缓释微粒的制备方法、制得的缓释微粒及其应用

文档序号:10520966阅读:1064来源:国知局
缓释微粒的制备方法、制得的缓释微粒及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种缓释微粒的制备方法,包括以下步骤:1)制备水溶性药物与可生物降解和生物相容的水难溶性聚合物的固体分散体;2)将制备的固体分散体溶于有机溶剂C中,形成固体分散体乳液;3)将得到的固体分散体乳液注入含有表面活性剂的油溶液中形成均匀的乳液;4)通过溶剂挥发或溶剂提取使乳液中的微粒固化,收集微粒,洗涤干燥,获得所述缓释微粒;本发明还公开了由所述缓释微粒的制备方法制得的缓释微粒及缓释微粒在植入式缓释药物组合物中的应用。本发明的缓释微粒的制备方法全程常温或低温,对于高温敏感的药物制备聚合物基质的组合物非常有利;同时,所制备的缓释微粒具有接近零级的优异缓释效果,药物浓度在缓释期间稳定。
【专利说明】
缓釋微粒的制备方法、制得的缓釋微粒及其应用
技术领域
[0001 ]本发明属于水溶性药物领域,尤其设及缓释微粒的制备方法、制得的缓释微粒及 缓释微粒在植入式缓释药物组合物中的应用。
【背景技术】
[0002] 近年来,大量的生物活性类物质如寡肤、多肤和蛋白作为候选药物获得了大量关 注,其在治疗严重的病状(癌症、贫血症、多发性硬化、肝炎等)中发挥重要的作用。但是,运 些大分子活性成分比较脆弱,因为它们在胃肠道中的稳定性差(容易在低抑或蛋白酶解下 降解),循环半衰期较短,W及它们穿过肠壁的通透性差,从而导致生物利用度非常低,因此 难W 口服给药。注射或胃肠外途径给药仍是多肤和蛋白等活性成分的优选给药途径。可通 过静脉、肌肉或皮下途径注射的肤和蛋白质的很多制剂已经上市或在研发当中,如亮丙瑞 林缓释微粒、戈舍瑞林缓释植入剂、曲普瑞林缓释微粒等。
[0003] 对于许多肤试剂,特别是激素,需要W受控的速率长期连续给药,运些活性成分在 祀组织或器官上产生期望的效果所需的全身浓度很高,因而需要通过频繁地注射高剂量获 得治疗效用窗中所需的浓度,运常常造成对患者有损害的全身毒性。同时,注射给药是疼痛 的,因此,患者的依从低,疗效差,副作用大。运些问题可W通过基于聚合物的活性成分的长 效传递系统化rug Delivery System,DDS)得W解决,该系统通过将活性成分包封入生物可 降解和生物相容的聚合物基质中,制成微胶囊、微颗粒或可移植杆的形式,使活性成分长期 稳定地释放出来,从而达到緩释控释的目的。
[0004] 已经报道的微粒制备方法有多种,比如溶剂挥发法(solvent evaporation)、凝聚 法(coacervation)、喷雾干燥法W及喷雾冷冻干燥法等。其中使用最多的是水相中溶剂挥 发法,它又可细分为单乳化法(0il/Water,0/W;Water/0il,W/0)和复乳化法(Water/0il/ Water,W/0/W;Water/0il/0il,W/0/0)。
[0005] 一种改进的复乳化方法(如CN102245210A、CN1826170B),直接将多肤粉末悬浮在 有机相中,形成油包固(S/0)的悬浊液,然后将此悬浊液分散到水相中,形成S/0/W的复乳 液。由于多肤粉末一般不溶于中间有机相溶剂,此方法可避免Wi/O/W^复乳化方法中内水相 向外水相的扩散,进而提高包封率。
[0006] 在S/0/W方法中,预制备的活性物质颗粒的大小十分重要,当固体蛋白质颗粒的直 径从5微米增大到20微米时,不仅初期的释放速率翻倍,其微囊包封率从80%下降到20%。 通常得到的蛋白质、多肤冻干粉末平均粒径在1〇-1〇〇〇μπι,比如,典型的蛋白质、多肤冷冻干 燥粉末平均粒径约在10-500μπι。如果直接用如此大粒径的粉末悬浮在有机溶剂中形成S/0 悬浊液,然后应用S/0/W复乳化方法制备微粒,药物将得不到很好的包封,导致的结果是或 者包封率低,或者緩释结果不令人满意(前期药物突释较大,而后期药物释放量不足),或者 制备的微粒粒径太大,难W注射给药;同时,药物颗粒的形状也影响微粒的形状。因此,一般 要采用某种方法预先将药物粉末平均粒径减小到l-l〇ym,然后将此粉末用于S/0/W复乳化 法制备緩释微粒化SP 6270700;Takada S,et al.Journal of Controlled Release.2003, 88(2):229-42)。
[0007]然而,制备小粒径的药物往往要通过研磨、喷雾干燥、超声粉碎、气流粉碎、结晶法 等方法(如CN1494900B)工艺复杂,并且容易导致活性成分失活。研磨法受限于造成粉尘、重 金属污染W及研磨热引起的蛋白质变性;喷雾干燥法或许可W提供足够小的蛋白颗粒,但 是喷嘴附近的高剪切力和液体与空气间的界面张力会使蛋白变性;此外,喷雾干燥或喷雾 式冷冻干燥中须使用表面活性剂,而表面活性剂又造成蛋白质在下一步制剂程序中与溶剂 互相作用。同时,如果降低制备颗粒工艺的复杂性,牺牲粒径大小W保证药物的活性,制备 的颗粒粒径相对微粒略小(即颗粒半径比聚合物层厚度大得多),则会出现每个微粒只包裹 一个或很少几个活性物质颗粒的情况,从而导致前期极少药物释放,而后期药物释快速释 放,达不到缓释效果。
[000引一种改进的复乳化法(CN102233129 B、CN 102871969 A、CN102266294 B等),将活 性物质与一种或几种添加剂(如葡聚糖、聚乙二醇、海藻酸钢等)制备小粒径的颗粒,然后用 有机溶剂洗去部分或全部的添加剂,获得多孔、半缕空或缕空的活性物质小颗粒,然后再用 S/0/hO工艺制备微粒。运种方法增加了制备小颗粒运一步较复杂的步骤,而且需要用有机 溶剂除去其中的添加剂。并且,运些添加剂大多为水溶性物质,如果没有完全去除,容易影 响释放效果,加快活性物质释放,或者形成凝胶(如高分子量的葡聚糖、海藻酸钢),可能导 致微粒涨破、药物释放延迟或者释放不彻底。
[0009] 更进一步优化的制备方法化S5556642),将水溶性活性物质和聚合物溶于共溶剂, 然后通过蒸发去除有机溶剂得到固体分散体,然后将固体分散体溶于有机溶剂中,通过0/W 法制备微粒。运种方法克服了传统的S/0/W法前期没有药物释放,而后期药物释急剧释放的 缺点。然而,挥发有机溶剂制备固体的工艺不利于对溫度敏感的活性物质,容易致使其变 性;如果于较低溫度下挥发有机溶剂,由于溶剂挥发较慢则会造成活性物质在固化时聚集 析出,干燥后的固体分散体中活性物质也会W较大的体积存在,如块状、带状、丝状,对后续 的制备微粒工艺造成困难或造成浪费,也会导致释放不稳定。
[0010] 因此,本发明的目的在于,提供一种无需预先制备小粒径药物粉末,通过乳化-溶 剂挥发法制备緩释组合物,工艺比较简单而且又能保证活性物质的生物活性、理想的包封 率和优异的緩释效果的方法。

【发明内容】

[0011] -方面,为解决现有技术中存在的问题,本发明提供了一种缓释微粒的制备方法, 此方法的制备全程常溫或低溫,对于高溫敏感的药物非常有利,能够最大程度上保持活性 物质的生物活性。
[0012] 本发明采用的技术方案为:一种缓释微粒的制备方法,包括W下步骤:
[0013] 1)制备水溶性药物与可生物降解和生物相容的水难溶性聚合物的固体分散体;
[0014] 2)将步骤1)制备的固体分散体溶于有机溶剂C中,形成固体分散体乳液(内油相), 所述有机溶剂C为不能溶解所述水溶性药物但可W溶解所述水难溶性聚合物、沸点低于水 且不溶于或难溶于水的有机溶剂;
[0015] 3)将步骤2)得到的固体分散体乳液注入含有表面活性剂的油溶液(外油相)中形 成均匀的乳液;
[0016] 4)通过溶剂挥发或溶剂提取使乳液中的微粒固化,收集微粒,用有机溶剂D洗涂数 次,再W超纯水洗涂数次,W除去附着于微粒表面的表面活性剂,然后进行干燥,获得所述 缓释微粒;其中,所述有机溶剂D不能溶解水溶性药物和水难溶性聚合物,其能与所述油溶 液混溶,同时对所述表面活性剂有良好的溶解性。
[0017] 所述的水溶性药物包括分子量小于约3350化的碱性物质或含有碱性基团的物质 (如生物碱、短肤、括抗剂、抗生素、小分子核酸)及其盐,W及分子量大于约3350化的碱性物 质或含有碱性基团的物质及其盐(如多肤、蛋白、核酸、抗体、抗原、抗生素等)中的至少一 种。优选地,所述水溶性药物为蛋白类药物、肤类药物和核酸类药物中的至少一种。优选的, 所述水溶性药物的分子量小于约3350化。
[0018] 所述蛋白包括天然的,合成的,半合成的或重组的化合物或蛋白质,或含有通过肤 键共价连接的α氨基酸的基本组成结构,或功能上相关。具体的,包括但不限于球状蛋白(如 白蛋白、球蛋白、组蛋白),纤维蛋白(如胶原,弹性蛋白,角蛋白),化合物蛋白质(可含有一 个或多个非肤组分,如糖蛋白、核蛋白、粘蛋白、脂蛋白、金属蛋白),治疗性蛋白,融合蛋白, 受体,抗原(如合成的或重组的抗原),病毒表面蛋白,激素和激素类似物,抗体(如单克隆或 多克隆抗体),酶,化b片段,白介素及其衍生物,干扰素及其衍生物中的至少一种。
[0019] 所述核酸是指天然的、合成的、半合成的,或由两个或更多个相同或不同的核巧酸 形成的至少部分重组的化合物,并且可W是单链或双链。核酸的非限制性例子包括寡核巧 酸,反义寡核巧酸,适体,多核巧酸,脱氧核糖核酸,siRNA,核巧酸构建体、单链或双链区段 物W及前体及其衍生物(如糖基化、超糖基化、PEG化、門TC标记、核巧,W及它们的盐)。具体 的,戶片述核酉畫包括但不限于Mipomersen、A1 icaf orsen、Nusinersen、Volanesorsen、 Custirsen、Apatorsen、Plazomicin、RG-012、RG-101、ATL1102、ATL1103、lONIS-皿Vrx、 IONIS-HBV-Lrx、IONIS-GCGRrx、IONIS-GCCRrx、IONIS-HTTrx、IONIS-TTRrx、IONIS-PKKrx、 I0NIS-FXlRx、I0NIS-AP0(a)-LRx、I0NIS-ANGPTL3-LRx、I0NIS-AR-2.5Rx、I0NIS-DMPK-2.5Rx、 I0NIS-STAT3-2.5rx、I0NIS-S0D1rx、I0NIS-GSK4-Lrx、I0NIS-PTP1Brx、I0NIS-FGFR4rx、I0NIS- DGAT2rx中的至少一种。上述名词为核酸药物的名称或代号。
[0020] 所述水溶性药物优选含有至少一个碱性基团的水溶性物质(如肤类药物),包括且 不限于促肾上腺皮质激素(ACTH)及其衍生物、表皮生长因子化GF)、血小板衍生生长因子 (1'06。)、促性腺素释放激素化皿^及其衍生物或类似物、降巧素、膜岛素样生长因子(16尸- I、IGF-II)、细胞生长因子(例如EGF、TGF-a、TGF-β、PDGF、盐酸FGF、碱性FGF等)、膜高血糖素 样肤(如化P-1、化P-2)及其衍生物或类似物、神经营养因子(例如NT-3、NT-4、CNTF、GDNF、 抓NF等)、集落刺激因子(例如CSF、GCSF、GMCSF、MCSF等),W及它们的合成类似物、修饰物和 药物活性片段中的至少一种。所述化P-1的衍生物或类似物包括但不限于exendin-3和 exendin-4〇
[0021] 所述含有至少一个碱性基团水溶性药物优选肤类物质及其衍生物、类似物中的至 少一种,所述肤类物质包括且不限于依降巧素(31肤)、索玛鲁肤(31肤)、膜高血糖素样肤-1 (31肤)、利拉鲁肤(34肤)、特立帕肤(34肤)、普兰林肤(37肤)、恩夫韦地(38肤)、艾塞那肤 (39肤)、促肾上腺皮质激素(39肤)、促肾上腺皮质激素释放激素(41肤)、替莫瑞林(44肤)、 利西拉来(44肤)、促卵泡生成素(118肤)、杜拉鲁肤(274肤)、阿必鲁肤(645肤)、膜高血糖素 (29肤)、舍莫瑞林(29肤)、阿肤地尔(28肤)、膜泌素(27肤)、齐考诺肤(25肤)、替可克肤(24 肤)、比伐芦定(20肤)、生长抑素(14肤)、特利加压素(12肤)、戈舍瑞林(10肤)、曲普瑞林(10 肤)、那法瑞林(10肤)、戈那瑞林(10肤)、西曲瑞克(10肤)、地加瑞克(10肤)、安替肤(10肤)、 血管紧张素(6-10肤)、亮丙瑞林(9肤)、阿拉瑞林(9肤,丙氨瑞林)、布舍瑞林(9肤)、德舍瑞 林(9肤)、布雷默浪丹(7肤)、比伐芦定(10肤)、奥曲肤(8肤)、兰瑞肤(8肤)、布雷默浪丹(7 肤)、埃替非己肤(7肤)、海沙瑞林(6肤)、脾脏五肤(5肤)、胸腺五肤(5肤)中的至少一种。
[0022] 所述肤类物质优选具有不多于30个氨基酸残基的短肤或多肤。所述肤类物质的衍 生物、类似物是指具有不多于30个氨基酸残基的多肤及其变体、类似物中的至少一种经水 溶性或水难溶性的基团或物质修饰的产物,其具有更高的生物及药理活性、稳定性,或具有 新的功能或属性。
[0023] 所述肤类药物的衍生物、类似物包括膜高血糖素样肤(如化P-1、化P-2)及其衍生 物、类似物中的至少一种,包括但不限于exendin-3、exendin-4及它们的变体、衍生物中的 至少一种。
[0024] 所述变体、类似物是指氨基酸序列的一个或多个氨基酸残基被取代(或替换)、缺 失、插入、融合、截短或其任意组合而不同的肤,变体多肤可W是完全功能性的或者可缺乏 一种或多种功能。如膜高血糖素肤-1 (GLP-1)的类似物exendin-4的第2位为甘氨酸,而化P- 1的第2位为丙氨酸,而且exendin-4能与GLP-1受体结合、并产生细胞信号级联传导。
[0025] 所述水溶性或水难溶性的基团或物质选自聚乙二醇及其衍生物、环糊精、透明质 酸、短肤、白蛋白、氨基酸序列、核酸、基因、抗体、憐酸、横酸、巧光染料、KLH、OVA、PVP、PE0、 PVA、烧控、芳控、生物素、免疫球蛋白、清蛋白、聚氨基酸、明胶、班巧酷明胶、丙締酷胺衍生 物、脂肪酸、多糖、脂质氨基酸、壳聚糖和葡聚糖中的至少一种。优选聚乙二醇和/或其其衍 生物,所述聚乙二醇及其衍生物的结构可W是支链的、直链的、分叉的或哑铃状的。所述聚 乙二醇的衍生物包括但不限于单甲氧基聚乙二醇、丙酸甲氧基聚乙二醇。所述聚乙二醇及 其衍生物为市售的,或通过本领域技术人员熟知的技术自行制备的。
[0026] 所述水溶性或水难溶性物质经修饰为带有活化基团的修饰剂后与所述肤类物质 衍生物相偶联,所述活化基团选自马来酷亚胺、面素、乙締基讽、二硫键、琉基、醒基、幾基、 0-取代径氨、活性醋、締基、烘基、叠氮基及其他具有高化学反应活性的基团中的至少一种; 优选地,所述活化基团选自马来酷亚胺、面素、乙締基讽和二硫键中的至少一种;更优选为 马来酷亚胺和/或二硫键。聚合物上所带有的活化基团个数为一个或多个,且当活化基团个 数大于一个时,所述活化基团可为相同或不同。
[0027] 一个或多个所述水溶性或水难溶性物质的分子量为l-60kDa,优选2-50kDa,更优 选5-40kDa。
[0028] 带有活化基团的修饰剂可W通过氨基酸序列上的氨基、簇基、径基或琉基等与肤 或其变体、类似物相偶联。运样的基团通常位于氨基酸残基如Lys(赖氨酸)、Asp(天冬氨 酸)、Glu(谷氨酸)、切S(半脫氨酸)、化s(组氨酸)、4-琉基脯氨酸、时p(色氨酸)、Arg(精氨 酸)、Ala(丙氨酸)、Gly(甘氨酸)、Ser(丝氨酸)或化r(苏氨酸)中的任何一个氨基酸或它们 的衍生物的N端、C端、侧链或任意位点,优选为含有琉基的位点。如Exendin-4及其类似物 中,位于2、14、21、25、28、35、38或任意位的任一个半脫氨酸残基位点或其他氨基酸残基被 替换为半脫氨酸残基的位点。
[0029] 所述肤及其变体、类似物的修饰为随机修饰、定位修饰物(特异性修饰)、单点修饰 或多点修饰,优选单点定位修饰。
[0030] 所述肤及其变体、类似物采用常规的多肤合成方法制备,包括固相多肤合成方法、 液相多肤合成方法、固相-液相多肤合成方法W及重组方法;肤及其变体、类似物与修饰剂 的反应在水溶液或缓冲盐溶液中进行,适当控制反应体系的抑值,WHPLC、GPC等对修饰产 物进行监测,并通过离子交换、凝胶色谱等分离纯化,浓缩并冷冻干燥获得目标产物。
[0031] W上所提及的水溶性药物可W是游离形式或是药学可接受的盐的形式,其成盐的 酸可选用无机酸或有机酸。所述无机酸包括盐酸、硫酸、憐酸,有机酸包括醋酸、甲酸、丙酸、 乳酸、Ξ氣乙酸、构祿酸、富马酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、Π 冬氨酸、苯甲酸、甲横酸、苯横 酸、巧樣酸、苹果酸、草酸、班巧酸、碳酸;优选盐酸、醋酸、富马酸、马来酸;更优选醋酸。
[0032] 所述可生物降解和生物相容的水难溶性聚合物包括聚醋、聚碳酸醋、聚缩醒、聚 酢、聚径基脂肪酸,W及它们的共聚物或共混物。详细的,所述可生物降解和生物相容的聚 合物为聚丙交醋(PLA)、聚乙交醋(PGA)、丙交醋-乙交醋共聚物(PLGA)及它们与聚己内醋 (PCL)或聚乙二醇(PEG)的共聚物(如化 A-PEG、化 GA-PEG、PLGA-PEG-化 GA、PLA-PEG-PLA、 阳G-P化、P化-PLA-P化、P化-PLGA-P化、PEG-PLA-PEG、PEG-PLGA-PEG )、聚己内醋及其与聚乙 二醇的共聚物、聚径基下酸、聚径基戊酸、聚对二氧环己酬(PPD0)、壳聚糖、海藻酸及其盐、 聚氯基丙締酸醋、纤维蛋白、聚酸酢、聚原酸醋、聚酷胺、聚憐腊、聚憐酸醋W及它们的共聚 物或混合物;优选PLA、PLGAW及它们与PCL或PEG的共聚物,W及它们混合物;更优选化A、 PLGA或它们的混合物。
[0033] 所述的PLA、PLGA及它们与P化或阳G的共聚物的重均分子量为25000-150000化,优 选分子量为30000-130000化,更优选分子量为35000-110000化。本说明中所使用的重均分 子量是通过凝胶渗透色谱(GPC)测量所获得的值。
[0034] 所述的PLA、PLGA及它们与PCL或阳G的共聚物的粘度(测试条件为~0.5%(w/v), CHC13,25°C)为0.22-1.1化/g,优选0.27-1. (WL/g,更优选0.31-0.9化/g。
[0035] 所述水难溶性聚合物的分子链都可W携带阴离子或阳离子基团,或者不携带运些 基团。优选的,聚合物具有端簇基或端醋基,更优选的具有端簇基的聚合物。
[0036] 所述化A JLGA及它们与P化或阳G的共聚物,其中丙交脂与乙交脂的比率从100:0 到50:50,优选从大约90:10到50:50,更优选为85:1巧化0:50。
[0037] 本发明的制备缓释微粒的聚合物,可W为单一的聚合物,也可W为多种聚合物的 混合物,如丙交脂与乙交脂的比率及分子量相同但携带基团不同的PLGA的组合、丙交脂与 乙交脂的比率及携带基团相同但分子量不同的PLGA的组合、分子量及携带基团相同但丙交 脂与乙交脂的比率不同的PLGA的组合、分子量、携带基团及丙交脂与乙交脂的比率均不同 的PLGA的组合、PLGA与PLA的组合等。
[0038] 所述有机溶剂C,不能溶解水溶性药物,但可W溶解可生物降解和生物相容的水难 溶性聚合物,沸点低于水且不溶于或难溶于水。所述有机溶剂C可为单一的有机溶剂,也可 W为混溶的两种及W上的有机溶剂。所述有机溶剂C选自脂肪控(分子结构为直链、支链或 环状,例如正己烧、正庚烧、正戊烧、环己烧、石油酸等)、面代控(如二氯甲烧、氯仿、氯乙烧、 四氯乙締、Ξ氯乙締、二氯乙烧、Ξ氯乙烧、四氯化碳、氣控、氯代苯(单、双、Ξ取代)、Ξ氯氣 甲烧等)、脂肪酸醋(如乙酸乙醋、乙酸下醋等)、芳香控(如苯、甲苯、二甲苯等)、酸(如二乙 基酸、二异丙基酸、甲基异下基酸、甲基叔下基酸、甲氧基化酸、烷基酸、二面代酸、Ξ面代 酸、环酸、冠酸等)中的至少一种,优选面代脂肪控类溶剂,更优选二氯甲烧和氯仿中的至少 一种。所述内油相中有机溶剂C的比例根据不同药物和聚合物有所不同,根据实际情况调 配。
[0039] 水难溶性聚合物于有机溶剂C中的浓度依据聚合物的类型、重均分子量W及有机 溶剂的类型而变化;通常,其质量浓度(聚合物质量/有机溶剂C质量*100%)为约1-18% (w/ W),优选为约2-15% (w/w),更优选为约3-12% (w/w)。
[0040] 所述有机溶剂D,同时不能溶解水溶性药物和可生物降解和生物相容的水难溶性 聚合物,但能与所述油溶液混溶,同时对所述表面活性剂有良好的溶解性。所述有机溶剂D 可为单一的有机溶剂,也可W为可W混溶的两种及W上的有机溶剂。所述有机溶剂D选自无 水乙酸、环己烧、正己烧、正庚烧、石油酸中的至少一种,优选正己烧、环己烧、正庚烧中的至 少一种,所述有机溶剂D的种类和比例根据不同表面活性剂、油溶液有所不同,根据实际情 况调配。
[0041] 所述沸点低于水且不溶于或难溶于水的有机溶剂是指只能够与水^巧%体积比 混溶的有机溶剂,而且具有较低沸点(小于或远小于100°c),w便容易地通过例如冻干、蒸 发或鼓风来除去。
[0042] 所述内油相为低溫,所述低溫可W理解为20°C或W下,优选15°C或W下,更优选10 °(:或^下。
[0043] 所述含有表面活性剂的油溶液(又称为外油相)为低溫,所述低溫可W理解为18°C 或W下,优选12°C或W下,更优选8°C。
[0044] 所述含有表面活性剂的油溶液的油基质为制药工艺领域任何药学上可接受的多 元醇、植物油、矿物油及其他油中的至少一种。该油基质可为单一组分,也可W为混溶的两 种及W上的组分。所述植物油包括但不限于豆油、棉巧油、菜巧油、花生油、红花油、芝麻油、 米慷油、玉米胚芽油、葵花油、磐粟油、橄揽油、玉米油、棉巧油、挪子油、亚麻子油、藍麻油、 栋桐油中的至少一种,运些植物油中优选使用豆油、花生油、藍麻油中的至少一种,更优选 花生油;所述矿物油包括但不限于硅油、液体石蜡;其他油包括通过植物油的部分氨化得到 的油(如氨化藍麻油)和液态的饱和脂肪酸(如己酸、辛酸等);所述多元醇包括甘油、聚乙二 醇。所述油基质优选植物油和/或矿物油,更优选植物油。
[0045] 所述表面活性剂可W增加有机相的湿润性质、提高乳化过程中小液珠的稳定性及 形状,避免小液珠重新聚合、减少未包封的或部分包封的小球颗粒的数量,从而避免药物在 释放过程中的初始突释。
[0046] 所述表面活性剂为阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、非离子性表面活性 剂或表面活性生物分子运样的化合物,优选阴离子表面活性剂、非离子性表面活性剂,更优 选阴离子表面活性剂。
[0047] 所述非离子性表面活性剂包括但不限于失水山梨糖醇醋(司盘)、单硬脂酸甘油 醋、十六烧醇、十八十六醇、十八烧醇中的至少一种。
[0048] 所述阴离子表面活性剂包括但不限于憐脂及其衍生物、甘油醋、脂肪酸醋、脂肪醇 和其它胆汁酸(如胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛横胆酸、甘氨脱氧胆酸)中的至少一种。
[0049] 所述阴离子表面活性剂优选憐脂及其衍生物,所述憐脂及其衍生物包括但不限于 憐脂酷胆碱(卵憐脂)、憐脂酷乙醇胺(脑憐脂)、憐脂酷丝氨酸、憐脂酷肌醇、憐脂酷甘油、双 憐脂酷甘油(屯、憐脂)、甘油憐脂酸、溶血憐脂、大豆憐脂、二栋桐酷-憐脂酷胆碱、二油酷憐 脂酷-乙醇胺、二油酷憐脂酷胆碱和二肉豆違酷-憐脂酷甘油,及其混合物。所述憐脂可W是 盐化的或非盐化的、氨化的或部分氨化的、天然的、半合成的或全合成的。所述憐脂及其衍 生物优选憐脂酷胆碱、大豆憐脂、憐脂酷甘油,更优选大豆憐脂。
[0050] 所述表面活性剂(或稳定剂)在油基质中的质量百分比浓度一般在0.05-10%,优 选为0.25-8 %,更优选0.5-5 %。
[0051] 外油相的使用量,通常为内油相的约50倍体积W上,优选为约70倍体积W上,且特 别优选为约100倍体积W上。
[0052] 所述形成均匀的乳液的方法与众所周知的乳化方法相同,采用产生高剪切力的装 置(如磁力揽拌器、机械揽拌器、高速均质机、超声仪、膜乳化器、转子-定子混合器、静态混 合器、高压均质机等)将内油相与外油相混合,W形成均匀乳液。
[0053] 所述步骤4)中除去有机溶剂可W应用下述方法:
[0054] (1)通过加热、减压(或联合加热)除去有机溶剂;
[0055] (2)气流鼓吹液体表面,并控制液相与气相的接触面积、乳液揽拌和循环的速率 (如肝-A-9-221418)加速有机溶剂的挥发,所述气流优选干燥的氮气;
[0056] (3)用空屯、纤维薄膜快速除去有机溶剂(如W00183594),空屯、纤维薄膜优选娃橡胶 全蒸发薄膜,特别是由聚二甲基硅氧烷制备的全蒸发薄膜。
[0057] 所述步骤4)中所获得的微粒通过离屯、、过筛或过滤的方式予W分离。
[0058] 所述步骤4)中洗涂微粒所用的超纯水溫度为低溫,所述低溫可W理解为12°C或W 下,优选9°C或W下,更优选6°C或W下。
[0059] 所述步骤4)中洗涂所用的超纯水中还可含有无机盐(如锋盐),W减少洗涂过程中 水溶性活性物质溶渗至水相,提高药物包封率,其机理为提高外相的渗透压或降低活性物 质在外相中的溶解度。对于多肤、蛋白、核酸、抗体、抗原、抗生素等活性物质,含锋离子的化 合物是比较理想的选择,包括且不限于醋酸锋、氯化锋、硫酸锋、硫酸氨锋、硝酸锋、葡萄糖 酸锋、碳酸锋或它们的任意混合物。超纯水中无机盐的质量浓度为0-3 %,优选0.01-1.5 %, 更优选0.01-1 %。
[0060] 优选地,所述步骤1)通过W下步骤实施:
[0061] 11)将可生物降解和生物相容的水难溶性聚合物与水溶性药物完全溶解于有机溶 剂A中,形成药物和聚合物的混合溶液;
[0062] 12)将所述混合溶液注入有机溶剂B中或将有机溶液B注入所述混合溶液中,产生 均匀、细微的沉淀物,收集沉淀物,并用有机溶剂B洗涂数次,去除有机溶剂B,获得水溶性药 物和水难溶性聚合物的固体分散体;其中,有机溶剂B不能溶解所述水难溶性聚合物和所述 水溶性药物。
[0063] 所述有机溶剂A,能同时溶解水溶性药物和可生物降解、生物相容的水难溶性聚合 物。所述有机溶剂A可为单一的有机溶剂,也可W为混溶的两种及W上的有机溶剂。所述有 机溶剂A选自冰醋酸、乙腊、Ξ氣乙酸、二甲基亚讽中的至少一种,优选冰醋酸和/或乙腊,更 优选冰醋酸。所述混合物中有机溶剂的种类和比例根据不同药物和聚合物有所不同,可根 据实际情况调配。
[0064] 所述有机溶剂B,同时不能溶解水溶性药物和可生物降解、生物相容的水难溶性聚 合物。所述有机溶剂B可为单一的有机溶剂,也可W为可W混溶的两种及W上的有机溶剂。 所述有机溶剂B选自无水乙酸、己烧(包括环己烧、正己烧)、正庚烧中的至少一种,优选无水 乙酸和己烧(包括环己烧、正己烧)中的至少一种,更优选无水乙酸。所述混合物中有机溶剂 的种类和比例根据不同药物和聚合物有所不同,可根据实际情况调配。
[0065] 所述有机溶剂A控制为常溫W下或低溫,所述常溫通常可W理解为20°C,优选10- 15°C;所述低溫通常可W理解为10°CW下,优选为4-6°C或W下;所述有机溶剂B控制为低 溫,所述低溫通常可W理解为15°CW下,优选为10°C或W下,更优选为6°CW下;有机溶剂A 比有机溶剂B的溫度高0-10°C,优选3-8°C。
[0066] 所述固体分散体中,水溶性药物与可生物降解和生物相容的水不溶性聚合物的质 量比为1:1~1:99,优选2:3~3:97,更优选为7:13~1:19。
[0067] 所述水不溶性聚合物于有机溶剂A中的浓度依据聚合物的类型、重均分子量W及 有机溶剂的类型而变化。通常,其质量浓度(聚合物质量/有机溶剂A质量*100%)为1-18% (w/w),优选为2-15% (w/w),更优选为3-12% (w/w)。
[0068] 所述去除有机溶剂B的步骤在常溫W下或低溫下进行,所述常溫通常可W理解为 20-30°C,优选20-25°C;所述低溫通常可W理解为15°CW下,优选为10°C及W下。去除有机 溶剂的方法包括但不限于真空干燥、冷冻干燥、流化干燥。
[0069] 进一步的,本发明的缓释微粒中可W包含一种或多种助剂。本发明的缓释微粒的 制备方法还包括加入助剂的步骤,助剂在所述步骤1)制备固体分散体的过程中加入,或在 所述步骤2)制备固体分散体乳液时加入;优选在所述步骤2)制备固体分散体乳液时加入。 所述助剂溶解或混悬于内油相中。所述助剂加入时可为极细微的粉末,其粒径小于0.5WI1, 优选为粒径小于0. Ιμπι,更优选粒径小于0.05WI1。
[0070] 所述助剂可W赋予活性药物或微粒其它的特征,例如增加微粒、活性药物或聚合 物的稳定性、促进活性药物从微粒中的可控释放或调节活性药物的生物学组织渗透性。所 述助剂为所述水溶性药物与水难溶性聚合物的质量之和的0.01-10%,优选0.1-8%,更优 选 0.5-8%。
[0071] 所述助剂包括但不限于糖类、氨基酸、脂肪酸、醇类、抗氧化剂、缓冲剂中的至少一 种。
[0072] 所述缓冲剂包括但不限于无机酸或有机酸的盐,如碳酸、乙酸、草酸、巧樣酸、憐 酸、盐酸的盐。具体的,包括但不限于碳酸巧、氨氧化巧、肉豆遽酸巧、油酸巧、栋桐酸巧、硬 脂酸巧、憐酸巧、醋酸巧、醋酸儀、碳酸儀、氨氧化儀、憐酸儀、肉豆違酸儀、油酸儀、栋桐酸 儀、硬脂酸儀、碳酸锋、氨氧化锋、氧化锋、肉豆遽酸锋、油酸锋、醋酸锋、氯化锋、硫酸锋、硫 酸氨锋、硝酸锋、葡萄糖酸锋、栋桐酸锋、硬脂酸锋、憐酸锋、碳酸钢、碳酸氨钢、亚硫酸氨钢、 硫代硫酸钢、醋酸-醋酸钢缓冲盐,及它们的任意组合。优选无机酸或有机酸的锋盐,更优选 氯化锋。所述缓冲剂为所述水溶性药物与所述水难溶性聚合物的质量之和的0-5%,优选 0.01-3%,更优选 0.01-2%。
[0073] 所述抗氧化剂包括但不限于叔下基对径基茵香酸、二下基苯酪、生育酪、肉豆遽酸 异丙醋、d-a乙酸生育酪、抗坏血酸、栋桐酸抗坏血酸醋、下基化径基苯甲酸、下基化径基酿、 径基香豆素、下基化径基甲苯、捂酸脂肪酸醋(如乙醋、丙醋、辛醋、月桂醋)、丙径基苯甲酸 醋、Ξ径基苯下酬、维生素 E、维生素 E-TPGS、P-径基苯甲酸醋(如甲醋、乙醋、丙醋、下醋)中 的至少一种。抗氧化剂可w有效地去除缓释微粒中的自由基或过氧化物。所述抗氧化剂为 所述水溶性药物与所述水难溶性聚合物的质量之和的0-1%,优选0-0.5%,更优选0- 0.1%。
[0074] 所述糖类包括但不限于单糖、寡糖和多糖,W及它们的衍生物。具体的,包括但不 限于海藻糖、葡萄糖、薦糖、甘油、赤薛醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇、甘露糖醇、葡萄糖醒酸、 艾杜糖醒酸、神经氨糖酸、半乳糖醒酸、葡萄糖酬酸、甘露糖醒酸、透明质酸及其盐、硫酸软 骨素及其盐、肝素、菊粉、几下质及其衍生物、糊精、葡聚糖和海藻酸及其盐中的至少一种。 优选薦糖、甘露糖醇、木糖醇,或它们的任意组合。所述糖类为所述水溶性药物与所述水难 溶性聚合物的质量之和的0.01 -10%,优选0.1 -8%,更优选0.5-6%。
[0075] 所述氨基酸包括但不限于甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸、色 氨酸、赖氨酸、径赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脫氨酸、半脫氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、 异亮氨酸W及它们的衍生物中的至少一种;优选碱性氨基酸,包括但不限于精氨酸、组氨 酸、赖氨酸中的至少一种。所述氨基酸为所述水溶性药物与所述水难溶性聚合物的质量之 和的0-4%,优选0-2%,更优选0.01-1 %。
[0076] 所述脂肪酸包括12~24烧酸及其衍生物,包括但不限于油酸、硬脂酸、月桂酸、肉 豆違酸、栋桐酸、花生酸、山俞酸、木质素酸,优选硬脂酸、山俞酸、栋桐酸中的至少一种。所 述脂肪酸为所述水溶性药物与所述水难溶性聚合物的质量之和的0-5%,优选0.01-4%,更 优选 0.05-3 %。
[0077] 所述醇类包括但不限于聚乙二醇。所述聚乙二醇的分子量为400-6000化,优选为 400-4000Da,更优选为400-2000化。所述醇类为所述水溶性药物与所述水难溶性聚合物的 质量之和的0-5%,优选0.01-4%,更优选0.05-3%。
[0078] 注射用的制剂要求无菌,具体的灭菌方法属于本领域技术人员的一般知识和技 术,如采用无菌操作、热压、环氧乙烧或者伽马射线保证制剂无菌。本发明制备缓释微粒优 选无菌操作,如用醋酸纤维素膜过滤外相水溶液、用聚酸讽膜过滤化GA的乙酸溶液、用聚四 氣乙締膜过滤二氯甲烧,且全部设备是容易密闭的并配备有机溶剂回收装置,W防止细菌 的污染W及有机溶剂扩散到空气中。
[0079] 另一方面,本发明还提供了根据所述的缓释微粒的制备方法制得的缓释微粒。
[0080] 因为微粒用于注射给药时,粒径太大容易导致堵针,必须用更大号的注射针头,患 者的疼痛感更强,而粒径太小将导致共聚物无法很好的包裹药物,达不到良好的缓释效果。 本发明制备的缓释微粒优选具有小于200WI1的平均几何颗粒大小。所述缓释微粒的粒径为 10-200μπι,优选10-150μπι,更优选20-150μπι。缓释微粒粒径大小通过动态光散射方法(例如 激光衍射法)、或显微技术(如扫描电镜法)来测量。
[0081] 本发明的缓释微粒可W包封大量的活性成分,剂量可依据活性成分的类型与含 量、剂型、释放持续时间、给药受试者、给药途径、给药目的、祀标疾病及症状等而适当地选 择。然而,只要活性成分可于活体内维持在药物有效浓度达预期的持续时间,则该剂量可认 为是令人满意的。
[0082] 本发明的缓释微粒中,所述水溶性药物的质量含量百分比大约为1-40%,优选3- 35%,更优选 5-30 %。
[0083 ]在本文中当陈述范围时,意味着包含了其中的任何范围或范围的组合。
[0084] 又一方面,本发明还提供了一种混悬液制剂,其包括所述的缓释微粒和分散介质。
[0085] 当微粒W混悬剂形式给药时,其可与适当的分散介质制成混悬液制剂。
[0086] 所述分散介质包括非离子表面活性剂、聚氧乙締藍麻油衍生物、纤维素增稠剂、海 藻酸钢、透明质酸、糊精、淀粉中的至少一种。或可选择的,还可W与其他组分如等渗剂(如 氯化钢、甘露醇、甘油、山梨醇、乳糖、木糖醇、麦芽糖、半乳糖、薦糖、葡萄糖等)、pH调节剂 (例如碳酸、醋酸、草酸、巧樣酸、憐酸、盐酸或运些酸的盐,例如碳酸钢、碳酸氨钢等)、防腐 剂(例如对径基苯甲酸醋、对径基苯甲酸丙醋、苯甲醇、氯代下醇、山梨酸、棚酸等)等结合制 成水性溶液,或者后续通过冷冻干燥、减压干燥、喷雾干燥等方法固化,使用前再将固化物 溶解于注射用水中获得分散微粒的分散介质。
[0087] 此外,缓释注射剂也可通过下述方法获得:将缓释微粒分散于植物油(诸如芝麻油 及玉米油)或添加有憐脂(诸如卵憐脂)的植物油中,或者分散于中链甘油Ξ醋中,W获得油 性混悬液。
[0088] 又一方面,本发明还提供了所述的固体分散体、缓释微粒在植入式缓释药物组合 物中的应用。
[0089] 本发明制备的水溶性药物缓释药物组合物,特别是蛋白、核酸W及肤类药物的缓 释药物组合物还可W为棒状物、片状物,进一步地,本发明还提供了一种植入式缓释药物组 合物的制备方法,包括W下步骤:
[0090] ①制备水溶性药物与可生物降解和生物相容的水难溶性聚合物的固体分散体;
[0091] ②将步骤①中制得的固体分散体加热后采用成型方法成型,冷却即制得植入式緩 释药物组合物。
[0092] 成型方法在此不作限制,专业技术人员所熟知的成型方法皆可使用,如模压成型、 挤出成型,緩释组合物可成型为棒状、片状。
[0093] 本发明的制备水溶性药物,特别是蛋白、肤类药物和核酸的缓释药物组合物为棒 状、片状的植入剂。
[0094] 进一步地,一种植入式缓释药物组合物的制备方法,包括W下步骤:
[0095] ①'根据所述的缓释微粒的制备方法制得缓释微粒;
[0096] ②'将步骤①'制得的缓释微粒通过专业技术人员所熟知的成型方法制得植入式 緩释药物组合物。緩释药物组合物可成型为棒状、片状。
[0097] 本发明获得的缓释微粒可用于颗粒剂形式、悬浮剂形式、埋植形式的制剂、注射剂 形式、粘附制剂形式等等,并可W 口服或非胃肠道给药(肌内注射、皮下注射、经皮给药、粘 膜给药(颊内、阴道内、直肠内等))。
[0098] 本发明的植入剂W可生物降解、生物相容性材料为基质,外观呈细棒状、圆棒状或 片状(圆盘状),可通过注射或手术方式植入到体内,药物释放完全后无需手术取出。该植入 剂的优点是容易获得高包封率和载药率,突释率低,并能够W稳定的速度持续释放治疗所 需剂量的活性药物达一个月至数月之久,大大降低医疗成本,提高病患的顺应性。
[0099] 本发明的有益效果为:本发明中,缓释微粒的制备全程常溫或低溫,对于高溫敏感 的药物,特别是蛋白、核酸及肤类药物制备聚合物基质的组合物非常有利,相比已公开的技 术,能够最大程度上在整个工艺过程中保持活性物质的生物活性;同时,所制备的缓释微粒 具有接近零级的优异缓释效果,药物浓度在释放期间稳定,解决了传统的要预先制备药物 微小颗粒的s/o/w工艺得到的微粒前期没有药物释放,而后期药物释快速释放的缺点;再 者,缓释微粒具有较高的载药率和药物包封率。
[0100] 本发明的缓释微粒在给药后,蛋白、肤、核酸、生物碱等活性物质能够在体内持续 输送一段时间,释放周期长达几周或几个月。
【附图说明】
[0101] 图1为实施例6的戈舍瑞林微粒、实施例7的亮丙瑞林微粒、实施例8的曲普瑞林微 粒和实施例12的布舍瑞林微粒给药的大鼠的血清睾酬浓度-时间曲线图。
【具体实施方式】
[0102] 为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点,下面将结合具体实施例对本发明 作进一步说明。W下实施例中的"微粒"也即"缓释微粒";"缓释植入剂"也即植入式缓释药 物组合物。
[0…引实施例1膜高血糖素/PLA微粒的制备 [0104] (I)固体分散体的制备
[01化]将0.99g PLA(分子量25kDa,端醋基)溶于约5.50mL冰乙酸中,然后加入0.0 lg醋酸 膜高血糖素、0.05g木糖醇和0.05g氨氧化锋,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙酸 (8Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0106] (II)微粒的制备
[0107] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约5.50g二氯甲烧中获得内油相,接着将内 油相注入200mL已预先恒溫至约10°C的0.05%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并使用润轮式 均匀混合器乳化制备S/0/0乳液(润转速度约7000rpm,5min)。将S/0/0乳液转移至密封玻璃 烧瓶中继续机械揽拌约3小时(500巧m)固化微粒,然后使用离屯、机通过离屯、(约2500巧m, 5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后 离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得微粒中膜高血糖素的含量为 0.93%,微粒粒径为42-100皿。
[0…引实施例2齐考诺肤/PLGA微粒的制备
[0109] (I)固体分散体的制备
[0110] 将0.97g PLGA(分子量25邸曰,单体比例90/10,端醋基)溶于约5.39mL乙腊中,然后 加入0.0:3g醋酸齐考诺肤、0.05g木糖醇和0.0:3g氯化锋,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下 的环己烧(6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用环己烧萃取约5次,将沉淀物收集 后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC),得固体分散体。
[0111] (II)微粒的制备
[0112] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约5.39g氯仿中获得内油相,接着将内油相 注入290mL已预先恒溫至约8°C的0.1%(w/w)卵憐脂/液体石蜡溶液中,并使用高速均质机 制备5/0/0乳液(转子速度约5000'9111,5111111)。将5/0/0乳液继续机械揽拌约3.5小时 (500rpm)固化微粒,然后使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用正己烧将微 粒洗涂约5次后,再次分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻 干燥,获得微粒。测得所得微粒中齐考诺肤的含量为2.81%,微粒粒径为19-91μι。
[01。] 实施例3替可克肤/PLGA微粒的制备
[0114] (I)固体分散体的制备
[0115] 将0.95g化GA(分子量30kDa,单体比例85/15,端簇基)溶于约6.33mL冰乙酸和乙 腊的混合液中,然后加入0.05g醋酸替可克肤,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的正己烧 (6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用正己烧萃取约5次,将沉淀物收集后于真空 干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0116] (II)微粒的制备
[0117] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约6.3:3g四氯乙締中获得内油相,接着将内 油相注入480mL已预先恒溫至约6°C的0.25%(w/w)卵憐脂/玉米油溶液中,并使用SPG膜乳 化器制备5/0/0乳液(膜孔径20-504111,循环3次)。将5/0/0乳液继续机械揽拌约3.5小时 (500rpm)固化微粒,然后使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用环己烧将微 粒洗涂约5次后,再次分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻 干燥,获得微粒。测得所得微粒中替可克肤的含量为4.57%,微粒粒径为39-80WI1。
[011引实施例4生长抑素/PLGA微粒的制备
[0119] (I)固体分散体的制备
[0120] 将0.90g PLGA(分子量35kDa,单体比例75/25,端簇基)溶于约7.50mLS氣乙酸中, 然后加入0.10g醋酸生长抑素,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的正庚烧(6°C)中,产生白 色沉淀物,收集白色沉淀物并用正庚烧萃取约5次,将沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥 24h(l(TC),得固体分散体。
[0121] (II)微粒的制备
[0122] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约7.50g二氯甲烧与氯仿的混合液中获得 内油相,接着将内油相注入450mL已预先恒溫至约5°C的0.5%(w/w)卵憐脂/大豆油溶液中, 并使用静态混合器制备S/0/0乳液(转速5000巧m,循环3次)。将S/0/0乳液转移至密封玻璃 烧瓶中继续机械揽拌约3.5小时(500巧m)固化微粒,然后使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm, 5min)收集微粒。用正庚烧和正己烧的混合液将微粒洗涂约5次后,再次分散于超纯水巧°C) 中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得微粒中生长抑素 的含量为9.35%,微粒粒径为39-8化111。
[012引实施例5特利加压素 /PLGA微粒的制备 [0124] (I)固体分散体的制备
[01巧]将0.85g化GA(分子量40邸曰,单体比例65/35,端簇基)溶于约8.50mL二甲基亚讽 中,然后加入〇.15g醋酸特利加压素,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙酸(6°C) 中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于真空干 燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0126] (II)微粒的制备
[0127] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约8.50g^氯代苯中获得内油相,接着将内 油相注入580mL已预先恒溫至约5°C的0.75%(w/w)卵憐脂/藍麻油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(120化pm,3min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约3.5小时巧OOrpm)固化微粒, 然后使用离屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用石油酸将微粒洗涂约5次后,再次 分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得 所得微粒中特利加压素的含量为14.20%,微粒粒径为20-83皿。
[012引实施例6戈舍瑞林/PLGA微粒的制备
[0129] (I)固体分散体的制备
[0130] 将0.9625g PLGA(分子量35kDa,单体比例75/25,端簇基)溶于约6.42血冰乙酸中, 然后加入0. 〇375g醋酸戈舍瑞林和0.0?木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水 乙酸(6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后 于真空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0131] (II)微粒的制备
[0132] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约6.4?二氯甲烧中获得内油相,接着将内 油相注入440mL已预先恒溫至约6°C的l%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌制 备S/0/0乳液(100化pm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约3.5小时巧OOrpm)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用无水乙酸将微粒洗涂约5次后,再次 分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得 所得微粒中戈舍瑞林的含量为3.48%,微粒粒径为27-123^11。
[0。;3] 实施例7亮丙瑞林/PLGA微粒的制备
[0134] (I)固体分散体的制备
[0135] 将0.925g化GA(分子量40kDa,单体比例65/35,端簇基)溶于约7.71mL冰乙酸中, 然后加入0. 〇75g醋酸亮丙瑞林和0.06g木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙 酸(6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于 真空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0136] (II)微粒的制备
[0137] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约7.71g二氯甲烧中获得内油相,接着将内 油相注入470mL已预先恒溫至约rC的1.25%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(1000巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(500rpm)固化微粒使 用离,然后屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次 分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得 所得微粒中亮丙瑞林的含量为7.10%,微粒粒径为21-80μπι。
[0。引实施例S曲普瑞林/PLGA微粒的制备
[0139] (I)固体分散体的制备
[0140] 将0.85g PLGA(分子量45kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约8.50mL冰乙酸中,然 后加入0.15g醋酸曲普瑞林和0.0:3g木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙酸 (6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0141] (II)微粒的制备
[0142] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约8.50g二氯甲烧中获得内油相,接着将内 油相注入640mL已预先恒溫至约8°C的1.5%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(130化pm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时巧00巧m)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分 散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所 得微粒中曲普瑞林的含量为13.57%,微粒粒径为23-79μπι。
[014引实施例9亮丙瑞林/PLGA微粒的制备
[0144] (I)固体分散体的制备
[0145] 将0.80g化GA(分子量50kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约10.0 OmL冰乙酸中, 然后加入0.20g醋酸亮丙瑞林,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙酸(6°C)中,产生 白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于真空干燥箱中干 燥24h(l(TC),得固体分散体。
[0146] (II)微粒的制备
[0147] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约10.OOg二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入900mL已预先恒溫至约10°C的2%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(120化pm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(eOOrpm)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约4000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分 散于超纯水(5Γ)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所 得微粒中亮丙瑞林的含量为19.11%,微粒粒径为36-112μπι。
[014引实施例10安替肤/PLGA微粒的制备
[0149] (I)固体分散体的制备
[0150] 将0.82g化GA(分子量55kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约11.71mL冰乙酸中, 然后加入0.1?醋酸安替肤和0.0?木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙酸 (6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0151] (II)微粒的制备
[0152] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约11.71g二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入700mL已预先恒溫至约10°C的2%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 审恪S/0/0乳液(900巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(400巧m)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约4000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分 散于超纯水(5Γ)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所 得微粒中安替肤的含量为17.30 %,微粒粒径为20-94μπι。
[015引实施例。那法瑞林/PLGA微粒的制备
[0154] (I)固体分散体的制备
[0155] 将0.80g化GA(分子量65kDa,单体比例65/35,端簇基)溶于约13.33mL冰乙酸中, 然后加入0.20g醋酸那法瑞林、0.05g薦糖和0.0 lg硬脂酸,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌 下的无水乙酸(6°C)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀 物收集后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC),得固体分散体。
[0156] (II)微粒的制备
[0157] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约13.33g二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入900mL已预先恒溫至约10°C的3%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(1300巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(400rpm)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分 散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所 得微粒中那法瑞林的含量为18.95 %,微粒粒径为27-10Ιμπι。
[015引实施例12布舍瑞林/PLGA微粒的制备
[0159] (I)固体分散体的制备
[0160] 将0.75g化GA(分子量75kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约15.00mL冰乙酸中, 然后加入0.25g醋酸布舍瑞林和0.0?甘露醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙 酸(6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于 真空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0161] (II)微粒的制备
[0162] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约15.OOg二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入1.1L已预先恒溫至约13°C的4%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(1400巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(400rpm)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分 散于超纯水(5Γ)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所 得微粒中那法瑞林的含量为23.56%,微粒粒径为26-11 Ιμπι。
[016;3] 实施例13阿拉瑞林/PLGA微粒的制备 [0164] (I)固体分散体的制备
[01化]将0.70g化GA(分子量90kDa,单体比例65/35,端簇基)溶于约17.50mL冰乙酸中, 然后加入0.30g醋酸阿拉瑞林、0.05g甘露醇和0.03评EG-400,满旋下溶解,然后慢慢注入揽 拌下的无水乙酸(6°C)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉 淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC),得固体分散体。
[0166] (II)微粒的制备
[0167] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约17.50g二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入1.化已预先恒溫至约l〇°C的5% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(1500巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(400rpm)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分 散于超纯水(5Γ)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所 得微粒中阿拉瑞林的含量为27.00 %,微粒粒径为19-116μπι。
[016引实施例14奥曲肤/PLGA微粒的制备
[0169] (I)固体分散体的制备
[0170] 将0.65g PLGA(分子量llOkDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约21.67mL冰乙酸中, 然后加入〇.35g醋酸奥曲肤和O.Olg木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙酸 (6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于真 空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0171] (II)微粒的制备
[0172] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约21.67g二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入1.化已预先恒溫至约8°C的6% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌制 备S/0/0乳液(18(Κ)巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约5小时(700巧m)固化微粒,然后 使用离屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分散 于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得 微粒中奥曲肤的含量为32.71 %,微粒粒径为17-89WI1。
[017;3] 实施例15布雷默浪丹/PLGA微粒的制备 [0174] (I)固体分散体的制备
[01巧]将0.60g PLGA(分子量130kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约30.00血冰乙酸中, 然后加入0.40g醋酸布雷默浪丹和0.005g木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水 乙酸(6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后 于真空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0176] (II)微粒的制备
[0177] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约30.OOg二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入化已预先恒溫至约8°C的8% (w/w)卵憐脂/甘油溶液中,并通过机械揽拌制备S/ 0/0乳液(200化pm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约5小时(700rpm)固化微粒,然后使用 离屯、机通过离屯、(约3000rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分散于超 纯水(5Γ)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得微粒 中布雷默浪丹的含量为36.52%,微粒粒径为22-85WI1。
[017引实施例16海沙瑞林/PLGA微粒的制备
[0179] (I)固体分散体的制备
[0180] 将0.50g PLGA(分子量150kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约50.00mL冰乙酸中, 然后加入0.50g醋酸海沙瑞林和0.0 Olg木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙 酸(6Γ)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于 真空干燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0181] (II)微粒的制备
[0182] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约50.OOg二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入2.化已预先恒溫至约8°C的10% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并使用润轮式均 匀混合器乳化制备S/0/0乳液(润转速度约7000巧m,5min)。将S/0/0乳液转移至密封玻璃烧 瓶中继续机械揽拌约5小时(800巧m)固化微粒,然后使用离屯、机通过离屯、(约4000巧m, 5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后 离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得微粒中海沙瑞林的含量为44.00 %, 微粒粒径为26-9祉m。
[018引实施例17 Exendin-4衍生物/PLGA微粒的制备
[0184] (I)固体分散体的制备
[0185] 固体分散体含有W下质量百分含量的成分:水溶性药物:Exendin-4衍生物20%、 水难溶性聚合物:PLGA79.5 %、助剂:木糖醇0.5 % ;其中所述PLGA的分子量为50kDa,其中丙 交醋和乙交醋的比例为50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[01化](1)制备Exendin-4衍生物:制备lOkDa PEG-NHS醋,然后在PBS缓冲液中与 Exendin-4中28位的天冬酷胺反应,通过离子交换、凝胶色谱分离纯化,浓缩并冷冻干燥获 得Exendin-4衍生物。
[0187] (2)将水难溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中,然后再加入水溶性药物和助剂至完 全溶解;其中水难溶性聚合物为冰乙酸的质量的6.5%;然后注入无水乙酸(6°C)使得产生 白色沉淀物,收集沉淀物,并用无水乙酸萃取5次,将沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C),得固体分散体。
[018引(II)微粒的制备
[0189] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约12倍的二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入1L已预先恒溫至约5°C的2% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌制备 S/0/0乳液(140化pm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(600巧m)固化微粒,然后使 用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分散于 超纯水(5Γ)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得微 粒中虹611山11-4衍生物的含量为18.40%,微粒粒径为27-109皿。
[0190] 实施例18 Exendin-4衍生物/PLGA微粒的制备
[0191] (I)固体分散体的制备
[0192] 固体分散体含有W下质量百分含量的成分:水溶性药物:Exendin-4衍生物15%、 水难溶性聚合物:PLGA84%、助剂:木糖醇1 % ;其中所述PLGA的分子量为50kDa,其中丙交醋 和乙交醋的比例为50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[0193] (1)制备Exendin-4衍生物:通过固相多肤合成方法制备Exendin-4中28位的天冬 酷胺替换为半脫氨酸的Exendin-4变体,然后在PBS缓冲液中与lOkDa Y型单甲氧基聚乙二 醇-马来酷亚胺反应,通过离子交换、凝胶色谱分离纯化,浓缩并冷冻干燥获得Exendin-4衍 生物。
[0194] (2)将水难溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中,然后再加入水溶性药物和助剂至完 全溶解;其中水难溶性聚合物为冰乙酸的质量的6.5%;然后注入无水乙酸(6°C)使得产生 白色沉淀物,收集沉淀物,并用无水乙酸萃取5次,将沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C),得固体分散体。
[0195] (II)微粒的制备
[0196] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约13倍的二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入970血已预先恒溫至约5°C的1.75% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽 拌制备S/0/0乳液(1400rpm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时巧OOrpm)固化微粒, 然后使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次 分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得 所得微粒中Exendin-4衍生物的含量为13.25%,微粒粒径为30-113皿。
[0197] 实施例19 Exendin-4衍生物/PLGA微粒的制备
[0198] (I)固体分散体的制备
[0199] 固体分散体含有W下质量百分含量的成分:水溶性药物:Exendin-4衍生物20%、 水难溶性聚合物:PLGA78 %、助剂:山梨醇2 % ;其中所述PLGA的分子量为55kDa,其中丙交醋 和乙交醋的比例为50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[0200] (1)制备Exendin-4衍生物:通过固相多肤合成方法制备Exendin-4中20位的精氨 酸替换为半脫氨酸的Exendin-4变体,然后在PBS缓冲液中与化化单甲氧基聚乙二醇-马来 酷亚胺反应,通过离子交换、凝胶色谱分离纯化,浓缩并冷冻干燥获得Exend in-4衍生物。
[0201] (2)将水难溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中,然后再加入水溶性药物和助剂至完 全溶解;其中水难溶性聚合物为冰乙酸的质量的6%;然后注入无水乙酸(6°C)使得产生白 色沉淀物,收集沉淀物,并用无水乙酸萃取5次,将沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C),得固体分散体。
[0202] (II)微粒的制备
[0203] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约14倍的二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入1L已预先恒溫至约5°C的1.5%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌制 备S/0/0乳液(14(Κ)巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时(500巧m)固化微粒,然后 使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分散 于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得 微粒中Exendin-4衍生物的含量为18.31 %,微粒粒径为32-126皿。
[0204] 实施例20阿拉瑞林衍生物/PLGA微粒的制备
[0205] (I)固体分散体的制备
[0206] 固体分散体含有W下质量百分含量的成分:水溶性药物:阿拉瑞林衍生物16%、水 难溶性聚合物:PLGA81 %、助剂:木糖醇3 % ;其中所述PLGA的分子量为45kDa,其中丙交醋和 乙交醋的比例为50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[0207] (1)制备阿拉瑞林衍生物:通过固相多肤合成方法制备阿拉瑞林中4位的丝氨酸替 换为半脫氨酸的阿拉瑞林变体,然后在PBS缓冲液中与20kDa单甲氧基聚乙二醇-马来酷亚 胺反应,通过离子交换、凝胶色谱分离纯化,浓缩并冷冻干燥获得阿拉瑞林衍生物。
[0208] (2)将水难溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中,然后再加入水溶性药物和助剂至完 全溶解;其中水难溶性聚合物为冰乙酸的质量的7%;然后注入无水乙酸(6°C)使得产生白 色沉淀物,收集沉淀物,并用无水乙酸萃取5次,将沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C),得固体分散体。
[0209] (II)微粒的制备
[0210] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约11倍的二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入970血已预先恒溫至约5°C的1.25% (w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽 拌制备S/0/0乳液(13(K)rpm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时巧OOrpm)固化微粒, 然后使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次 分散于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得 所得微粒中阿拉瑞林衍生物的含量为13.74 %,微粒粒径为32-12祉m。
[0211] 实施例21胸腺五肤衍生物/PLGA微粒的制备
[0212] 固体分散体含有W下质量百分含量的成分:水溶性药物:胸腺五肤衍生物12%、水 难溶性聚合物:PLGA84%、助剂:木糖醇4% ;其中所述PLGA的分子量为40kDa,其中丙交醋和 乙交醋的比例为50/50,且所述PLGA具有端簇基。
[0213] (1)制备胸腺五肤衍生物:制备lOkDa PEG-N服醋,然后在PBS缓冲液中与胸腺五肤 中2位的赖氨酸反应,通过离子交换、凝胶色谱分离纯化,浓缩并冷冻干燥获得胸腺五肤衍 生物。
[0214] (2)将水难溶性聚合物完全溶解于冰乙酸中,然后再加入水溶性药物和助剂至完 全溶解;其中水难溶性聚合物为冰乙酸的质量的6.5%;然后注入无水乙酸(6°C)使得产生 白色沉淀物,收集沉淀物,并用无水乙酸萃取5次,将沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h (10°C),得固体分散体。
[0215] (II)微粒的制备
[0216] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约10倍的二氯甲烧中获得内油相,接着将 内油相注入970mL已预先恒溫至约5°C的l%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌 制备S/0/0乳液(140化pm,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约4小时巧OOrpm)固化微粒,然 后使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用正庚烧将微粒洗涂约5次后,再次分 散于超纯水(5Γ)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所 得微粒中胸腺五肤衍生物的含量为10.68%,微粒粒径为35-132WI1。
[0217] 实施例22 Mipomersen/PLGA微粒的制备
[0218] (I)固体分散体的制备
[0219] 将〇.80g化GA(分子量30kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约6.53mL冰乙酸和乙 腊的混合液中,然后加入0.20g Mipomersen sodium和O.Olg木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢 注入揽拌下的无水乙酸(6°C)中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用正己烧萃取约5次, 将沉淀物收集后于真空干燥箱中干燥24h(l(TC),得固体分散体。
[0220] (II)微粒的制备
[0221] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约6.5:3g四氯乙締中获得内油相,接着将内 油相注500mL已预先恒溫至约6°C的l%(w/w)卵憐脂/花生油溶液中,并通过机械揽拌制备 S/0/0乳液(10(Κ)巧m,5min)。将S/0/0乳液继续机械揽拌约3.5小时(500巧m)固化微粒,然后 使用离屯、机通过离屯、(约3500rpm,5min)收集微粒。用环己烧将微粒洗涂约5次后,再次分散 于超纯水(5°C)中洗涂约2次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得 微粒中Mipomersen的含量为18.10%,微粒粒径为32-109μπι。
[0。。 实施例23白介素 /PLGA微粒的制备
[0223] (I)固体分散体的制备
[0224] 将0.82g PLGA(分子量35kDa,单体比例50/50,端簇基)溶于约6.12mL冰乙酸中,然 后加入0.1?白介素和0.02g木糖醇,满旋下溶解,然后慢慢注入揽拌下的无水乙酸(6°C) 中,产生白色沉淀物,收集白色沉淀物并用无水乙酸萃取约5次,将沉淀物收集后于真空干 燥箱中干燥24h (1 (TC),得固体分散体。
[0225] (II)微粒的制备
[0226] 将步骤I所得的固体分散体分均匀散于约6.1?二氯甲烧与氯仿的混合液中获得 内油相,接着将内油相注入500mL已预先恒溫至约5°C的0.5%(w/w)卵憐脂/大豆油溶液中, 并通过机械揽拌制备S/0/0乳液(100化pm,5min)。将S/0/0乳液转移至密封玻璃烧瓶中继续 机械揽拌约4小时(500巧m)固化微粒,然后使用离屯、机通过离屯、(约3500巧m,5min)收集微 粒。用正庚烧和正己烧的混合液将微粒洗涂约5次后,再次分散于超纯水(5Γ)中洗涂约2 次,然后离屯、收集,W冷冻干燥机冷冻干燥,获得微粒。测得所得微粒中白介素的含量为 16.36%,微粒粒径为31-114皿。
[0。7] 实施例24亮丙瑞林/PLGA缓释植入剂的制备
[0228]将实施例9的步骤I制备的干燥的固体混合物进料到热烙挤出机中,热烙挤出成直 径约1mm的条状物,冷却后切割得到长度约为5mm的亮丙瑞林缓释植入剂。测得所得植入剂 中亮丙瑞林的含量为19.32%。
[0。9] 实施例25亮丙瑞林/PLGA缓释植入剂的制备
[0230]将实施例9的步骤II中所得微粒填入的模具(内腔为圆柱状,圆底直径为 1mm,深度约为10mm)中,升溫至约43 °C后,模压成型,得到柱状(lmm*4.98mm)亮丙瑞林缓释 植入剂。测得所得植入剂中亮丙瑞林的含量为19.05%。
[0231 ]上述实施例中微粒或植入剂的载药率和药物包封率分析方法为:取5mg微粒或植 入剂,溶于50mL乙腊(ACN)中,再加入0.1 %TFA 50化L,充分混合后,离屯、取上清液,用高效 液相色谱分析其中的药物浓度。微粒(或植入剂)中包封的药物质量与投药量的比值即为药 物的包封率,微粒(或植入剂)中包封的药物质量与微粒质量的比值即为药物的载药率。所 有的实验均重复3次W上。
[0232]上述实施例制备的微粒的粒径分析方法为:将约lOmg微粒分散在液体石蜡中,超 声约30s分散,使用Beckman Coulter的激光粒度分析仪进行测量。
[OZ3;3] 实施例26微粒及植入剂的突释和体外释放曲线的测定
[0234]将上述实施例制备的缓释微粒及植入剂进行突释和体外释放曲线的测定,测定方 法是:精密称取含药微粒或植入剂20mg置15mL离屯、管中,WpH为7.4的憐酸缓冲液(含 0.02%叠氮化钢作为抑菌剂)为释放介质,置于恒溫气浴摇床中,在振荡速度l(K)rpm、溫度 37°C±0.5°C条件下进行微粒或植入剂的体外释放度测定。分别在1天、2天、7天、14天、21 天、28天、40天、50天和60天取出全部释放介质并补充等量的新释放介质,高效液相色谱法 测定药物释放量,测定方法为:
[02巧]液相色谱仪:安捷伦1260;
[0236] 色谱条件:色谱柱:Phenomenex Gemini NX 加 C18 4.6X 150mm;
[0237] 流动相乙胺溶液-乙腊-丙醇;
[023引流速:lmL/min;
[0239] 检测波长:280nm。
[0240] 测试结果如表1所示。
[0241] 表1缓释微粒及植入剂体外释放累计释放度结果
[0242]
[0244]由表1的体外释放结果可W看出,采用本发明所述固体分散体制备得到的缓释微 粒及所制得的植入剂,没有突释现象或明显的迟释现象,整个释放趋势接近零级释放。其 中,有的样品体外释放周期长达40-50天,有的样品体外释放周期长达50-60天,有的样品体 外释放周期超过60天,具有优异的缓释效果。
[0245] 实施例27微粒通针性实验
[0246] 将约20mg微粒样品混悬于2mL稀释剂(3%簇甲基纤维素、0.9%化C1)中,然后吸入 注射器,分别通过24-30G的注射针头注入市售的化g重的猪后腿(肌肉)中。每次注射进行20 秒或W下,观察没有阻塞W及推针顺杨性,结果如表2所示。
[0247] 表2微粒通针性实验结果 [024引
[0249 ]注:++推针顺杨性很好,+推针顺杨性一般,-推针有阻滞感,--堵针。
[0250] 表2的通针性结果表明,本发明制备的不同粒径的微粒悬浮液均可W通过30号针 头吸入注射器内并将注射器中的内含物完全注射到猪肉中的能力,没有出现阻滞或堵针的 现象,说明本发明的微粒可W通过皮下或肌肉注射的方式进行给药。
[0251] 实施例28有机溶剂残留量测定试验
[0252] 本发明实施例1-23制备的固体分散体和缓释微粒中有机溶剂A、有机溶剂B、有机 溶剂C和有机溶剂D的残留量测定,测定方法为众所周知的测定方法。测定结果如表3所示。
[0253] 表3有机溶剂残留量测定结果
[ο 巧 4]
[02W]注:-表示没有检测到或含量低于检测限。
[0256]由表3的有机溶剂残留量结果可W看出,本发明制备的固体分散体和缓释微粒中, 有机溶剂的残留量很低,或者没有检测到,或残留量低于可检测范围,给药后对病人无因有 机溶剂产生的副作用,也有利于保持微粒的稳定性,延长货架期。
[0巧7] 实施例29动物试验
[0巧引选取健康雄性SD大鼠40只,体重250 ±20g,随机每组8只分成给药组(4组)和空白 组(1组),给药组大鼠分别皮下注射实施例6的戈舍瑞林微粒、实施例7的亮丙瑞林微粒、实 施例8的曲普瑞林微粒和实施例12的布舍瑞林微粒,微粒用含有3%簇甲基纤维素、0.9% 化C1的稀释剂混悬。给药组每只大鼠注射药物剂量为2(K)yg/kg,空白组皮下注射同体积的 生理盐水。在给药的第 0d、0.5d、ld、2d、3d、4d、5d、6d、7d、14d、21d、28d、35d、42d、49d、56d、 63d、70d的同一时间从尾静脉取血,采用放射免疫分析法测定血清中睾酬浓度,然后制作血 清睾酬浓度-时间的曲线图,结果如图1所示。
[0259]由图1曲线图可知,本发明的制备的实施例6的戈舍瑞林微粒、实施例7的亮丙瑞林 微粒、实施例8的曲普瑞林微粒和实施例12的布舍瑞林微粒在给药后的70天内能够很好地 控制血清睾酬浓度,且在给药后的第4-63天内的血清睾酬浓度小于5ng/mL,7-50天内的血 清睾酬浓度小于约4ng/mL,明显比空白组低,说明本发明的戈舍瑞林微粒、亮丙瑞林微粒、 曲普瑞林微粒和布舍瑞林微粒给药后能够长时间释放其中的活性药物,并达到理想的治疗 效果,能够降低给药频率,有利于提高病人的依从性。
[0260]最后所应当说明的是,W上实施例仅用W说明本发明的技术方案而非对本发明保 护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当 理解,可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质 和范围。
【主权项】
1. 一种缓释微粒的制备方法,其特征在于:包括以下步骤: 1) 制备水溶性药物与可生物降解和生物相容的水难溶性聚合物的固体分散体; 2) 将步骤1)制备的固体分散体溶于有机溶剂C中,形成固体分散体乳液,所述有机溶剂 C为不能溶解所述水溶性药物但可以溶解所述水难溶性聚合物、沸点低于水且不溶于或难 溶于水的有机溶剂; 3) 将步骤2)得到的固体分散体乳液注入含有表面活性剂的油溶液中形成均匀的乳液; 4) 通过溶剂挥发或溶剂提取使乳液中的微粒固化,收集微粒,用有机溶剂D洗涤数次, 再以超纯水洗涤数次,以除去附着于微粒表面的表面活性剂,然后进行干燥,获得所述缓释 微粒;其中,所述有机溶剂D不能溶解水溶性药物和水难溶性聚合物,其能与所述油溶液混 溶,同时对所述表面活性剂有良好的溶解性。2. 根据权利要求1所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述水溶性药物为蛋白、 核酸和具有不多于30个氨基酸残基的肽及其衍生物、类似物中的至少一种。3. 根据权利要求1所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述步骤1)通过以下步骤 实施: 11) 将可生物降解和生物相容的水难溶性聚合物与水溶性药物完全溶解于有机溶剂A 中,形成药物和聚合物的混合溶液; 12) 将所述混合溶液注入有机溶剂B中或将有机溶液B注入所述混合溶液中,产生均匀 的细微沉淀物,收集沉淀物,并用有机溶剂B洗涤数次,去除有机溶剂B,获得水溶性药物和 水难溶性聚合物的固体分散体;其中,有机溶剂B不能溶解所述水难溶性聚合物和所述水溶 性药物。4. 根据权利要求3所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述有机溶剂A选自冰醋 酸、乙腈、三氟乙酸、二甲基亚砜中的至少一种; 所述有机溶剂B选自无水乙醚、己烷、正庚烷中的至少一种。5. 根据权利要求1所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述固体分散体中,水溶 性药物与水难溶性聚合物的质量比为1:1~1:99。6. 根据权利要求1所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述有机溶剂C选自脂肪 烃、卤代烃、脂肪酸酯、芳香烃、醚中的至少一种; 所述有机溶剂D选自无水乙醚、环己烷、正己烷、正庚烷、石油醚中的至少一种。7. 根据权利要求1所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述步骤1)中的水难溶性 聚合物为聚丙交酯、聚乙交酯、丙交酯-乙交酯共聚物及它们与聚己内酯或聚乙二醇的共聚 物、聚己内酯及其与聚乙二醇的共聚物、聚羟基丁酸、聚羟基戊酸、聚对二氧环己酮、壳聚 糖、海藻酸及其盐、聚氰基丙烯酸酯、纤维蛋白、聚酸酐、聚原酸酯、聚酰胺、聚磷腈、聚磷酸 酯、以及它们的共聚物和/或混合物中的至少一种。8. 根据权利要求1所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述方法还包括加入助剂 的步骤,助剂在所述步骤1)制备固体分散体的过程中加入,或在所述步骤2)制备固体分散 体乳液时加入;所述助剂为所述水溶性药物与所述水难溶性聚合物的质量之和的0.01-10%〇9. 根据权利要求8所述的缓释微粒的制备方法,其特征在于:所述助剂为氨基酸、抗氧 化剂、缓冲剂、糖类、脂肪酸、醇类中的至少一种。10.根据权利要求1~9中任一项所述的缓释微粒的制备方法制得的缓释微粒。
【文档编号】A61K9/16GK105878190SQ201610268762
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月26日
【发明人】刘锋, 赖树挺, 郑阳, 曹付春, 连远发
【申请人】广州帝奇医药技术有限公司
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