无针注射犬病毒疫苗系统与应用

无针注射犬病毒疫苗系统与应用
【专利摘要】本发明公开了无针注射犬病毒疫苗系统与应用，本发明提供了无针注射犬病毒疫苗系统，包括灌装有犬病毒疫苗的容器和可读载体；所述可读载体记载内容包括：所述犬病毒疫苗的无针注射剂量不大于该犬病毒疫苗标准剂量。本发明实验证明了无针注射安瓿与无针注射器联合应用进行免疫时，抗原用量只需传统肌肉注射抗原用量的一部分，即可与其产生相同或更高的免疫效果。进一步说明无针免疫途径方式为免疫犬病毒疫苗可供选择的理想策略。
【专利说明】
无针注射犬病毒疫苗系统与应用
技术领域
[0001 ]本发明涉及医药领域，尤其是传染性疾病领域。更具体地，涉及无针注射犬病毒疫 苗系统与应用。适用于各类犬病毒疫苗免疫预防接种。
【背景技术】
[0002] 目前，国内外普遍采用不锈钢注射针头对人或动物进行药物或疫苗的注射，众所 周知，针头的注射会带来诸多不便，注射的安全性已成为临床操作的热点关注问题。因此， 一种可替代传统有针注射方式的药物或疫苗接种方式诞生一一无针注射。近年来，无针注 射技术处在飞速发展阶段，由传统的高压无针注射创伤大，发展到今天低压无针注射创伤 小，推动了无针注射技术发展与应用，因其突出的优势在疫苗相关领域将会拥有广泛的应 用前景。
[0003] 犬病毒性疾病主要指犬狂犬病、犬痕热、犬副流感、犬腺病毒病、犬细小病毒病，也 可以是任何一种犬的传染性疾病或流行病。狂犬病乃狂犬病毒(Rabies viruS，RV)所致的 急性传染病，人兽共患，多见于犬、狼、猫等肉食动物，主要是由狂犬病毒通过动物传播给人 的一种严重的急性传染病。犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种高度接触性传染病，传染性 极强，死亡率可高达80%以上。犬瘟热病毒最初感染开始于病毒侵袭上呼吸道上皮细胞。病 毒很快扩散至局部淋巴组织、扁桃腺、和支气管淋巴结。犬副流感是犬副流感病毒感染犬的 主要的呼吸道传染病。病理变化以卡他性鼻炎和支气管炎为特征。研究表明，犬副流感病毒 也可引起急性脑髓炎和脑内积水，后躯麻癖和运动失调等症状。该病在全国各地均有发生。 犬腺状病由犬腺状病毒引起，犬腺状病毒(CanineadenovirusCAV)是哺乳动物腺病毒属中 致病性最强的一种病毒，流行于我国和世界各地家养的犬、狐中，而且广泛地流行于野生的 狐、熊、郊狼和浣熊等动物中。本病一年四季均可发生，其中以离乳至一岁的动物，发病率和 死亡率最高。病程较犬瘟热短，大约在2周内恢复或死亡，有时在数日内死亡。如与犬瘟热混 合感染，则死亡率更高。犬细小病毒对犬具有高度的接触性传染性，各种年龄的犬均可感 染。但以刚断乳至90日龄的犬发病较多，病情也较严重。幼犬有的可呈现心肌炎症状而突然 死亡。据临床发病犬的种类来看，纯种犬及外来犬比土种犬发病率高。犬狂犬病、犬痕热、犬 副流感、犬腺病毒病、犬细小病毒病严重影响了军警犬的发展、名优珍贵犬品种的保种以及 民间守门防盗犬的生命安全，而且狂犬病还是人兽共患病毒性传染病。
[0004] 目前，国内主要使用五联弱毒疫苗进行预防接种。接种方式多采用有针肌肉或皮 下部位免疫，存在抗原用量大，免疫应答较弱与免疫保护不足及副作用大的现实问题。许多 研究已经证实经皮肤注射的药物或疫苗进入真皮层，因真皮层包含丰富的抗原呈递细胞将 抗原呈递给T细胞从而引起免疫应答，故皮肤的免疫原性优于肌肉或其他途径。无针皮内注 射仅需肌肉注射的部分剂量即可引起相同或者更强的免疫反应。这样既节约疫苗用量，降 低成本，解决疫苗短缺的限制，又降低了发生深层渗透的几率。无针皮下注射、无针肌肉注 射可减少出血与感染的风险。无针连续注射可提高免疫速度，适用于大规模免疫接种。利用 无针注射进行常规疫苗的接种能很好的解决下述问题:一、因有针注射引起的动物疾病的 交叉感染;二、注射速度慢;三、消减注射疼痛带来的应激反应；四、排除断针残留动物体内 的隐患等。

【发明内容】

[0005] 本发明的一个目的是提供无针注射犬病毒疫苗系统。
[0006] 本发明提供的无针注射犬病毒疫苗系统，为如下1)或2):
[0007] 1)所示的系统包括灌装有犬病毒疫苗的容器，所述犬病毒疫苗的灌装剂量小于等 于该犬病毒疫苗的标准剂量;其中，灌装有犬病毒疫苗的容器为使用的装有犬病毒疫苗的 容器；
[0008] 2)所示的系统包括灌装犬病毒疫苗的容器和可读载体;所述可读载体记载内容包 括:所述犬病毒疫苗的无针注射剂量小于等于该犬病毒疫苗标准剂量。其中，灌装有犬病毒 疫苗的容器为可多次连续使用的装有犬病毒疫苗的容器。
[0009] 上述系统中，犬病毒疫苗标准剂量为1头份犬病毒疫苗肌肉注射剂量；1头份犬病 毒疫苗肌肉注射剂量通过病毒含量体现。
[0010] 不同的犬病毒疫苗，1头份犬病毒疫苗肌肉注射剂量的体积和病毒含量不同：
[0011] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的狂犬病弱毒病毒含量2 105^050/0.031111，体积一般 为2.0ml;
[0012] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的犬痕热弱毒病毒含量2 104'5TCID50/0 . lml，体积一 般为2.0ml;
[0013] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的犬副流感弱毒病毒含量2 104'5TCID50/0.1ml，体积 一般为2.0ml;
[0014] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的犬腺病毒弱毒病毒含量2 lOMTCIDSO/O . lml，体积 一般为2.0ml;
[0015] 1头份犬病毒疫苗的肌肉注射犬细小病毒弱毒病毒含量2 104'5TCID50/0.1ml，体 积一般为2.0ml。
[0016] 上述系统中，所述犬病毒疫苗的灌装剂量为1/5倍-1倍该犬病毒疫苗的标准剂量；
[0017] 所述犬病毒疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1倍该犬病毒疫苗标准剂量。
[0018] 上述系统中，所述犬病毒疫苗的灌装剂量为1/5倍-1/3倍该犬病毒疫苗的标准剂 量；
[0019] 所述犬病毒疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1/3倍该犬病毒疫苗标准剂量。
[0020] 1/5倍或1/3倍犬病毒疫苗标准剂量为1头份犬病毒疫苗肌肉注射剂量的病毒含量 的1/5或1/3倍。
[0021] 上述系统中，
[0022] 所述犬病毒疫苗为单价犬病毒疫苗或多价犬病毒疫苗；
[0023] 所述多价犬病毒疫苗为多种犬病毒疫苗联合组成；
[0024]每种犬病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量均为小于等于该犬病毒疫苗的标准 剂量；
[0025]和/或，每种犬病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5倍-1倍该犬病毒 疫苗的标准剂量；
[0026] 和/或，每种犬病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5倍-1/3倍该犬病 毒疫苗的标准剂量；
[0027] 和/或，所述多价犬病毒疫苗具体由犬狂犬病疫苗、犬瘟热疫苗、副流感疫苗、腺病 毒病疫疫苗、小病毒病疫苗中至少两种组成。实施例中，所述多价犬病毒疫苗为五价犬病毒 疫苗，具体为购买自吉林省五星动物保健药厂的犬狂犬病、犬痕热、副流感、腺病毒病、细小 病毒病的五联犬病毒活疫苗；
[0028] 上述系统中，所述犬病毒疫苗为无佐剂犬病毒疫苗或由犬病毒疫苗抗原和佐剂组 成的疫苗，
[0029] 所述犬病毒疫苗抗原或所述无佐剂犬病毒疫苗均为病毒灭活疫苗、病毒裂解疫 苗、纳米颗粒疫苗、减毒活疫苗、合成肽疫苗、重组VLP疫苗、基因工程疫苗、基因缺失疫苗、 活载体疫苗、核酸疫苗等中的任何一种或几种混合，但不限于此；
[0030] 和/或，所述佐剂具体为SP0UISA206、氢氧化铝胶、矿物油、卡波姆、Gel 01、蜂胶、 黄芪多糖、ISA760VG和弗氏佐剂的一种或几种组合物，但不限于此。
[0031] 上述疫苗中，1)所示的系统或2)所示的系统均还包括与所述灌装有犬病毒疫苗的 容器配套使用的无针注射装置；
[0032] 和/或，所述无针注射装置具体为无针注射器。上述无针注射器为江苏米特公司无 针注射器(例如:MG-0.1;MP-0.1)，本实施例中用的是ΜΡ-0.1。
[0033] 上述犬病毒疫苗的剂型为液体、冻干剂、粉末、乳脂或利用生物降解材料包埋的疫 苗制剂等，但不限于此。
[0034] 上述系统中，所述灌装有犬病毒疫苗的容器为灌装有疫苗的一次性无针注射安 瓿，其包括：
[0035]预灌装疫苗的一管体，
[0036] -体设置于所述管体一端的一无针注射器接头，
[0037] 由所述管体另一端滑动设置在所述管体内、并封闭所述管体的一动力推杆，
[0038] 设置在所述无针注射器接头内的一喷射口，
[0039]易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆，
[0040] 可拆卸地设置在所述无针注射器接头上、并封闭所述喷射口的一密封帽，和
[0041] 可拆卸地设置在所述动力推杆上、并与所述管体的入口相嵌合的一密封锁块；
[0042] 其中，所述喷射口具有一止动槽，所述喷射口通过所述止动槽与所述管体内腔相 连通;所述止动杆与所述止动槽相配合。
[0043] 上述系统中，所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致;所述止动杆和止动槽 为锥形;所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上；
[0044] 所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽 中，从而可拆卸地安装在所述动力推杆上；
[0045] 所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上;所述动力推杆 上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在 所述动力推杆上；
[0046] 所述管体、无针注射器接头、喷射口和止动槽一体制造而成。
[0047] 所述管体、无针注射器接头、动力推杆、喷射口和止动杆均采用优质医用级材料制 成，如玻璃、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、COP或者环状聚烯烃等中的一种或几种混合制造而 成，或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物理改性进行优化的材料，但不 限于此。
[0048] 上述管体的长度为1.5-4cm，所述无针注射器接头的长度为0.5-2cm，所述动力推 杆的长度为1.5-6cm，整个无针注射安瓿的长度为2-6cm;所述喷射口的直径为0.05-0.25mm〇
[0049] 上述系统中，1)所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积为0.05-lml;
[0050] 2)所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积为0.5-200ml;
[0051] 和/或，2)所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积具体为50-200ml;
[0052] 和/或，2)所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积具体为50-100ml;
[0053] 2)所示的系统中，所述可读载体记载内容还包括所述犬病毒疫苗的无针注射部位 和所述犬病毒疫苗的无针注射方式；
[0054] 所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉；
[0055] 所述无针注射方式为多次连续免疫或单次免疫。
[0056] 连续多次免疫为一管疫苗多次或多头（只）免疫，可设定相同剂量多次免疫，或设 定不同剂量多次免疫。
[0057] 上述系统在制备免疫动物产品中的应用也是本发明保护的范围。
[0058]上述应用中，所述动物具体为家畜，所述家畜尤其具体为犬。
[0059] 本发明还保护一种对动物或人免疫犬病毒疫苗的方法，为用上述系统进行免疫， 免疫剂量为上述系统中的无针注射剂量。
[0060] 上述方法中，免疫方式具体为多次连续免疫或单次免疫;免疫部位具体为皮内、皮 下或肌肉。
[0061] 本发明的疫苗可以单剂量免疫方案递送。或者，本发明的疫苗也可作为初始免疫-加强免疫的方案的基本单元递送(这意味着在第一次免疫后数周或数月内进行抗原性相似 的第二次免疫）。
[0062]免疫原性的特征为，与疫苗施用相关的，能够刺激机体形成特异中和抗体，或刺激 特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应。
[0063]安全性的特征为，与疫苗施用相关的副作用的局限，尤其是注射部位经无针注射 装备注射后的反应减轻或缺乏。
[0064]皮肤产生免疫应答的基础为，表皮和真皮层富含朗格汉斯细胞和DC细胞，经皮免 疫的抗原被这些抗原提呈细胞捕获，转移至淋巴结，从而触发T、B细胞的活化。未被捕获的 抗原也可直接迀移至淋巴结，而后被DC细胞捕获并呈递给淋巴细胞。
[0065] 本发明的实验证明，本发明提供的无针注射犬病毒疫苗系统，不经过传统有针免 疫注射途径，能够准确、快速、无痛地将疫苗通过无针注射器注入靶向区域，更具体是不需 要大剂量抗原的途径施用疫苗，该系统预灌装疫苗的无针注射安瓿可防止二次利用，避免 交叉污染的发生，免疫前疫苗预灌装，提高注射速度，精确免疫剂量并为大规模快速免疫接 种提供可能。
[0066] 本发明的无针注射安瓿联合无针注射器的免疫方式是一种新型的免疫策略，通过 经皮的免疫途径，只需传统有针肌肉注射剂量的1/5倍、1/3或更低剂量，即可诱导抗体的产 生和全身免疫应答的免疫效果。
[0067] 本发明证实了无针注射安瓿与无针注射器联合应用进行免疫时，注射的准确性与 安全性。
[0068] 本发明的优点还在于，无针注射安瓿与无针注射器联合应用进行免疫时，抗原用 量只需传统有针肌肉注射抗原用量的一部分，即可与其产生相同或更高的免疫效果。说明 无针免疫途径方式为免疫犬病毒疫苗可供选择的理想策略。
【附图说明】
[0069]图1为无针注射安瓿结构示意图。
[0070] 图2为应用系统中的装配有墨汁的无针注射头，与无针注射器联合使用，在小鼠、 大鼠、兔子皮肤内墨汁分布的照片。
[0071] 图3为Draize scale评分标准。
[0072] 图4为灌装有犬病毒疫苗的容器与无针注射器的联合使用经皮内注射犬的DRAIZE 评分。
【具体实施方式】
[0073] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0074] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0075] 下述内容为本发明的示例及时说明，但不意味着因此受此限制，凡是本发明在应 用过程中可能对结构的简单变换、和/或一些实施方式中实现的优点的其中一个或多个均 在本申请的保护范围内。
[0076]实施例1、无针注射安瓿的制备
[0077] 下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。
[0078] 如图1A、图1B所示，本发明提供的预装疫苗或药品的无针注射安瓿，其包括一管体 1、一无针注射器接头2、一动力推杆3、一喷射口 4、一止动杆5、一密封帽6和一密封锁块7;其 中，管体1用于预灌装固定精确剂量的疫苗或药品，无针注射器接头2-体设置于管体1的一 端，动力推杆3由管体1的另一端滑动设置在管体1内，并封闭管体1;喷射口4设置在无针注 射器接头2内，其具有一止动槽8，喷射口4通过止动槽8与管体1内腔相连通;止动杆5易断地 连接于动力推杆3的前端，且止动杆5与止动槽8相配合。当动力推杆3向前运动至管体1底 部，将疫苗从喷射口 4释放时，止动杆5与止动槽8吻合，止动杆5与动力推杆3断开连接，并停 留在止动槽8内，从而防止无针注射安瓿的重复利用。密封帽6可拆卸地设置在无针注射器 接头2上，并封闭喷射口 4,密封锁块7可拆卸地设置在动力推杆3上，并且与管体1的入口相 嵌合;在向管体1灌装精确剂量的疫苗或药品后，将密封锁块7安装于动力推杆3的密封锁块 凹槽9中，同时在无针注射器接头2上安装密封帽6,可以避免空气、细菌等与疫苗或药品接 触，达到无菌要求，还可以防止意外碰触导致动力推杆移动带来的药品溢出，有利于疫苗或 药品的长时间储存和运输。
[0079] 上述实施例中，密封帽6采用嵌合结构可拆卸地设置在无针注射器接头2上;动力 推杆3上设置有密封锁块凹槽9,密封锁块7嵌合在密封锁块凹槽9中，从而可拆卸地安装在 动力推杆3上。
[0080]上述实施例中，动力推杆3的直径与管体1的内径一致。
[0081 ] 上述实施例中，止动杆5和止动槽8为锥形。
[0082]上述实施例中，管体1的长度为1.5-4cm，无针注射器接头2的长度为0.5-2cm，动力 推杆3的长度为1.5-6cm，整个无针注射安瓿的长度为2-6cm;喷射口 4的直径为0 . Οδ-Ο · 25mm〇
[0083] 上述实施例中，管体1内预灌装的疫苗剂量为0.02-1.0ml。
[0084] 上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、动力推杆3、喷射口4和止动杆5均采用具 有良好透明性、较高韧性与刚性、耐高温、阻湿、与疫苗或药品相容性良好的优质医用级材 料制成，例如玻璃、聚乙稀、聚丙稀、聚碳酸酯、C0P(Cycloolefin polymer，环稀经聚合物， 一种光学塑料材料）、环状聚烯烃或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物 理改性进行优化的材料。
[0085] 上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、喷射口 4及止动槽8-体制造而成，强度 高，制造简单方便。
[0086] 上述实施例中，在疫苗或药品预灌装和无针注射安瓿的组装过程中需进行灭菌， 预装疫苗或药品的无针注射安瓿的组装和包装均在无菌生产环境下进行，同时检测物理、 化学和生物性能，且需经过不溶性微粒等检查。
[0087] 无针注射安瓿应用时，如图1B所示，首先将未使用过的预装疫苗或药品的无针注 射安瓿的密封锁块7从动力推杆3上拆卸分离，通过无针注射器接头2与无针注射器连接，再 将密封帽6取下，然后将组合后的无针注射系统抵靠在患者皮肤上定位；启动无针注射器， 无针注射器的动力装置驱动无针注射安瓿的动力推杆3相对于管体1运动至管体1底部，推 动管体1内的疫苗从喷射口 4释放，将抗原（即为疫苗)准确、快速、无痛地分布于靶向的皮 内、皮下、肌肉和粘膜等部位，可引起相当于传统针头注射免疫全剂量抗原所达到的机体免 疫保护效果。此时，与动力推杆3连接的止动杆5插入止动槽6中，顶端堵住喷射口 4，并与动 力推杆3断开连接;止动杆5停留在止动槽8内，防止二次抽药，二次接种必须更换新的安瓿， 从而防止无针注射安瓿的重复利用。
[0088] 上述各实施例仅用于说明本发明，其中各部件的结构、设置位置及其连接方式等 都是可以有所变化的，凡是在本发明技术方案的基础上进行的等同变换和改进，均不应排 除在本发明的保护范围之外。
[0089] 实施例2、无针注射犬病毒疫苗系统与应用
[0090] 本实施例的无针注射犬病毒疫苗系统包括灌装有1/5倍-1倍犬病毒疫苗标准剂量 的无针注射安瓿和配套使用的无针注射器。
[0091] 犬病毒疫苗标准剂量为1头份犬病毒疫苗肌肉注射剂量，1头份犬病毒疫苗肌肉注 射剂量通过病毒含量体现。
[0092] 不同的犬病毒疫苗，1头份犬病毒疫苗肌肉注射剂量的体积和病毒含量不同：
[0093] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的狂犬病弱毒病毒含量2 Π ^??δΟ/0.03ml，体积一般 为2.0ml;
[0094] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的犬痕热弱毒病毒含量2 104'5TCID50/0 . lml，体积一 般为2.0ml;
[0095] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的犬副流感弱毒病毒含量2 104'5TCID50/0.1ml，体积 一般为2.0ml;
[0096] 1头份犬病毒疫苗肌肉注射的犬腺病毒弱毒病毒含量2 H^^TCIDSO/O . lml，体积 一般为2.0ml;
[0097] 1头份犬病毒疫苗的肌肉注射犬细小病毒弱毒病毒含量2 104'5TCID50/0.1ml，体 积一般为2.0ml。
[0098] -、无针注射犬病毒疫苗系统的注射深度摸索
[0099] 将墨汁水溶液替换疫苗灌装到实施例1制备的无针注射安瓿，得到灌装有墨汁水 溶液的无针注射安瓿。
[0100]墨汁水溶液为将普通用蓝黑色墨水用孔径为〇.22um的滤膜过滤，收集过滤液再用 注射用水稀释得到浓度为1 %的墨汁水溶液。
[0101]将灌装有〇. lml墨汁水溶液的无针注射安瓿与MIT无针注射器(江苏丞宇米特医疗 科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)连接，得到无针注射装置;将无针注射装置分别 施用于体重16-18 8之间的8&113/(3小鼠和200-25(^之间的30大鼠以及2.51^的家兔，将待注 射部位剃毛，每只注射0.1ml墨汁水溶液。注射施用位置为小鼠的背部和大鼠、家兔的大腿 外侧。
[0102] 注射后30分钟，处死Balb/c小鼠、SD大鼠和家兔，用手术刀在注射部位皮肤划开 2cm2并将皮肤与肌肉分离，进行液体分布位置及深度观察。
[0103] 结果如图2所示，A、B为Balb/c小鼠经无针皮内注射，C、D为SD大鼠经无针皮内注 射，E、F为家兔经无针皮内注射;可以看出，只在真皮区域发现墨汁，未在皮下区域中发现墨 汁，未在肌肉区域内发现墨汁。因此本发明采用的无针注射安瓿及其配套待注射液体系统 可以将液体注射于表皮内，且无液体注射于肌肉部位。
[0104] 二、无针注射犬病毒疫苗系统的制备
[0105] 无针注射犬病毒疫苗系统包括灌装有不同量的犬病毒疫苗的无针注射安瓿、MIT 无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)和说明书。
[0106] 说明书记载犬病毒疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1倍犬病毒疫苗标准剂量，无针 注射部位具体为皮内，无针注射方式为单次免疫。
[0107] 1、犬病毒病疫苗的获得
[0108] 五价犬病毒疫苗为购买自吉林省五星动物保健药厂的犬狂犬病、犬瘟热、副流感、 腺病毒病、细小病毒病的五联犬病毒活疫苗。
[0109] 2、灌装有不同量的犬病毒疫苗的无针注射安瓿
[0110]五价犬病毒疫苗的标准剂量为1头份五价犬病毒疫苗的肌肉注射剂量，具体为注 射体积为2.0ml，每1头份五价犬病毒疫苗中的抗原量(病毒含量)如下： 1头份五价犬病毒疫苗的狂犬病弱毒(Rb/E3株)病毒含量2 10^0)50/0.03ml; 1头 份犬病毒疫苗的犬痕热弱毒(CDV/R-20/8株)病毒含量2 104'5TCID50/0. lml; 1头份犬病毒 疫苗的犬副流感弱毒(CPIV/A-20/8株)病毒含量2 104'5TCID50/0. lml; 1头份犬病毒疫苗的 犬腺病毒弱毒(YCA18株)病毒含量2 10^4(31050/0. lml; 1头份犬病毒疫苗的犬细小病毒弱 毒(CR86106株)病毒含量 2 104'5TCID50/0.1ml。
[0112] 灌装有不同量的五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿为以下三种：
[0113] 灌装有剂量为1/5倍五价犬病毒疫苗标准剂量的无针注射安瓿，灌装总体积为 0.2ml;
[0114] 灌装有剂量为1/3倍五价犬病毒疫苗标准剂量的无针注射安瓿，灌装总体积为 0.5ml;
[0115] 灌装有剂量为1倍五价犬病毒疫苗标准剂量的无针注射安瓿，灌装总体积为 1.0ml;
[0116] 使用时将上述3种灌装有五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿与无针注射器(江苏丞 宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)连接。
[0117] 三、无针注射犬病毒疫苗系统的应用
[0118] 1、疫苗安全检验
[0119] 以3倍五价犬病毒疫苗标准剂量或5倍五价犬病毒疫苗五价犬病毒疫苗标准剂量 一次给犬注射，几乎无不良影响，尽量接种局部出现隆起，但多数犬（16/25)在接种后1小时 之内均可消退;少数犬(9/25)的肿结虽在此时不能彻底消退，但触之已无痛感。接种3小时 后，仅4/25的犬在首次喂食时出现食欲消退，但其精神、体温、呼吸、心搏次数等均在正常生 理范围内，不久试验犬全部转为正常。
[0120] 2、疫苗无菌检验
[0121]对灌装有五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿分别按《中国兽药典》进行无菌检验，无 菌生长。
[0122] 3、疫苗免疫效果检测
[0123] 1)免疫
[0124] 经查无犬狂犬病、犬瘟热、副流感、腺病毒病、细小病毒病血清抗体的敏感成年犬 105只，除去15头空白对照组，其余90头分别随机分为无针注射组1和有针注射组2,每组45 头;将组1和组2又进一步分为A，B，C三个小组，每小组15只犬;A，B，C三组的剂量分别为1 /5 倍、1/3倍、或1倍上述二获得的无针注射五价犬病毒疫苗标准剂量。
[0125] 组1:采用上述二制备的灌装有五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿与无针注射器连 接，进行皮内免疫，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式为以每剂0.2ml(可多点注射），五价 犬病毒疫苗标准剂量的体积施用于颈部区域中，每个小组分别为无针A组(灌装有剂量为1/ 5倍五价犬病毒疫苗标准剂量）、无针B组(灌装有剂量为1/3倍五价犬病毒疫苗标准剂量）、 无针C组(灌装有剂量为1头份五价犬病毒疫苗标准剂量）。
[0126] 组2:采用传统0.5mm*20mm为规格的有针注射器进行肌肉免疫五价犬病毒疫苗，免 疫方式为以每剂2.0ml的体积施用于颈部区域中，隔7-14日后再接种本疫苗，每个小组分别 为有针A组(剂量为1 /5倍）；有针B组(剂量为1 /3倍）、有针C组(剂量为1头份）。
[0127] 空白对照组:采用传统有针肌肉注射方式免疫PBS，免疫方式为以每剂2.0ml的体 积施用于颈部区域中。
[0128] 2)效力检验：
[0129] 每组又分为a，b，c三个小组进行攻毒：
[0130] 将A组、B组、C组和空白对照组免疫后21天，每组分为如下abcde五组，其中a组采血 分离血清检测狂犬病毒抗体(李六金;金昌德;娄清林等.狂犬病犬肠炎犬瘟热犬腺病毒病 犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究[J].中国兽医科技.1996(01))，抗体效价大于等于1:32 即可以达到很好的保护，抗体效价低于1:32则判定为不保护，对照犬尽管也有微量的抗体， 但随着时间的推移逐渐降低并消失;b组用100个半数感染量犬瘟热CDV-XN株(李六金;金昌 德;娄清林等.狂犬病犬肠炎犬瘟热犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究[J].中 国兽医科技.1996 (01))攻击，3只健康对照犬在观察的7天内，均应出现犬瘟热的典型症状 而死亡2只，因攻毒而两后肢不能站立，瘦弱并处于濒死状态判定为不保护；c组用100个半 数感染量犬副流感强毒CPIV-XN4株【专利公开号：CN 1137347A】攻击，出现犬副流感的发 热、咳嗽、流涕等典型症状判定为不保护;d组用100个半数感染量犬腺病毒CAV 2-XN3株【专利 公开号：CN 1137347A】攻击;e组用100个半数感染量犬细小病毒CPV-XN931强毒(李六金;金 昌德;娄清林等.狂犬病犬肠炎犬瘟热犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究 [J].中国兽医科技.1996(01))攻击，3只健康对照犬在观察的7天内，均应出现犬细小病毒 的典型症状而死亡2只，出现犬细小病毒病的典型症状判定为不保护。
[0131] 观察7天，具体见表1。
[0132] 表1为犬五联疫苗免疫效力试验结果
[0135] 由表1可以看出，无针A组和无针B组犬病毒疫苗系统接种的保护率明显高于经传 统有针注射器经肌肉注射的保护率。
[0136] 4、无针注射犬病毒疫苗免疫安全性评价一一DRAIZE评分
[0137] 在应用无针注射犬病毒疫苗系统免疫犬后的7天内，每天观察注射部位的皮肤损 伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准如图3所示。0分:没有红斑，未见水肿；1 分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难以察觉;2分:清晰红斑，可看到明显的隆起;3分：中 度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红斑，且有结痂及深度损伤。评分结果见图4无针皮内 注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果相似，均在注射后前3天内出现偶见的表皮擦伤和轻 微的红斑。在注射后第4天皮肤不良反应逐渐减轻，且在注射后第5天，各组不良反应均消 失。由此表明，无针皮内注射与有针肌肉注射均具有良好的安全性。
[0138] 四、无针注射犬病毒疫苗系统的注射部位研究
[0139] 注射部位可以注射皮内、皮下、肌肉注射。
[0140] 犬病毒病疫苗也可以按照如下方法制备:将购买自吉林省五星动物保健药厂的犬 狂犬病、犬瘟热、副流感、腺病毒病、细小病毒病五联活疫苗与SP01佐剂按比例混合，得到含 有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗。
[0141] 其中，抗原:佐剂的体积比= 1:1
[0142] 佐剂:采用SP01佐剂【专利公开号:CN 102370977 A】；
[0143] 将上述制备的含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗按照剂量为1头份五价犬病毒疫苗 灌装到实施例1的无针注射安瓿中，灌装总体积为2.0ml，得到灌装有含有SP01佐剂的五价 犬病毒疫苗的无针注射安咅瓦。
[0144] 经查无犬狂犬病、犬瘟热、副流感、腺病毒病、细小病毒病血清抗体的敏感成年犬 30只，随机分为无针肌肉注射组1、有针肌肉注射组2、无针皮下注射组3、无针肌肉连续5点 注射组4、无针皮下连续5点注射组5,每组5只；空白对照5只。
[0145] 具体如下：
[0146] 组1:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿与 无针注射器连接，进行肌肉免疫，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式为以每剂2.0ml的体 积施用于颈部区域中。
[0147] 组2:采用传统0.5mm*20mm为规格的有针注射器进行肌肉免疫上述制备的含有 SP01佐剂的五价犬病毒疫苗，进行肌肉免疫，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式为以每剂 2.0ml的体积施用于颈部区域中。
[0148] 组3:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿与 无针注射器连接，进行皮下免疫，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式为以每剂2.0ml的体 积施用于颈部皮下区域中。
[0149] 组4:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿与 无针注射器连接，进行肌肉连续5点注射，每点0.4ml，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式 为以总剂量2.0ml的体积施用于颈部肌肉区域中。
[0150]组5:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿与 无针注射器连接，进行皮下连续5点注射，每点0.4ml，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式 为以总剂量2.0ml的体积施用于颈部皮下区域中。
[0151] 免疫后21天，100个半数感染量犬瘟热CDV-XN株(李六金;金昌德;娄清林等.狂犬 病犬肠炎犬瘟热犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究[J].中国兽医科技 .1996(01))攻击，5只健康对照犬在观察的7天内，均应出现犬瘟热的典型症状而死亡4只， 因攻毒而两后肢不能站立，瘦弱并处于濒死状态判定为不保护，观察7天，具体保护结果见 表2。
[0152] 由表2表明，无针肌肉注射、有针肌肉注射、无针皮下注射、无针肌肉连续5点注射、 无针皮下连续5点注射均具有良好的保护性。
[0153] 表2免疫五价犬病毒活疫苗不同部位的结果
[0154]
[0155] 五、无针注射犬病毒疫苗系统的疫苗佐剂研究
[0156] 1、不同佐剂疫苗的制备
[0157] 1)含有矿物油佐剂的五价犬病毒疫苗
[0158] 将上述购买自吉林省五星动物保健药厂的五价犬病毒疫苗与矿物油佐剂按比例 混合，得到含有矿物油佐剂的五价犬病毒疫苗，疫苗配制的比例为，抗原:佐剂的体积比= 1:1〇
[0159] 2)含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗
[0160]将上述购买自吉林省五星动物保健药厂的五价犬病毒疫苗与SP01佐剂按比例混 合，得到含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗。
[0161] 抗原:佐剂的体积比= 1:1
[0162] 佐剂:采用SP01佐剂【专利公开号:CN 102370977 A】。
[0163] 2、灌装有含有矿物油佐剂五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿
[0164] 将上述制备的含有矿物油佐剂的五价犬病毒疫苗按照剂量为1头份犬病毒疫苗灌 装到实施例1的无针注射安瓿中，灌装总体积为2.0ml，得到灌装有含有矿物油佐剂五价犬 病毒疫苗的无针注射安咅瓦；
[0165] 将上述制备的含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗按照上剂量为1头份犬病毒疫苗灌 装到实施例1的无针注射安瓿中，灌装总体积为2.0ml，得到灌装有含有SP01佐剂的五价犬 病毒疫苗的无针注射安咅瓦。
[0166] 3、免疫攻毒
[0167] 经查无犬狂犬病、犬瘟热、副流感、腺病毒病、细小病毒病血清抗体的敏感成年犬 15只，随机分为无针矿物油佐剂疫苗组1、无针SP01佐剂疫苗组2,空白对照组，每组5只。
[0168] 1)免疫
[0169] 组1:采用灌装有含有矿物油佐剂五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿分别无针注射 器连接，进行肌肉免疫，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式为以每剂2.0ml的体积施用于 颈部区域中。
[0170] 组2:采用灌装有含有SP01佐剂的五价犬病毒疫苗的无针注射安瓿与无针注射器 连接，进行肌肉免疫，隔7-14日后再接种本疫苗，免疫方式为以每剂2.0ml的体积施用于颈 部区域中。
[0171] 空白对照组:采用有针注射器注射PBS，进行肌肉免疫，免疫方式为以每剂2.0ml的 体积施用于颈部区域中。
[0172] 2)攻毒
[0173] 以100个半数感染量犬瘟热CDV-XN株(李六金;金昌德;娄清林等.狂犬病犬肠炎 犬瘟热犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究[J].中国兽医科技.1996(01))攻 击对上述1)处理后的各组犬进行攻毒，5只健康对照犬在观察的7天内，均应出现犬瘟热的 典型症状而死亡4只，因攻毒而两后肢不能站立，瘦弱并处于濒死状态判定为不保护，具体 保护结果见表3。
[0174]由表3表明，无针矿物油佐剂疫苗和无针SP01佐剂疫苗均具有良好的保护性。
[0175] 表3为免疫不同佐剂五联活疫苗的结果
[0176]
【主权项】
1. 无针注射犬病毒疫苗系统，为如下1)或2): 1) 所示的系统包括灌装有犬病毒疫苗的容器，所述犬病毒疫苗的灌装剂量小于等于该 犬病毒疫苗的标准剂量； 2) 所示的系统包括灌装犬病毒疫苗的容器和可读载体;所述可读载体记载内容包括： 所述犬病毒疫苗的无针注射剂量小于等于该犬病毒疫苗标准剂量。2. 根据权利要求1所述的系统，其特征在于： 所述犬病毒疫苗的灌装剂量为1/5倍-1倍该犬病毒疫苗的标准剂量； 所述犬病毒疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1倍该犬病毒疫苗标准剂量。3. 根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于： 所述犬病毒疫苗的灌装剂量为1/5倍-1/3倍该犬病毒疫苗的标准剂量； 所述犬病毒疫苗的无针注射剂量为1/5倍-1/3倍该犬病毒疫苗标准剂量。4. 根据权利要求1-3中任一所述的系统，其特征在于： 所述犬病毒疫苗为单价犬病毒疫苗或多价犬病毒疫苗； 所述多价犬病毒疫苗为多种犬病毒疫苗联合组成； 每种犬病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量均为小于等于该犬病毒疫苗的标准剂量； 和/或，每种犬病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5倍-1倍该犬病毒疫苗 的标准剂量； 和/或，每种犬病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5倍-1/3倍该犬病毒疫 苗的标准剂量； 和/或，所述多价犬病毒疫苗具体由犬狂犬病疫苗、犬痕热疫苗、副流感疫苗、腺病毒病 疫疫苗、小病毒病疫苗中至少两种组成。5. 根据权利要求1-4中任一所述的系统，其特征在于:所述犬病毒疫苗为无佐剂犬病毒 疫苗或由犬病毒疫苗抗原和佐剂组成的疫苗， 所述犬病毒疫苗抗原或所述无佐剂犬病毒疫苗均为病毒灭活疫苗、病毒裂解疫苗、纳 米颗粒疫苗、减毒活疫苗、合成肽疫苗、重组VLP疫苗、基因工程疫苗、基因缺失疫苗、活载体 疫苗、核酸疫苗等中的任何一种或几种混合，但不限于此； 和/或，所述佐剂具体为SP0UISA206、氢氧化铝胶、矿物油、卡波姆、Gel 01、蜂胶、黄芪 多糖、ISA760VG、弗氏佐剂的一种或几种组合物。6. 根据权利要求1-5中任一所述的系统，其特征在于：1)所示的系统或2)所示的系统均 还包括与所述灌装有犬病毒疫苗的容器配套使用的无针注射装置； 和/或，所述无针注射装置具体为无针注射器。7. 根据权利要求1-6所述的系统，其特征在于： 所述灌装有犬病毒疫苗的容器为灌装有疫苗的一次性无针注射安瓿，其包括： 预灌装疫苗的一管体， 一体设置于所述管体一端的一无针注射器接头， 由所述管体另一端滑动设置在所述管体内、并封闭所述管体的一动力推杆， 设置在所述无针注射器接头内的一喷射口， 易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆， 可拆卸地设置在所述无针注射器接头上、并封闭所述喷射口的一密封帽，和 可拆卸地设置在所述动力推杆上、并与所述管体的入口相嵌合的一密封锁块； 其中，所述喷射口具有一止动槽，所述喷射口通过所述止动槽与所述管体内腔相连通； 所述止动杆与所述止动槽相配合。8. 根据权利要求7所述的系统，其特征在于： 所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致;所述止动杆和止动槽为锥形;所述密封 帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上； 所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从 而可拆卸地安装在所述动力推杆上； 所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上;所述动力推杆上设 置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在所述 动力推杆上； 所述管体、无针注射器接头、喷射口和止动槽一体制造而成。9. 根据权利要求1-8中任一所述的系统，其特征在于： 1) 所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积为〇.〇5-lml; 2) 所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积为0.05-200ml; 和/或，2)所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积具体为50-200ml; 和/或，2)所示的系统中，所述犬病毒疫苗的灌装体积具体为50-100ml; 2)所示的系统中，所述可读载体记载内容还包括所述犬病毒疫苗的无针注射部位和所 述犬病毒疫苗的无针注射方式； 所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉； 所述无针注射方式为多次连续免疫或单次免疫。10. 权利要求1-9中任一所述系统在制备免疫动物产品中的应用； 所述动物具体为犬； 或，一种对动物或人免疫犬病毒疫苗的方法，为用权利要求1-9中任一所述系统进行免 疫，免疫剂量为权利要求1-9中任一所述系统中的无针注射剂量;免疫方式具体为多次连续 免疫或单次免疫;免疫部位具体为皮内、皮下或肌肉。
【文档编号】A61D7/00GK105833393SQ201610313309
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】连梦瑶, 任天宇, 王林叶, 王欢, 孙治华, 李敏, 王鋮, 杨晓岚, 木其尔
【申请人】内蒙古华希生物科技有限公司