Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物的组合物在抗红细胞低下性贫血药物中的应用
【专利摘要】本发明公开一种Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物的组合物在抗红细胞低下性贫血药物中的应用,本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其在制备抗红细胞低下性贫血药物上的用途。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有抗红细胞低下性贫血的作用，具有开发抗红细胞低下性贫血药物的价值。
【专利说明】
Vi rosa i ne A的哌嗪基和咪唑基衍生物的组合物在抗红细胞 低下性贫血药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 基于不同的临床特点，贫血有不同的分类。如:按贫血进展速度分急、慢性贫血;按 骨髓红系增生情况分增生性贫血(如溶血性贫血、缺铁性贫血、巨幼细胞贫血等）和增生低 下性贫血(如再生障碍性贫血）。
[0003] 临床上常从贫血发病机制和病因的分类：
[0004] 1.红细胞生成减少性贫血
[0005] 造血细胞、骨髓造血微环境和造血原料的异常影响红细胞生成，可形成红细胞生 成减少性贫血。
[0006] (1)造血干祖细胞异常所致贫血
[0007] 1)再生障碍性贫血(AA)AA是一种骨髓造血功能衰竭症，与原发和继发的造血干祖 细胞损害有关。部分全血细胞减少症的发病机制与B细胞产生抗骨髓细胞自身抗体，进而破 坏或抑制骨髓造血细胞有关。
[0008] 2)纯红细胞再生障碍贫血(PRCA)PRCA是指骨髓红系造血干祖细胞受到损害，进而 引起贫血。依据病因，该病可分为先天性和后天性两类。先天性PRCA即Diamond-Blackfan综 合征，系遗传所致;后天性PRCA包括原发、继发两类。有学者发现部分原发性PRCA患者血清 中有自身EP0或幼红细胞抗体。继发性PRCA主要有药物相关型、感染相关型(细菌和病毒，如 微小病毒出 9、肝炎病毒等）、自身免疫病相关型、淋巴细胞增殖性疾病相关型（如胸腺瘤、淋 巴瘤、浆细胞病和淋巴细胞白血病等）以及急性再生障碍危象等。
[0009] 3)先天性红细胞生成异常性贫血(CDA)CDA是一类遗传性红系干祖细胞良性克隆 异常所致的、以红系无效造血和形态异常为特征的难治性贫血。根据遗传方式，该病可分为 常染色体隐陛遗传型和显性遗传型。
[0010] 4)造血系统恶性克隆性疾病这些疾病造血干祖细胞发生了质的异常，包括骨髓增 生异常综合征及各类造血系统肿瘤性疾病如白血病等。前者因为病态造血，高增生，高凋 亡，出现原位溶血;后者肿瘤性增生、低凋亡和低分化，造血调节也受到影响，从而使正常成 熟红细胞减少而发生贫血。
[0011] (2)造血微环境异常所致贫血
[0012] 造血微环境包括骨髓基质，基质细胞和细胞因子。
[0013] 1)骨髓基质和基质细胞受损所致贫血骨髓坏死、骨髓纤维化、骨髓硬化症、大理石 病、各种髓外肿瘤性疾病的骨髓转移以及各种感染或非感染性骨髓炎，均可因损伤骨髓基 质和基质细胞，造血微环境发生异常而影响血细胞生成。
[0014] 2)造血调节因子水平异常所致贫血干细胞因子(SCF)、白细胞介素（IL)、粒-单系 集落刺激因子(GM-CSF)、粒系集落刺激因子(G-CSF)、红细胞生成素(EP0)、血小板生成素 (TPO)、血小板生长因子(TGF)、肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素（IFN)等均具有正负调控造血 作用。肾功能不全、肝病和垂体或甲状腺功能低下等时产生EP0不足;肿瘤性疾病或某些病 毒感染会诱导机体产生较多的造血负调控因子如TNF、IFN、炎症因子等，均可导致慢性病性 贫血(ACD)。
[0015] (3)造血原料不足或利用障碍所致贫血
[0016] 造血原料是指造血细胞增殖、分化、代谢所必需的物质，如蛋白质、脂类、维生素 (叶酸、维生素B12等）、微量元素(铁、铜、锌等)等。任一种造血原料不足或利用障碍都可能 导致红细胞生成减少。
[0017] 1)叶酸或维生素B12缺乏或利用障碍所致贫血由于各种生理或病理因素导致机体 叶酸或维生素B12绝对或相对缺乏或利用障碍可引起的巨幼细胞贫血。
[0018] 2)缺铁和铁利用障碍性贫血这是临床上最常见的贫血。缺铁和铁利用障碍影响血 红素合成，有称该类贫血为血红素合成异常性贫血。该类贫血的红细胞形态变小，中央淡染 区扩大，属于小细胞低色素性贫血。
[0019] 2 ?溶血性贫血(HA)
[0020] 即红细胞破坏过多性贫血。
[0021] 3 ?失血性贫血
[0022] 根据失血速度分急性和慢性，慢性失血性贫血往往合并缺铁性贫血。可分为出凝 血性疾病（如特发性血小板减少性紫癜、血友病和严重肝病等)所致和非出凝血性疾病(如 外伤、肿瘤、结核、支气管扩张、消化性溃疡、痔和妇科疾病等)所致两类。
[0023] 从天然产物中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到 高效低毒的潜在药物最有重要价值。
[0024] 本发明涉及的化合物I是一个2012年发表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的化合物，我们对化合物I进行了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化 合物IV，并用化合物III和化合物IV制备了组合物并对该组合物抗红细胞低下性贫血活性 进行了评价，其具有抗红细胞低下性贫血活性。
【发明内容】
[0025] 本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物 中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为35%和65%。
[0028] 本发明公开的组合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
[0029] 本发明的目的在于提供本发明组合物在制药领域中的新的应用。
[0030] 本发明涉及组合物作为制备治疗红细胞低下性贫血药物中的应用。
[0031]以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
【具体实施方式】
[0032] 实施例1化合物Virosaine A的制备
[0033] 化合物Virosaine A(I)的制备方法参照Bing-Xin Zhao等人发表的文献(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法 D
[0035] 实施例2Virosaine A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0036] 将化合物I (235mg，1. OOmmo 1)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氢氧化钠溶液。混合物在35摄氏 度搅拌Shdh之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。然后 对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤3次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶 剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0037] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s，2H)，3.33(s，lH)，2.26(s，lH)，1.58(d，J=9.8Hz，3H)，1.41(s，2H).
[0038] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s)，79.95(s)，74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0039] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0041 ] 实施例3Virosaine A的0_(哌嗪基）乙基衍生物（III)的合成
[0042] 将化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(690mg， 5.0mmol)，碘化钾（168mg，1 .Ommol)和无水哌嗪（3446mg，40mmol)，混合物加热回流3h。反应 结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有机相。依次用水和饱和食盐 水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗 品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥 去溶剂即得到化合物III的淡棕色固体(123.2mg，71 % )。
[0043] MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.90(s，lH)，4.04(s，lH)，3.59(s，lH)，3.50(s，2H)， 3.40(d，J=65.9Hz，lH)，2.64(s，4H)，2.54(s，2H)，2.31(s，4H)，2.22(s，lH)，1.62(s，2H)， 1.56(s，lH)，1.43(s，2H)，0.97(s，lH).
[0044] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.84(s)，106.72(s)，79.94(s)，74.33(s)，66.72(d， J=9.2Hz),54.45(s),54.16(s),45.25(s),44.20(s),35.56(s),25.86(s),21.87(s).
[0045] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci8H26N3〇4:348.1923;found:348.1927。
L〇〇47J 实施例4 Virosaine A的0_(咪唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0048] 将化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(690mg， 5 ? Ommo 1)，碘化钾（2 5 2mg，1 ? 5mmo 1)和咪唑（8 7 Omg，1 Ommo 1)，混合物加热回流2h。反应结束 后将反应液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有机相。依次用水和饱和食盐 水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗 品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油醚/丙酮= 100:0.3，v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥 去溶剂即得到化合物IV的淡棕色固体(144. lmg，71 % )。
[0049] XH NMR(500MHz,DMS0-d6)87.86(s,lH),7.12(s,lH),6.71(s,lH),5.99(s,lH), 4.09(s,lH),3.89(d,J=16.4Hz,2H),3.80(s,2H),3.58(s,lH),3.35(s,lH),2.31(s,lH), 1.68(s,lH),1.58(s,2H),1.44(s,2H).
[0050] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)13C 匪R(125MHz，Common 匪R Solvents)Sl71.82(s), 139.64(s),128.67(s),119.31(s),106.70(s),79.92(s),74.31(s),67.61(s),66.66(s), 44.20(s),43.75(s),35.52(s),25.85(s),21.86(s).
[0051] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci7H2〇N3〇4:330.1454;found:330.1458。
[0053] 实施例5组合物抗红细胞低下性贫血实验
[0054] -、组合物对失血小鼠的治疗作用
[0055] ICR小鼠30只，早d各半，均分成5组(n = 10)。除生理盐水组外，其它组每只小鼠从 眼眶静脉放血0.5ml，24h后再取血测全部各组指标，然后连续灌胃给药1周且给药之后每天 放血0.5ml，末次给药lh后，从眼眶静脉丛取血用F-800全血小板分析仪进行红细胞计数 (10 12/L)。
[0056] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的35mg化合物III的粉末和研磨之后过200 目网的65mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组合物， 使用时用水溶解这l〇〇mg的组合物即得到组合物的溶液。
[0057]表1组合物对因失血所致红细胞减少的治疗作用
[0059] 与模型组比较:*p〈0.05
[0060] 结果表明，放血小鼠经服用组合物治疗7天后，与模型组比较，其红细胞显著高于 模型组，接近生理盐水组。而化合物III和化合物IV无此作用。
[0061 ]二、组合物对环磷酰胺致红细胞减少的治疗作用
[0062] 对小鼠骨髓造血功能损伤的防治作用ICR小鼠50只，罕cSI用，均分成5组(n=10)， 即生理盐水组、造模组、组合物1.2mg/kg组、化合物III 1.2mg/kg组和化合物IV 1.2mg/kg 组，口服给药，每天1次。第0、5、10日除生理盐水组外，其它各组小鼠分别腹腔注射环磷酸胺 80mg/kg，然后继续给药3天。于末次给药后lh，从眼眶静脉丛取血，测红细胞数(10 12/L)。
[0063] 表2组合物对环磷酰胺所致红细胞的影响
[0065] 与模型组比较:林p〈0.01
[0066]结果表明，与生理盐水组比较，环磷酸胺能使小鼠骨髓损伤，造成外周血细胞下 降，组合物组与模型组比较，可明显对抗环磷酸胺所致小鼠红细胞下降。而化合物III和化 合物IV无此作用。
[0067]三、组合物对苯所致红细胞减少的治疗作用
[0068] 对再生障碍性贫血小鼠的影响：昆明种小鼠50只，罕痛用，均分成5组(n = 10)，除 生理盐水组外，其它组小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，连续12天，造模的当日，同时口服给药，每 天1次，共18天，末次给药后lh，眼眶静脉丛取血，测红细胞。
[0069]表3组合物对苯所致红细胞减少的治疗作用
[0072] 与模型组比较:林p〈0.01
[0073]结果表明，组合物组与模型组比较，可明显对抗苯所致再生障碍性贫血小鼠红细 胞的下降。而化合物III和化合物IV无此作用。
[0074] 结论:组合物能够显著升高红细胞，可以用来制备治疗贫血的药物。而化合物III 和化合物IV不能够显著升高红细胞，不能用来制备治疗贫血的药物。
[0075] 实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备
[0076] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0077] 实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备
[0078] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为35%和65%，2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为:将化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照质量百分数分别为35 %和65 %充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在治疗红细胞低下性贫血药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在治疗红细胞低下性贫血药物中的应用，其特征为:所述 红细胞低下性贫血是由失血所引起的。5. 如权利要求3所述的组合物在治疗红细胞低下性贫血药物中的应用，其特征为:所述 红细胞低下性贫血是由化学物质所引起的红细胞低下。6. 如权利要求5所述的组合物在治疗红细胞低下性贫血药物中的应用，其特征为:所述 化学物质为苯，所述红细胞低下性贫血是由苯所致的再生障碍性贫血。7. 如权利要求5所述的组合物在治疗红细胞低下性贫血药物中的应用，其特征为:所述 化学物质为环磷酸胺，所述红细胞低下性贫血是由环磷酸胺所致红细胞下降。
【文档编号】A61K31/496GK105853430SQ201610278690
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】王卓婷
【申请人】南京赋海澳赛医药科技有限公司