Wnt抑制剂在制备治疗造血再生障碍性疾病药物中的应用
【专利摘要】本发明公开Wnt抑制剂ICG001在制备治疗造血再生障碍性疾病药物中的应用。Wnt抑制剂ICG001通过抑制CBP介导的Wnt信号通路，从而抑制由SIRT6缺失而导致的过高Wnt信号的造血干细胞的耗竭。本发明揭露了ICG001可用于制备治疗造血再生障碍性相关疾病的药物，以及ICG001用于促进SIRT6敲除造血干细胞再生的作用机制。
【专利说明】
Wnt抑制剂在制备治疗造血再生障碍性疾病药物中的应用
技术领域
[00011本发明属生物医学类技术领域，涉及Wnt抑制剂ICG-001在制备治疗造血再生障碍 性疾病药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 造血系统承担着人体运输氧和营养物质到各个组织细胞，同时将二氧化碳和代谢 产物运出体外的功能，并成为机体发生损伤应激以及对抗感染时，各级免疫体系的调度师， 是机体更新和再生速度最快的组织之一，在人类的骨髓中，每天约有万亿(约1012)计的新 细胞产生。造血系统是人体中具有最强再生能力的组织器官，然而在许多造血再生障碍性 疾病中，是由于某些基因功能缺陷而导致的造血干细胞功能下降而引起的造血再生障碍， 严重影响健康甚至生命。造血干细胞中的绝大部分细胞处于非分裂增殖状态，即静息期(G0 期）。而只有其中的一小部分具有活跃的增殖能力，并且直至走向终末分化。而这一静息的 机能被认为具有关键的生物学意义。研究表明，造血干细胞中这一小部分始终维持在静息 期的细胞，能够更好的抵抗辐射，细胞毒素，氧化应激，因而可以终身存在，以满足造血的需 求。然而在临床和实验中，造血干细胞移植会由于一些细胞内信号通路的变化而导致造血 系统重建能力下降或造血干细胞的耗竭。因此，寻找有效的治疗造血再生障碍性疾病药物 成为临床上骨髓再生障碍性病人的需要。
[0003] 造血干细胞稳态调控是一个复杂的多分子参与过程，为了阐明这种复杂过程的调 节机制，科研人员常利用各种基因敲除小鼠模型来研究特定信号通路对造血干细胞自我更 新和分化的影响。Wnt信号通路在许多类型的干细胞中对细胞增殖起了关键作用，近年来的 研究证实Wnt还影响干细胞分化，及对造血干细胞的自我更新调控。
[0004] Wnt抑制剂ICG001 为小分子化合物，CAS number: 780757-88-2，分子量548 ? 63，化 学命名为（6S，9aS)-6-(4-hydroxybenzyl )-N-benzyl-8-(naphthalen_l-ylmethyl )_4，7-diox〇-hexahydr〇-2H-pyrazino [ 1,2-a]pyrimidine-l (6H)-carboxa mide，分子式为 C33H32N4〇4,化学结构如下：
U.
[0006]在本项专利中，
【申请人】首次发现ICG001在造血再生障碍性相关疾病中的应用。具 体的，本专利发现ICG001在体内可发挥抑制Wnt信号的作用，降低由Wnt信号过高而引起的 过度的细胞增殖和干细胞的耗竭。本项专利亦揭示了其用于造血再生障碍性相关疾病的作 用机制。ICG001在造血再生过程中抑制CBP蛋白的活性，降低Wnt信号防止过度增殖维持造 血干细胞稳态。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是针对上述问题，提出了Wnt抑制剂ICG001在制备治疗造血再生障 碍性疾病药物中的应用。
[0008] 本发明以造血干细胞中SIRT6敲除小鼠为模型。
【申请人】发现化合物ICG001可以抑 制CPB蛋白的活性进而抑制Wnt信号基因表达，并且抑制Wnt信号基因表达可促进SIRT6敲除 小鼠造血干细胞的再生降低细胞的过度增殖。同时还发现在体外给予Wnt抑制剂ICG001可 起相同的效果。以上结果揭示了 ICG001在促进造血再生中的作用及机理。
[0009] ICG001的有效用量为3.2mg/kg，药物配成溶剂，以腹腔注射方式给药。
[0010] 本发明的有益效果是ICG001能够促进SIRT6敲除造血干细胞再生。ICG001可降低 SIRT6敲除造血干细胞的过度增殖。本发明揭露了 ICG001可用于制备治疗造血再生障碍性 相关疾病的药物，以及ICG001用于促进SIRT6敲除造血干细胞再生的作用机制。
【附图说明】
[0011]图1为SIRT6基因敲除可增加Wnt信号通路基因表达；
[0012] 图2为ICG001在SIRT6基因敲除小鼠体内抑制Wnt信号通路基因表达；
[0013] 图3为ICG001处理可以提高SIRT6基因敲除造血干细胞的外周血重建能力和造血 干细胞的重建能力；
[0014]图4为在体外培养的条件下ICG001抑制SIRT6基因敲除造血干细胞的Wnt信号通路 基因表达；
[0015]图5为ICG001体外培养处理可以提高SIRT6基因敲除造血干细胞的外周血重建能 力和造血干细胞的重建能力；
[0016] 图6为本发明机理流程图。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，而非限定本发明。
[0018] 本发明使用的SIRT6基因敲除（SIRT6AM)小鼠和清洁级C57BL/6小鼠饲养于杭州 师范大学实验动物中心清洁级动物房，实验时小鼠为6-8周龄。在整个体内实验过程中，所 有操作均遵守国家及杭州师范大学伦理委员会制定的《实验动物使用条例》。ICG001购自美 国LC Laboratories;二甲基亚讽（Dimethyl sulfoxide，DMS0)，5_溴脱氧尿啼啶核苷（5-Bromo-2-deoxyUridine，BRDU)等从美国Sigma-Aldrich公司购买;本发明中所使用的所有 抗体，除特别说明，均购自美国Ce 11 Si gna 1 ing Techno 1 〇gy公司。所有实验结果均是由独 立的三次重复实验得到，采用不配对的t检验分析数据，均用士 SEM表示。P值〈0.05为显著性 差异标准(*〈〇.〇5，**〈0.01)。
[0019] 实施例一:Wnt抑制剂ICG001可促进SIRT6基因敲除造血干细胞的再生
[0020]分离提取SIRT6基因敲除和同窝对照野生型小鼠的造血干细胞，检测并分析比较 两组间基因表达差异和SIRT6缺失对造血干细胞移植能力的影响。结果表明，SIRT6基因敲 除小鼠的HSC可显著增加Wnt信号通路基因表达（图1)。体内给药3次后，ICG001在SIRT6基因 敲除小鼠体内显著抑制Wnt信号通路基因表达（图2)。通过骨髓移植实验，比较ICG001处理 组，可以发现ICG001显著提高SIRT6基因敲除造血干细胞的外周血重建能力和造血干细胞 的重建能力（图3)。在体外培养的条件下ICG001也抑制SIRT6基因敲除造血干细胞的Wnt信 号通路基因表达（图4)<JCG001体外培养处理可以提高SIRT6基因敲除造血干细胞的外周血 重建能力和造血干细胞的重建能力（图5)。
[0021] 以上结果表明，Wnt抑制剂ICG001可以促进SIRT6基因敲除造血干细胞的再生。如 图6所示，Wnt抑制剂ICG001可以防治SIRT6基因敲除造血系统的骨髓衰竭和治疗由SIRT6基 因敲除引起的造血再生障碍性相关疾病。
[0022] 上述实施例并非是对于本发明的限制，本发明并非仅限于上述实施例，只要符合 本发明要求，均属于本发明的保护范围。
【主权项】
1. Wnt抑制剂在制备治疗SIRT6敲除引起的造血再生障碍性疾病药物中的应用，其中 Wnt抑制剂为抑制乙酰化转移酶CBP活性的Wnt抑制剂ICGOO1。2. 如权利要求1所述的Wnt抑制剂在制备治疗造血再生障碍性疾病药物中的应用，其特 征在于所述的Wnt抑制剂ICG001为小分子化合物，CASnumber 780757-88-2，分子量548.63， 化学命名为（6S，9aS )-6-( 4-hydroxybenzyl )_N_benzy 1_8_( naphthalen-1-y lme thy 1) _4， 7-dioxo_hexahydr〇-2H-pyrazino[ 1，2-a]pyrimidine_l (6H)_carboxami de，分子式为 C33H32N4O4,化学结构如下：3. 如权利要求1所述的Wnt抑制剂在制备治疗造血再生障碍性疾病药物中的应用，其特 征在于乙酰化酶CBP为Wnt信号通路的靶点，Wnt抑制剂ICG001通过直接抑制Wnt信号通路防 止细胞过度增殖。
【文档编号】A61K38/07GK105854018SQ201610183285
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年3月28日
【发明人】鞠振宇, 汪虎
【申请人】杭州师范大学