用于促进脂肪细胞分化的包含羟基吡喃酮衍生物化合物的化妆品组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于促进脂肪细胞分化的包含羟基吡喃酮衍生物化合物作为活性成分的化妆品组合物。根据本发明的组合物具有促进脂肪细胞分化的作用，并且因此允许皮肤层中的脂肪细胞分化，从而提高皮肤体积或弹性。因此，本发明的组合物可在例如皮肤损伤的领域中广泛用作化妆品组合物或药物组合物。
【专利说明】
用于促进脂肪细胞分化的包含羟基吡喃酮衍生物化合物的化 妆品组合物
技术领域
[0001 ]本公开内容涉及用于促进脂肪细胞分化的化妆品组合物。
【背景技术】
[0002] 皮肤的基本结构由皮下脂肪组织来维持。皮下脂肪组织在维持皮肤的体积 (早HI喜）和强度中发挥关键作用。因此，与向外真皮层或表皮层提供弹性的现有方法相 比，提高脂肪组织的体积可以是用于维持皮肤体积和弹性的更好解决方案。正在对脂肪细 胞积极进行多种研究。通常来说，广泛使用前脂肪细胞，因为其通过诱导分化的物质（例如 胰岛素）而分化为脂肪细胞。近来，间充质干细胞在使用脂肪细胞的研究中颇受关注。脂肪 源性间充质干细胞广泛用于研究脂肪细胞的分化(Science 1999,284,143-146)，因其可以 以类似于前脂肪细胞分化为脂肪细胞的方式分化(Exp. Cel 1 Res. 2006，312，1856-1864)。 脂肪源性间充质干细胞（天丨哲异BH吾21舀奎〕丨灿呈）广泛分布遍及全身，并且已知 不仅能够分化为脂肪细胞而且还能够分化为其他类型的细胞，例如软骨细胞、骨细胞等 (J.Cell Sci.2006，119,2204-2213)。
【发明内容】
[0003] 技术问题
[0004] 本公开内容的发明人已对表现出促进脂肪细胞分化作用的化合物进行了研究。在 此期间，他们已经发现具有特定结构的羟基吡喃酮衍生物表现出促进脂肪细胞分化的作 用，并且已经完成了本公开内容。
[0005] 因此，本公开内容涉及提供用于促进脂肪细胞分化或者增大皮肤体积或弹性的组 合物，其包含羟基吡喃酮衍生物化合物。
[0006] 技术方案
[0007] 在一个方面中，本公开内容提供了用于促进脂肪细胞分化或者增大皮肤体积或弹 性的组合物，其包含羟基吡喃酮衍生物作为活性成分。
[0008] 有益效果
[0009] 根据本公开内容的包含羟基吡喃酮衍生物作为活性成分的组合物表现出促进脂 肪细胞分化的作用，并且藉此表现出增大皮肤体积或弹性的作用。更特别地，其可通过促进 人间充质干细胞分化为脂肪细胞并由此产生脂滴而表现出增大皮肤体积和弹性的作用。因 此，本公开内容的组合物可广泛应用于化妆品或药物领域。
[0010] 附图简述
[0011] 图1示出了显示使用根据本公开内容一个方面的羟基吡喃酮衍生物化合物来诱导 脂肪细胞分化的结果的显微镜图像。
[0012]最佳方式
[0013] 在2014年1月20日提交的韩国专利申请No. 10-2014-0006640出于所有目的而以其 整体并入本公开内容。本公开内容还要求韩国专利申请No . 10-2014-0006640的优先权，其 内容整体并入本公开内容。
[0014] 在一个方面中，本公开内容可涉及用于增大皮肤体积或弹性的组合物，其包含化 学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物作为活性成分：
[0015] [化学式1]
[0017] 其中 R为-CH2-或-CH2CH2-。
[0018] 在一个方面中，本公开内容可涉及用于增大皮肤体积或弹性的方法，其包括向需 要增大皮肤体积或弹性的对象施用化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化 合物作为活性成分的组合物。在本公开内容的一个方面中，施用可根据本公开内容中描述 的施用方法和施用剂量来进行。
[0019] 在一个方面中，本公开内容可涉及化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物或者包 含其作为活性成分的组合物，其用于增大皮肤体积或弹性。
[0020] 在一个方面中，本公开内容可涉及化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物用于增 大皮肤体积或弹性的用途。在一个方面中，本公开内容可涉及化学式1所示羟基吡喃酮衍生 物化合物在制备用于增大皮肤体积或弹性的组合物中的用途。
[0021] 在本公开内容的一个方面中，根据本公开内容一个方面的组合物可促进间充质干 细胞分化为脂肪细胞。
[0022]在本公开内容的一个方面中，所述间充质干细胞可以是人间充质干细胞。
[0023] 在本公开内容的一个方面中，基于所述组合物的总体积，根据本公开内容一个方 面的组合物可包含0.01至lOOyM浓度的活性成分。在本公开内容的一个方面中，基于所述组 合物的总体积，活性成分的浓度可以是0.0 OlyM或更高、0.0 lyM或更高、0. lyM或更高、0.5yM 或更高、lyM或更高、5yM或更高、10yM或更高、20yM或更高、25yM或更高、28yM或更高、29yM或 更高、30yM或更高、31yM或更高、32yM或更高、35yM或更高、40yM或更高、50yM或更高、100yM 或更高、200yM或更高、500yM或更高、ImM或更高、10mM或更高、50mM或更高、100mM或更高、1M 或更高、或者5M或更高以及10M或更低。特别地，在本公开内容的一个方面中，活性成分的浓 度可以是30yM。
[0024] 在本公开内容的一个方面中，根据本公开内容一个方面的组合物可提高脂肪组 织。
[0025] 在本公开内容的一个方面中，根据本公开内容一个方面的组合物可提高皮肤体 积。
[0026] 在本公开内容的一个方面中，根据本公开内容一个方面的组合物可提高皮肤弹 性。
[0027] 在本公开内容的一个方面中，根据本公开内容一个方面的组合物可以是药物、食 品或化妆品组合物。
[0028] 在一个方面中，本公开内容可涉及用于制备化学式1所示羟基吡喃酮衍生物的方 法，其包括：
[0029] (1)通过替换5-羟基-2-(羟甲基)-4H-吡喃-4-酮的2位羟甲基中的羟基来制备5-羟基-2-(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮的步骤；
[0030] (2)通过使3,4-(亚甲基二氧基）肉桂酸或3,4-(亚乙基二氧基）肉桂酸与无机碱在 极性溶剂中反应来制备金属盐；以及
[0031] (3)使5-羟基_2_(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮与所述金属盐反应。
[0032] 用方案1作为实例描述所述制备方法。
[0033] [方案 1]
[0035] 其中 R为-CH2-或-CH2CH2-。
[0036] 通过根据本公开内容一个方面的制备方法获得的化学式1的羟基吡喃酮衍生物化 合物的具体实例包括(2E)-3-(苯并[d][l，3]二氧代-6-基)丙烯酸(5-羟基-4-氧代-4H-吡 喃-2-基）甲酯和(2E)-3-(2,3-二羟基苯并[b][l，4]二氧代-7-基)丙烯酸(5-羟基-4-氧代-4H-吡喃-2-基）甲酯。
[0037] 在一个方面中，本公开内容可涉及用于增大皮肤体积或弹性的组合物，其包含通 过根据本公开内容一个方面的制备方法制备的羟基吡喃酮衍生物化合物作为活性成分。
[0038] 由于通过根据本公开内容一个方面的制备方法制备的化学式1所示羟基吡喃酮衍 生物化合物能够通过促进脂肪细胞分化而产生并积累脂滴，因此其可改善皮肤弹性和增大 皮肤体积。
[0039] 在一个方面中，本公开内容可涉及用于促进脂肪细胞分化的组合物，其包含化学 式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物作为活性成分。
[0040] [化学式1]
[0042] 其中 R为-CH2-或-CH2CH2-。
[0043] 在一个方面中，本公开内容可涉及用于促进脂肪细胞分化的方法，其包括向需要 促进脂肪细胞分化的对象施用化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化合物 作为活性成分的组合物。在本公开内容的一个方面中，施用可依照本公开内容中描述的施 用方法和施用剂量来进行。
[0044] 在一个方面中，本公开内容可涉及化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物或者包 含所述化合物作为活性成分的组合物，其用于促进脂肪细胞分化。
[0045] 在一个方面中，本公开内容可涉及化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物用于促 进脂肪细胞分化的用途。在一个方面中，本公开内容可涉及化学式1所示羟基吡喃酮衍生物 化合物在制备用于促进脂肪细胞分化的组合物中的用途。
[0046] 在本公开内容中，"皮肤"是指覆盖生物体的外部的器官，其由表皮、真皮和皮下脂 肪层构成。该术语以最广泛的概念使用，不仅包括覆盖面部或身体外部的组织而且还包括 头皮和毛发。
[0047] 在本公开内容中，"体积"指皮肤层的体积或容量。其可意味着明显的大体积外观。 因此，体积提高或增大的皮肤将看起来提升、健康且年轻。此外，例如，当皮肤已因损伤、创 伤、灼伤等而受损并且因此而具有疤痕或凹陷，或者皮肤或组织已因外科手术而切开时等， 增大皮肤组织的体积可导致受损组织和皮肤层的体积增大，并且提供使皮肤或组织恢复到 接近其初始状态的作用。
[0048] 在本公开内容中，"增大体积"意指皮肤层的体积提高。其还可意指由于皮肤体积 提高而使皮肤看起来提升且健康，或者使受损的皮肤组织恢复至接近其初始状态。因此，提 高的皮肤组织体积可提供这样的效果:借此当下垂皮肤的体积提高并且皮肤表面伸展时， 受损皮肤恢复至接近其初始状态。
[0049] 根据本公开内容一个方面的化妆品组合物的制剂不受特别限制，并且可根据目的 而适当选择。例如，其可制成选自以下的一种或更多种制剂:皮肤洗剂、皮肤软化剂、紧肤剂 (厶艺!巨L~| )、收敛洗剂、乳液洗剂、增湿洗剂、滋养洗剂、按摩霜、滋养霜、增湿霜、护手 霜、粉底、精华液、滋养精华液、面膜（埤）、皂、清洁泡沫、清洁洗剂、清洁霜、身体洗剂和身 体清洁剂，但不限于此。
[0050] 当将根据本公开内容一个方面的化妆品组合物配制为糊剂、霜剂或凝胶时，可使 用以下作为载体成分:动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙 二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌等。
[0051] 当将根据本公开内容一个方面的化妆品组合物配制为粉剂或喷雾剂时，可使用以 下作为载体成分:乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末。特别地，喷雾剂还 可包含抛射剂，例如氯氟烃、丙烷/ 丁烷或二甲醚。
[0052] 当将根据本公开内容一个方面的化妆品组合物配制为溶液剂或乳剂时，可使用溶 剂、增溶剂或乳化剂作为载体成分。例如可使用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄 醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3_ 丁二醇、脂肪族甘油酯、聚乙二醇、或失水山梨糖醇的脂肪酸 酯。
[0053] 当将根据本公开内容一个方面的化妆品组合物配制为混悬剂时，可使用以下作为 载体成分:液体稀释剂(例如水、乙醇或丙二醇）、助悬剂(例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯 山梨糖醇酯和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯）、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、西黄蓍 月父等。
[0054]当将根据本公开内容一个方面的化妆品组合物配制为含表面活性剂的清洁剂时， 可使用以下作为载体成分:脂肪醇硫酸酯、脂肪醇醚硫酸酯、磺基琥珀酸单酯、羟乙磺酸酯/ 盐、咪唑啉ft衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸酯/盐、脂肪酸酰胺醚硫酸酯、烷基酰氨基甜菜碱、 脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯 等。
[0055]除羟基吡喃酮衍生物化合物以外，根据本公开内容一个方面的化妆品组合物还可 包含功能性添加剂以及化妆品组合物中通常含有的其他成分。功能性添加剂可以是选自以 下的成分:水溶性维生素、油溶性维生素、多肽、多糖、鞘脂和海藻提取物。
[0056]必要时，根据本公开内容一个方面的化妆品组合物可包含化妆品组合物中通常含 有的除功能性添加剂之外的成分。额外包含的成分可以是油、脂肪、湿润剂、润肤剂、表面活 性剂、有机或无机颜料、有机粉末、UV吸收剂、防腐剂、灭菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH控 制剂、醇、着色剂、芳香剂、血液循环刺激剂、冷却剂、止汗剂、纯化水等。
[0057]在一个方面中，本公开内容可涉及用于皮肤外用制剂，其包含羟基吡喃酮衍生物 化合物作为活性成分。皮肤外用制剂包括可由外部施用于皮肤的任何制剂，并且其中可包 括多种制剂形式的化妆品。
[0058]根据本公开内容一个方面的药物组合物可作为多种经口或肠胃外制剂来提供。通 常来说，所述制剂使用常用的稀释剂或赋形剂(例如填料、增容剂、黏合剂、湿润剂、崩解剂、 表面活性剂等)来制备。用于经口施用的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、粒剂以及软或硬胶 囊剂。这些固体制剂通过将化合物与至少一种赋形剂(例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶 等)混合来制备。除简单的赋形剂外，还使用润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石等。用于经口施用 的液体制剂包括混悬剂、内用溶液剂、乳剂、糖浆剂。除常用的简单稀释剂(例如水和液体石 蜡)之外，所述制剂还可包含多种赋形剂，例如湿润剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。用于肠胃 外施用的制剂包括无菌水溶液剂、非水溶液剂、混悬剂、乳剂、冻干制剂和栓剂。非水溶液剂 和混悬剂可包含丙二醇、聚乙二醇、植物油（例如橄榄油）、可注射酯（例如油酸乙酯）等。作 为栓剂的基质，可使用Wit印sol、聚乙二醇、吐温61、可可豆脂、月桂精酯、甘油明胶等。
[0059] 根据本公开内容一个方面的组合物可包含所述化合物的可药用盐，并且还可包含 其他药物活性化合物。所述盐不受特别限制，只要其可药用即可。例如，可使用盐酸盐、硫酸 盐、硝酸盐、磷酸盐、氢氟酸盐、氢溴酸盐、甲酸盐、乙酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、富 马酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、萘磺酸盐等。
[0060] 根据本公开内容一个方面的组合物根据目的可肠胃外或经口施用。可每天施用 0.1至5 00mg/kg体重，特别地1至10 Omg/kg体重的日剂量一次或数次。对特定患者的施用剂 量可根据以下而变化:患者的体重、年龄、性别和身体状况，饮食，施用时间，施用方法，排出 速率，疾病的严重程度等。
[0061] 根据本公开内容一个方面的药物组合物可制成任何药学上合适的制剂，包括例如 丸剂、颗粒剂、片剂、软或硬胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂、皮肤外用制剂(如，软膏 剂、霜剂等）、栓剂、注射剂、注射用无菌溶液剂等的制剂。特别地，其可制成注射剂或皮肤外 用制剂。
[0062] 根据本公开内容一个方面的组合物可通过多种途径施用于哺乳动物，例如大鼠、 小鼠、牛、人等。所有施用方式均可在预期之内。例如，其可经口、经直肠、静脉内、肌内、皮 下、子宫内或者脑室内施用。
[0063] 根据本公开内容一个方面的组合物可通过本领域普通技术人员可容易地选择的 多种途径来施用。特别地，根据本公开内容一个方面的药物组合物可以作为皮肤外用制剂 通过皮肤表面来施用。
[0064] 在本公开内容的一个方面中，所述食品组合物可以是健康功能性食品组合物。
[0065] 根据本公开内容一个方面的食品组合物的制剂不受特别限制。例如，其可配制成 片剂、颗粒剂、散剂、液体(如，饮料）、焦糖、凝胶、棒等。食品组合物的每种制剂可包含相关 领域中常用的除活性成分之外的成分，所述成分可由本领域技术人员根据具体制剂和使用 目的而容易地选择。在这种情况下，可实现协同作用。
[0066] 确定根据本公开内容一个方面的食品组合物中活性成分的施用剂量在本领域技 术人员的能力之内。日施用剂量可以是例如〇. 1至5000mg/kg/天，更特别地50至500mg/kg/ 天，但不限于此。施用剂量可根据多种因素(例如对象的年龄和健康状况、存在或并发症等） 而变化。
[0067] 例如，根据本公开内容一个方面的食品组合物可以是以下形式:多种食品，例如口 香糖、焦糖、糖果、冷冻甜点、甜食等;饮料，例如碳酸饮料、矿泉水、酒精饮料等;或者健康功 能性食品，包括维生素、矿物质等。
[0068] 此外，根据本公开内容一个方面的食品组合物可包含多种营养物质、维生素、矿物 质（电解质）、香料（例如合成和天然香料）、着色剂、增容剂（乳酪、巧克力等）、果胶酸及其 盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH控制剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇类、用于碳 酸饮料的碳酸化剂等。此外，根据本公开内容一个方面的功能性食品组合物可包含用于制 备天然果汁、果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。这些成分可以独立使用或组合使用。基于1〇〇重 量份根据本公开内容一个方面的组合物，这些添加剂通常以约〇至20重量份的量包含在内， 但并不具有显著重要性。
[0069] 下文中，将通过实施例和测试例详细描述本公开内容。然而，以下实施例和测试例 仅用于说明性目的，并且本公开内容不受其限制。
[0070] [实施例1](2幻-3-(苯并[d][1，3]二氧代- 6-基)丙烯酸(5_羟基-4-氧代-4H-吡 喃-2-基）甲酯的制备
[0071] 将50g 5-羟基_2_(羟甲基）-4H-吡喃-4-酮（0.35mmol)溶解于250mL N，N-二甲基 甲酰胺中。在于冰-水浴中冷却至l〇°C之后，逐滴添加50g亚硫酰氯(0.42mol)，持续30分钟。 在于室温下搅拌2小时之后，向反应溶液中添加2000mL冰水。过滤所产生的固体，并将所得 固体溶解在lOOOmL乙酸乙酯中。在使用碳酸镁和活性炭干燥和脱色并随后过滤之后，通过 浓缩滤液并添加己烷来获得结晶。在真空过滤之后，获得39.5g作为黄色固体的5-羟基-2-(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮(70 % )。
[0072] 将5g 3,4-(亚甲基二氧基）肉桂酸(0.026mol)和1.3g氢氧化钠(0.031mol)溶解于 40mL甲醇中。在蒸馏出甲醇之后，将剩余残留物溶解于70mL N，N-二甲基甲酰胺中。向其中 添加4.2g 5-羟基_2_(氯甲基)-4H-吡喃-4-酮(0.026mol)，之后在搅拌下将混合物在油浴 中于110°C下加热2小时。在蒸馏出溶剂之后，将残留物溶解于300mL乙酸乙酯中。用5 %盐酸 和蒸馏水洗涤乙酸乙酯溶液，然后通过添加碳酸镁和活性炭干燥并脱色。在滤掉不溶性物 质之后，在减压（12托（torr))下蒸发滤液以获得5.3g作为淡黄色固体的反应产物（产率： 65%)〇
[0073] TLC(乙酸乙酯：己烷= l:l):Rf = 0.63。
[0074] NMR(DMS0-d6，S):9.29(bs，lH)，8.12(s，lH)，7.65(d，lH，J=16.2Hz)，7.46(s， lH)，7.23(d，lH，J = 8.1Hz)，6.96(d，lH，J = 8.1Hz)，6.60(d，lH，J=16.2Hz)，6.52(s，lH)， 6.08(s，2H)，5.07(s，2H).
[0075][实施例2](2E)-3-(2,3-二羟基苯并[b][l，4]二氧代-7-基)丙烯酸(5-羟基-4-氧 代-4H-吡喃-2-基）甲酯的制备
[0076]以与实施例1中相同的方式获得作为淡黄色固体的目标产物(5.0g，57%)，不同之 处在于:使用3,4-(亚乙基二氧基）肉桂酸代替3,4-(亚甲基二氧基）肉桂酸。
[0077] TLC(乙酸乙酯：己烷= l:l):Rf = 0.58。
[0078] NMR(DMS0-d6，S):9.26(bs，lH)，8.11(s，lH)，7.63(d，lH，J=16.2Hz)，7.32(s， lH)，7.25(d，lH，J = 8.1Hz)，6.90(d，lH，J = 8.1Hz)，6.59(d，lH，J=16.2Hz)，6.51(s，lH)， 5.06(s，2H)，4.27(m，4H).
[0079] [测试例1]诱导脂肪源性间充质干细胞分化为脂肪细胞
[0080] 人脂肪源性间充质干细胞（human adipose-derived mesenchymal stem cell， hAT-MSC)购买自 Lonza，Inc ? (Walkersville，MD，USA)，并按照Lonza，Inc的说明书进行培 养。按照L〇nza，Inc.的说明书来诱导脂肪源性间充质干细胞分化为脂肪细胞，不同之处在 于:使用曲格列酮(1^〇81；^32〇116，11?0)代替吲噪美辛（；[11(101]161：1^(3；[11)。具体地，通过向间充 质干细胞的培养物中添加以下物质来使间充质干细胞分化为脂肪细胞:lg/mL胰岛素、1M地 塞米松（dexamethasone，DEXA)、0 ? 5mM异丁基甲基黄噪呤（isobutylmethylxanthine，IBMX) 和2M TR0。对于测试组，在诱导分化为脂肪细胞时，以30yM的浓度向培养基中添加实施例1 的化合物。用30yM格列本脲与IDX-起处理阳性对照组。在脂肪源性间充质干细胞开始分化 为脂肪细胞后的第14天，用10mL磷酸缓冲盐水(PBS)清洗细胞，然后使用10%福尔马林/PBS 溶液(0.2mL/cm 2)固定10分钟。用60 %异丙醇溶液(0.5mL/cm2)洗涤经固定的细胞一次，并用 溶解在60%异丙醇中的油红0(0.2mL/cm 2)将脂肪细胞中的脂肪体染色10分钟。然后，在用 苏木精再次染色以使细胞核可视化之后，在显微镜下观察细胞。结果在图1中示出。
[0081]根据图1，与只用IDX进行处理相比，用实施例1的化合物进行处理导致向脂肪细胞 的分化提高。与作为阳性对照的格列本脲相比，染色细胞的数目略少，但向脂肪细胞的分化 显著提高。因此，根据本公开内容一个方面的羟基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化合 物的组合物可促进脂肪细胞的分化，并且因此可提供增大皮肤体积或弹性的效果。
[0082] [测试例2]测量人脂肪源性间充质干细胞中脂连蛋白的表达水平
[0083] 脂连蛋白是脂肪细胞中分泌的一种代表性蛋白质类激素。据报道，脂连蛋白的表 达随着向脂肪细胞的分化而提高。因此，测量分泌到细胞培养基中的脂连蛋白的量作为促 进脂肪细胞分化的标志。为了测量脂连蛋白的分泌量，在购自L 〇nza，Inc.的人脂肪源性间 充质干细胞开始分化为脂肪细胞后的第14天对其进行收集，并使用脂连蛋白ELISA试剂盒 (R&D Systems，目录号.DY1065)如下量化脂连蛋白的量(将数据相对于对照组的数据进行 归一化）。具体地，在96孔板上与捕获抗体反应并用清洗缓冲液清洗后，用浓度为60yM的样 品处理细胞并在室温下孵育2小时。其后，将细胞与检测抗体、HRP、底物溶液和终止溶液一 起孵育方案中指定的时间，同时在各步骤之间清洗3次。在最后的孵育后，使用分光光度计 在450nm处测量吸光度。结果在表1中示出。
[0084] 【表1】
[0085]脂连蛋白的表达水平
[0088] 实施例1和实施例2的化合物为曲酸酯化合物。如从表1可见，尽管曲酸未显示出提 高脂连蛋白表达的作用，但是实施例1和实施例2的化合物提高了脂连蛋白的表达。根据本 公开内容的化合物提高脂连蛋白表达的作用与阳性对照物质格列本脲并无显著差异。因 此，可以证实根据本公开内容一个方面的羟基吡喃酮衍生物化合物或者包含所述化合物的 组合物表现出显著的促进脂肪细胞分化的作用，并且因此可提供增大皮肤体积或弹性的效 果。
[0089] 下文中，将通过配制例详细描述本公开内容。然而，以下制备例仅用于说明性目 的，并且本公开内容不受其限制。
[0090] [配制例1]软胶囊剂
[0091] 根据常用方法通过混合以下物质来制备软胶囊剂填充溶液:8mg实施例1或2的羟 基P比喃酮衍生物、9mg维生素E、9mg维生素C、2mg棕榈油、8mg氢化植物油、4mg黄蜂錯和9mg卵 磷脂。独立于此，由66重量份明胶、24重量份甘油和10重量份山梨糖醇溶液制备软胶囊片 材，并用填充溶液填充以制备包含400mg根据本公开内容一个方面的组合物的软胶囊剂。 [0092][配制例2]片剂
[0093]混合以下物质并使用流化床干燥器制粒：8mg实施例1或2的羟基吡喃酮衍生物、 9mg维生素E、9mg维生素C、200mg半乳寡糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖。添加6mg糖酯之后，根 据常用方法将500mg所得组合物制备成片剂。
[0094][配制例3]饮料
[0095] 混合以下物质并添加300mL纯化水:8mg实施例1或2的羟基吡喃酮衍生物、9mg维生 素E、9mg维生素C、10g葡糖糖、0.6g柠檬酸和25g寡糖糖浆。每瓶装填200mL所得溶液并在130 °C下灭菌4至5秒。
[0096][配制例4]颗粒剂
[0097]混合以下物质并使用流化床造粒机制粒：8mg实施例1或2的羟基吡喃酮衍生物、 9mg维生素E、9mg维生素C、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉。将所制备的颗粒剂装入袋 中。
[0098][配制例5]注射剂
[0099] 通过常用方法以表2中所述的组成制备注射剂。
[0100] 【表2】
[0102][配制例6]健康功能性食品
[0103] 通过常用方法以表3中所述的组成制备健康功能性食品。
[0104] 【表3】
[0106]
[0107] 以上维生素和矿物质的组成比仅作为相对适用于健康功能性食品的特定实例给 出，并且可根据需要而变化。
[0108] [配制例7]健康饮料
[0109] 通过常用方法以表4中所述的组成制备健康饮料。
[0110] 【表4】
[0112] 根据常用的健康饮料制备方法，将上述成分混合，在85°C下于搅拌下加热约1小 时，过滤，然后灭菌。
[0113] [配制例8 ]软化洗剂(皮肤洗剂）
[0114] 通过常用方法以表5中所述的组成制备软化洗剂。
[0115] 【表5】
[0117] ~[配制例9 ]滋养洗剂(乳液洗剂)
[0118] 通过常用方法以表6中所述的组成制备滋养洗剂。
[0119] 【表6】
[0121]
[0122] [配制例10]滋养霜
[0123] 通过常用方法以表7中所述的组成制备滋养霜。
[0124] 【表7】
[0126]
[0127] [配制例11]按摩霜
[0128] 通过常用方法以表8中所述的组成制备按摩霜。
[0129] 【表8】
[0131][配制例12]面膜
[0132] 通过常用方法以表9中所述的组成制备面膜。
[0133] 【表9】
[0135]虽然已示出并描述了一些示例性实施方案，但是本领域技术人员应该理解的是： 在不脱离如所附权利要求书限定的本公开内容的精神和范围的情况下，可以对本公开内容 进行多种形式和细节的改变。
【主权项】
1. 用于增大皮肤体积或弹性的组合物，其包含化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物 作为活性成分： [化学式1] 其中 R为-CH2-或-CH2CH2-。2. 根据权利要求1所述的用于增大皮肤体积或弹性的组合物，其中所述组合物促进间 充质干细胞分化为脂肪细胞。3. 根据权利要求1所述的用于增大皮肤体积或弹性的组合物，其中基于所述组合物的 总体积，所述组合物包含〇. 01至100μΜ浓度的所述活性成分。4. 根据权利要求1所述的用于增大皮肤体积或弹性的组合物，其中所述组合物提高脂 肪组织。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的用于增大皮肤体积或弹性的组合物，其中所述组 合物为药物组合物或化妆品组合物。6. 用于促进脂肪细胞分化的组合物，其包含化学式1所示羟基吡喃酮衍生物化合物作 为活性成分： [化学式1] 其中 R为-CH2-或-CH2CH2-。7. 根据权利要求6所述的用于促进脂肪细胞分化的组合物，其中所述组合物促进间充 质干细胞分化为脂肪细胞。8. 根据权利要求6所述的用于促进脂肪细胞分化的组合物，其中基于所述组合物的总 体积，所述组合物包含〇. 01至1〇〇μΜ浓度的所述活性成分。
【文档编号】A61K8/49GK105873584SQ201580003446
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2015年1月20日
【发明人】卢浩植, 白兴洙, 金俞姃, 申松锡, 李存桓
【申请人】株式会社爱茉莉太平洋