一种四烯雌酮纳米乳液及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种四烯雌酮纳米乳液及其制备方法，所述乳液由包括质量份数分别为四烯雌酮0.1?1份、表面活性剂15?35份、助表面活性剂1.5?20份、油2?30份、注射用水26?45份的原料制备而成，所述四烯雌酮纳米乳液热力学稳定性好，在加热至80℃后放置充分振荡完全可以恢复稳定的乳剂状态，贮存稳定性好，久置不分层，既可口服饮水给药又可拌料给药，口服给药纳米乳基质能很好地保护四烯雌酮不受到胃酸的破坏且能够克服肝脏首过效应；其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。
【专利说明】
-种四稀雌酬纳米乳液及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及一种四締雌酬药物制剂及其制备方法，尤其是一种四締雌酬纳米乳液 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 四締雌酬(又称締丙孕素)是一种孕激素，结构上与兽用药类固醇群勃龙有关，是 一种合成的化ienic C21酱类孕激素，属于19-去甲睾丸素类。它是具有口服活性的促孕激 素。与所有类固醇一样，四締雌酬通过自身脂溶性可W渗透入祀细胞中然后与特定受体结 合来发挥作用，其类似于天然孕酬的作用模式来抑制促性腺激素的释放，可作为家畜同期 发情的药物。
[0003] 在兽医领域，四締雌酬用来是母马和母猪同步发情。四締雌酬可使母猪同期发情， 还能增加仔猪的初生体重、仔猪数量，减少木乃伊胎的产生，提高母猪的分娩率，及防止母 猪早产、断奶后背腰过厚，但不能提高早期断奶母猪的繁殖率。研究表明，通过给后备母猪 饲喂适量的四締雌酬可使大量的后备母猪达到同期发情。同期发情可使母猪分娩时间集 中，便于母猪集中断奶、全进全出、进入下一个繁殖周期，有效地提高母猪的繁殖率，减少病 原的传播，利于规模化猪场实行严格的防疫制度和保证生物安全体系。本试验研究了四締 雌酬对后备母猪同期发情影响，W确定后备母猪的同期发情程度、发情高峰期。
[0004] 目前在我国兽医临床上尚无四締雌酬制剂，欧洲EMEA和美国FDA已批准了四締雌 酬溶液(油溶液)用于诱导母马和母猪的同步发情。由于四締雌酬为类固醇类物质且水溶性 很差(微溶于水），其在植物油中有较大溶解度。但传统的油溶液制剂并不能改善类固醇药 物四締雌酬口服给药后在酸性（胃酸)条件下受到破坏、稳定性较差等缺陷，进而造成其生 物利用度低、用药量加大、提高用药成本等，大大限制其在兽医临床的应用。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种稳定性好的四締雌酬纳米乳液。
[0006] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述四締雌酬纳米乳液的制备方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
[000引一种四締雌酬纳米乳液，由包括如下质量份数的原料制成： 四締雌醒： 0.1-1份 表面活性剂： 15-35份
[0009] 助表面活性剂：1.5-20份 嫩； 2-30份 注射用水; 26-似份。
[0010] 其中，所述表面活性剂是泊洛沙姆、司盘-80、单硬脂酸甘油醋或聚氧乙締酸氨化 藍麻油(畑50)中的任一种或任两种的混合物;所述助表面活性剂是阳G-400、阳G-600、1,2- 丙二醇、丙Ξ醇或乙二醇中的任一种或任两种的混合物;所述油为肉豆違异丙醋、橄揽油、 油酸乙醋、花生油、霍霍己油或棉巧油中的任一种或任两种的混合物。
[0011]优选地，所述的四締雌酬纳米乳液，由包括如下质量份数的原料制成： 四婦雌醒： 0.1-1份 表面活性剂： 15-30份
[001^ 助表面祗性剂：10-20份 紳;： 20-30 份 注射用氷； 32-45份。
[001引更优选的，上述四締雌酬纳米乳液，由下列质量份数的原料组成： 四締雌酬： 0.4份 表面活性剂；20份
[0014] 助表面活性剂：11份 油； 2S份 注射用水： 43.6份。
[001引优选地，上述四締雌酬纳米乳液，所述表面活性剂是泊洛沙姆、单硬脂酸甘油醋或 聚氧乙締酸氨化藍麻油(RH-40);所述助表面活性剂是乙二醇、PEG-600或1,2-丙二醇;所述 油为油酸乙醋、花生油或棉巧油。
[0016] 优选地，上述四締雌酬纳米乳液，所述表面活性剂是泊洛沙姆;所述助表面活性剂 是乙二醇;所述油为花生油。
[0017] 优选地，上述四締雌酬纳米乳液，是由包括如下步骤的方法制备得到的：
[0018] (1)按质量份数分别称取四締雌酬、表面活性剂、助表面活性剂、油、注射用水，备 用；
[0019] (2)将配方量的四締雌酬作为原料药先溶于助表面活性剂中，并加入配方量的表 面活性剂和油，混匀备用；
[0020] (3)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入上述注射用水到体系 中，一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得四締雌酬纳米乳液。
[0021] 优选地，上述四締雌酬纳米乳液，所述乳液为纳米乳药液，其乳滴粒径为10-100纳 米。
[0022] 优选地，上述四締雌酬纳米乳液，所述乳液为纳米乳药液，其乳滴粒径为40-60纳 米。
[0023] 优选地，上述四締雌酬纳米乳液，所述纳米乳药物加双蒸水大量稀释制成不同浓 度的注射液或口服液。
[0024] 本发明还提供了上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，包括如下步骤：
[0025] (1)按质量份数分别称取四締雌酬、表面活性剂、助表面活性剂、油、注射用水，备 用；
[0026] (2)将配方量的四締雌酬作为原料药先溶于助表面活性剂中，并加入配方量的表 面活性剂和油，混匀备用；
[0027] (3)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入上述注射用水到体系 中，一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得四締雌酬纳米乳液。
[0028] 优选的，上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，所得四締雌酬纳米乳液为水包油型 (0/W)乳剂，粒径在10-1 OOnm。
[0029] 优选的，上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，所得四締雌酬纳米乳液加双蒸水大 量稀释成不同浓度的口服液。
[0030] 本发明的有益效果是：
[0031 ]本发明四締雌酬纳米乳液，热力学稳定性好，在加热至8(TC后放置充分振荡完全 可W恢复稳定的乳剂状态，胆存稳定性好，久置不分层，甚至在离屯、加速试验中，12000rpm 离屯、30min也不会分层;防腐性能良好，保质期时间长，便于保存;所述四締雌酬纳米乳液， 既可口服饮水给药又可拌料给药，尤其口服给药纳米乳基质能很好地保护四締雌酬不受到 胃酸的破坏且能够克服肝脏首过效应;具有一定的缓释作用，可减少给药次数，给药方便， 能诱导母畜(母猪)的同期发情，大大提高劳动效率、降低人工和管理成本。
[0032]所述四締雌酬纳米乳液经过反向HPLC含量检测，重现性好，含量稳定，主药四締雌 酬无变性、分解等，含量满足临床用药需求;所述四締雌酬纳米乳液可W过滤灭菌，制备工 艺简单，便于操作，且所需原料价格适中，能够被广大消费者所接受。
【附图说明】
[00削图1是0.4%四締雌酬纳米乳透射电镜照片；
[0034] 图2是0.4%四締雌酬纳米乳粒径分析图。
【具体实施方式】
[0035] 下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
[0036] 实施例1
[0037] -种四締雌酬纳米乳液，由下列原料制备而成： 四締雌醒原料药 2疫 花生油 250g 泊洛沙姆 200g
[00；3 引 己·.醇 llOg 注射用氷 43雖 总苗 lOOOg
[0039] 上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，包括如下步骤：
[0040] (1)在室溫条件下，按照配方比例称量四締雌酬原料药先溶于乙二醇中，并加入配 方量的泊洛沙姆和花生油，混匀备用；
[0041] (2)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入注射用水到体系中， 一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得粒径10-100纳米、外观澄明均一的四締雌 酬纳米乳液。
[0042] 实施例2
[0043] -种四締雌酬纳米乳液，由下列原料组成： 四締雌酬原料药 4g 油酸乙醋 220g 单硬脂酸甘油醋 i60g
[0044] PEG-600 180g 注射用水 436g 总 Μ: lOOOg
[0045] 上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，包括如下步骤：
[0046] (1)在室溫条件下，按照配方比例称量四締雌酬原料药先溶于阳G-600中，并加入 配方量的单硬脂酸甘油醋和油酸乙醋，混匀备用；
[0047] (2)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入上述注射用水到体系 中，一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得粒径10-100纳米、外观澄明均一的四 締雌酬纳米乳液。
[004引实施例3
[0049] -种四締雌酬纳米乳液，由下列原料组成： 四婦帷醒原料药 踞 棉巧油 280g 聚氧乙嫌醒氨化蔑麻油CRH-30) 240g
[(Κ)加 ] - 1，2 丙二醇 130g 注射巧化 342g 息量 lOOOg
[0051] 上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，包括如下步骤：
[0052] (1)在室溫条件下，按照配方比例称量四締雌酬原料药先溶于1，2丙二醇中，并加 入配方量的聚氧乙締酸氨化藍麻油(RH-50)和棉巧油，混匀备用；
[0053] (2)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入上述注射用水到体系 中，一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得粒径10-100纳米、外观澄明均一的四 締雌酬纳米乳液。
[0054] 实施例4
[0055] -种四締雌酬纳米乳液，由下列原料组成： 四締雌酬原料戴 Ig 橄揽油 茲雄 司盘-80 260g
[0化6] 丙S醇 160g 注射用水 354g 总量' lOOOg
[0057] 上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，包括如下步骤：
[005引（1)在室溫条件下，按照配方比例称量四締雌酬原料药先溶于丙Ξ醇中，并加入配 方量的司盘-80和橄揽油，混匀备用；
[0059] (2)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入上述注射用水到体系 中，一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得粒径10-100纳米、外观澄明均一的四 締雌酬纳米乳液。
[0060] 实施例5
[0061] -种四締雌酬纳米乳液，由下列原料组成： 四婦雌酬原料药 i〇_g 霍霍巴油 T15运 泊洛沙姆 170g
[0062] PEG-400 200g 注射用水 345g 总量 1㈱Og
[0063] 上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，包括如下步骤：
[0064] (1)在室溫条件下，按照配方比例称量四締雌酬原料药先溶于阳G-400中，并加入 配方量的泊洛沙姆和霍霍己油，混匀备用；
[0065] (2)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入上述注射用水到体系 中，一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得粒径10-100纳米、外观澄明均一的四 締雌酬纳米乳液。
[0066] 实施例6
[0067] -种四締雌酬纳米乳液，由下列原料组成： 四締雌醒原料药 4g 花生油 250g 泊洛妙'姆 200g
[006引 己·.配 llOg 注射用水 4：36g 总量 ：1000g
[0069] 上述四締雌酬纳米乳液的制备方法，包括如下步骤：
[0070] (1)在室溫条件下，按照配方比例称量四締雌酬原料药先溶于乙二醇中，并加入配 方量的泊洛沙姆和花生油，混匀备用；
[0071] (2)将配方量的注射用水作为水相，在室溫下，一边缓慢加入上述注射用水到体系 中，一边不断揽拌，直至形成澄清透明的液体，即制得粒径10-100纳米、外观澄明均一的四 締雌酬纳米乳液。
[0072] 将实施例1-6之一所述各组分用量按照相同比例增加或减少，所得各组分的用量 关系均属于本发明的保护范围。
[0073] 实施例1-6制备的四締雌酬纳米乳液在加热至80°C后放置充分振荡完全可W恢复 稳定的乳剂状态，胆存稳定性好，久置不分层，在离屯、加速试验中，1200化pm离屯、30min也不 会分层。
[0074] 粒度分析结果
[0075] 本发明经透射电镜(JEM 1200EX)及激光粒度分析仪检测，实施例2所述0.4%四締 雌酬纳米乳外观为淡黄色澄清透明液体，乳滴粒径分布在10-100纳米之间，平均粒径为40 纳米。检测相关结果见图1(0.4%四締雌酬纳米乳透射电镜照片)和图2(0.4%四締雌酬纳 米乳粒径分析图）。
[0076] 含量测定
[0077] 将制备好的四締雌酬纳米乳采用高效液相色谱法进行含量测定，日本岛津LC- lOADvp高效液相色谱仪，SPD-lOAvp二极管阵列检测器，Class-vp工作站;色谱柱:Eel ipse XDB-C18 (150mm X 4.6mm，5μπι);流动相：乙腊：水（60 :40);流速：1. OmL/min;检测波长： 240nm;进样量:2化L。理论塔板数按四締雌酬计算不低于2000。
[0078] 对照品溶液的制备取四締雌酬对照品精密称定，加流动相制成每mL含lOmg的溶 液，作为对照品储备液。精密吸取上述储备液适量加流动相制成每My#四締雌酬0.5mg的溶 液，作为对照品溶液。
[0079] 供试品溶液制备精密称取实施例2所述0.4%四締雌酬纳米乳适量，置lOOmL量瓶 中，加流动相适量，超声使溶解；取适量加入流动相稀释至0.5mg/ml，摇匀，用微孔滤膜 (0.45皿)滤过，即得，作为供试品溶液。
[0080] 标准曲线和线性范围精密量取对照品储备液，加流动相分别制成每mL含四締雌酬 0.10、0.25、0.5、0.75、1.00和2. OOmg的标准溶液，经0.45皿滤膜过滤后，依次进样，测定色 谱峰面积，W峰面积(Y)对其质量浓度(X)进行线性回归，得回归方程。
[0081 ] ￥ = 49232.21X-3.77，r = 0.9999。结果表明，四締雌酬浓度为0.10-2. OOmg/mL时 有良好的线性关系。
[0082] 含量测定精密量取已知含量的四締雌酬纳米乳2.5mL，置于100ml的容量瓶中，用 流动相稀释至刻度，超声使溶解;精密量取5ml上述溶液置于100ml的容量瓶中，用流动相稀 释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45皿)滤过，进样20化，记录色谱图，计算峰面积，由标准曲 线计算药物含量，结果，其含量为标示量的97-103%，RSD小于1.5%。
[0083] 安全性评价采用豚鼠和家兔分别进行四締雌酬纳米乳的全身用药过敏性、肌肉局 部刺激性及家兔红细胞体外溶血性试验研究，用改良寇氏法对小鼠的LDso进行了测定。结果 显示本品临床给药剂量对豚鼠无全身过敏性、对家兔肌肉注射给药无明显局部刺激性、对 家兔红细胞无体外溶血性，表明四締雌酬纳米乳剂的各项安全性均良好，为实际应用提供 了有力的证据。
[0084] 应用试验例：
[0085] 四締雌酬纳米乳液对断奶初产母猪生产性能的疗效观察
[0086] 1药物实施例2所述0.4%四締雌酬纳米乳液和实施例6所述0.4%四締雌酬纳米乳 液。
[0087] 2试验动物
[008引选自2013年5月至2015年10月期间在河北、山东两省多个大型养猪场中的断奶初 产母猪，合计985头。母猪场常见的情况是母猪第二胎繁殖性能差，运种情况通常是由于在 第一次断奶时体况差等各种因素造成。
[0089] 3试验方法
[0090] 将某一养猪场阶段时间内（约7天左右)收集到的断奶初产母猪随机分为Ξ组，一 组按照常规饲养管理方式进行，作为对照组;试验组1在出产母猪断奶后(第0天)开始计算， 连续14天每天口服实施例2制备的0.4%四締雌酬纳米乳液5ml;试验组2在出产母猪断奶后 (第0天)开始计算，连续14天每天口服实施例6制备的0.4%四締雌酬纳米乳液5ml。试验期 间，所有试验母猪自由采食和饮水。试验结束后W分娩率、总产子数、断奶到第一次配种的 饲料消耗量、非生产天数等为研究考察指标，用SPSS软件分析结果。
[0091] 4试验结果见表1
[0092] 表 1
[0093]
[0094]
[0095] 综上，本发明所述四締雌酬纳米乳液是一种溶解性好、稳定性高、生物利用度高、 具有缓释作用、且不受胃酸破坏的四締雌酬制剂，解决了现有技术水平下四締雌酬微溶于 水、稳定性差、易受胃酸破坏的技术难题，为兽医临床提供了新型的用于诱导家畜同期发情 的药物制剂，起到了提高母猪分娩率、产子数，缩短非生产天数等作用。
[0096]上述参照实施例对该一种四締雌酬纳米乳液及其制备方法进行的详细描述，是说 明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总 体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种四烯雌酮纳米乳液，其特征在于：由包括如下质量份数的原料制成： 四烯雌酮： 0.1-1份 表面活性剂: 15-35份 助表面活性剂：1.5-20份 油： 2-30份 注射用水： 26-45份 其中，所述表面活性剂是泊洛沙姆、司盘-80、单硬脂酸甘油酯或聚氧乙烯醚氢化蓖麻 油(RH50)中的任一种或任两种的混合物;所述助表面活性剂是PEG-400、PEG-600、1，2-丙二 醇、丙三醇或乙二醇中的任一种或任两种的混合物;所述油为肉豆蔻异丙酯、橄榄油、油酸 乙酯、花生油、霍霍巴油或棉籽油中的任一种或任两种的混合物。2. 根据权利要求1所述的一种四烯雌酮纳米乳液，其特征在于：所述原料的质量份数 为： 四烯雌酮0.1-1份 表面活性剂： 15-30份 助表面活性剂：10-20份 油： 20-30份 注射用水: 32-45份。3. 根据权利要求2所述的一种四烯雌酮纳米乳液，其特征在于：所述原料的质量份数 为： 四烯雌酮： 0.4份 表面活性剂： 20份 助表面活性剂：11份 油： 25份 注射用水： 43,6汾。4. 根据权利要求1所述的四烯雌酮纳米乳液，其特征在于：所述表面活性剂是泊洛沙 姆、单硬脂酸甘油酯或聚氧乙烯醚氢化蓖麻油（RH50);所述助表面活性剂是乙二醇、PEG-600或 1 ， 2-丙二醇; 所述油为油酸乙酯 、花生油或棉籽油。5. 根据权利要求4所述的四烯雌酮纳米乳液，其特征在于：所述表面活性剂是泊洛沙 姆;所述助表面活性剂是乙二醇;所述油为花生油。6. 根据权利要求1-5任一项所述的四烯雌酮纳米乳液，其特征在于:是由包括如下步骤 的方法制备得到的： ⑴按质量份数分别称取四烯雌酮、表面活性剂、助表面活性剂、油、注射用水，备用； (2) 将配方量的四烯雌酮作为原料药先溶于助表面活性剂中，并加入配方量的表面活 性剂和油，混匀备用； (3) 将配方量的注射用水作为水相，在室温下，一边缓慢加入上述注射用水到体系中， 一边不断搅拌，直至形成澄清透明的液体，即制得四烯雌酮纳米乳液。7. 根据权利要求1-6任一项所述的四烯雌酮纳米乳液，其特征在于:所述乳液为纳米乳 药液，其乳滴粒径为10-100纳米。8. 根据权利要求7所述的四烯雌酮纳米乳液，其特征在于:所述纳米乳药液的乳滴粒径 为40-60纳米。9. 权利要求1-8任一项所述的四烯雌酮纳米乳液的制备方法，其特征在于:包括如下步 骤： ⑴按质量份数分别称取四烯雌酮、表面活性剂、助表面活性剂、油、注射用水，备用； (2) 将配方量的四烯雌酮作为原料药先溶于助表面活性剂中，并加入配方量的表面活 性剂和油，混匀备用； (3) 将配方量的注射用水作为水相，在室温下，一边缓慢加入上述注射用水到体系中， 一边不断搅拌，直至形成澄清透明的液体，即制得四烯雌酮纳米乳液。10. 根据权利要求9所述的四烯雌酮纳米乳液的制备方法，其特征在于:所得四烯雌酮 纳米乳液加双蒸水大量稀释成不同浓度的口服液。
【文档编号】A61K31/567GK105878184SQ201610269070
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月26日
【发明人】焦晓军, 龚伟勤, 韩贞珍, 程雪娇, 王建, 朱士江, 季昆, 王勇, 王猛, 余贵菊, 甄盼盼, 杨雪, 崔志刚, 张立会, 姜淋洁, 于小婷, 李丽琴, 王宇鹏, 李玲, 范庆增
【申请人】天津市中升挑战生物科技有限公司