野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：步骤一：以野芋为原料，采用溶剂提取法、溶剂萃取法、树脂吸附法、正相柱层析法中的一种或者多种工艺；步骤二：结合浓缩干燥、冷冻干燥，喷雾干燥等常用干燥方法制备成尖尾芋木脂素酰胺提取物；步骤三：将制成的提取物作为抗癌活性成分，使之与适宜的赋彤剂相结合；步骤四：按常规方法制成的口服给药的内用剂型及非口服给药的注射荆和外用剂型在癌症治疗中进行应用。本发明工艺简单实用，抗癌疗效好，并且无毒副作用，为野芋应用提供了广泛的途径。
【专利说明】
野芋抗癌环稀離瞄昔提取物的制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及一种提取物的制备方法，特别是设及一种野芋抗癌环締酸祗巧提取物 的制备方法。
【背景技术】
[0002] 野芋（Colocasia antiquorum Schott et Endl)为天南星科植物野芋，其叶为中 药，生于山涧阴湿处，或树旁沟边、河边。分布于广东、广西、四川等地。该植物能清热、解毒、 活血、消肿，治疗疮、痴肿、丹毒，跌打损伤，慢性气管炎、钩端螺旋体病等疾病[有毒中药药 性药理及临床研究应用实用手册，（1977年，上海人民出版社），pp.302-303]。迄今为止， 对海芋的研究很少，多见于一般药效学报道。有关野芋的抗癌药理活性很少报道，仅见侯学 文从中分离得到一个凝集素，其对肺腺癌细胞株P18仅有很少杀伤能力。癌症是当今社会发 病率高、死亡率高的一种顽疲，目前尚无治愈率较高的药物的报道。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种野芋抗癌环締酸祗巧提取物的制备方法， 其工艺简单实用，抗癌疗效好，并且无毒副作用，为野芋应用提供了广泛的途径。
[0004] 本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题的：一种野芋抗癌环締酸祗巧提 取物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤： 步骤一 野芋为原料，采用溶剂提取法、溶剂萃取法、树脂吸附法、正相柱层析法中的 一种或者多种工艺； 步骤二:结合浓缩干燥、冷冻干燥，喷雾干燥等常用干燥方法制备成尖尾芋木脂素酷胺 提取物； 步骤Ξ:将制成的提取物作为抗癌活性成分，使之与适宜的赋形剂相结合； 步骤四：按常规方法制成的口服给药的内用剂型及非口服给药的注射荆和外用剂型 在癌症治疗中进行应用。
[0005] 优选地，所述野芋是根茎或是枝叶的任一部位、果实的任一部位，野芋是新鲜采集 的或是经过炮制的。
[0006] 优选地，所述野芋环締酸祗巧提取物包括其中主要所含的各种类型的环締酸祗巧 类的化合物。
[0007] 优选地，所述溶剂提取法选用水、甲醇、乙醇、正下醇或者其他低级脂肪醇中的一 种溶媒，在室溫下漫润提取或者用超声波振荡仪超声振荡提取，或者在加热状态下漫润提 取或回流提取，提取次数是一次获是多次。
[000引优选地，所述溶剂萃取法将经水或者低级脂肪醇中的一种溶媒或者混合溶媒提取 并经所获得的提取物混悬于水中，经低极性溶媒脱脂。
[0009]优选地，所所述正相柱屡析法选用常压或加压硅胶柱层析或者氧化侣柱层析，正 相柱屡析法的所用柱填料可选柱层析用硅胶或氧化侣，或者薄层层析用硅胶或氧化侣，洗 脱选用苯：丙酬、二氯甲烧：丙酬、苯：甲醇、二氯甲烧：甲醇、Ξ氯甲烧：甲醇.乙酸乙醋：甲 醇，苯:丙酬:水、二氯甲烧:丙酬:水、Ξ氯甲烧:丙酬:水、二氯甲烧：甲醇：水、Ξ氯甲烧：甲 醇：水或者乙酸乙醋：甲醇：水等溶媒中的一种或者多种，正相柱屡析法的洗脱是等浓度洗 脱或梯度洗脱。
[0010]本发明的积极进步效果在于：本发明工艺简单实用，抗癌疗效好，并且无毒副作 用，为野芋应用提供了广泛的途径。本发明制备的野芋抗癌环締酸祗巧提取物具有很好的 抗肿瘤活性。
【具体实施方式】
[0011 ]下面结合给出本发明较佳实施例，W详细说明本发明的技术方案。
[0012] 本发明野芋抗癌环締酸祗巧提取物的制备方法，主要包括如下步骤： 步骤一 野芋为原料，采用溶剂提取法、溶剂萃取法、树脂吸附法、正相柱层析法等工 艺中的一种或者多种工艺； 步骤二:结合浓缩干燥、冷冻干燥，喷雾干燥等常用干燥方法制备成尖尾芋木脂素酷胺 提取物； 步骤Ξ:将制成的提取物作为抗癌活性成分，使之与适宜的赋形剂相结合； 步骤四：按常规方法制成的口服给药的内用剂型及非口服给药的注射荆和外用剂型 在癌症治疗中进行应用。
[0013] 所述抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法:植物原料野芋(Co 10caSia antiquorum Schott et Endl)可W是根茎，也可W是枝叶、果实等全草的任一部位，原辫可W是新鲜采 集的，也可W是经过炮制的。
[0014] 所述抗癌新药野芋提取物的制备方法:作为抗癌活性成分的野芋环締酸祗巧提取 物包括其中主要所含的各种类型的环締酸祗巧类的化合物。
[0015] 所述抗癌新药野芋环締酸祗巧提取物制备方法:所采用的溶剂提取法中，可选用 水、甲醇、乙醇、正下醇或者其他低级脂肪醇中的一种溶媒，在室溫下漫润提取或者用超声 波振荡仪超声振荡提取，或者在加热状态下漫润提取或回流提取，提取次数可W是一次，也 可W是多次。
[0016] 所述抗癌新药野芋环締酸祗巧提取物制备方法:所采用的溶剂萃取法中，可将经 水或者低级脂肪醇中的一种溶媒或者混合溶媒提取并经所获得的提取物混悬于水中，经低 极性溶媒(如石油酸、乙酸等中的一种或两种)脱脂。
[0017] 所述抗癌新药野芋提取物的制备方法:所采用的树脂吸附法中，树脂可选用AB-8 型吸附树脂，D-101型吸附树脂或者皿P-100型吸附树脂W及其他类型的吸附树脂，洗脱溶 媒用水、甲醇、乙醇、丙酬、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酬中的一种或多种，洗脱是可W 等浓度洗脱，也可W梯度洗脱。
[0018] 所述抗癌新药野芋环締酸祗巧提取物的制备方法:所采用的正相柱屡析法中，可 选用常压或加压硅胶柱层析或者氧化侣柱层析，所用柱填料可选柱层析用硅胶或氧化侣， 或者薄层层析用硅胶或氧化侣，洗脱可选用苯:丙酬、二氯甲烧:丙酬、苯：甲醇、二氯甲烧： 甲醇、Ξ氯甲烧：甲醇.乙酸乙醋：甲醇，苯：丙酬：水、二氯甲烧：丙酬：水、Ξ氯甲烧：丙酬： 水、二氯甲烧：甲醇：水、Ξ氯甲烧：甲醇：水或者乙酸乙醋：甲醇：水等溶媒中的一种或者多 种，洗脱是可w等浓度洗脱，也可w梯度洗脱。
[0019] 实施例1:溶剂提取法/溶剂萃取法提取制备海芋生物碱提取物 野芋化g用70%乙醇在90°C下回流，合并提取液，浓缩得到130g乙醇提取物。将乙醇提 取物混悬于水中，用石油酸萃取脱脂，脱脂后经浓缩干燥即可得到尖尾芋提取物，收率为 70% 实施例2:溶剂提取法/树脂吸附法合用提取制备尖尾芋提取物 野芋1.0 kg用70%乙醇在90°C下回流，合并提取液，浓缩得到130g乙醇提取物。乙醇提 取物上AB-8型吸附树脂柱，先用水、5%乙醇-水洗脱W除去色素和杂质，而后用60%乙醇- 水洗脱。其中60%乙醇-水洗脱部分减压浓缩除乙醇，再经冷冻干燥可得到尖尾芋提取物， 收率为30 %。
[0020] 实施例3:野芋提取物的体外抑瘤实验 3.1细胞株、试剂及仪器 人结肠癌肥T-8细胞株购自中科院细胞库;DMEM培养液，Gibco产品；胎牛血清，G化CO产 品；膜蛋白酶，G化CO产品；DMS0溶液，Sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco 3000培养箱， Thermo公司；Multishkan MK3 酶标仪，Thermo公司。
[0021] 3.2肿瘤细胞培养方法 人结肠癌肥T-8细胞株用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养，培养条件为37°C，5%C02 浓度及饱和湿度。当细胞生长至对数生长期时，用25%膜酶消化细胞，洗涂吹散细胞稀释至 106/ml，每孔10化L接种于96孔板，W备MTT实验。
[0022] 3.3细胞增殖实验(MTT法） 野芋环締酸祗巧提取物溶于DMS0溶液，取含1%〇DMSO的野芋提取物溶液，用含10%胎牛 血清的DMEM溶液配成浓度分别为100、50、20、化g/mL的野芋提取物溶液，每孔10化L接种于 96孔板，混匀，使野芋提取物每孔终浓度分别达到50、25、10、化肖/1^，放入培养箱继续培养 16、32、4她。每孔加入5mg/mLMTT溶液扣L，继续培养化，测定各孔吸光度。W不加任何处理的 培养细胞为空白对照，W单用培养细胞作为阴性对照。每个浓度梯度均设置12个平行组，分 别计算细胞抑制率。按照W下公式(1)计算抑制率： 抑制率=1-(实验组吸光度平均值/对照组吸光度平均值）X 100%……（1) 结果见表1: 表1野芋环締酸祗巧提取物对化la细胞体外增殖的抑制作用
t检验，*p<0.05，**p<0. ο 1，结果表明：不同浓度，不同培养时间的海芋生物碱提取物可 显著抑制人结肠癌HCT-8细胞的增殖，提示其可能有一定的抗癌效果。
[0023] W上所述的具体实施例，对本发明的解决的技术问题、技术方案和有益效果进行 了进一步详细说明，所应理解的是，W上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制 本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本 发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤： 步骤一：以野芋为原料，采用溶剂提取法、溶剂萃取法、树脂吸附法、正相柱层析法中的 一种或者多种工艺； 步骤二:结合浓缩干燥、冷冻干燥，喷雾干燥等常用干燥方法制备成野芋环烯醚萜苷提 取物； 步骤三:将制成的提取物作为抗癌活性成分，使之与适宜的赋彤剂相结合； 步骤四：按常规方法制成的口服给药的内用剂型及非口服给药的注射荆和外用剂型 在癌症治疗中进行应用。2. 如权利要求1所述的野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，所述野芋 是根茎或是枝叶的任一部位、果实的任一部位，野芋是新鲜采集的或是经过炮制的。3. 如权利要求1所述的野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，所述野芋 环烯醚萜苷提取物包括其中主要所含的各种类型的环烯醚萜苷类的化合物。4. 如权利要求1所述的野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，所述溶剂 提取法选用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低级脂肪醇中的一种溶媒，在室温下漫润提取 或者用超声波振荡仪超声振荡提取，或者在加热状态下漫润提取或回流提取，提取次数是 一次获是多次。5. 如权利要求1所述的野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，所述溶剂 萃取法将经水或者低级脂肪醇中的一种溶媒或者混合溶媒提取并经所获得的提取物混悬 于水中，经低极性溶媒脱脂。6. 如权利要求1所述的野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，所述树脂 吸附法采用树脂，树脂选用AB-8型吸附树脂、D-IOl型吸附树脂或者HDP-IOO型吸附树脂，洗 脱溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一种或多种，树脂吸 附法的洗脱是等浓度洗脱或梯度洗脱。7. 如权利要求1所述的野芋抗癌环烯醚萜苷提取物的制备方法，其特征在于，所述正相 柱屡析法选用常压或加压硅胶柱层析或者氧化铝柱层析，正相柱屡析法的所用柱填料可选 柱层析用硅胶或氧化铝，或者薄层层析用硅胶或氧化铝，洗脱选用苯：丙酮、二氯甲烷：丙 酮、苯：甲醇、二氯甲烷：甲醇、三氯甲烷：甲醇.乙酸乙酯：甲醇，苯：丙酮：水、二氯甲烷：丙 酮:水、三氯甲烷:丙酮:水、二氯甲烷：甲醇:水、三氯甲烷：甲醇：水或者乙酸乙酯：甲醇：水 等溶媒中的一种或者多种，正相柱屡析法的洗脱是等浓度洗脱或梯度洗脱。
【文档编号】A61K36/888GK105878622SQ201610223090
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月12日
【发明人】陈国瑞
【申请人】上海历鼎生物技术有限公司