] 例如，公开号为CN1404823A的中国发明专利申请文献公开了一种天麻素粉针剂， 天麻素粉针剂主要由天麻素与注射用水溶性药用辅料或者水或者注射用水溶性药用辅料 和水的混合物组成，其中天麻素的含量为重量百分比的30~99.9%。
[0006]
【发明内容】
[0007] 本发明提供一种天麻植物提取物parishin在制备抗衰老药物中的应用，parishin 的结构式如下：
[0009] 本发明还提供一种抗衰老药物或保健品，由所述天麻植物提取物parishin与药学 上可接受的载体组成。
[0010] 本发明研究表明天麻的活性组分可以显著地延长酵母细胞的复制性寿命，另外， 通过对其作用机理的研究，发现该活性组分是通过调节UTH1/雷帕霉素靶标(TOR)信号通路 而调节细胞的抗氧化能力，提高酵母细胞在氧化环境中的生存率，减少氧化自由基(R0S)和 丙二醛(MDA)的产生，提高超氧化物歧化酶(S0D)的酶活力，从而延长酵母复制性寿命。 [0011]氧化自由基学说是目前比较公认的衰老学说之一。该学说认为衰老过程中的退行 性变化是由于细胞正常代谢过程中产生的自由基造成的，衰老是细胞不断产生的自由基积 累的结果。自由基可使细胞中的许多物质氧化，破坏生物膜，还会影响蛋白质和核酸的正常 功能，甚至引起DNA的损伤，从而诱发衰老进程。
[0012] UTH1是一个与氧化相关的基因，UTH1表达上升，会抑制细胞寿命的延长。TOR是细 胞生长过程中与营养相关的一个重要调节因子，相关研究表明这种蛋白能调节蛋白质合 成，促进细胞生长，延长生物体的寿命。化合物parishin可通过调节UTH1的表达和TOR信号 通路，提高酵母的氧化应激水平。
[0013]化合物pari shin可根据常规过程与药学上可接受的载体制备成抗衰老药物或保 健品，药学上可接受载体如药学领域常规的稀释剂、赋形剂等，填充剂如淀粉、蔗糖、微晶纤 维素等;粘合剂如淀粉浆、羟丙纤维素、明胶、聚乙二醇等;湿润剂如硬脂酸镁、微粉硅胶、聚 乙二醇类等;吸收促进剂如聚山梨脂、卵磷脂等，表面活性剂如伯洛沙姆、脂肪酸山梨坦、聚 山梨脂等等，另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。
[0014] 给药的剂型可以是片剂，丸剂，粉剂，分散片，小药囊剂，酏剂，混悬剂，乳剂，溶液 剂，糖浆剂，气雾剂，软胶囊，硬胶囊，无菌注射液，搽剂或栓剂。可制成常规，速释，缓释或延 迟释放。
[0015] 上述各种剂型可采用常规方法进行制备。
[0016] 本发明的药物可通过各种途径(肠道或非肠道)给予，包括口服，鼻腔，肌肉，皮下， 静注等。
[0017]本发明还提供一种如所述天麻植物提取物pari shin的制备方法，其特征在于，包 括如下步骤：
[0018] (1)天麻经粉碎后用甲醇浸提，抽滤浓缩后再经水和乙酸乙酯溶剂分配、水层浓 缩，得到浸提物；
[0019] (2)将所得浸提物依次经0DS开口柱分离和硅胶开口柱分离，得天麻抗衰老活性组 分；
[0020] (3)所得天麻抗衰老活性组分分离纯化后得天麻植物提取物parishin。
[0021] 步骤(1)中所用甲醇为工业级甲醇;所用天麻为干燥的中药天麻。
[0022] 0DS(十八烷基硅烷键合硅胶填料)开口柱分离的溶剂系统为甲醇:水:溶剂系统按 体积比为甲醇：水=0:100，20:80，25:75，30:70，35:65，40:60，60:40，80:20。
[0023] 硅胶开口柱分离的溶剂系统为氯仿：甲醇：甲醇=9:1，8:2,6:4,5:5,4 :6,3:7,2: 8,0:10〇
[0024]步骤（2 )所得天麻抗衰老活性组分中含有6 5 %~7 5 %的葡萄糖苷化合物 parishin，优选含有67 %的葡萄糖苷化合物parishin。
[0025] 分离纯化方法为反向HPLC纯化，色谱条件：色谱柱0DS-UG-5( Φ 20/250mm)，流速 81111/111；[11，检测波长21011111，流动相为甲醇：水=28:720
[0026] 本发明的天麻活性组分及化合物parishin在K6001酵母抗衰老活性系统上展现出 显著的延缓衰老的作用，能显著地延长酵母的复制性寿命。本方法制备方法简单，活性化合 物的纯度高，另外，中药天麻具有广泛的来源，易于购买，为抗衰老及预防和治疗老年性相 关疾病的相关问题提供了新的研究基础，具有重要的现实意义。
【附图说明】
[0027]图1是化合物parishin显著延长K6001酵母的复制性寿命的结果图；
[0028] 图2A~图2D是化合物parishin不影响sodl，sod2，uthl及skn7突变株的复制性寿 命的结果图；
[0029]图3A和图3B是化合物parishin提高酵母细胞的抗氧化能力的结果图；
[0030] 图4A和图4B是化合物parishin降低酵母细胞的R0S和MDA水平的结果图；
[0031]图5A~图?是化合物parishin提高酵母细胞的总S0D和S0D1酶活力的结果图； [0032] 图6A和图6B是化合物parishin显著降低酵母的RPL9A和RPS26A的基因表达水平的 结果图；
[0033] 图7A和图7B是uthl和uthl，sir2酵母突变株的RPL9A和RPS26A的基因表达水平显 著下降的结果图。
【具体实施方式】
[0034]以下通过对该类若干具体化合物制备实例的实施方式和附图再对本发明的上述 内容作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述的实例， 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0035] 实施例1
[0036]从中药天麻中分离提取活性组分及化合物parishin的制备方法，具体步骤为： [0037] 1)粉碎和浸提：
[0038] 200g干燥的中药天麻经粉碎后，用工业级甲醇2L室温下浸提2天，抽滤浓缩，得到 甲醇浸提物。再经水和乙酸乙酯溶剂分配，静置分层后，将水层浓缩，得到26g水层浸提物。
[0039] 2)分离和纯化：
[0040] 将水层浸提物先经0DS开口柱分离(溶剂系统按体积比为甲醇:水=0:100，20:80， 25 :75,30 :70,35 :65,40 :60,60 :40,80 : 20);之后，将活性样品（1.4g)经硅胶开口 柱分离 (200-300目，溶剂系统按体积比为氯仿：甲醇=9:1，8:2,6 :4,5:5,4:6,3:7,2:8,0 :10);最 后得到微黄色的含活性化合物的活性组分(921mg)。取150mg活性组分用反向HPLC纯化，色 谱条件:色谱柱0DS-UG-5 ( Φ 20/250mm)，流速8ml/min，检测波长210nm，流动相为甲醇:水= 28:72,得到化合物parishin(100mg,保留时间为36min).
[00411本发明检测得到的活性提取物中活性化合物parishin的含量约为67%。