肽在抗生素抗性中的用图

肽在抗生素抗性中的用图
【专利摘要】本发明涉及增加抗生素针对细菌、特别是抗生素抗性细菌的有效性的组合物和方法。
【专利说明】
肽在抗生素抗性中的用途
[0001 ] 相关专利申请案的交叉参考
[0002] 本申请案要求2013年10月31日提交的临时申请案美国申请案61/898,183的优先 权，所述临时申请案以全文引用的方式并入本文中。本申请案要求2013年11月18日提交的 临时申请案US申请案61/905，440的优先权，所述临时申请案以全文引用的方式并入本文 中。
技术领域
[0003] 本发明涉及增加抗生素针对细菌、特别是抗生素抗性细菌的有效性的组合物和方 法。
【背景技术】
[0004] 抗生素使用已变得普遍并且是药物治疗的基石，用于治疗范围介于严重危及生命 的疾病至较轻微并且常常非细菌性疾病的感染。这种恒定抗生素压力与细菌并入其它菌株 和密切相关物种的DNA的能力组合已经导致抗性性状的进化和获得。多重抗生素抗性菌株 现在分布广泛并且细菌已经出现至少一种针对每一单个抗生素类别的抗性机制(并且常常 更多）。举例来说，甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)是主要多重抗药性细菌病原体中的一个，引起严重的社区 和医院获得性感染，如皮肤和软组织感染、骨骼、关节和植入物感染、呼吸机相关肺炎和败 血症。据估计，多重抗药性金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染在美国每年导致 19，000例死亡，以及相关的30-40亿美元额外每年医疗保健费用。尽管此死亡率高，但是医 药流水线中仍存在相对较少的新抗细菌剂。实际上，近十年间研发的大部分抗生素是由现 有抗生素类别再经工程改造的分子，其潜在抗性机制已经存在。因此，迫切需要有效治疗所 引起的感染、特别是由多重抗药性细菌所引起的感染的新治疗选择。
[0005] 此前，已经表明在横跨动物界的广泛范围生物体中所发现的肽可以使得微生物从 表面和彼此脱离，由此防止生物膜的形成。这些蛋白质和肽不是杀细菌的并且不影响细菌 生长。
[0006] 本发明人已经发现当与抗生素组合使用时，相同肽可以增加抗生素针对细菌、特 别是抗生素抗性物种的效力。

【发明内容】

[0007] 本发明大体上涉及增加抗生素针对细菌的有效性的领域，包含使所述细菌与所述 抗生素和包含序列roYDWY的肽接触。本发明还涉及增加抗生素针对抗生素抗性细菌的有效 性，包含使所述抗生素抗性细菌与包含序列FDYDWY的肽接触。
[0008] 如本文所用，术语"包含"和"包括"或其语法变体将视为指定所陈述的特征、整数、 步骤或组分，但是不排除添加一或多个额外特征、整数、步骤、组分或其群组。这一术语涵盖 术语"由……组成"和"基本上由……组成"。
[0009] 短语"基本上由……组成"或其语法变体在本文中使用时将视为指定所陈述的特 征、整数、步骤或组分，但是不排除添加一或多个额外特征、整数、步骤、组分或其群组，不过 仅在所述额外特征、整数、步骤、组分或其群组实质上不改变所要求的组合物、装置或方法 的基础和新颖特征时。
[0010] 术语"方法"是指用于实现给定任务的方式、手段、技术和程序，包括(但不限于)化 学、生物学和生物物理学领域从业者已知的或易于由已知方式、手段、技术和程序开发的那 些方式、手段、技术和程序。
[0011 ]如本文所用，术语"约"是指± 10 %。
[0012] 如本文所用，术语抗生素的"杀细菌浓度"是所处理的细菌培养物不产生在适当的 培养基和培育条件下可以培养的任何细菌菌落的最小抗生素浓度。如本文所用，术语抗生 素的"最小杀细菌浓度"（MBC)是杀死特定细菌所需的最小或最低抗生素浓度。
[0013] 如本文所用，术语"接触"是指安置本发明的肽和抗生素以使其直接或间接与细菌 接触。因此，本发明涵盖将本发明的组合物施用于所需表面和/或直接施用于细菌细胞。可 以使用所属领域中已知的任何方法实现所述组合物与表面接触，包括喷雾、展布、湿润、浸 没、浸渍、涂刷、超声波焊接、焊接、粘结或粘附。肽和抗生素与细菌接触还可以包括向有需 要的个体投与肽和抗生素。
[0014] 本发明的其它特征和优势将从以下【具体实施方式】以及权利要求书显而易知。
【附图说明】
[0015] 图la展现不同浓度的苯唑西林(oxacillin)单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针 对金黄色葡萄球菌ATCC 43300(MRSA)(5X105CFU/mL)的测试结果。图lb展现不同浓度的苯 P坐西林单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针对金黄色葡萄球菌ATCC 25923(MSSA)(5X 105CFU/mL)的测试结果。
[0016] 图2展现不同浓度的苯唑西林单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对7X106CFU/ mL细菌浓度的金黄色葡萄球菌ATCC 43300(MRSA)和金黄色葡萄球菌ATCC25923(MSSA)的测 试结果。
[0017] 图3展现不同浓度的苯唑西林单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针对金黄色葡萄 球菌ATCC 33591 (MRSA菌株）（5 X 107CFU/mL)和1 X 108CFU/mL细菌浓度的金黄色葡萄球菌 ATCC 25923(MSSA)的测试结果。
[0018] 图4a展现不同浓度的苯唑西林单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针对金黄色葡萄 球菌ATCC 33591 (MRSA菌株）（5X 105CFU/mL)的测试结果和苯唑西林单独对于1 X 106CFU/mL 细菌浓度的金黄色葡萄球菌ATCC 25923(MSSA)的活性。图4b展现不同浓度的苯唑西林单独 或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对金黄色葡萄球菌ATCC 25923(1 X 106CFU/mL)的测试结 果。
[0019] 图5展现不同浓度的万古霉素（vancomycin)单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针 对屎肠球菌(Enterococcus faecium)ATCC 700221(万古霉素、替考拉宁（teicoplanin)和 四环素(tetracyclin)抗性菌株）（4X 102CFU/mL)的测试结果。
[0020] 图6展现不同浓度的替考拉宁单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对屎肠球菌 ATCC 700221(万古霉素、替考拉宁和四环素抗性菌株)（2X102CFU/mL)的测试结果。
[0021 ] 图7展现不同浓度的氨节西林(ampicillin)单独或与ΙΟηΜ grZ14s_nvCyc-起针 对肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨节西林、氨 曲南（aztreonam)、头抱西丁（cefoxitin)、头抱泊 Η亏（cefpodoxime)、头抱他啶 (ceftazidime)、氯胺苯醇（chloramphenicol )、哌拉西林(piperacillin)、四环素抗性）（3 X105CFU/mL)的测试结果。
[0022] 图8展现不同浓度的氨节西林单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢泊肟、头孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（2 X 103CFU/mL)的测试结果。
[0023]图9展现不同浓度的头孢西丁单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢泊肟、头孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（2 X 106CFU/mL)的测试结果。
[0024] 图10展现不同浓度的亚胺培南（imipenem)单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针对 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA? 1705 (碳青霉烯（carbapenem)-亚胺培南和厄他培南 (ertapenem)、阿米卡星（amikacin)、氨曲南、左氧氟沙星（levofloxacin)和环丙沙星 (ciprofloxacin)抗性菌株）（3 X 102CFU/mL)的测试结果。
[0025]图11展现不同浓度的亚胺培南单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAA?1705(碳青霉烯-亚胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环 丙沙星抗性菌株)（lX106CFU/mL)的测试结果。
[0026] 图12展现不同浓度的莫匹罗星(mupirocin)单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针 对金黄色葡萄球菌ATCC B A A ? 1708 (MRSA-mupA阳性菌株）（1 X 105CFU/mL)的测试结果。
[0027] 图13a展现不同浓度的四环素单独或与10nM grZ14s_nvCyc-起针对屎肠球菌 ATCC 700221(万古霉素、替考拉宁和四环素抗性菌株）（lX103CFU/mL)的测试结果。图13b 展现不同浓度的四环素单独或与10nM grZ14s-nvCyC-起针对屎肠球菌ATCC700221(万古 霉素、替考拉宁和四环素抗性菌株)（2X105CFU/mL)的测试结果。
[0028]图14展现不同浓度的环丙沙星单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAAK L705(碳青霉烯-亚胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环 丙沙星抗性菌株)（1 X 105CFU/mL)的测试结果。
[0029]图15展现不同浓度的氯胺苯醇单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢泊肟、头孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（4 X 106CFU/mL)的测试结果。
[0030]图16展现不同浓度的氯胺苯醇单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢泊肟、头孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（1 X 1 〇3CFU/mL)的测试结果。
[0031]图17展现不同浓度的阿米卡星单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAA? 1705 (碳青霉烯-亚胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环 丙沙星抗性菌株)（lX106CFU/mL)的测试结果。
[0032]图18展现不同浓度的左氧氟沙星单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷 伯氏菌ATCCBAA(§) 1705 (碳青霉烯-亚胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和 环丙沙星抗性菌株)（2X106CFU/mL)的测试结果。
[0033]图19a展现不同浓度的氨曲南单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAAt) 1705 (碳青霉烯-亚胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环 丙沙星抗性菌株）（lX105CFU/mL)的测试结果。图19b展现不同浓度的氨曲南单独或与10nM grZ14s-nvCyc-起针对肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX103CFU/mL)的测试结果。
【具体实施方式】
[0034] 本文所述的方法是关于增加抗生素针对细菌的有效性，包含使所述细菌与所述抗 生素和包含序列FDYDWY的肽接触。
[0035] 在一些实施例中，本发明是一种增加抗生素针对细菌的效力的方法，包含使所述 细菌与所述抗生素和包含序列FDYDWY的肽接触。
[0036] 在一些实施例中，抗生素的效力增加或有效性增加是通过分析抗生素针对细菌的 最小杀细菌浓度来测量。因此，在一些实施例中，本发明是一种增加抗生素针对细菌的有效 性的方法，其中所述抗生素针对所述细菌的最小杀细菌浓度降低至少约5%、约10%、约 15%、约 20%、约 25%、约 30%、约35%、约40%、约45%、约 50%、约 55%、约60%、约65%、约 70%、约75%、约80%、约85%或约90%。最小杀细菌浓度(MBC)的降低百分比是通过在本发 明的肽存在和不存在的情况下MBC之间的差值除以在本发明的肽不存在的情况下的MBC并 且结果乘以100来测量。
[0037] 在一些实施例中，抗生素针对细菌的最小杀细菌浓度降低约5-25%、约10-30%、 约 20-60 %、约 20-40 %、约20-50 %、约40-90 %、约5-90 %、约 10-80 %、20-70 %、约30-60 % 或约 30-50 %。
[0038] 在一些实施例中，抗生素的效力增加或有效性增加是通过分析抗生素针对细菌的 杀细菌浓度来测量。
[0039] 在一些实施例中，抗生素的效力增加或有效性增加是通过测量抗生素的杀细菌浓 度来测量。因此，在一些实施例中，本发明是一种增加抗生素针对细菌的有效性的方法，其 中所述抗生素针对所述细菌的杀细菌浓度降低至少约5%、约10%、约15%、约20%、约 25%、约 30%、约 35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约 70%、约 75%、约 80%、约85%或约90%。杀细菌浓度的降低百分比是通过在本发明的肽存在和不存在的情 况下杀细菌浓度之间的差值除以在本发明的肽不存在的情况下的杀细菌浓度并且结果乘 以1〇〇来测量。
[0040] 在一些实施例中，抗生素针对细菌的杀细菌浓度降低约5-25%、约10-30%、约20- 60%、约20-40 %、约20-50%、约40-90 %、约5-90%、约 10-80%、20-70%、约30-60%或约 30-50% 〇 [0041]肽
[0042]本文所述的方法包含使细菌与抗生素和包含序列FDYDWY的肽接触。举例来说，所 述肽可以包含 FDYDWY、SFDYDWY、SFDYDWYN、HSFDYDWYN、VHSFDYDWYN、SVHSFDYDWYN、 SVHSFDYDWYNV、SVHSFDYDWYNVS、KSVHSFDYDWYNVS、KSVHSFDYDWYNVSD、NKSVHSFDYDWYNVSD、 NKSVHSFDYDWYNVSDQ、QNKSVHSFDYDWYNVSDQ、QNKSVHSFDYDWYNVSDQA、SQNKSVHSFDYDWYNVSDQ、 SQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADL、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLK、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKN 或 CSFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKNC 或其组合中的至少一个。 [0043] 根据一些实施例，所述肽包含具有至多约20个、至多约25个、至多约30个、至多约 40个或至多约50个氨基酸的序列的一部分。
[0044] 在一些实施例中，本发明的肽在序列中具有两个半胱氨酸。在一些实施例中，所述 半胱氨酸处于C端和N端。
[0045] 在一些实施例中，本发明的肽可以环化（即，呈环状形式)并且因此在本申请案中 用术语"eye"指出。在一个实施例中，每个肽用C端处的半胱氨酸和N端处的半胱氨酸修饰， 其中所述C端和N端经S-S桥接。在特定实施例中，一或多个肽用C端处的半胱氨酸和N端处的 半胱氨酸修饰，其中所述C端和N端经S-S桥接。在其它实施例中，例如当肽中不在N端或C端 处的一或多个氨基酸彼此连接时，所述肽经内部环化。这种连接可以借助两个半胱氨酸之 间的S-S桥接或可以是化学合成的共价连接，例如酯或酰胺基。
[0046] 在一些实施例中，本发明的肽可以任选地包含由一些类型的连接子连接的至少两 个序列，使得第一肽序列的N端连接至连接子的C端并且第二肽序列的C端连接至连接子的N 端。
[0047] 在一些实施例中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。在一些实施例中，肽 CSVHSFDYDWYNVC借助C端和N端处的两个半胱氨酸环化。
[0048] 在一些实施例中，所述肽是非环化的。
[0049] 在一些实施例中，所述肽是可溶的。在其它实施例中，所述肽附接至连接子。在一 些实施例中，所述连接子是聚乙二醇或棕榈酸。在一些实施例中，所述肽是合成的。
[0050] 细菌物种
[0051] 在本发明方法的一些实施例中，细菌是革兰氏阳性物种（gram pos i tive species)。在一些实施例中，细菌是革兰氏阴性物种(gram negative species)。
[0052] 如本文所用，术语"革兰氏阳性细菌"是指具有以下特征的细菌:其具有肽聚糖以 及多糖和/或磷壁酸作为其细胞壁结构的一部分并且通过其在革兰氏染色程序中的蓝-紫 色反应表征。代表性革兰氏阳性细菌包括：放线菌属（Actinomyces spp.)、炭疽杆菌 (Bacillus anthracis)、双歧杆菌属（Bif idobacterium spp ·)、肉毒梭菌（Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens)、梭菌属（Clostridium spp.)、破 伤风梭菌（Clostridium tetani)、白喉杆菌（Corynebacterium diphtheriae)、杰氏棒状杆 菌(Corynebacterium jeikeium)、奠肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌、红斑丹 毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、真杆菌属(Eubacterium spp ·)、阴道加德纳菌 (Gardnerella vaginalis)、麻疼孪生球菌（Gemella mo rbillorum)、明串珠菌属 (Leuconostoc spp ·)、胺肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)、鸟型分支杆菌复合体 (Mycobacterium avium complex)、龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)、偶发分枝杆菌 (Mycobacterium fortuitum)、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilium)、堪萨斯分支 杆菌(Mycobacterium kansasii )、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、海洋分枝杆菌 (Mycobacterium marinum)、瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、耻垢分枝杆菌 (Mycobacterium smegmatis)、土地分枝杆菌(Mycobacterium terrae)、结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)、溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)、诺卡菌属 (Nocardia spp·)、黑色消化球菌（Peptococcus niger)、消化链球菌属 (?6卩七08以6卩七0(30(3(3118 8卩卩.）、丙酸菌属（？1'0卩1'；!_011；^&(^61'；!_111118卩卩.）、藤黄八叠球菌 (Sarcina lutea)、金黄色葡萄球菌、耳葡萄球菌(Staphylococcus auricularis)、头葡萄 球菌(Staphylococcus capitis)、科氏葡萄球菌(Staphylococcus cohnii)、表皮葡萄球菌 (Staphylococcus epidermidis)、溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus)、人葡萄 球菌（Staphylococcus hominis)、路邓葡萄球菌（Staphylococcus lugdanensis)、解糖葡 萄球菌（Staphylococcus saccharolyticus)、腐生葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus)、施氏葡萄球菌（Staphylococcus schleiferi)、模拟葡萄球菌 (Staphylococcus simiIans)、瓦氏葡萄球菌（Staphylococcus warneri)、木糖葡萄球菌 (Staphylococcus xylosus)、无乳链球菌（Streptococcus agalactiae，B族链球菌）、咽峡 炎链球菌（Streptococcus anginosus)、牛链球菌（Streptococcus bovis)、犬链球菌 (Streptococcus canis)、马链球菌（Streptococcus equi)、米勒链球菌（Streptococcus mi 11 eri )、轻型链球菌（Streptococcus mitior)、变形链球菌（Streptococcus mutans)、肺 炎链球菌（Streptococcus pneumoniae)、酿胺链球菌（Streptococcus pyogenes，A族链球 菌）、唾液链球菌（Streptococcus salivarius)、血液链球菌（Streptococcus sanguis)。 [0053]如本文所用，术语"革兰氏阴性细菌"是指特征在于存在双重膜包围每个细菌细胞 的细菌代表性革兰氏阴性细菌包括乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)、鲍 氏不动杆菌（Acinetobacter baumannii)、伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans)、嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila)、木糖氧化产喊菌 (Alcaligenes xylosoxidans)、拟杆菌属（Bacteroides)、脆弱拟杆菌（Bacteroides 作&8；1118)、杆菌状巴通体（831^0116113匕3(3；!_111：[>01'11118)、博特氏杆菌属（80『(16七611& spp.)、伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi)、卡他布兰汉菌（Branhamella catarrhal is )、布鲁氏菌属(Brucella spp ·)、弯曲杆菌属（Campylobacter spp ·)、肺炎衣 原体（Chalmydia pneumoniae)、婴4鹉热衣原体（Chlamydia psittaci )、沙眼衣原体 (Chlamydia trachomatis)、紫色色杆菌（Chromobacterium violaceum)、梓檬酸杆菌属 (Citrobacter spp.)、卩齿蚀艾肯菌（Eikenella corrodens)、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes)、大肠杆菌（Escherichia col i)、脑膜胺毒性黄杆菌（Flavobacterium meningosept icum)、梭杆菌属（Fusobacterium spp·)、流感嗜血杆菌（Haemophi lus influenzae)、嗜血杆菌属（Haemophilus spp.)、幽门螺杆菌（Helicobacter pylori)、肺炎 克雷伯氏菌、克雷伯氏菌属(Klebsiella spp.)、军团菌属(Legionella spp.)、钩端螺旋体 属（Leptospira spp ·)、卡他莫拉菌(Moraxe 11a catarrhal is)、摩氏摩根菌(Morgane 11a morganii)、肺炎支原体（My coplasma pneumoniae)、淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)、多杀巴斯德菌(Pasteurella multocida)、类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)、普氏菌属(Prevotellaspp.)、 变形菌属（Proteus spp.)、雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)、假单胞菌属（Pseudomonas spp·)、普氏立克次体(Rickettsia prowazekii )、立氏立克次体（Rickettsia rickettsii )、罗克利马体属（Rochalimaea spp.)、沙门氏菌属（Salmonella spp.)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、粘质沙雷氏菌 (Serratia marcescens )、志贺氏菌属（Shigella spp.)、索氏志贺氏菌（Shigella sonnei)、斑点密螺旋体（Treponema carateum)、苍白密螺旋体（Treponema pallidum)、地 方性苍白密螺旋体（Treponema pallidum endemicum)、细弱密螺旋体（Treponema 卩61^611116)、韦荣氏球菌属(￥6；[11011611&8。。.）、霍乱弧菌(￥；[131'；[0(311016抑6)、创伤弧菌 (Vibrio vulnificus)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、鼠疫耶尔森 氏菌（Yersinia pestis)。
[0054] 在一些实施例中，所述细菌例如通过形成生物膜而呈现对抗生素的非特异性抗 性。在一些实施例中，所述细菌呈现对特定抗生素的特异性抗性。所述细菌中的特异性抗性 可以是先天性或获得性的。在一些实施例中，所述细菌呈现对抗生素的特异性和非特异性 抗性。在一些实施例中，所述细菌以极低浓度存在并且因此不形成生物膜。在不限制本发明 的情况下，假设不在生物膜中的细菌呈现对抗生素的特异性抗性机制。在不限制本发明的 情况下，还假设本发明的肽在对抗这些特异性非生物膜相关抗性机制方面起作用。
[0055] 在一些实施例中，所述细菌是金黄色葡萄球菌。在特定实施例中，所述金黄色葡萄 球菌是甲氧西林抗性物种(MRSA)。
[0056] 在一些实施例中，所述细菌是屎肠球菌。在一些实施例中，所述屎肠球菌是万古霉 素抗性物种。在其它实施例中，所述屎肠球菌是替考拉宁抗性物种。在一些实施例中，所述 屎肠球菌是万古霉素和替考拉宁抗性物种。在一些实施例中，所述屎肠球菌具四环素类抗 生素抗性。
[0057]在一些实施例中，所述细菌是肺炎克雷伯氏菌。在一些实施例中，所述肺炎克雷伯 氏菌是抗生素抗性物种。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具青霉素(penicillin)类 抗生素抗性。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具头孢菌素(cephalosporin)类抗生素 抗性。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具碳青霉烯类抗生素抗性。在特定实施例中， 所述肺炎克雷伯氏菌具氟喹诺酮(fluoroquinolone)类抗生素抗性。在特定实施例中，所述 肺炎克雷伯氏菌具蛋白质合成抑制剂抗生素抗性。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌 具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢泊肟、头孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林和四环素抗性。在 特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具碳青霉烯-亚胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、 左氧氟沙星和环丙沙星抗性。
[0058]抗生素
[0059] 在一些实施例中，本发明是一种增加抗生素针对细菌的效力的方法，包含使所述 细菌与所述抗生素和包含序列FDYDWY的肽接触。
[0060] 在一些实施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素、核酸抑制剂或蛋白质合成抑制 剂。
[0061] 在一些实施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素，选自由青霉素、头胞菌素、糖肽 和碳青霉烯组成的群组。在一些实施例中，所述抗生素是青霉素，选自由以下组成的群组： 苯挫西林、甲氧西林、阿莫西林(amoxicillin)、氨节西林、氯唑西林(cloxaci 11 in)、双氯西 林(dicloxacillin)、卡本西林(carbenicillin)、替卡西林(ticarcillin)和哌拉西林。在 一些实施例中，所述抗生素是头孢菌素，选自由以下组成的群组:头孢乙腈(cefacetrile)、 头孢轻氨节（〇6€8(11'(?；[1)、头孢力新（06。1^161；[11)、头孢来星（06€310815^；[11)、头孢洛宁 (061^1011；[11111)、头抱噻啶（06€&101^(1；[116)、头抱噻吩（06€&101：；[11)、头抱匹林(06€&。；[1'；[11)、 头抱曲秦（cefatrizine)、头抱氮氣（cefazaflur)、头抱西酮（cefazedone)、头抱唑林 (cefazolin)、头抱拉定(cefradine)、头抱沙定(cefroxadine)、头抱替唑（ceftezole)、头 孢克洛（cefaclor)、头孢尼西（cefonicid)、头孢丙稀（cefprozil)、头孢咲辛 (cefuroxime)、头抱唑喃（cefuzonam)、头抱美唑（cefmetazole)、头抱替坦（cefotetan)、氯 碳头抱（loracarbef)、头抱拉宗（cef buperazone)、头抱美唑（cefmetazole)、头抱米诺 (cefminox)、头抱替坦（cefotetan)、头抱西丁（cefoxitin)、头抱替安（cefotiam)、头抱克 定（cefclidine)、头孢吡聘(cefepime)、头孢瑞南（cef luprenam)、头孢噻利（cefoselis)、 头孢唑兰（cefozopran)、头孢匹罗（cefpirome)、头孢喹Η亏（cefquinome)、氟氧头孢 (flomoxef )、头抱吡普(ceftobiprole)和头抱洛林(ceftaroline)。在一些实施例中，所述 所述抗生素是糖肽，选自由万古霉素和替考拉宁组成的群组。在一些实施例中，所述抗生素 是碳青霉烯，选自由以下组成的群组:亚胺培南、莫若培南(morepenem)、厄他培南、多尼培 南(doripenem)、帕尼培南(panipenem)和比阿培南(biapenem)。在特定实施例中，所述抗生 素是氨曲南。
[0062] 在一些实施例中，所述抗生素是核酸抑制剂，选自由氟喹诺酮组成的群组。在一些 实施例中，所述氟喹诺酮是环丙沙星、依诺沙星(enoxacin)、氟罗沙星(fleroxacin)、洛美 沙星（lomef loxacin)、那氟沙星（nadif loxacin)、诺氟沙星(norf loxacin)、氧氟沙星 (ofloxacin)、培氣沙星(pefloxacin)、芦氣沙星(rufloxacin)、巴洛沙星(balofloxacin)、 格帕沙星（gr e p a f 1 ο Xa c i η )、左氧氟沙星、替马沙星（t ema f 1 ο Xa c i η )、妥舒沙星 (tosufloxacin)、克林沙星（clinafloxacin)、加替沙星（gatifloxacin)、吉米沙星 (gemifloxacin)、莫西沙星（moxifloxacin)、西他沙星（sitafloxacin)、曲伐沙星 (1：1'0￥3；1^1(^3(3；[11)、博氟沙星（卩1'0111；1^1(^3(3；[11)、德拉沙星（(1613；1^1(^3(3；[11)、达氟沙星 (danofloxacin)、二氣沙星（difloxacin)、恩氣沙星（enrofloxacin)、依巴沙星 (ibafloxacin)、马波沙星（marbofloxacin)、奥比沙星（orbifloxacin)或沙氣沙星 (sarafloxacin)。在特定实施例中，所述氟喹诺酮是环丙沙星或左氧氟沙星。
[0063] 在一些实施例中，所述抗生素是蛋白质合成抑制剂，选自由氯胺苯醇和阿米卡星 组成的群组。在其它实施例中，所述抗生素是蛋白质合成抑制剂，选自大环内酯类抗生素。 大环内酯抗生素包括阿奇霉素（azithromycin)、克拉霉素（clarithromycin)、红霉素 (erythromycin)、泰利霉素（telithromycin)、碳霉素 A(carbomycin A)、交沙霉素 (josamycin)、吉他霉素（kitasamycin)、麦迪霉素（midecamycin)、竹桃霉素 (oleandomycin)、索利霉素（solithromycin)、螺旋霉素 （spiramycin)、醋竹桃霉素 (troleandomycin)、罗红霉素(roxithromycin)、泰利霉素、喹红霉素（cethromycin)、索利 霉素、螺旋霉素或袢霉素(ansamycin)。在一些实施例中，所述蛋白质合成抑制剂抗生素是 莫匹罗星。
[0064] 在一些实施例中，所述抗生素是具有未知作用机制的抗生素。
[0065] 在特定实施例中，所述抗生素因特定细菌物种针对所述抗生素的特异性或非特异 性抗性而针对所述细菌呈现减小的活性。
[0066] 投药
[0067] 在一些实施例中，本发明是一种增加抗生素针对细菌的效力的方法，包含使所述 细菌与所述抗生素和包含序列FDYDWY的肽接触。
[0068] 在一些实施例中，所述细菌与所述抗生素和所述肽同时（即，在同一时间）接触。所 述抗生素和所述肽的这种同时接触可以例如通过使用含有所述抗生素和所述肽的单一组 合物实现。在其它实施例中，所述抗生素和所述肽的同时接触可以通过使所述细菌与所述 抗生素和所述肽在两个独立组合物中接触来实现。
[0069] 在一些实施例中，所述细菌与所述抗生素和所述肽在不同时间接触。在特定实施 例中，所述抗生素和所述肽与所述细菌接触相隔约15分钟、相隔约30分钟、相隔约45分钟、 相隔约1小时、相隔约1.5小时或相隔约2小时。在所述细菌与所述抗生素和所述肽在不同时 间接触的一些实施例中，所述细菌可以在所述细菌与所述抗生素接触之前或之后与所述肽 接触。
[0070] 在一些实施例中，本发明是一种增加抗生素针对细菌的效力的方法，包含向有需 要的个体投与所述抗生素和包含序列n)YDWY的肽。在一些实施例中，所述个体是非人类哺 乳动物，例如犬、猫、马、猪、牛。在其它实施例中，哺乳动物是人类。
[0071] 在一些实施例中，向所述个体投与的肽可以包含以下中的至少一者：FDYDWY、 SFDYDWY、SFDYDWYN、HSFDYDWYN、VHSFDYDWYN、SVHSFDYDWYN、SVHSFDYDWYNV、SVHSFDYDWYNVS、 KSVHSFDYDWYNVS^KSVHSFDYDWYNVSD^NKSVHSFDYDffYNVSD^NKSVHSFDYDffYNVSDQ^ QNKSVHSFDYDWYNVSDQ、QNKSVHSFDYDWYNVSDQA、SQNKSVHSFDYDWYNVSDQ、 SQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADL、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLK、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKN 或 CSFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKNC 或其组合。在特定实施例 中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。
[0072] 根据一些实施例，所述肽包含具有至多约20个、至多约25个、至多约30个、至多约 40个或至多约50个氨基酸的序列的一部分。
[0073] 在一些实施例中，本发明的肽在序列中具有两个半胱氨酸。在一些实施例中，所述 半胱氨酸处于C端和N端。
[0074] 在一些实施例中，本发明的肽可以环化（即，呈环状形式)并且因此在本申请案中 用术语"eye"指出。在一个实施例中，每个肽用C端处的半胱氨酸和N端处的半胱氨酸修饰， 其中所述C端和N端经S-S桥接。在特定实施例中，一或多个肽用C端处的半胱氨酸和N端处的 半胱氨酸修饰，其中所述C端和N端经S-S桥接。在其它实施例中，例如当肽中不在N端或C端 处的一或多个氨基酸彼此链接时，所述肽经内部环化。这种链接可以借助两个半胱氨酸之 间的S-S桥接或可以是化学合成的共价链接，例如酯或酰胺基。
[0075] 在一些实施例中，本发明的肽可以任选地包含由一些类型的链接子连接的至少两 个序列，使得第一肽序列的N端连接至链接子的C端并且第二肽序列的C端连接至链接子的N 端。
[0076] 在一些实施例中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。在一些实施例中，肽 CSVHSFDYDWYNVC借助C端和N端处的两个半胱氨酸环化。
[0077] 在一些实施例中，所述肽是非环化的。
[0078] 在一些实施例中，所述肽是可溶的。在其它实施例中，所述肽附接至链接子。在一 些实施例中，所述链接子是聚乙二醇或棕榈酸。在一些实施例中，所述肽是合成的。
[0079] 在一些实施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素、核酸抑制剂或蛋白质合成抑制 剂。在一些实施例中，所述抗生素是一种如上所述的抗生素。在特定实施例中，所述抗生素 是氨苄西林、苯唑西林、头孢西丁、万古霉素、替考拉宁、亚胺培南、厄他培南、莫匹罗星、四 环素、环丙沙星、左氧氟沙星、氯胺苯醇、阿米卡星或氨曲南。
[0080] 在特定实施例中，所述抗生素因特定细菌物种针对所述抗生素的特异性或非特异 性抗性而针对所述细菌呈现减小的活性。
[0081] 在一些实施例中，哺乳动物具有需要治疗的细菌感染。在特定实施例中，所述细菌 感染是由抗生素抗性细菌引起。在一些实施例中，所述细菌例如通过形成生物膜而呈现对 抗生素的非特异性抗性。在一些实施例中，所述细菌呈现对特定抗生素的特异性抗性。所述 细菌中的特异性抗性可以是先天性或获得性的。在一些实施例中，所述细菌呈现对抗生素 的特异性和非特异性抗性。
[0082] 在一些实施例中，所述细菌是革兰氏阳性物种。在一些实施例中，所述细菌是革兰 氏阴性物种。革兰氏阳性和革兰氏阴性物种的实例如上文所定义。
[0083]在一些实施例中，所述细菌是金黄色葡萄球菌。在特定实施例中，所述金黄色葡萄 球菌是甲氧西林抗性物种(MRSA)。
[0084] 在一些实施例中，所述细菌是屎肠球菌。在一些实施例中，所述屎肠球菌是万古霉 素抗性物种。在其它实施例中，所述屎肠球菌是替考拉宁抗性物种。在一些实施例中，所述 屎肠球菌是万古霉素和替考拉宁抗性物种。在一些实施例中，所述屎肠球菌具四环素类抗 生素抗性。
[0085] 在一些实施例中，所述细菌是肺炎克雷伯氏菌。在一些实施例中，所述肺炎克雷伯 氏菌是抗生素抗性物种。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具青霉素类抗生素抗性。在 特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具头孢菌素类抗生素抗性。在特定实施例中，所述肺炎 克雷伯氏菌具碳青霉烯类抗生素抗性。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具氟喹诺酮 类抗生素抗性。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具蛋白质合成抑制剂抗生素抗性。在 特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢泊肟、头孢他啶、 氯胺苯醇、哌拉西林和四环素抗性。在特定实施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具碳青霉烯-亚 胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环丙沙星抗性。
[0086] 在一些实施例中，所述抗生素和所述肽同时（即，在相同时间）投与个体。所述抗生 素和所述肽的这种同时投与可以例如通过使用含有所述抗生素和所述肽的单一组合物实 现。在其它实施例中，所述抗生素和所述肽的同时投与可以通过以两个独立组合物投与所 述抗生素和所述肽来实现。
[0087] 在一些实施例中，所述抗生素和所述肽在不同时间投与个体。在特定实施例中，所 述抗生素和所述肽相隔约15分钟、相隔约30分钟、相隔约45分钟、相隔约1小时、相隔约1.5 小时或相隔约2小时投与。在所述抗生素和所述肽在不同时间投与的一些实施例中，所述肽 可以在所述抗生素之前或之后投与。
[0088] 组合物
[0089] 在一些实施例中，本发明是一种组合物，包含抗生素和包含序列roYDWY的肽。
[0090] 在一些实施例中，所述包含序列roYDWY的肽可以具有如上所述序列中的任一个。 在特定实施例中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。在一些实施例中，肽CSVHSFDYDWYNVC借 助C端和N端处的两个半胱氨酸环化。
[0091] 在一些实施例中，所述肽是非环化的。
[0092] 在一些实施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素、核酸抑制剂或蛋白质合成抑制 剂。在一些实施例中，所述抗生素是一种如上所述的抗生素。在特定实施例中，所述抗生素 是氨苄西林、苯唑西林、头孢西丁、万古霉素、替考拉宁、亚胺培南、厄他培南、莫匹罗星、四 环素、环丙沙星、左氧氟沙星、氯胺苯醇、阿米卡星或氨曲南。
[0093] 在一些实施例中，所述肽和抗生素在单一组合物中与细菌接触。在一些实施例中， 所述肽和抗生素与细菌或在两个独立组合物中接触。
[0094] 本发明的组合物包括涂有如上所述的肽和抗生素的装置。由本发明涵盖的示例性 装置包括(但不限于)船身、机动车表面、飞机表面、膜、过滤器和工业设备。所述表面还可以 包含在医疗装置、仪器和植入物中。
[0095] 此类医疗装置、仪器和植入物的实例包括能够暂时或永久植入哺乳动物生物体 (如人类）中的任何物体。根据本发明可以使用的代表性医疗装置、仪器和植入物包括例如 中心静脉导管、泌尿导管、气管插管、机械心脏瓣膜、起搏器、血管移植物、支架和假体关节。
[0096] 根据本发明的教示内容可以涂布的医疗装置包括(但不限于)人造血管、导管和用 于去除或传递流体至患者的其它装置、人造心脏、人造肾脏、矫形针、假体关节、板和植入 物；导管和其它管(包括泌尿管和胆管、气管插管、外周可插入中心静脉导管、透析导管、长 期隧道式中心静脉导管、外周静脉导管、短期中心静脉导管、动脉导管、肺部导管、斯旺-甘 兹氏导管（Swan-Ganz catheter)、泌尿导管、腹膜导管）、泌尿装置(包括长期泌尿装置、组 织结合泌尿装置、人造泌尿括约肌、泌尿扩张肌）、分流器(包括心室或动静脉分流器）；假体 (包括乳房植入物、阴茎假体、血管移植假体、动脉瘤修复装置、机械心脏瓣膜、人造关节、人 造喉、耳科植入物）、吻合装置、血管导管端口、血管支架、夹具、栓塞装置、伤口引流管、眼晶 体、牙齿植入物、脑积水分流器、起搏器和可植入除颤器、无针连接器、发音假体等。本发明 的另一种可能的应用是医疗和牙科环境中所发现的表面涂布。此类表面包括不论一次性或 打算重复使用的各种仪器和装置的内部和外部方面。此类表面包括适用于医疗用途的全部 范围的物品，包括(但不限于)解剖刀、针、剪刀和用于侵入性手术、疗法或诊断程序的其它 装置;血液过滤器。其它实例将对于这些领域的从业者显而易知。
[0097] 医疗环境中所发现得表面还包括医学设备零件、保健机构人员佩戴或携带的医疗 工具的内部和外部方面。此类表面可以包括预期作为医疗机构中感染性生物体的生物屏障 的表面，如手套、工作裙和面罩。生物屏障的常用材料是热塑性或聚合材料，如聚乙烯、涤纶 (dacron)、尼龙(nylon)、聚酯、聚四氟乙稀、聚氨基甲酸酯、乳胶、娃酮和乙稀。其它表面可 以包括用于医疗程序或用于制备医疗器具的区域中的工作台面和固定装置、用于呼吸道治 疗(包括投与氧气、喷雾器中溶解的药物和麻醉剂）的管和罐。其它此类表面可以包括并不 打算无菌的医疗或牙科设备的手柄和线缆。另外，此类表面可以包括那些通常遇到血液或 体液或其它有害生物材料的区域中所发现的管和其它设备的非无菌外表面。本发明的组合 物可以用于这些医疗装置的表面或内部以提供避免单电池生物体定殖的长期保护并且降 低装置相关感染的发生率。
[0098] 本发明的组合物可以在聚合物合成阶段或在装置制造阶段直接并入医疗装置的 聚合物基质中。所述组合物还可以共价连接到医疗装置聚合物。这些和许多其它涂布医疗 装置的方法对于所属领域的一般技术人员是明显的。
[0099] 根据本发明的教示内容可以处理的额外表面包括那些参与水纯化、水储存和水传 递的物品和那些参与食品加工的物品的内部和外部方面。因此，本发明设想涂布食品或饮 料容器的固体表面以延长其内含物的存放期。
[0100]与健康相关的表面还可以包括那些参与提供营养、卫生或疾病预防的家用物品的 内部和外部方面。因此，本发明的组合物可以用于从外表面去除致病微生物。这些可以包括 例如家用食品加工设备、婴儿护理材料、棉塞、肥皂、清洁剂、健康和皮肤护理产品、家用清 洁剂和抽水马桶。
[0101]所述表面还可以是实验室物品，包括(但不限于)显微镜载玻片、培养罩、皮氏培养 皿(Petri dish)或所属领域中已知的任何其它合适类型的组织培养器皿或容器。
[0102] 水下表面包括任何水浸没的表面，包括船身/艇身（即，船舶或小艇的身体或框 架）、潜艇、助航设施、筛网、网、建筑物、漂浮或布设的海上平台（例如，船坞）、浮标、发信设 备和与海水或盐水接触的物品。其它水下表面包括暴露于海水的结构，包括粧、船舶标记、 海底输送器(如电缆线和管道）、钓鱼网、舱壁、冷却塔和水下操作的任何装置或结构。
[0103] 本发明的组合物可以并入至船舶涂层中以限制不合需要的船舶生物附着。因此， 可以配制本发明的防生物附着剂以便不含毒性材料(如重金属)并且仍保留其功效。本发明 的防生物附着涂料可以另外含有粘合剂、颜料、溶剂和添加剂。
[0104] 可以使用的溶剂的实例包括芳香族烃，如二甲苯和甲苯；脂肪族烃，如己烷和庚 烷;酯，如乙酸乙酯和乙酸丁酯；酰胺，如N-甲基吡咯烷酮和N，N_二甲基甲酰胺;醇，如异丙 醇和丁醇；醚，如二噁烷、THF和乙醚；以及酮，如甲基乙基酮、甲基异丁基酮和甲基异戊基 酮。溶剂可以单独或以其组合形式使用。
[0105]可以使用的粘合剂的实例包括醇酸树脂、丙烯酸或乙烯乳液、聚氨基甲酸酯树脂、 环氧树脂、基于硅酮的树脂、丙烯酸树脂、基于无机硅酸酯的树脂、乙烯树脂（特别是氯乙 烯/乙酸乙烯酯共聚物）和松香。可以使用的颜料的实例包括二氧化钛、氧化亚铜、铁氧化 物、滑石、铝薄片、云母薄片、三氧化二铁、硫氰酸亚铜、氧化锌、乙酸间砷酸铜、铬酸锌、二甲 基二硫代氨基甲酸锌、乙烯双(二硫代氨基甲酸)锌和二乙基二硫代氨基甲酸锌。
[0106]可以并入涂布组合物中的添加剂的实例包括除湿剂、湿润/分散剂、抗沉降剂、防 结皮剂、干燥/固化剂、抗磨损剂和通常在涂布组合物中用作稳定剂和消泡剂的添加剂。 [0107]制备船舶防生物附着涂料的方法详细阐述于美国专利第4,678,512号；美国专利 第4,286,988号；美国专利第4,675,051号；美国专利第4,865,909号和美国专利第5，143， 545号中。
[0108] 本发明的组合物还可以用于在化妆品中提供抗细菌特性以防止产品变质。
[0109] 所述组合物可以另外用于向口腔、牙齿和牙龈提供抗细菌作用，如通过并入牙膏、 漱口剂或口香糖中。
[0110] 本发明的医药组合物可以通过任何适合的途径投与，例如包括经口、经直肠、经粘 膜(尤其经鼻）、肠道或非经肠传递，包括肌肉内、皮下和髓内注射，以及鞘内、直接心室内、 静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。 或者，有人可以用局部而非全身性方式投与本发明组合物，例如借助将所述组合 物直接注射至患者的组织区域中。
[0112]本发明的医药组合物可以通过所属领域中熟知的工艺来制造，例如借助于常规混 合、溶解、粒化、糖衣药丸制造、水磨、乳化、囊封、覆埋或冻干工艺。根据本发明使用的医药 组合物因此可以按常规方式使用一或多种生理学上可接受的载剂来配制，所述载剂包含赋 形剂和助剂，其有助于活性成分加工成可以在医药学上使用的制剂。适当配制品取决于所 选投与途径。
[0113] 关于注射，医药组合物的活性成分可以配制在水溶液中，优选在生理上相容的缓 冲液中，如汉克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理盐缓 冲液。关于经粘膜投与，在配制品中使用适于待渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂一般是所属 领域中已知的。
[0114] 关于局部投与，本发明的组合物可以配制为凝胶、乳膏、洗液、清洗剂或喷雾剂。
[0115] 关于经口投与，医药组合物可以易于通过使活性化合物与所属领域中熟知的医药 学上可接受的载剂组合来配制。此类载剂使得医药组合物能够配制为片剂、丸剂、糖衣药 丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等以便患者口服摄取。用于经口使用的药物制剂可 以使用固体赋形剂，任选地研磨所得混合物并且在视需要添加适合的助剂之后加工颗粒混 合物获得片剂或糖衣药丸核心而制得。具体来说，适合的赋形剂是填充剂，如糖，包括乳糖、 蔗糖、甘露醇或山梨醇;纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、 黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素和羧甲基纤维素钠;和/或生理学上可接受的聚合 物，如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。必要时，可以添加崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海 藻酸或其盐，如海藻酸钠。
[0116] 糖衣药丸核心具有适合的包衣。出于此目的，可以使用浓缩糖溶液，其可以任选地 含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶（carbopol gel)、聚乙二醇、二氧化钛、 漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可以添加至片剂或糖衣药丸包衣中以 鉴别或表征活性化合物剂量的不同组合。可以经口使用的医药组合物包括由明胶制成的配 合插入胶囊(push-fit capsule)以及由明胶和如丙三醇或山梨醇的塑化剂制成的软密封 胶囊。配合插入胶囊可以含有活性成分与如乳糖的填充剂、如淀粉的粘合剂、如滑石或硬脂 酸镁的润滑剂和任选地稳定剂的混合物。在软胶囊中，活性成分可以溶解或悬浮于适合的 液体中，如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可以添加稳定剂。用于口服的所有调配 物的剂量应适于所选投与途径。
[0117] 关于经颊投与，组合物可以呈以常规方式调配的片剂或口含锭形式。
[0118] 关于通过经鼻吸入投与，根据本发明使用的活性成分常规地借助于使用适合的推 进剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯-四氟乙烷或二氧化碳），以从加压包装或喷雾 器呈现的气雾剂喷雾形式传递。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供用于传递定量数量 的阀门来确定剂量。可以调配含有化合物和适合粉末基剂(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的 用于分配器中的(例如）明胶的胶囊和药筒。
[0119] 可以调配本文所述的医药组合物用于非经肠投与，例如通过快速注射或连续输 注。注射用调配物可以呈现为单位剂型，例如任选地添加防腐剂的安瓿或多剂量容器。所述 组合物可以是在油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液，并且可以含有如悬浮剂、稳定剂 和/或分散剂的调配物。
[0120] 用于非经肠投与的医药组合物包括呈水溶性形式的活性制剂的水溶液。另外，活 性成分的悬浮液可以制备为适当的油性或基于水的注射悬浮液。
[0121 ]适合的亲脂性溶剂或媒剂包括脂肪油，如芝麻油；或合成脂肪酸酯，如油酸乙酯、 甘油三酯；或脂质体。水性注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素 钠、山梨醇或葡聚糖。
[0122] 任选地，悬浮液还可以含有适合的稳定剂或增加活性成分溶解度的药剂以允许制 备高度浓缩的溶液。或者，活性成分可以呈粉末形式，以便在使用之前用适合的媒剂，例如 无菌、无热原质、基于水的溶液复原。
[0123] 在一些实施例中，本发明的组合物可以用立即释放形式传递。在其它实施例中，本 发明的组合物可以用控制释放系统或持续释放系统传递。控制或持续释放医药组合物的共 同目标可以是改善药物疗法超过由其非控制或非持续释放对应部分所实现的结果。控制或 持续释放组合物的优势包括延长抗生素和肽的活性、降低给药频率和增加顺应性。另外，控 制或持续释放组合物可以有利地影响起始作用时间或其它特征，如抗生素和肽的血液含 量，并且可以因此减低不良副作用的发生率。
[0124] 控制或持续释放组合物可以包含立即释放部分和延长释放部分。立即释放部分最 初立即释放迅速产生所要疗法或预防作用的量的肽和/或抗生素，而延长释放部分逐渐并 且持续释放其它量的肽和/或抗生素以维持疗法或预防作用水平历时延长的时间段。活性 成分的控制或持续释放可以通过各种条件来刺激，包括(但不限于)pH变化、温度变化、酶的 浓度或利用率、水的浓度或利用率或其它生理条件或化合物。
[0125] 控制释放和持续释放剂型可以用于提供一或多种活性成分的控制或持续释放，使 用例如变化比例的羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、可渗透膜、渗透系统、多层包 衣、微米粒子、多颗粒物、脂质体、微球体或其组合以提供所要释放曲线。所属领域中已知的 适合的控制或持续释放配制品包括本文所述的那些，可以鉴于本公开内容而易于选择以用 于本发明的活性成分。也参见古德森（Goodson)，控制释放的医疗应用（Medical Applications of Controlled Re 1 ease )第2卷应用和评估（App 1 i cat ions and Evaluation)中的"牙科应用（Dental Applications)"（第115-138页），兰格（R. S.Langer) 和怀斯(D.L.Wise)编，CRC出版社（1984)。可以根据本发明的用途选择兰格，科学(Science) 249:1527-1533(1990)综述中所论述的其它控制或持续释放系统。在一个实施例中，可以使 用栗（兰格，科学249 :1527-1533( 1990);塞夫顿（Sef ton)，CRC生物医学工程评论（CRC Crit.Ref Biomed.Eng. )14:201(1987);布赫瓦尔德（Buchwald)等人，外科学（Surgery)88: 507(1980);和索德克（Saudek)等人，新英格兰医学杂志(N. Engl. J.Med)321:574(1989))。 在另一个实施例中，可以使用聚合材料（参见控制释放申请案医疗应用（兰格和怀斯编， 1974);受控药物生物可用性、药品设计和性能(Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design and Performance)(斯蒙伦（Smolen)和鲍尔（Ball)编，1984);罗杰尔 (R a n g e r )和派帕斯（P e p p a s )，高分子科学期刊-高分子化学评述 (J .Macromol · Sc i · Rev · Macromol · Chem. )23:61(1983);拉维（Levy)等人，科学 228:190 (1985);杜林格（During)等人，神经学年刊（Ann .Neurol · )25:351( 1989);和霍沃德 (Howard)等人，神经外科杂志(J.Neurosurg. )71:105(1989))。在又一个实施例中，控制或 持续释放系统可以靠近感染目标(例如皮肤、肺、脊柱、脑或胃肠道)放置，因此仅需要一部 分全身性剂量。
[0126] 当呈片剂或丸剂形式时，本发明的医药组合物可以经包覆以延迟在胃肠道中的崩 解和吸收，由此提供历时延长时间段的持续作用。包围渗透活性驱动化合物的可选择性渗 透膜也适用于经口投与的组合物。在后面的这些平台中，来自包围胶囊的环境的流体由驱 动化合物吸收，所述驱动化合物膨胀以使药剂或药剂组合物移位穿过开口。这些传递平台 可以提供与立即释放配制品的尖峰状曲线相对的基本上零级传递曲线。还可以使用延时材 料，如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。口服组合物可以包括标准赋形剂，如甘露醇、乳糖、 淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素和碳酸镁。在一个实施例中，所述赋形剂是医药级的。
[0127] 还可以使用例如常规栓剂基质（如可可脂或其它甘油酯)将本发明的医药组合物 配制在如栓剂或保留灌肠剂的直肠组合物中。
[0128] 适于在本发明的情形下使用的医药组合物包括含有有效实现预期目的的量的活 性成分的组合物。更确切地说，"治疗有效量"意思是有效预防、缓解或改善致病性感染的症 状(例如，发热)或延长所治疗个体的存活期的活性成分(例如，肽和抗生素）的量。治疗有效 量的确定完全在所属领域的技术人员的能力范围内，尤其根据本文提供的详细公开内容。
[0129] 对于本发明的方法中所用的任何制剂，最初可以由体外和细胞培养物分析来估计 剂量或治疗有效量。举例来说，可以在动物模型中配制剂量以达到所要浓度或效价。这类信 息可以用于更准确地确定人类适用剂量。
[0130] 本文所述的活性成分的毒性和疗效可以通过体外、细胞培养物或实验动物中的标 准医药程序来确定。从这些体外和细胞培养物分析以及动物研究获得的数据可以用于配制 一系列适用于人类的剂量。剂量可以视所采用的剂型和所利用的投与途径而变化。个别医 师可以鉴于患者的病状选择准确的配制品、投与途径和剂量。（参见例如芬格尔(Fingl，E.) 等人（1975)，"治疗学的药理学基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics)"，第 1章第1页。）可以独立地调节剂量和投与间隔以提供足够的活性成分的血浆或脑含量，从而 诱导或抑制生物学作用（即，最小有效浓度MEC或最小杀细菌浓度MBChMEC将针对各个制剂 而变化，但是可以从体外数据估计。达到MEC所必需的剂量将取决于个体特征和投与途径。 可以使用检测分析测定血浆浓度。
[0131 ] 适合的有效剂量可以介于患者每天约0.01mg/kg体重至约3000mg/kg体重范围内， 但是其通常是患者每天约0. 〇lmg/kg体重至约2500mg/kg体重或患者每天约0.01mg/kg体重 至约1000mg/kg体重。在一个实施例中，有效剂量是患者每天约100mg/kg体重或更少。在另 一个实施例中，有效剂量范围介于每天患者约〇.〇lmg/kg体重至约100mg/kg体重的抗生素 或肽，在另一个实施例中，患者每天约0.02mg/kg体重至约50mg/kg体重，并且在另一个实施 例中，患者每天约0. 〇25mg/kg体重至约20mg/kg体重。
[0132] 可以单次剂量形式或以分次剂量形式投与。在一个实施例中，约每24小时投与有 效剂量或与细菌接触，直到病状减轻为止。在另一个实施例中，约每12小时投与有效剂量或 与细菌接触，直到病状减轻为止。在另一个实施例中，约每8小时投与有效剂量或与细菌接 触，直到病状减轻为止。在另一个实施例中，约每6小时投与有效剂量或与细菌接触，直到病 状减轻为止。在另一个实施例中，约每4小时投与有效剂量或与细菌接触，直到病状减轻为 止。本文所述的有效剂量是指所投与的各抗生素或肽的量。
[0133] 视待治疗病状的严重程度和反应性而定，给药可以是单个或多个投与，疗程持续 数天至数周或直到实现治愈或实现疾病病况减弱为止。
[0134] 待投与的组合物的量当然将取决于所治疗的个体、病痛的严重程度、投药方式、处 方医师的判断等。
[0135] 必要时，本发明的组合物可以呈现于包装或分配装置中，如FDA批准的试剂盒，其 可以含有一或多个含有活性成分的单位剂型。包装可以例如包含金属或塑料箱，如泡罩包 装。包装或分配装置可以附有投药说明书。包装或分配装置还可以附有注意事项，呈管理医 药的制造、使用或出售的政府机构规定的形式，所述注意事项反映了所述组合物的形式由 所述机构批准用于人类或兽医投与。此类注意事项例如可以包括由美国食品和药物管理局 (U.S.Food and Drug Administration)批准用于处方药物的标签或所批准的产品说明书。 还可以制备包含在医药学上可接受的载剂中配制的本发明制剂的组合物，放置在适当容器 中并且标注为用于治疗指定病状，如上文所进一步详述。
[0136] 本发明的医药组合物包括适于口服的单个单位剂型，如(但不限于)适用于控制或 持续释放的片剂、胶囊、软胶囊和囊片。
[0137] 以下实例说明但不限制本发明的组合物和方法。通常在细菌感染治疗中所遇到并 且鉴于本公开内容而对所属领域的技术人员明显的多种条件和参数的适合修改和调适在 本发明的精神和范围内。
[0138] 实例
[0139] 实例1-苯唑西林和包含FDYDWY的肽针对甲氧西林抗性和甲氧西林敏感性金黄色 葡萄球菌的活性
[0140] 金黄色葡萄球菌ATCC 43300(5X 105CFU/mL)(MRSA菌株)在具有仅苯唑西林或苯 唑西林与grZ14s-nvCyc肽（10nM)(环化CSVHSFDYDWYNVC)的1.5mL艾本德（Eppendorf)管中 在37°C下振荡（250rpm)培育24小时。管中溶液通过连续稀释用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释 十倍。接着将所稀释的溶液接种于血液琼脂板上并且在37°C下培育24小时。结果表示血液 琼脂板上计数的菌落形成单位(CFU)的数目。
[0141 ] 结果呈现在图la中。图la展现苯唑西林与grZ14s_nvCyc-起的杀细菌浓度比仅苯 唑西林低得多，由此证实grZ14s-nvCyC增强所述抗生素的活性。
[0142] 作为比较，甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株(5X105CFU/mL)用仅 苯挫西林或苯唑西林与grZ14s_nvCyc( 10nM)处理。结果呈现在图lb中。图lb展现在有或无 grZHs-nvCyc的情况下苯唑西林活性之间不存在显著差异。这证实本发明的肽的活性增强 抗生素针对抗生素抗性物种的活性。
[0143] 使用浓度为7 X106CFU/mL的金黄色葡萄球菌ATCC 43300进行类似分析。此分析中 的细菌浓度较高（~7X106CFU/mL)。结果呈现在图2中。图2展现苯唑西林与grZ14s-nvCyc 一起对金黄色葡萄球菌ATCC 43300MRSA菌株的杀细菌浓度比仅苯唑西林低得多。在 grZ14s-nvCyc存在下，杀死细菌所需的苯唑西林浓度(6.25yg/mL)甚至低于杀死相同细菌 浓度（~7 X106CFU/mL)的甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌ATCC 25923所需的苯唑西林浓 度（12.5yg/mL)。这一结果证实本发明的肽降低MRSA菌株ATCC43300的抗性并且使其与敏感 性金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株相比对苯唑西林更敏感。
[0144] 实例2-苯唑西林和包含FDYDWY的肽针对甲氧西林抗性和甲氧西林敏感性金黄色 葡萄球菌的活性
[0145] 金黄色葡萄球菌ATCC 33591(MRSA菌株）（5X107CFU/mL)和甲氧西林敏感性金黄 色葡萄球菌菌株(MSSA)ATCC 25923( 1 X 108CFU/mL)在具有仅苯唑西林或苯唑西林与 grZ14s-nvCyc(10nM)的1.5mL艾本德管中在37°C下振荡（250rpm)培育24小时。管中溶液通 过连续稀释用PBS稀释十倍。接着将所稀释的溶液接种于血液琼脂板上并且在37°C下培育 24小时。
[0146] 结果呈现在图3中。如图3中所见，苯唑西林针对MRSA和MSSA的杀细菌浓度在本发 明的肽存在下降低至约一半。因此，图3证实本发明的肽的活性通过减少抗生素特异性和非 特异性抗性机制而增强抗生素针对抗生素抗性物种和抗生素敏感性物种的活性。
[0147] 金黄色葡萄球菌ATCC 33591(5 X 105CFU/mL)(MRSA菌株)在具有仅苯唑西林或苯 唑西林与grZ14s-nvCyc肽（10nM)的1.5mL艾本德管中在37°C下振荡（250rpm)培育24小时。 细菌在培养物中的较低浓度使得细菌可以保持在浮游状态并且仅呈现特异性抗性机制。管 中溶液通过连续稀释用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释十倍。接着将所稀释的溶液接种于血液 琼脂板上并且在37 °C下培育24小时。
[0148] 结果呈现在图4a中。图4a展现苯唑西林与grZ14s_nvCyc-起的杀细菌浓度比仅苯 唑西林低得多，由此证实grZHs-nvCyc增强所述抗生素的活性。所述活性证实本发明的肽 针对展现特异性抗性机制的细菌的活性。
[0149] 作为比较，细菌浓度与图4a中的金黄色葡萄球菌ATCC 33591浓度(MRSA菌株(5 X 105CFU/mL)类似的甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株(1 X 106CFU/mL)用仅苯 P坐西林或苯唑西林与grZ14s_nvCyc( ΙΟηΜ)肽处理。结果呈现在图4b中。图4b展现在有或无 grZHs-nvCyc的情况下苯唑西林活性之间不存在显著差异。这证实本发明的肽的活性通过 减少特异性抗生素抗性而增强抗生素针对抗生素抗性物种的活性。
[0150] 实例3-万古霉素与包含n)YDWY的肽组合针对屎肠球菌抗性物种的活性
[0151] 屎肠球菌ATCC 700221(4X 102CFU/mL)(万古霉素、替考拉宁和四环素抗性菌株） 在具有仅万古霉素或万古霉素与grZHs-nvCyc肽（ΙΟηΜ)的1.5mL艾本德管中在37°C下振荡 (250rpm)培育24小时。管中溶液通过连续稀释用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释十倍。接着将所 稀释的溶液接种于血液琼脂板上并且在37°C下培育24小时。
[0152]结果呈现在图5中。图5展现万古霉素与grZHs-nvCyc-起的杀细菌浓度比仅万古 霉素低得多（约50%)，由此证实grZ14s-nvCyc增强所述抗生素对万古霉素抗性菌株的活 性。
[0153] 实例4-替考拉宁与包含roYDWY的肽组合针对屎肠球菌抗性物种的活性
[0154] 屎肠球菌ATCC 700221(2X 102CFU/mL)(万古霉素、替考拉宁和四环素抗性菌株） 与仅替考拉宁或替考拉宁与grZHs-nvCyc肽（ΙΟηΜ)-起在37°C下振荡（250rpm)培育24小 时。如上所述处理溶液。
[0155] 结果呈现在图6中。图6展现替考拉宁与grZHs-nvCyc-起的杀细菌浓度比仅替考 拉宁低得多(低约60%)，由此证实grZHs-nvCyc增强所述抗生素对替考拉宁抗性菌株的活 性。
[0156] 实例5-氨苄西林与包含n)YDWY的肽组合针对肺炎克雷伯氏菌抗性物种的活性
[0157] 肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢 泊肟、头孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（3X105CFU/mL)与仅氨苄西林或氨苄西 林与grZHs-nvCyc肽（ΙΟηΜ)-起在37°C下振荡（250rpm)培育24小时。管中溶液通过连续稀 释用磷酸盐缓冲盐水(PBS)稀释十倍。接着将所稀释的溶液接种于血液琼脂板上并且在37 °C下培育24小时。
[0158] 结果呈现在图7中。图7展现即使极高浓度的仅氨苄西林仍不能在(3X105CFU/mL) 的细菌浓度下实现细菌杀死。然而，氨苄西林与grZHs-nvCyc的组合在显著较低浓度(低~ 100%)下实现杀细菌活性。这一实验证实grZ14s-nvCyc增强抗生素对氨苄西林抗性菌株的 活性。
[0159] 使用2 X103CFU/mL较低细菌浓度的肺炎克雷伯氏菌进行类似分析。结果呈现在图 8中。如图8中所见，在较低细菌浓度下，抗生素氨苄西林在仅抗生素存在下实现细菌杀死。 另外，图8还展现氨节西林与grZ14s-nvCyc-起的杀细菌浓度比仅氨节西林低100yg/mL，由 此证实grZHs-nvCyc增强所述抗生素针对展现特异性抗性的抗生素抗性物种的活性。
[0160] 实例6-头孢西丁与包含roYDWY的肽组合针对肺炎克雷伯氏菌抗性物种的活性
[0161] 肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西丁、头孢 泊肟、头孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（2X106CFU/mL)与仅头孢西丁或头孢西 丁与grZHs-nvCyc肽（10nM)-起在37°C下振荡（250rpm)培育24小时。接着如以上实例中所 述处理溶液。
[0162] 结果呈现在图9中。图9展现头孢西丁与grZHs-nvCyc-起的杀细菌浓度比仅头孢 西丁低得多（低>80% )，由此证实grZHs-nvCyc增强所述抗生素针对抗生素抗性物种的活 性。
[0163] 实例7-碳青霉烯与包含n)YDWY的肽组合针对肺炎克雷伯氏菌抗性物种(低和高细 菌浓度)的活性
[0164] 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA? 1705(3 X 102CFU/mL)(碳青霉烯酶阳性菌株）（碳青霉 烯-亚胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环丙沙星抗性菌株)与仅亚胺培 南或亚胺培南与grZHs-nvCyc肽（10nM)-起在37°C下振荡（250rpm)培育24小时。接着如以 上实例中所述处理溶液。
[0165] 结果呈现在图10中。图10展现亚胺培南与grZHs-nvCyc-起的杀细菌浓度比仅亚 胺培南低得多（低>75% )，由此证实grZHs-nvCyc增强所述抗生素针对抗生素抗性物种的 活性。细菌浓度低表明所述细菌以其浮游状态存在。因此，假定本发明的肽具有针对所述细 菌的特异性抗性机制的活性。
[0166] 类似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA」51705(lX106CFU/mL)与仅亚胺培南或亚胺培 南与grZ14s-nvCyc-起培育。结果呈现在图11中。图11展现亚胺培南与grZ14s-nvCyc-起 的杀细菌浓度比仅亚胺培南低得多（低>75% )，由此证实grZHs-nvCyc增强所述抗生素针 对抗生素抗性物种的活性。分析中的细菌浓度较高表明所述细菌可能处于浮游或生物膜阶 段。结果证实本发明的肽即使在较高细菌负载下具有针对抗生素抗性物种的活性。
[0167] 实例8-莫匹罗星与包含H3YDWY的肽组合针对MRSA的活性
[0168] 金黄色葡萄球菌ATCCBAA? 1708 (MRSA菌株，mupA阳性）（1 X 105CFU/mL)如以上实 例中所述与仅莫匹罗星或莫匹罗星与grZHs-nvCyc-起培育。结果呈现在图12中。图12展 现细菌负载在莫匹罗星与grZ14s-nvCyc的组合存在下减少至少一个数量级。
[0169] 实例9-蛋白质合成抑制剂与包含n)YDWY的肽组合的活性
[0170] 屎肠球菌ATCC 700221(lX103CFU/mL)(万古霉素、替考拉宁和四环素抗性菌株） 如以上实例中所述与仅四环素或四环素与grZ14S-nvCyc(10mN)-起培育。结果呈现在图 13a中。图13a展现四环素与grZ14s-nvCyc-起针对抗生素抗性物种的杀细菌浓度比仅四环 素低得多（低60% )。类似地，屎肠球菌ATCC 700221 (2 X 105CFU/mL)(万古霉素、替考拉宁和 四环素抗性菌株）如以上实例中所述与仅四环素或四环素与grZ14S-nvCyc(10mN)-起培 育。结果呈现在图13b中。图13b展现四环素与grZ14s-nvCyc-起针对抗生素抗性物种的杀 细菌浓度比仅四环素低得多(低~70% )。
[0171] 类似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX105CFU/mL)如以上实例中所述与仅 环丙沙星或环丙沙星与grZ14s-nvCyc-起培育。结果呈现在图14中。图14展现环丙沙星与 grZ14s-nvCyc-起针对抗生素抗性物种的杀细菌浓度比仅环丙沙星低得多(低80% )。
[0172] 类似地，肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西 丁、头孢泊肟、头孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（4X106CFU/mL)如以上实例中 所述与仅氯胺苯醇或氯胺苯醇与grZ14s-nvCyc-起培育。结果呈现在图15中。图15展现氯 胺苯醇与grZHs-nvCyc在仅氯胺苯醇未实现细菌杀死的浓度下实现细菌杀死。
[0173] 类似地，肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨苄西林、氨曲南、头孢西 丁、头孢泊肟、头孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四环素抗性）（IX 103CFU/mL)如以上实例中 所述与仅氯胺苯醇或氯胺苯醇与grZ14s-nvCyc-起培育。结果呈现在图16中。在此实例中， 细菌浓度较低，因此仅抗生素可以实现杀细菌活性。图16展现氯胺苯醇与grZHs-nvCyc- 起针对抗生素抗性物种的杀细菌浓度比仅氯胺苯醇低得多(20% )。
[0174] 类似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAAK1705(1 X 106CFU/mL)(碳青霉烯-亚胺培南和 厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环丙沙星抗性菌株)如以上实例中所述与仅阿 米卡星或阿米卡星与grZ14s-nvCyc-起培育。结果呈现在图17中。图17展现氯胺苯醇与 grZ14s-nvCyc-起针对抗生素抗性物种的杀细菌浓度比仅氯胺苯醇低得多(75% )。
[0175] 实例10-左氧氟沙星与包含roYDWY的肽组合的活性
[0176] 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA'iil705(2 X 106CFU/mL)(碳青霉烯-亚胺培南和厄他培 南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环丙沙星抗性菌株)如以上实例中所述与仅左氧氟沙 星或左氧氟沙星与grZ14s-nvCyc-起培育。结果呈现在图18中。图18展现左氧氟沙星与 grZ14s-nvCyc-起针对抗生素抗性物种的杀细菌浓度比仅左氧氟沙星低得多(30% )。
[0177] 实例11-氨曲南与包含roYDWY的肽组合的活性
[0178] 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX105CFU/mL)(碳青霉烯-亚胺培南和厄他培 南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和环丙沙星抗性菌株)如以上实例中所述与仅氨曲南或 氨曲南与grZ14s-nvCyc-起培育。结果呈现在图19中。图19展现氨曲南与grZ14s-nvCyc在 仅氨曲南未实现细菌杀死的浓度(1 〇〇〇μg/ml)下实现细菌杀死。
[0179] 类似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX103CFU/mL)如以上实例中所述与仅 氨曲南或氨曲南与grZHs-nvCyc-起培育。在此实例中，细菌浓度较低，因此仅抗生素能够 实现杀细菌活性。结果呈现在19b中。图19b展现氨曲南与grZ14s-nvCyc-起针对抗生素抗 性物种的杀细菌浓度比仅氯胺苯醇低得多(80% )。
【主权项】
1. 一种增加抗生素针对细菌的有效性的方法，其包含使所述细菌与所述抗生素和包含 序列FDYDWY的肽接触。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述抗生素针对所述细菌的最小杀细菌浓度降低 至少10%。3. 根据权利要求1所述的方法，其中所述细菌是抗生素抗性物种。4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述肽包含至多50个氨基酸。5. 根据权利要求1所述的方法，其中所述抗生素选自由胞外被膜抗生素、核酸抑制剂和 蛋白质合成抑制剂组成的群组。6. 根据权利要求5所述的方法，其中所述抗生素是选自由以下组成的群组的胞外被膜 抗生素:青霉素(penicillin)、头胞菌素(cephalosporin)、糖肽和碳青霉稀(carbapenem)。7. 根据权利要求6所述的方法，其中所述抗生素是选自由以下组成的群组的青霉素:苯 P坐西林（oxacillin)、甲氧西林（methicillin)、阿莫西林（amoxi ci llin)、氨节西林 (ampicillin)、氯挫西林（cloxacillin)、双氯西林（dicloxacillin)、卡本西林 (carbenici 11 in)、替卡西林(ticarci 11 in)和哌拉西林(piperacillin) 〇8. 根据权利要求6所述的方法，其中所述抗生素是选自由以下组成的群组的头孢菌素： 头孢乙腈（〇6€8061：1'；[16)、头孢轻氨节（06€3(11'(?；[1)、头孢力新（06。1^161；[11)、头孢来星 (cefaloglycin)、头抱洛宁（cefalonium)、头抱噻啶（cefaloridine)、头抱噻吩 (cefalotin)、头抱匹林(cefapirin)、头抱曲秦(cefatrizine)、头抱氮氣(cefazaf lur)、头 抱西酮（cefazedone)、头抱唑林（cefazolin)、头抱拉定（cefradine)、头抱沙定 (。6；^(?&(1；[116)、头抱替唑(06；1^62〇16)、头抱克洛(06€&(31〇1')、头抱尼西(06；1^011；[(^(1)、头抱 丙稀（cefprozil)、头抱咲辛（cefuroxime)、头抱唑喃（cefuzonam)、头抱美挫 (06^116七&2〇16)、头抱替坦(06；1^(^6七&11)、碳头抱稀(0&1^&06。116111):氯碳头抱（1〇抑0&1^6；〇、 头抱拉宗（cef buperazone )、头抱美唑（cefmetazole)、头抱米诺（cefminox)、头抱替坦 (06；1^(^6七311)、头孢西丁（06；1^(?；[1：；[11)、头孢替安（06；1^01：13111)、头孢克定（06；1^11(1；[116)、头孢 P比月亏（cefepime)、头孢瑞南（cefluprenam)、头孢噻利（cefoselis)、头孢唑兰 (cefozopran)、头孢匹罗（cefpirome)、头孢喹Η亏(cefquinome)、氟氧头孢(f lomoxef)、头孢 P比普（ceftobiprole)和头抱洛林(ceftaroline)。9. 根据权利要求6所述的方法，其中所述抗生素是选自由万古霉素(vancomycin)和替 考拉宁(te i cop lanin)组成的群组的糖肽。10. 根据权利要求6所述的方法，其中所述抗生素是选自由以下组成的群组的碳青霉 稀：亚胺培南（imipenem)、莫若培南（morepenem)、厄他培南（ertapenem)、多尼培南 (doripenem)、帕尼培南(panipenem)和比阿培南(biapenem) 〇11. 根据权利要求5所述的方法，其中所述抗生素是选自由氟喹诺酮 (f luoroqu ino 1 one)组成的群组的核酸抑制剂。12. 根据权利要求11所述的方法，其中所述氟喹诺酮是环丙沙星(ciprofloxacin)。13. 根据权利要求5所述的方法，其中所述抗生素是选自由氯胺苯醇 (chloramphenicol)和阿米卡星(amikacin)组成的群组的蛋白质合成抑制剂。14. 根据前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其中所述肽具有序列 CSVHSFDYDWYNVCo15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述肽经环化。16. 根据权利要求14所述的方法，其中所述肽借助羧基端和氨基端处的两个半胱氨酸 环化。17. 根据权利要求1所述的方法，其中所述抗生素和所述肽投与有需要的个体。18. 根据权利要求17所述的方法，其中所述个体是具有细菌感染的哺乳动物。19. 根据权利要求18所述的方法，其中所述细菌感染是由抗生素抗性物种引起。20. 根据权利要求18所述的方法，其中所述哺乳动物是人类。21. -种组合物，其包含抗生素和包含序列FDYDWY的肽。22. 根据权利要求21所述的组合物，其中所述肽包含至多50个氨基酸。23. 根据权利要求22所述的组合物，其中所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。24. 根据权利要求21所述的组合物，其中所述抗生素因特定细菌物种针对所述抗生素 的特异性或非特异性抗性而针对所述细菌呈现减小的活性。25. 根据权利要求23所述的组合物，其中所述肽借助羧基端和氨基端处的两个半胱氨 酸环化。
【文档编号】C07K7/06GK105828828SQ201480066565
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2014年10月31日
【发明人】阿米尔·兹洛特金
【申请人】和黄生物膜医疗解决方案有限公司