利用含有噻吩并三唑并二氮杂*化合物的药物制剂治疗白血病的方法

利用含有噻吩并三唑并二氮杂*化合物的药物制剂治疗白血病的方法
【专利摘要】一种治疗哺乳动物白血病的方法，通过向需要的患者施用药学可接受的量的式(1)表示的噻吩并三唑并二氮杂化合物，或其可药用的盐、或其水合物或溶剂化物：其中R1为具有1至4个碳的烷基；R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取代的具有1至4个碳的烷基；R3为卤素原子；任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基；─NR5─(CH2)m—R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；或–NR7─CO─(CH2)n—R8，其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，n为0至2的整数，并且R8为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基；并且R4为─(CH2)a─CO─NH—R9，其中a为1至4的整数，并且R9为具有1至4个碳的烷基；具有1至4个碳的羟烷基；具有1至4个碳的烷氧基；或任选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或─(CH2)b—COOR10，其中b为1至4的整数，并且R10为具有1至4个碳的烷基。
【专利说明】利用含有噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的药物制剂治疗白血 病的方法
[0001] 相关专利申请的交叉引用
[0002] 本专利申请要求2013年11月27日提交的美国临时申请No. 61/909，702、2014年6月 13日提交的美国临时申请No . 62/012，128、以及2014年11月17日提交的美国临时申请 No. 62/080，804的权益，所有这些申请的全文均以引用的方式并入本文。
技术领域
[0003] 本发明公开了一种利用噻吩并三唑并二氮杂罩化合物治疗白血病的方法，所述化 合物具有改善的溶解度和生物利用度，其可以固体分散体的形式提供。
【背景技术】
[0004] 下文所述的式（1)的化合物已经显示出可抑制乙酰化的组蛋白H4与包含串联的溴 结构域(BRD)的转录调节子家族(称为BET(溴结构域和额外末端）蛋白，包括BRD2、BRD3和 BRD4)的结合。参见美国专利申请公开No. 2010/0286127A1，其全文以引用的方式并入本文。 Denis，G. V.在文献 "Bromodomain coactivators in cancer ,obesity, type 2diabetes, and inflammation/'Discov Med 2010;10:489_499(该文献的全部内容以引用方式并入本 文）中报道了如下内容:BET蛋白作为增殖和分化的主要的表观遗传调节子而出现，并且还 与倾向于血脂异常或脂肪生成不当调节、心血管病和2型糖尿病的升高的炎症性质和风险、 以及自体免疫疾病(例如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮)的易感性增加有关。因此，式 (II)所示的化合物可以用于治疗多种癌症、心血管疾病、2型糖尿病和自体免疫失调（例如 类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮）。
[0005] 下文所述的式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物表现出与广泛施用和制备盖 伦组合物有关的非常特有的困难，尤其包括药物生物利用度以及患者间和患者内的剂量应 答的差异性的特定问题，由此迫切需要针对噻吩并三唑并二氮杂罩的几乎不溶于水的性质 而开发非常规的剂型。
[0006] 之前，如美国专利申请公开No.20090012064 Al中所报告(该文献的全部内容以引 用方式并入本文），已经发现式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物可以使用载体丙烯酸乙 酯 -甲基丙稀酸甲酯-三甲基铵乙基甲基丙稀酸酯氯化物（trimethy Iammonioethyl methacrylate chloride)的共聚物(Eudragit RS，由Rohm公司生产)来配制，从而提供在下 部肠道优先释放药物组分以用于治疗炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩病）的口服制 剂。通过多种实验(包含动物测试），发现就炎性肠病而言，与式（1)的噻吩并三唑并二氮杂 章化合物由胃肠道被吸收至循环中相比，式（1)的噻吩并三唑并二氮杂草化合物在病变部 位的释放及其对炎性病变的直接作用更为重要。但是，对于许多其他的病症而言，则要求将 式（1)的噻吩并三唑并二氮杂草化合物由胃肠道高度吸收至循环中。因此，需要可以使式 (1)的噻吩并三唑并二氮杂章化合物由胃肠道高度吸收至循环中的式（1)的噻吩并三唑并 二氮杂罩化合物的制剂。
[0007] 人类BET家族溴结构域(包括BRD2、BRD3、BRD4和BRDT蛋白）已经成为研究特异基因 转录的抑制剂的药物靶标。因此，急迫地需要新型口服BET-BRD抑制剂作为单独的试剂或与 其他试剂联合施用来治疗各种疾病(包括白血病）。

【发明内容】

[0008] 在一个实施方案中，本公开提供了利用本文所述的组合物治疗白血病的方法。
[0009] 在一个实施方案中，本公开提供了治疗哺乳动物中白血病的方法，包括:向需要的 患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含根据第III、IV、V、VI和VII部分描述的组 合物的固体分散体。在一个实施方案中，白血病选自由急性白血病和慢性白血病构成的 组。在一个实施方案中，白血病独立地选自由以下疾病构成的组：急性淋巴细胞性白血病 (ALL)、急性骨髓性白血病(AML)(或急性成髓细胞性白血病）、慢性淋巴细胞性白血病(CLL) 和慢性骨髓性白血病（CML)。在另一个实施方案中，白血病独立地选自由以下疾病构成的 组:急性骨髓性白血病、慢性急性骨髓性白血病和急性淋巴细胞性白血病。
[0010] 在一个实施方案中，根据本发明的治疗白血病的方法包括向患者施用有效量的根 据式（I)的化合物、其可药用的盐、或其水合物：以及可药用的聚合物：
[0011]
[0012 ] 其中，父为卤素，R1为C1-C4烷基，R2Sc 1-C4烷基，a为1至4的整数，R3SC1-C4烷基、θα 羟烷基X1-C4 烷氧基、任选地具有取代基的苯基、或任选地具有取代基的杂芳基。在一个 这样的实施方案中，将噻吩并三唑并二氮杂罩化合物配制成含有无定形噻吩并三唑并二氮 杂罩化合物的固体分散体。
[0013]在一个实施方案中，根据本发明的治疗白血病的方法，包括向需要此类治疗的患 者施用根据本发明的有效量的化合物组合物，其中至少式（1)的化合物与至少一种其他的 治疗剂联合施用，其中式（1)的化合物或其可药用的盐以及至少一种其他的治疗剂同时或 依次施用。在一个实施方案中，所述其他的治疗剂独立地选自由以下化合物构成的组:表观 遗传调节剂、糖皮质激素、m-TOR抑制剂、HDAC-抑制剂、去甲基化试剂、蒽环霉素、胞嘧啶核 苷类似物和细胞毒性药物。在一个这样的实施方案中，去甲基化试剂为地西他滨。在另一个 这样的实施方案中，HDAC-抑制剂为伏立诺他或帕比司他。在另一个这样的实施方案中， mTOR抑制剂为依维莫司。在另一个这样的实施方案中，糖皮质激素为地塞米松。在另一个这 样的实施方案中，细胞毒性药物选自由阿糖孢苷或甲氨蝶呤构成的组。在另一个这样的实 施方案中，胞嘧啶核苷的类似物为氮杂胞苷。在另一个这样的实施方案中，蒽环霉素为道诺 霉素。
[0014] 在一个实施方案中，式（1)选自由以下化合物构成的组：（i)(S)-2-[4_(4-氯代苯 基)-2,3,9-三甲基-6!1-噻吩并[3,2-幻[1，2,4]三唑并-[4,3- &][1，4]二氮杂罩-6-基]，-(4-羟苯基）乙酰胺或其二水合物；（ii) (S)-{4-(3 ' -氰基联苯-4-基)-2，3，9-三甲基-6H-噻 吩并[3,2-幻[1，2,4]三唑并[4,3-&][1，4]二氮杂罩-6-基}乙酸甲酯；（1^)(5)-{2,3,9-三 甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂罩-6-基}乙酸甲酯；以及（丨￥)(5)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯基]-6!1-噻吩并 [3,2-卜][1，2,4]三唑并[4,3- &][1，4]二氮杂罩-6-基}乙酸甲酯。在一个这样的实施方案 中，式（1)为(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-幻[1，2,4]三唑并[4， 3-a ] [ 1，4 ]二氮杂罩-6-基]-N- (4-羟苯基）乙酰胺。
[0015] 在一些实施方案中，所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在 一些这样的实施方案中，固体分散体中噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与醋酸羟丙基甲基纤 维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。在一些这样的实施方案中，所述固体分散体 表现出约130 °C至约140 °C的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。在一些这样的实施方案中， 在40°C下暴露于75%的相对湿度至少一个月之后，噻吩并三唑并二氮杂章化合物的浓度为 暴露前无定形噻吩并三唑并二氮杂章化合物浓度的至少90%。
[0016] 在其它实施方案中，可药用的聚合物为PVP。在一些这样的实施方案中，固体分散 体中噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与PVP的重量比为1:3至1:1。在一些这样的实施方案中， 所述固体分散体表现出约175 °C至约185 °C的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。在一些这样 的实施方案中，在40°C下暴露于75%的相对湿度至少一个月之后，噻吩并三唑并二氮杂罩 化合物的浓度为暴露前无定形噻吩并三唑并二氮杂罩化合物浓度的至少90 %。
[0017] 在另一个实施方案中，所述固体分散体由喷雾干燥法得到。
[0018] 在另一个实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结 晶的式(1)的噻吩并三唑并二氮杂草化合物有关的衍射线。
[0019] 在又一个实施方案中，当通过静脉施用时，由所述固体分散体获得的曲线下面积 (AUC)值为由对照组合物获得的相应AUC值的至少0.5倍，其中所述对照组合物包含等价量 的结晶的式(1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物。
[0020] 在另一个实施方案中，与不包含聚合物时结晶的式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩 化合物在pH值为5.0至7.0之间的对照体外测试介质中的浓度相比，所述固体分散体在pH值 为5.0至7.0之间的水性体外测试介质中具有的无定形的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的 浓度高至少5倍。
[0021] 在又一个实施方案中，与不包含聚合物时结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮 杂罩化合物在pH值为5.0至7.0之间的体外测试介质中的浓度相比，所述固体分散体在pH值 为1.0至2.0之间的水性体外测试介质中具有的无定形的噻吩并三唑并二氮杂罩._化合物的 浓度高至少50 %。
[0022] 在一个实施方案中，式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物和可药用的聚合物的 固体分散体中的无定形的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的浓度比式（1)的噻吩并三唑并二 氮杂草化合物的浓度高至少50%，其中所述可药用的聚合物选自以下物质组成的组中：羟 丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基铵乙基甲基丙烯酸 酯氯化物共聚物，其中各固体分散体被置于PH值为1.0至2.0的水性体外测试介质中。
[0023] 在一个实施方案中，式（1)的噻吩并三唑并二氮杂章化合物和可药用的聚合物的 固体分散体中的无定形的式（1)的噻吩并三唑并二氮杂蓽化合物的浓度比式（1)的噻吩并 三唑并二氮杂罩化合物的浓度高至少50%，其中所述可药用的聚合物选自以下物质组成 的组中：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基铵乙基甲 基丙烯酸酯氯化物共聚物，其中各固体分散体被置于PH值为1.0至2.0的水性体外测试介质 中。
【附图说明】
[0024] 参照示例性实施方案的附图来阅读时，将会更好的理解前面的发明概述以及下面 的对本发明的包含噻吩并三唑并二氮杂罩制剂的药物组合物和方法的实施方案的详述。但 是，应该理解的是本发明不限于所示的精确设置和手段。
[0025]在本文和附图全文中，术语0TX015与化合物（1-1)是同义的。
[0026] 在附图中：
[0027] 图IA示出了包含固体分散体的比较制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含 25% 的化合物（1-1)和Eudragit L100 -55;
[0028] 图IB示出了包含固体分散体的比较制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包含 50% 的化合物（1-1)和Eudragit L100 -55;
[0029] 图IC示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25%的化合物（1-1)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP);
[0030]图ID示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50%的化合物（1-1)和PVP;
[0031] 图IE示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25%的化合物（1-1)和PVP-乙酸乙烯酯(PVP-VA);
[0032] 图IF示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50%的化合物（1-1)和和PVP-VA;
[0033] 图IG示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25%的化合物(1-1)和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS-M);
[0034] 图IH示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50 %的化合物（I -1)和HPMCAS-M;
[0035] 图II示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含25%的化合物（1-1)和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP-HP55);
[0036] 图IJ示出了包含固体分散体的示例性制剂的溶解情况，其中所述的固体分散体包 含50 %的化合物（1-1)和HMCP-HP55;
[0037]图2A示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含25%化合物（1-1)和 PVP的固体分散体；
[0038]图2B示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含25 %化合物（1-1)和 HPMCAS-M的固体分散体；
[0039]图2C示出了示例性制剂的体内筛选结果，该示例性制剂包含50%化合物（1-1)和 HPMCAS-M的固体分散体；
[0040]图3示出了化合物(1-1)的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。
[00411图4A示出了在环境条件下平衡的25 %化合物（1-1)和PVP的固体分散体的修正的 差示扫描量热轨迹；
[0042]图4B示出了在环境条件下平衡的25 %化合物（1-1)和HPMCAS-M的固体分散体的修 正的差示扫描量热轨迹；
[0043]图4C示出了在环境条件下平衡的50 %化合物（1-1)和HPMCAS-M的固体分散体的修 正的差示扫描量热轨迹；
[0044] 图5示出了 25 %化合物（1-1)和PVP或HPMCAS-M的固体分散体、以及50 %化合物（1-1)和HPMCAS-MG的固体分散体的玻璃化转变温度(Tg)对相对湿度(RH)的图；
[0045]图6示出了在75 %相对湿度下平衡的25 %化合物（1-1)和PVP的固体分散体的修正 的差示扫描量热轨迹；
[0046]图7示出了 lmg/kg静脉定量给药后的化合物（1-1)(实心矩形）、3mg/kg 口服定量给 药的25%化合物（1-1):PVP(空心圆圈）、3mg/kg口服定量给药的25%化合物（1-1):HPMCAS-MG (空心三角形)和3mg/kg 口服定量给药的50 %化合物（I -1): HPMCAS-MG (空心倒三角）的血 浆浓度对时间的曲线。插图描绘了在半对数标度上绘制的相同的数据；
[0047]图8示出了化合物（1-1)作为25%化合物（I-I)=PVP(空心圆圈）、25%化合物（1-1): HPMCAS-MG(空心三角形)和50 %化合物（1-1): HPMCAS-MG(空心倒三角)在3mg/kg 口服定 量给药后的血浆浓度对时间的曲线。插图描绘了在半对数标度上绘制的相同的数据；
[0048]图9示出了在稳定性测试时间为0时，化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的 X射线粉末衍射图谱；
[0049]图10示出了在40 °C和75 %相对湿度的环境下暴露1个月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱；
[0050]图11示出了在40 °C和75 %相对湿度的环境下暴露2个月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱；
[0051 ]图12示出了在40 °C和75 %相对湿度的环境下暴露3个月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱；
[0052] 图13A示出了用化合物（1-1)和各种化合物联合处理HL60、U937、Jurkat和K562细 胞系48小时后的联合指数值；
[0053] 图13B示出了用氮杂胞苷和化合物（1-1)联合处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞 系48小时后的联合指数值；
[0054] 图13C示出了用帕比司他和化合物（1-1)联合处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞 系48小时后的联合指数值；
[0055] 图14A示出了用氮杂胞苷处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系48小时之后依次用 化合物（I -1)处理48小时后的联合指数值；
[0056] 图14B示出了用氮杂胞苷处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系72小时之后依次用 化合物（I -1)处理48小时后的联合指数值；
[0057] 图14B示出了用氮杂胞苷处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系48小时之后依次用 化合物（1-1)处理24小时后的联合指数值；
[0058] 图14C示出了用氮杂胞苷处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系72小时之后依次用 化合物（I -1)处理48小时后的联合指数值；
[0059] 图14D示出了用氮杂胞苷处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系之后依次用化合物 (1-1)处理后的联合指数值的总结；
[0060] 图15A示出了用帕比司他处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系48小时之后依次用 化合物（I -1)处理48小时后的联合指数值；
[0061 ] 图15B示出了用帕比司他处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系72小时之后依次用 化合物（1-1)处理24小时后的联合指数值；
[0062] 图15C示出了用帕比司他处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系72小时之后依次用 化合物（I -1)处理48小时后的联合指数值；
[0063] 图15D示出了用帕比司他处理HL60、U937、Jurkat和K562细胞系之后依次用化合物 (1-1)处理后的联合指数值的总结；
[0064]图16A示出了用化合物（1-1)与氮杂胞苷或帕比司他联合处理HL60细胞系24小时 后，HL60细胞系中处于subGl的细胞百分比；
[0065]图16B示出了用化合物（1-1)与氮杂胞苷或帕比司他联合处理K562细胞系24小时 后，K562细胞系中处于subGl的细胞百分比；
[0066]图17A示出了用化合物（1-1)与氮杂胞苷或帕比司他联合处理HL60细胞系24小时 后，HL60细胞系中cMYC、切割的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)、切割的PARP(cleaved PARP)、p21和β肌动蛋白的蛋白质印迹图；
[0067]图17Β示出了用化合物（1-1)与氮杂胞苷或帕比司他联合处理Jurkat细胞系24小 时后，Jurkat细胞系中cMYC、切割的胱天蛋白酶3、切割的PARP、ρ21和β肌动蛋白的蛋白质印 迹图；
[0068]图17C示出了用化合物（1-1)与氮杂胞苷或帕比司他联合处理U937细胞系24小时 后，U937细胞系中cMYC、切割的胱天蛋白酶3、切割的PARP、p21和抑几动蛋白的蛋白质印迹 图；以及
[0069]图17D示出了用化合物（1-1)与氮杂胞苷或帕比司他联合处理Κ562细胞系24小时 后，Κ562细胞系中cMYC、切割的胱天蛋白酶3、切割的PARP、p21和抑几动蛋白的蛋白质印迹 图。
[0070] 发明详述
[0071] 现在，下文将参照附图和实施例来更全面地描述本发明的主题，所述附图和实施 例示出了代表性的实施方案。但是，本发明的主题可以以不同的形式体现，并且不应该解释 成局限于本发明列出的实施方案。提供这些实施方案旨在描述并使本领域的技术人员能 够实施。除非另有说明，否则本发明所用的所有技术和科学术语都具有所述主题所属技术 领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本发明中所提及的所有公开、专利申请、专 利和其他参考文献均以引用的方式全文并入本文中。
[0072] I.定义
[0073] 本文所用的术语"烷基"是指饱和的直链或支链烃。
[0074]术语"取代的烷基"是指具有一个或多个取代基的烷基部分，其中所述的取代基替 代了烃主链上的氢或者一个或多个碳。
[0075] 无论术语"烯基"是单独使用还是作为取代基的一部分(例如"&-4烯基(芳基)"）使 用，都是指具有至少一个碳-碳双键部分的部分不饱和支链或直链一价烃基团，其中所述的 双键是通过由母体烷基分子的两个相邻碳原子的每个碳原子上除去一个氢原子而得到的， 并且所述基团是通过由一个碳原子上除去一个氢原子而得到的。原子可以在双键周围以顺 式(Z)或反式(E)构象来排布。典型的烯基基团包括但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基(2-丙 烯基）、丁烯基等。例子包括C2-8烯基或C2-4烯基。
[0076] 术语"CG-k)"（其中j和k为整数，表示碳原子的指定数量)是指烷基以包含j至k个碳 原子(包含端值）的前置代号的脚注来显示的烷基、烯基、炔基、烷氧基或环烷基基团，或者 指基团中的烷基部分。例如Ca-4)表示包含1、2、3或4个碳原子的基团。
[0077]如本文所用，术语"卤代"或"卤素"是指F、Cl、Br或I。
[0078] 术语"可药用的盐"是本领域公认的，并且是指化合物的相对无毒性的无机酸和有 机酸加成盐，或者有机碱或无机碱加成盐，包括(例如)在本发明的组合物中所包含的那些。
[0079] 如本文所用，术语"固体分散体"是指一组固体产物，其由至少两种不同的组分组 成，通常为亲水性载体和疏水性药品(活性成分）。
[0080] 术语"手性的"是本领域公认的，并且是指具有镜像对应部分的非重叠性性质的分 子，而术语"非手性"是指可重叠在它们镜像对应部分上的分子。"前手性分子"是指在特定 的过程中具有转化成手性分子的潜力的分子。
[0081] 符号用于表示键，其可以是单键、双键或三键。
[0082] 术语"对映异构体"和用于描述对映异构体的结构式意指包含"纯的"对映异构体， 其不包含光学异构体以及对映异构体及其光学异构体的混合物，其中对映异构体以对映异 构体过量而存在，例如至少10%、25%、50%、75%、90%、95%、98%或99%对映异构体过 量。
[0083] 当在本文中使用术语"立体异构体"时，由所有的几何异构体、对映异构体或非对 映异构体组成。本发明涵盖了这些化合物和它们的混合物的多种立体异构体。此外，所公开 的化合物的构象异构体和旋转异构体也被包括在内。
[0084] 如本文所用，术语"立体选择合成"是指这样的化学或酶反应，其中单一的反应物 在建立新的立构中心的过程中或者在转化现有的立构中心的过程中形成了立体异构体的 不均匀的混合物，并且这些反应是本领域公知的。立体选择合成涵盖了对映选择性和非对 映选择性的转化。例如参见Carreira,E.M.和Kvaerno,L. ,Classics in Stereoselective Synthesis,Wiley-VCH:Weinheim，2009。
[0085] 术语"喷雾干燥"是指其中涉及将供料悬液或溶液雾化成小滴并在处理室(其中具 有用于蒸发的强驱动力，例如热干气、部分真空或它们的组合）中快速除去混合物中的溶剂 的工艺。
[0086] 如本文所用，术语"治疗有效量"是指这样的任何量，与未接受此量的噻吩并三唑 并二氮杂罩或者任何其他药物活性剂的相应患者相比，该量的本发明的噻吩并三唑并二氮 杂罩或者任何其他药物活性剂改善性地治疗、治愈、预防或减轻疾病、病症或副作用，或者 降低疾病或病症的进展的速度。
[0087] 术语"约"是指+/-10 %。
[0088] 在本申请及随附的权利要求书的全文中，除非上下文中必须另外说明，否则词语 "包括"或其变体(例如"包含"或"包含有"）都应该解释为包括所述的整数或步骤、或者一组 整数或步骤，并且但不排除任何其他的整数或步骤、或一组整数或步骤。
[0089] 目前已经发现，下文所述的式（1)的噻吩并三唑并二氮杂章化合物可以与可药用 的聚合物一同配制为固体分散体，从而提供可以使药物组分由胃肠道高度地吸收至血液循 环中的口服制剂。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯(也称 为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯或HPMCAS)。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙 烯吡咯烷酮(PVP)。
[0090] 在一些实施方案中，醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)可包括:具有9%乙 酰基/11 %琥珀酰基的M级(例如，平均粒径为5μπι的HPMCAS (即，HPMCAS-MF，细粉级)或平均 粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-MG，颗粒级））；具有12 %乙酰基/6 %琥珀酰基的H级(例如， 平均粒径为5μπι的HPMCAS(即，HPMCAS-HF，细粉级）或平均粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-HG，颗粒级））；以及具有8 %乙酰基/15 %琥珀酰基的L级（例如，平均粒径为5μπι的HPMCAS (即，HPMCAS-LF，细粉级)或平均粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-LG，颗粒级））。
[0091] 在一些实施方案中，聚乙烯吡咯烷酮的分子量可为约2,50〇CKollidon 012PF，重 均分子量在2，000至3，000之间）、约9，000(KolHdoa?17PF，重均分子量在7，000至11，000 之间）、约25,000 (丨(〇丨丨idon? 25,重均分子量在28,000至34,000之间）、约50,000( 1〈〇川<_'1〇11?30，重均分子量在44,000至54,000之间）和约1，250,000( 1^〇丨丨丨(1〇丨1泡90或 1(0] lidon? 90F，重均分子量在 1，000，000至 1，500，000之间）。
[0092] II.治疗方法
[0093] 在一个实施方案中，本公开提供了治疗哺乳动物中白血病的方法，包括:向需要此 类治疗的患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含根据第III、IV、V、VI和VII部分 描述的组合物的固体分散体。
[0094] 在一个实施方案中，白血病独立地选自由以下疾病构成的组:急性淋巴细胞性白 血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)(或急性成髓细胞性白血病）、慢性淋巴细胞性白血病 (CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)。
[0095] 在一个实施方案中，根据本发明的治疗白血病的方法，包括向需要此类治疗的患 者施用有效量的根据式（1)的化合物或其可药用的盐，其中式（1)的化合物或其可药用的盐 以及至少一种其他的治疗剂同时或依次施用。在一个实施方案中，根据式（1)的化合物以及 至少一种其他的治疗剂能够同时或依次施用。在一些实施方案中，该联合产生协同效应。在 一个实施方案中，所述其他的治疗剂独立地选自由以下化合物构成的组:表观遗传调节剂、 糖皮质激素、m-TOR抑制剂、HDAC-抑制剂、去甲基化试剂、蒽环霉素、胞嘧啶核苷的类似物和 细胞毒性药物。在一个这样的实施方案中，去甲基化试剂为地西他滨。在另一个这样的实施 方案中，HDAC-抑制剂为伏立诺他或帕比司他。在另一个这样的实施方案中，mTOR抑制剂为 依维莫司。在另一个这样的实施方案中，糖皮质激素为地塞米松。在另一个这样的实施方案 中，细胞毒性药物选自由阿糖孢苷或甲氨蝶呤构成的组。在另一个这样的实施方案中，胞嘧 啶核苷的类似物为氮杂胞苷。在另一个这样的实施方案中，蒽环霉素为道诺霉素。
[0096] 在一些实施方案中，本公开提供了治疗哺乳动物白血病的方法，包括：向需要的患 者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含根据第III、IV、V和VI部分描述的组合物的 固体分散体。
[0097] 急性骨髓性白血病包括血液癌和骨髓癌，其中骨髓癌产生异常的成髓细胞、红血 细胞或血小板。急性骨髓性白血病包括但不限于由世界卫生组织分类的急性骨髓性白血病 亚类以及由法国-美国-英国（FAB)合作组织分类的急性骨髓性白血病亚类。在一些实施方 案中，急性骨髓性白血病可为混合谱系白血病(MLL)融合阳性急性骨髓性白血病、JAK2突变 的真性红细胞增多症转化的（p〇st_JAK2 mutated polycythemia vera)急性骨髓性白血 病、或骨髓增生异常综合征转化(P〇st-myelodysplastic syndrome)的急性骨髓性白血病。 在一些实施方案中，急性骨髓性白血病可以为急性嗜碱细胞性白血病、急性全髓增殖症伴 骨髓纤维化或髓样肉瘤。在一些实施方案中，急性骨髓性白血病可以为急性髓细胞白血病 (微分化型）、急性髓细胞白血病(不伴成熟）、急性髓细胞白血病(伴粒细胞成熟）、急性早幼 粒细胞白血病、急性粒单核细胞白血病、粒单核细胞伴随骨髓嗜酸性粒细胞增多症、急性成 单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红细胞白血病或急性巨核细胞白血病。在一些 实施例中，急性骨髓性白血病是伴随复发性遗传异常的急性骨髓性白血病、伴随多系发育 异常的急性骨髓性白血病、或治疗相关的急性骨髓性白血病。伴随复发性遗传异常的急性 骨髓性白血病包括但不限于，AML伴随t(8;21)(q22;q22)、AML伴随in V(16)(pl3q22)或t (16;16)(?13;922)，41^伴随七（15;17)(922;912)、以及41^伴随11923异常。治疗相关的八1^ 包括但不限于烷化剂相关的AML和拓扑异构酶II抑制剂相关的AML。
[0098] 在一个实施方案中，根据本发明的治疗白血病的方法，包括向需要此类治疗的患 者联合施用根据式（1)的化合物或其可药用的盐以及至少一种其他的治疗剂，其中式（1)的 化合物或其可药用的盐以及至少一种其他的治疗剂同时或依次施用。在一个实施方案中， 式（1)的化合物以及其他的治疗剂同时或依次施用。在一些实施方案中，该联合产生协同效 应。在一个实施方案中，所述其他的治疗剂独立地选自由以下化合物构成的组:表观遗传调 节剂、糖皮质激素、m-T0R抑制剂、HDAC-抑制剂、去甲基化试剂、蒽环霉素、胞嘧啶核苷的类 似物和细胞毒性药物。在一个这样的实施方案中，去甲基化试剂为地西他滨。在另一个这样 的实施方案中，HDAC-抑制剂为伏立诺他或帕比司他。在另一个这样的实施方案中，mTOR抑 制剂为依维莫司。在另一个这样的实施方案中，糖皮质激素为地塞米松。在另一个这样的实 施方案中，细胞毒性药物选自由阿糖孢苷或甲氨蝶呤构成的组。在另一个这样的实施方案 中，胞嘧啶核苷的类似物为氮杂胞苷。在另一个这样的实施方案中，蒽环霉素为道诺霉素。
[0099] 在一些实施方案中，本公开提供了治疗哺乳动物慢性急性骨髓性白血病，包括：向 需要的患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含根据第III、IV、V和VI部分描述的 组合物的固体分散体。在一些实施方案中，该慢性急性骨髓性白血病可以处于慢性期。在其 他实施方案中，该慢性急性骨髓性白血病可以处于加速期。在另一些实施方案中，该慢性急 性骨髓性白血病可以处于急变期。
[0100] 在一个实施方案中，根据本发明的治疗慢性急性骨髓性白血病的方法，包括向需 要此类治疗的患者联合施用有效量的根据式（1)的化合物或其可药用的盐以及至少一种其 他的治疗剂，其中式（1)的化合物或其可药用的盐以及至少一种其他的治疗剂同时或依次 施用。在一个实施方案中，式（1)的化合物以及其他的治疗剂同时或依次施用。在一些实施 方案中，该联合产生协同效应。在一个实施方案中，所述其他的治疗剂独立地选自由以下化 合物构成的组:表观遗传调节剂、糖皮质激素、m-TOR抑制剂、HDAC-抑制剂、去甲基化试剂、 蒽环霉素、胞嘧啶核苷的类似物和细胞毒性药物。在一个这样的实施方案中，去甲基化试剂 为地西他滨。在另一个这样的实施方案中，HDAC-抑制剂为伏立诺他或帕比司他。在另一个 这样的实施方案中，mTOR抑制剂为依维莫司。在另一个这样的实施方案中，糖皮质激素为地 塞米松。在另一个这样的实施方案中，细胞毒性药物选自由阿糖孢苷或甲氨蝶呤构成的组。 在另一个这样的实施方案中，胞嘧啶核苷的类似物为氮杂胞苷。在另一个这样的实施方案 中，蒽环霉素为道诺霉素。
[0101] 在一些实施方案中，本公开提供了治疗哺乳动物急性淋巴细胞性白血病的方法， 包括：向需要的患者施用药学可接受的量的组合物，该组合物包含根据第III、IV、V和VI部 分描述的组合物的固体分散体。在一些实施方案中，急性淋巴细胞性白血病可被分类为 ALL-Ll。在其他实施方案中，急性淋巴细胞性白血病可被分类为ALL-L2。在其他实施方案 中，急性淋巴细胞性白血病可被分类为ALL-L3。在一些实施方案中，急性淋巴细胞性白血病 可被划分类前体B急性淋巴细胞性白血病或前B细胞。在其他实施方案中，急性淋巴细胞性 白血病可被分类为前体T急性淋巴细胞性白血病或前T细胞。在一些实施方案中，前体B急性 淋巴细胞性白血病可具有细胞遗传学亚型t(12;21)(pl2，q22)TEL/AML-l;t(l;19)(q23; pl3)PBX/E2A;t(9;22)(q34;qll)ABL/BCR;或 T(V，ll)(V;q23)V/MLL。在一些实施方案中， 急性淋巴细胞性白血病为Burkitt's白血病。在一些实施方案中，急性淋巴细胞性白血病为 双表型急性白血病。
[0102] 在一个实施方案中，根据本发明的治疗急性淋巴细胞性白血病的方法，包括向需 要此类治疗的患者联合施用的有效量的根据式（1)的化合物或其可药用的盐以及至少一种 其他的治疗剂，其中式（1)表示的化合物或其可药用的盐以及至少一种其他的治疗剂同时 或依次施用。在一个实施方案中，式（1)表示的化合物以及其他的治疗剂同时或依次施用。 在一些实施方案中，该联合产生协同效应。在一个实施方案中，其他的治疗剂独立地选自由 以下化合物构成的组:表观遗传调节剂、糖皮质激素、m-TOR抑制剂、HDAC-抑制剂、去甲基化 试剂、蒽环霉素、胞嘧啶核苷的类似物和细胞毒性药物。在一个这样的实施方案中，去甲基 化试剂为地西他滨。在另一个这样的实施方案中，HDAC-抑制剂为伏立诺他或帕比司他。在 另一个这样的实施方案中，mTOR抑制剂为依维莫司。在另一个这样的实施方案中，糖皮质激 素为地塞米松。在另一个这样的实施方案中，细胞毒性药物选自由阿糖孢苷或甲氨蝶呤构 成的组。在另一个这样的实施方案中，胞嘧啶核苷的类似物为氮杂胞苷。在另一个这样的实 施方案中，蒽环霉素为道诺霉素。
[0103] 在一些实施方案中，治疗急性骨髓性白血病、慢性急性骨髓性白血病或急性淋巴 细胞性白血病的方法利用了式（1)的噻吩并三唑并二氮杂章化合物(包括其任意的盐、异构 体、对映异构体、消旋物、水合物、溶剂化物、代谢物和多型变体），其中：
[0104]
[0105] 其中R1为具有1至4个碳的烷基;R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟 基取代的具有1至4个碳的烷基;R 3为卤素原子;任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、 具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一 NR5 - (CH2)m-R6,其中R5为氢原子、或具有1 至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R 6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基;或-NR7 一 CO - (CH2)n-R8,其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R 8为任选 地被卤素原子取代的苯基或吡啶基;并且R4为一(CH2) a-CO-NH-R9，其中a为1至4的整数， 并且R9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的羟烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任选地 被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基；或一 (CH 2) b-COOR1t3，其中b为1至4的整数，并且R1t3为具有1至4个碳的烷基。
[0106] 在一些实施方案中，式（1)选自式（IA)，其可药用的盐或水合物；以及可药用的聚 合物：
[0107]
[0108] 其中，X为卤素，R1SC1-C4烷基，R2SC 1-C4烷基，a为1至4的整数，R3SC1-C4烷基、θα 羟烷基X1-C4 烷氧基、任选地具有取代基的苯基、或任选地具有取代基的杂芳基。在一个 这样的实施方案中，将噻吩并三唑并二氮杂_章化合物配制成含有无定形噻吩并三唑并二 氮杂章合物的固体分散体。
[0109] 在本发明中，"治疗方案"或"治疗"是指向被医生诊断罹患AML、CML或ALL的患者或 有风险发展为AMUCML或ALL(的患者)施用本发明的活性组分的行为或行为过程，其目的在 于(例如)减轻AML、CML或ALL或病症，防止AML、CML或ALL或病症的发作，或恢复到AML、CML 或AML开始之前的状态。
[0110] 在本发明的方法中，与式（1)的噻吩并三唑并二氮杂章联合使用的合适的去甲基 化试剂包括但不限于下表A中所列出的去甲基化试剂。
[0114] 在本发明的方法中，与式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩联合使用的合适的组蛋白 脱乙酰酶(HDAC)抑制剂包括但不限于下表B中所列出的HDAC抑制剂。
[0115] 表B:













[0136] III.噻吩并三唑并二氮杂罩合物：
[0137] 在一个实施方案中，在本发明的制剂中使用的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物由式 (1)表示(包括其任意的盐、异构体、对映异构体、消旋物、水合物、溶剂化物、代谢物和多型 变体）：
[0138]
[0139] 其中R1为具有1至4个碳的烷基;R2为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟 基取代的具有1至4个碳的烷基;R 3为：卤素原子;任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷 基、具有1至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一 NR5-(CH2)m-R6,其中R5为氢原子、或具 有1至4个碳的烷基，m为0至4的整数，并且R 6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基;或-NR7-CO - (CH2)n-R8,其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R 8为任 选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基;并且R4为:一(CH2)a-CO-NH-R 9,其中a为1至4的整 数，并且R9为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的羟烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任 选地被具有1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基;或 -(CH 2) b-COOR1t3，其中b为1至4的整数，并且R1t3为具有1至4个碳的烷基。
[0140] 在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至4个碳原子的直链或支链烷 基基团。在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至3个碳原子的直链或支链烷 基基团。在一个实施方案中，合适的烷基包括含有1个碳原子至2个碳原子的直链或支链烷 基基团。在一个实施方案中，示例性的烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正 丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基。在一个实施方案中，示例性的烷基基团包括但不限于甲基、 乙基、丙基、异丙基、甲基-1-丙基和2_甲基_2_丙基。
[0141] 在一些实施方案中，本发明提供了本发明所述的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的 可药用的的盐、溶剂化物(包括水合物)和同位素标记的形式。在一个实施方案中，噻吩并三 唑并二氮杂罩化合物的可药用的盐包括与无机酸形成的酸加成盐。在一个实施方案中，噻 吩并三唑并二氮杂:草的可药用的无机酸加成盐包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、偏磷酸、硝 酸和硫酸的盐。在一个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的可药用的盐包括与有 机酸形成的酸加成盐。在一个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂罩化的可药用的有机酸加 成盐包括以下酸的盐:酒石酸、乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、甲 酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、马来酸、琥珀酸、樟脑硫酸、异硫羰酸（isothionic acid)、粘 酸、龙胆酸、异烟酸、糖二酸、葡萄糖醛酸、糠酸、谷氨酸、抗坏血酸、邻氨基苯甲酸、水杨酸、 苯乙酸、扁桃酸、扑酸(帕莫酸）、甲烷磺酸、乙烷磺酸、泛酸、硬脂酸、磺胺酸、褐藻酸、半乳糖 醛酸和芳基磺酸(例如苯磺酸和4-甲基苯磺酸）。
[0142] 本发明提供了本发明所述的噻吩并三唑并二氮杂章化合物的药学可接受的同位 素标记形式，其中一个或多个原子被原子数相同、但是原子量或质量数与天然常见的原子 量或质量数不同的原子所替代。适于包含在噻吩并三唑并二氮杂罩化合物中的同位素的实 例包括以下元素的同位素:氢，例如 2H和3H;碳，例如nC、13C和14C;氯，例如 36Cl;氟，例s如18F; 碘，例如123I和125I;氮，例如 13N和15N;氧，例如150、170和18O;以及硫，例如 35S。通常可以通过本 领域那些技术人员已知的常规技术来制备噻吩并三唑并二氮杂章化合物的同位素标记形 式。
[0143] 式（1)所示化合物的某些同位素标记形式(例如引入了放射性同位素的那些)可用 于药品和/或底物的组织分布研究中。由于放射性同位素氚( 3H)和碳-H(14C)易于引入和即 时的检测手段，所以它们特别适用于上述目的。使用较重的同位素(例如氘( 2H))进行取代 可以提供由于更广的代谢稳定性而产生的某些治疗益处，例如体内半衰期增长或者剂量需 求降低，因此，在一些情况下可以是优选的。使用发射正电子的同位素（例如 nC、18F、150和 13N)进行取代可以用于正电子发射断层成像术研究(PET)中，以用于检测底物受体的占用。
[0144] 在一些实施方案中，本发明公开的噻吩并三唑并二氮杂章化合物可以与药学可接 受的溶剂形成溶剂化以及非溶剂化的形式存在。本领域技术人员应该理解的是，溶剂化物 为溶质(在这种情况下为本发明所述的噻吩并三唑并二氮杂章化合物)和溶剂形成的化学 计量可变的复合物。优选的是此类溶剂不会干扰溶质(噻吩并三唑并二氮杂章化合物)的生 物活性。用于形成溶剂化物的合适的溶剂的实例包括但不限于水、甲醇、二甲基亚砜、乙醇 和乙酸。所用的合适的溶剂为药学可接受的溶剂。合适的是，所用的溶剂为水。在一个实施 方案中，本发明所述的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的药学可接受的溶剂化物包括乙醇 溶剂化物、异丙醇溶剂化物、二氧戊烷溶剂化物、四氢呋喃溶剂化物、二甲基亚砜溶剂化物、 叔丁醇溶剂化物、2-丁醇溶剂化物、二氧戊烷溶剂化物、1，3_二甲基_3,4,5,6_四氢-2(1H)_ 嘧啶酮（"DMPU"）溶剂化物、I，3_二甲基咪唑啉酮（"DMI"）溶剂化物和I，3_二甲基咪唑啉酮 ("DMP"）溶剂化物、或它们的混合物。
[0145] 在一些实施方案中，本发明所述的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物可以包含一个或 多个手性中心和/或双键，因此可以以几何异构体、对映异构体或非对映异构体的形式存 在。可以根据Cahn-Ingold-Prelog规则来命名噻吩并三唑并二氮杂罩.化合物的对映异构体 和非对映异构体，所述的规则将"R"或"S"描述符指定给每个立构中心(通常也称为手性中 心），并将E或Z描述符指定给每个碳-碳双键（以命名几何异构体），这样可以通过在系统名 中包含描述符而独特地描述整个分子的构造。
[0146] 在一些实施方案中，本发明所述的噻吩并三唑并二氮杂章化合物可以以外消旋混 合物或外消旋物的形式存在，其可以包含手性分子的等量的左旋和右旋对映异构体。可以 通过前缀（±)_或dl-来表示此类外消旋混合物，表明右旋和左旋异构体的相等（1:1)的混 合物。此外，前缀rac-(或racem-)或符号RS和SR也可以用于命名外消旋混合物。
[0147] 此外，由取代基围绕碳-碳双键的排列或者取代基围绕环烷基或杂环的排列而产 生的几何异构体也可以存在于本发明的化合物中。在一些实施方案中，符号二=可用于 表示可以为单键、双键或三键的键。围绕碳-碳双键的取代基可以命名为呈"Z"或"E"构型， 其中根据IUPAC标准使用术语"Z"和"E"。除非另有说明，否则描述双键的结构涵盖了 "Z"和 "E"异构体。围绕碳-碳双键的取代基也可以称为"顺式"或"反式("，其中"顺式"表示取代基 在双键的同侧上，而"反式"表示取代基在双键的对侧上。取代基围绕碳环的排列也可以命 名为"顺式"或"反式"。术语"顺式"表示取代基在环的平面的同侧上，而术语"反式"表示取 代基在环的平面的对侧上。其中取代基置于环的平面的同侧和对侧上的化合物所形成的 混合物命名为"顺式/反式"或"Z/E"。
[0148] 在一些实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物可以以单晶或 多晶形式或多型物存在。在一个实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂罩化合 物包含其无定形形式。在一个实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物 包含其单一多晶型物。在另一个实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂罩化合 物包含其多晶型物的混合物。在另一个实施方案中，所述化合物为结晶形式。
[0149] 在一些实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂草化合物可以以单一对 映异构体或者对映异构体富集形式存在。在一个实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑 并二氮杂草化合物以对映异构体过量百分比（entiomeric excess)超过80%的形式存在。 在一个实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物以对映异构体过量百分 比超过90%的形式存在。在一个实施方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂草化合 物以对映异构体过量百分比超过98%的形式存在。在一个实施方案中，本发明所公开的噻 吩并三唑并二氮杂章化合物以对映异构体过量百分比超过99 %的形式存在。在一个实施 方案中，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂革化合物以选自由至少10%、至少25%、至少 50%、至少75%、至少90 %、至少95 %、至少98%和至少99%所构成的组中的对映异构体过 量百分比的形式存在。
[0150] 对于一对映异构体对而言，可以使用以下等式(等式（1))来计算对映异构体El相 对于对映异构体E2的对映异构体过量百分比：
[0151] 对映异构体El的过量百分比等式(1) (El+E2) v
[0152] 可以通过手性高效液相色谱(HPLC)、核磁共振(匪R)或任何其他合适的方法来测 定El和E2的相对量。在一些实施方案中，对映异构体化合物的纯度可以指对映异构体El和 E2相对于其他材料的量，这些其他物质特别包括副产物和/或未反应的反应物或试剂。
[0153] 在一些实施方案中，式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物包括但不限于噻吩并 三唑并二氮杂萆化合物（1-1)至（1-18)，其列于下表A中。
[0154] 本文将表A的化合物（1-1)也称为0TX-015、0TX015或Y803。
[0155] 表Α:本发明的示例性化合物：

[0160]
[0161] 在一些实施方案中，式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂箪化合物包括：（i)(S)-2_ [4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并 _[4,3_a][l，4]二氮杂 罩-6-基]-N-(4-羟苯基）乙酰胺或其二水合物；（i i) (S) - {4-(3 ' -氰基联苯-4-基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂罩-6-基}乙酸甲酯；（iii) (S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l， 4]二氮杂章-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰基氨基)苯 基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮杂罩-6-基}乙酸甲酯。
[0162] 在一些实施方案中，式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物包括（S)-2_[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-扪[1，2，-4]三唑并[4,3- &][1，4]二氮杂罩_ 6-基]-N-(4-羟苯基）乙酰胺。
[0163] IV.制剂：
[0164] 式（1)所示的化合物在盖伦组合物的常规给药和制备方面表现出非常特有的困 难，特别包括药物生物利用度以及患者间和患者内的剂量应答的可变性的特定问题，由此 需要针对几乎水不溶性的所述化合物开发非常规的剂型。
[0165] 之前，已经发现可以利用载体丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基铵乙基甲基丙 稀酸酯氯化物共聚物(Eudragi t RS，由Rohm公司制造)将式（1)所示的化合物配置成固体分 散体，从而提供在下肠道中优先释放药物组分以用于治疗炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和 克罗恩病）的口服制剂(2009年1月8日公开的美国专利申请20090012064A1)。通过多个实验 (包括动物试验），发现就炎性肠病而言，药物在病变部位的释放及其对炎性病变的直接作 用比其由胃肠道吸收至循环中更为重要。
[0166] 现在，意外地发现根据式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物、其可药用的 盐、溶剂化物(包含水合物）、消旋物、对映异构体以及同位素标记的形式可以使用可药用的 聚合物而配制成固体分散体，从而提供口服制剂，该口服制剂能够使药物组分由胃肠道高 度吸收至循环中，从而治疗炎性肠病以及其他疾病。在狗和人类中的研究证明，与之前研发 的用于治疗炎性肠病的Eudragit固体分散体制剂相比，所述这些固体分散体具有高的口服 生物利用度。
[0167] 固体分散体为改善水溶性差的药物的口服生物利用度的一种手段。
[0168] 如本文所用，术语"固体分散体"是指一组固体产物，其包含至少2种不同的成分， 通常为亲水性载体和疏水性药物(根据式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物）。基于药物 在分散体内的分子排布，可以区分为6种不同类型的固体分散体。通常，固体分散体分为:简 单低共熔混合物、固溶体、玻璃溶液和悬浮液、以及结晶载体中的无定形沉淀。此外，可存在 一些组合，例如在同一样品中，一些分子可以成簇存在，而一些分子以分子形式分散。
[0169] 在一个实施方案中，根据式（1)的噻吩并三唑并二氮杂.罩化合物可以以分子形式 分散于无定形颗粒(簇)中。在另一个实施方案中，根据式（1)的噻吩并三唑并二氮杂章化合 物可以以结晶颗粒形式分散。在一个实施方案中，载体可以是结晶的。在另一个实施方案 中，载体可以是无定形的。
[0170] 在一个实施方案中，本发明提供了包含固体分散体的药物组合物，其中所述固体 分散体由以下形成:根据式(1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或其可药用的盐、溶剂化物 (包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或其同位素标记形式；以及可药用的聚合物。在 一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯（也称为醋酸羟丙基甲基 纤维素琥珀酸酯或HPMCAS)。在一个实施方案中，分散体中噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与 醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少 一部分噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案 中，噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固 体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130 °C至 140°C之间出现。在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约135°C出现。在一些这样的实施方 案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在 固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二 氮杂罩化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21°2Θ下，在 无定形晕(amorphous halo)上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩.化合 物有关的衍射线。在一些实施方案中，醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)可包括:具 有9 %乙酰基/11 %琥珀酰基的M级(例如，平均粒径为5μπι的HPMCAS (即，HPMCAS-MF，细粉级） 或平均粒径为1mm的HPMCAS (即，HPMCAS-MG，颗粒级））；具有12 %乙酰基/6 %琥珀酰基的H级 (例如，平均粒径为5μπι的HPMCAS(即，HPMCAS-HF，细粉级）或平均粒径为1mm的HPMCAS(即， HPMCAS-HG，颗粒级））；以及具有8 %乙酰基/15 %琥珀酰基的L级（例如，平均粒径为5μπι的 HPMCAS(即，HPMCAS-LF，细粉级)或平均粒径为1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-LG，颗粒级））。
[0171] 在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含式（1)所示的噻吩并三 唑并二氮杂罩化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构 体或同位素标记形式在可药用的聚合物中的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚 合物为聚乙烯吡咯烷酮(也称为聚维酮或PVP)。在一个实施方案中，分散体中噻吩并三唑并 二氮杂罩化合物与PVP的重量比为1:3至1: 1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并三唑并 二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并三唑并二 氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单 一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175°C至约185 °C之间出现。 在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约17%~出现。在一些这样的实施方案中，固体分散 体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X 射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂草化合物 有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕 (amorphous halo)上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章化合物有关的衍 射线。在一些实施方案中，聚乙烯吡咯烷酮的分子量可为约2,500(K〇llid(m ?12PF，重均 分子量在2，000至3，000之间）、约9，000 (Kollidon? 17PF，重均分子量在7，000至11，000之 间）、约25，000(K〇:llM〇tt? 25，重均分子量在28，000至34，000之间）、约50，000( Kollidon? 30,重均分子量在44,000至54,000之间）和约 1，250,000 (Kollidon? 90或 Kol lidon?90F，重均分子量在 1，000,000至 1，500,000之间）。
[0172] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的式（1)所示的噻吩并 三唑并二氮杂草化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异 构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚 合物为醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂 罩化合物与醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一 部分噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案 中，噻吩并三唑并二氮杂萆化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固 体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130 °C至 140°C之间出现。在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约135°C出现。在一些这样的实施方 案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在 固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二 氮杂罩化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在 无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂草化合物有关的衍射线。
[0173] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的式（1)所示的噻吩并 三唑并二氮杂草化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异 构体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚 合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与 聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮 杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂 罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐 点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175°C至约185°C之间出现。在其 他这样的实施方案中，单一的Tg在约17%~下出现。在一些这样的实施方案中，固体分散体 在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射 线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有 关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21°2Θ下，在无定形晕上不存 在与结晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。
[0174] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的式（1)所示的噻吩并三 唑并二氮杂罩化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构 体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合 物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，式（1)所示的噻吩并三唑并二氮 杂章化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重量比为1:3至1:1。
[0175] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的式（1)所示的噻吩并三 唑并二氮杂章化合物或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构 体或同位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合 物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与聚 乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。
[0176] 在一些实施方案中，通过喷雾干燥来制备包含固体分散体的药物组合物。
[0177] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由以下形成：式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或其可药用的盐、溶剂化物 (包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式，和可药用的聚合物。在一个 实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案中，化合 物（1)与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重量比为1: 3至1:1。在一个实施方案中，至少 一部分噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案 中，噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固 体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130 °C至 140°C之间出现。在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约135°C出现。在一些这样的实施方 案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在 固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二 氮杂罩合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在 无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。
[0178] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由以下形成：式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章化合物或其可药用的盐、溶剂化物 (包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。在一个 实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，化合物（1)与聚乙烯 吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮杂罩化 合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂罩化合 物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻 璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175°C至185°C之间出现。在其他这样的 实施方案中，单一的Tg在约179 °C出现。在一些这样的实施方案中，固体分散体在40 °C、相对 湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射 图案中，基本上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章化合物有关的衍射线。 就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式 (1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。
[0179] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由以下形成:无定形的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或其可药用的盐、溶 剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。 在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方案 中，式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重量 比为1:3至1: 1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮杂罩北合物均匀地分散 于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂草化合物均匀地分散于 整个固体分散体中。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度 (Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130°C至140°C之间出现。在一些这样的实施方案中， 固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在其他这样的实施方案中， 单一的Tg在约135Γ出现。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本 上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。就本申请的 目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式（1)所示的 噻吩并三唑并二氮杂章化合物有关的衍射线。
[0180] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由以下形成:无定形的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或其可药用的盐、溶 剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合物。 在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式（1)所示的 噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案 中，至少一部分噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个 实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂章化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一些实施 方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg 在175°C至185°C之间出现。在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约179°C出现。在一些这 样的实施方案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75 %的环境下暴露至少1个月。在一些实 施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻 吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在 约21°2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂_草化合物有关 的衍射线。
[0181] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由以下形成:结晶形式的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或其可药用的盐、 溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合 物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯。在一个实施方 案中，式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂^章化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯的重 量比为1:3至1:1。
[0182] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含喷雾干燥的固体分散体，该固体分 散体由以下形成:结晶形式的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂羣化合物或其可药用的盐、 溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式和可药用的聚合 物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为聚乙烯吡咯烷酮。在一个实施方案中，式(1)所示 的噻吩并三唑并二氮杂草化合物与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为1:3至1:1。
[0183] 在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含固体分散体，该 固体分散体由以下形成:2-[(6S)-4-(4-氯代苯基)-2,3,9_三甲基-6Η-噻吩并[3,2-f]-[l， 2,4]三唑并[4,3- &][1，4]二氮杂罩-6-基]4-(4-羟苯基）乙酰胺二水合物(化合物（1-1)) 或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式； 以及可药用的聚合物，其中所述化合物(1-1)如下：
[0184]
[0185] 在一个实施方案中，可药用的聚合物为HPMCAS。在一个实施方案中，分散体中化合 物（1-1)和HPMCAS的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮 杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂 罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。 在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案 中，单一的Tg在130°C至140°C之间出现。在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约135°C出 现。在一些这样的实施方案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1个 月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的式 (1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上不 存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物（1-1)有关的衍射线。
[0186] 在另一个实施方案中，所述药物组合物包含化合物（1-1)或其可药用的盐、溶剂化 物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记形式；以及可药用的聚合物的 固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为PVP。在一个实施方案中，分散体中化合 物（1-1)和PVP的重量比为1: 3至1: 1。在一个实施方案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮杂 -草化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂章 化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在 一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃玻璃化转变温度(Tg)。在一些实施方 案中，单一的Tg在175°C至185°C之间出现。在其他这样的实施方案中，单一的Tg在约179°C 出现。在一些这样的实施方案中，固体分散体在40°C、相对湿度为75%的环境下暴露至少1 个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中，基本上不存在与结晶的 式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。就本申请的目的而言，"基本上 不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物 (1-1)有关的衍射线。
[0187] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的噻吩并三唑并二氮杂 罩化合物（1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同 位素标记形式；以及可药用的聚合物。在一个实施方案中，可药用的聚合物为HPMCAS。在一 个实施方案中，分散体中化合物（1-1)与HPMCAS的重量比为1: 3至1:1。在一个实施方案中， 至少一部分噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一个实施 方案中，噻吩并三唑并二氮杂蓽化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实施方案 中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻璃化转 变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在130°C至140°C之间出现。在其他这样的实施方 案中，单一的Tg在约135 °C出现。在一些这样的实施方案中，固体分散体在40 °C、相对湿度为 75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射图案中， 基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。就本申 请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21°2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻吩并三 唑并二氮杂罩化合物(1-1)有关的衍射线。
[0188] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含无定形形式的噻吩并三唑并二氮杂 草化合物（1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同 位素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为 PVP。在一个实施方案中，分散体中化合物（1-1)与PVP的重量比为1:3至1: 1。在一个实施方 案中，至少一部分噻吩并三唑并二氮杂章化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在另一 个实施方案中，噻吩并三唑并二氮杂罩化合物均匀地分散于整个固体分散体中。在一个实 施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。在一些实施方案中，固体分散体表现出单一拐点的玻 璃化转变温度(Tg)。在一些实施方案中，单一的Tg在175°C至185°C之间出现。在其他这样的 实施方案中，单一的Tg在约189°C出现。在一些这样的实施方案中，固体分散体在40°C、相对 湿度为75%的环境下暴露至少1个月。在一些实施方案中，在固体分散体的X射线粉末衍射 图案中，基本上不存在与结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线。 就本申请的目的而言，"基本上不存在"是指在约21° 2Θ下，在无定形晕上不存在与结晶的噻 吩并三唑并二氮杂罩化合物(1-1)有关的衍射线。
[0189] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的噻吩并三唑并二氮杂罩 化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位 素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为 HPMCAS。在一个实施方案中，分散体中化合物（1 -1)与HPMCAS的重量比为1: 3至1:1。在一个 实施方案中，固体分散体是喷雾干燥的。
[0190] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含结晶形式的噻吩并三唑并二氮杂罩 化合物(1-1)或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、对映异构体、异构体或同位 素标记形式与可药用的聚合物的固体分散体。在一个实施方案中，可药用的聚合物为PVP。 在一个实施方案中，分散体中化合物（1-1)与PVP的重量比为1:3至1:1。在一个实施方案中， 固体分散体是喷雾干燥的。
[0191] 当经口施用本发明所述的固体分散体时，其表现出特别有利的性质。当在动物或 人类的标准生物利用度试验中施用时，所述固体分散体的有利性质的例子包括但不限于一 致的且高水平的生物利用度。本发明的固体分散体可以包括含有式（1)所示的噻吩并三唑 并二氮杂章化合物、聚合物以及添加剂的固体分散体。在一些实施方案中，固体分散体可以 实现使式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章化合物吸收入血流中，而这是不可能通过仅仅 将式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与添加剂混合而获得的，这是因为式（1)所 示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物药物在水和大多数水性介质中的溶解度可忽略不计。可 以使用多种体外和/或体内研究来测量式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或者噻 吩并三唑并二氮杂草化合物(1-1)的生物利用度。体内研究可以使用例如大鼠、狗或人类来 进行。
[0192] 可以通过沿着相对于横坐标(X轴）的时间的纵坐标(Y轴），绘制式（1)所示的噻吩 并三唑并二氮杂箪合物或者噻吩并三唑并二氮杂罩化合物d-D的血清或血浆浓度，从 而获得曲线下面积(AUC)值，由此测量生物利用度。然后，将所述固体分散体中的式（1)所示 的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或者噻吩并三唑并二氮杂罩化合物（1-1)的AUC值与等价 浓度的不包含聚合物的结晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或结晶性的噻吩 并三唑并二氮杂草化合物d-D的AUC值比较。在一些实施方案中，当将所述固体分散体经 口施用给狗时，该固体分散体的曲线下面积(AUC)值选自：由静脉施用给狗的对照组合物的 相应AUC值的至少0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.8倍、1.0倍，其中所述对照组合物包含等价量的结 晶的式(I)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物。
[0193] 可以通过模拟胃环境和肠环境的pH值的体外测试来测量生物利用度。可以通过以 下方法进行测量:将式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂草化合物或噻吩并三唑并二氮杂罩 化合物（1-1)的固体分散体悬浮在pH为1.0至2.0之间的水性体外测试介质中，随后将对照 体外测试介质的pH值调节为5.0至7.0。可以在pH值调节后的最初2个小时中的任何时间来 测量无定形的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章化合物或无定形噻吩并三唑并二氮杂 '蕈化合物（1-1)的浓度。在一些实施方案中，在pH值为5.0至7.0之间的水性体外测试介质 中，与不包含聚合物的结晶的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或者结晶的噻吩 并三唑并二氮杂韋化合物d-D的浓度相比，固体分散体使无定形的式（D所示的噻吩并三 唑并二氮杂_草化合物或者无定形的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物（1-1)的浓度高至少5 倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或者至少10倍。
[0194] 在其他的实施方案中，在pH值为1.0至2.0的水性体外测试介质中，与不包含聚合 物的结晶的式(1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的浓度相比，固体分散体中无定形 的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章化合物或无定形噻吩并三唑并二氮杂罩化合物（1-1)的浓度高至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%。在一些这样的实施方案 中，固体分散体的聚合物为HPMCAS。在一些这样的实施方案中，固体分散体的聚合物为PVP。
[0195] 在其他的实施方案中，所述固体分散体中的无定形的式（1)所示的噻吩并三唑并 二氮杂罩化合物或者无定形噻吩并三唑并二氮杂罩化合物（1-1)的浓度是式（1)所示的 噻吩并三唑并二氮杂章化合物和可药用的聚合物的固体分散体中的式（1)所示的噻吩并三 唑并二氮杂罩化合物的浓度的至少40%、至少50%以上、至少60%、至少70%、至少80%，其 中所述可药用的聚合物选自以下物质组成的组中：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和丙烯 酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-三甲基铵乙基甲基丙烯酸酯氯化物共聚物，其中各固体分散体被 放置在pH值为1.0至2.0的水性体外测试介质中。在一些这样的实施方案中，固体分散体的 聚合物为HPMCAS。在一些这样的实施方案中，固体分散体的聚合物为PVP。
[0196] 在一些实施方案中，当在一定的湿度和温度下暴露一段时间时，本发明所述的固 体分散体表现出抵抗式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或噻吩并三唑并二氮杂 罩化合物（1-1)的重结晶的稳定性。在一个实施方案中，无定形的式（1)所示的噻吩并三唑 并二氮杂罩化合物或噻吩并三唑并二氮杂罩化合物（1-1)的保持无定形的浓度选自：至少 90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94%、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 % 和至少99 %。
[0197] V.剂型：
[0198] 可以用于本发明的固体分散体的合适的剂型包括但不限于胶囊、片剂、小型片剂、 珠、微囊剂(beadlet)、丸剂、小颗粒(granule)、粒剂(granulate)和粉末。可以使用例如肠 溶包衣来包裹合适的剂型。合适的包衣可以包括但不限于邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基 甲基纤维素(HPMC)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚甲基丙烯酸共聚物、或醋酸羟丙 基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。在一些实施方案中，可存在某些组合，例如，在同一样品 中，本发明的噻吩并三唑并二氮杂罩的一些分子可以成簇存在，而一些分子则以分子形式 分散于载体中。
[0199] 在一些实施方案中，本发明的固体分散体可以配制成片剂、囊片或胶囊。在一些实 施方案中，本发明的固体分散体可以配制成小型片剂或倒入口中（pour-into-mouth)的小 颗粒、或者成分(constitution)的口服粉末。在一些实施方案中，本发明的固体分散体与其 他的赋形剂（例如，抑制重结晶/沉淀的聚合物、掩味成分等）组合并分散于合适的稀释剂 中，从而提供即用型的悬浮制剂。在一些实施方案中，本发明的固体分散体可以配制用于儿 科治疗。
[0200] 在一个实施方案中，本发明的药物组合物被配制用于口服给药。在一个实施方案 中，所述的药物组合物包含根据本发明所述的多个实施方案的固体分散体，其包含:式（1) 所示的噻吩并三唑并二氮杂革化合物、或其可药用的盐、溶剂化物(包括水合物）、消旋物、 对映异构体、异构体或同位素标记的形式；以及聚合物载体。在一个实施方案中，所述的药 物组合物还包含一种或多种添加剂，例如崩解剂、润滑剂、助流剂、粘结剂和填料。
[0201] 用于所述的药物组合物含义合适的可药用的润滑剂和可药用的助流剂的实例包 括但不限于胶态氧化硅、三硅酸镁、淀粉、滑石、三碱式磷酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸 钙、碳酸镁、氧化镁、聚乙二醇、粉末状纤维素、甘油二十二烷酸酯、硬脂酸、氢化蓖麻油、单 硬脂酸甘油酯和硬脂酰富马酸钠。
[0202] 用于所述的药物组合物的合适的可药用的粘结剂的实例包括但不限于:淀粉、纤 维素及其衍生物，例如微晶纤维素(例如AVICELPH，得自FMC公司）、羟丙基纤维素、羟乙基纤 维素和羟丙基甲基纤维素(HPMC，例如METH0CEL，得自Dow Chemical公司）；蔗糖、右旋糖、玉 米糖浆;多糖和明胶。
[0203] 用于所述的药物组合物的合适的可药用的填料和可药用的稀释剂的实例包括但 不限于:糖果制造商的糖、可压缩糖、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纤维 素(MCC)、粉末状纤维素、山梨醇、蔗糖和滑石。
[0204] 在一些实施方案中，在所述的药物组合物中，赋形剂可以发挥多于一种的功能。例 如，填料或粘结剂还可以为崩解剂、助流剂、抗粘附剂、润滑剂、甜味剂等。
[0205] 在一些实施方案中，本发明的药物组合物可以还包含添加剂或配料，例如抗氧化 剂(例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA )、二丁基化羟基甲苯(BHT )、α-生育酚、 丙基没食子酸盐和富马酸）、抗微生物剂、酶抑制剂、稳定剂(例如丙二酸)和/或防腐剂。
[0206] 通常，本发明的药物组合物可以配制成任何合适的固体剂型。在一些实施方案中， 本发明的固体分散体混合在单位剂型中，例如作为胶囊或片剂、或者多微粒系统(例如小颗 粒或粒剂、或者粉末），以用于给药。
[0207] 在一个实施方案中，药物组合物包含:根据本发明所述的固体分散体的多个实施 方案的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章化合物和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯 (HPMCAS)的固体分散体，其中所述噻吩并三唑并二氮杂罩化合物在固体分散体中是无定 形的，并且噻吩并三唑并二氮杂罩化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)的重 量比为1:3至1:1 ;45重量％至50重量％的乳糖一水合物;35重量％至40重量％的微晶纤维 素;4重量％至6重量％的交联羧甲基纤维素钠;0.8重量％至1.5重量％的胶体二氧化硅;和 0.8重量％至1.5重量％硬脂酸镁。
[0208] VI.剂量：
[0209] 在一个实施方案中，本发明提供了可以配制成任何合适的固体剂型的药物组合 物。在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物包含本发明所述式（1)所示的噻吩并三唑 并二氮杂罩化合物的多种实施方案中的一种或多种，其中所述式（1)所示的噻吩并三唑并 二氮杂罩的剂量为约IOmg至约100mg。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含本发 明所述式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂草的多种实施方案中的一种或多种，其中所述式 (1)所示的噻吩并三唑并二氮杂章的剂量选自由如下剂量组成的组：约IOmg至约100mg、约 IOmg至约90mg、约IOmg至约80mg、约IOmg至约70mg、约IOmg至约60mg、约IOmg至约50mg、约 IOmg至约40mg、约IOmg至约30mg和约IOmg至约20mg。在一个实施方案中，本发明的药物组合 物包含本发明所述式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩的多种实施方案中的一种或多种， 其中所述式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩的剂量选自由约1 〇 m g、约5 0 m g、约7 5 m g、约 IOOmg构成的组。
[0210] 在一些实施方案中，本发明的方法包括向有需要的受试者施用本发明所述多种实 施方案中的一种或多种的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮杂草，其剂量选自由如下剂量组 成的组：约 lmg、约2mg、约2 · 5mg、约3mg、约 4mg、约5mg、约7 · 5mg、约 10mg、约 15mg、约20mg、约 25mg、约 30mg、约 35mg、约40mg、约45mg、约 50mg、约 5 5mg、约 60mg、约 65mg、约 70mg、约 75mg、约 80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约 IOOmg、约 11Omg、约 120mg、约 130mg、约 140mg和约 150mg;其 剂型选自由以下组成的组:每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每三天一次、 每隔一天一次、每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次。在另一个实施方案中， 任意前述剂量或剂型可以定期减少或增加。
[0211] 在一些实施方案中，本发明的方法包括向有需要的受试者施用选自由以下化合物 构成的组中的噻吩并三唑并二氮杂草:化合物（1-1)、（1-2)、（1-3)、（1-4)、（1-5)、（1-6)、 (1-7)、（1-8)、（1-9)、（1-10)、（1-11)、（1-12)、（1-13)、（1-14)、（1-15)、（1-16)、（1-17)和 (1-18);所述噻吩并三唑并二氮杂罩的施用剂量选自由以下剂量构成的组:约Img、约2mg、 约2·5mg、约3mg、约4mg、约5mg、约7·5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、 约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70 mg、约75mg、约80mg、约85mg、约 90mg、约95mg、约IOOmg、约11Omg、约120mg、约130mg、约140mg和约150mg;其剂型选自由以下 组成的组:每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每三天一次、每隔一天一次、每 天一次、每天两次、每天三次、每天四次以及每天五次。在另一个实施方案中，任意前述剂量 或剂型可以定期减少或增加。
[0212] 根据特定的治疗目的、治疗阶段等，所述单位剂型适合每日给药1至5次。在一个实 施方案中，有需要的受试者可以至少连续两天每日至少1次施用该剂型。在一个实施方案 中，有需要的受试者可以至少隔日并每日至少1次施用该剂型。在一个实施方案中，有需要 的受试者可以至少每周施用该剂型，并且将该剂型分成相等的和/或不等的剂量。在一个实 施方案中，有需要的受试者可以每周施用该剂型，每隔3天和/或每周6次施用。在一个实施 方案中，有需要的受试者可以每隔1天、每3天、每4天、每5天、每6天和/或每周以分剂量施用 该剂型。在一个实施方案中，有需要的受试者可以每个月服用该剂型的2个或多个等分剂量 或非等分剂量。
[0213] 可以使用例如肠溶包衣来包裹所用的剂型（例如胶囊、片剂、小型片剂、珠、微囊 剂、丸剂、小颗粒、粒剂或粉末）。合适的包衣可以包括但不限于邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟 丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚甲基丙烯酸共聚物、或醋酸羟 丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。
[0214] VII.工艺：
[0215] 本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物可以以游离碱或酸加成盐的形式 存在，其可以根据美国专利申请公开No. 2010/0286127(其全部内容以引用方式并入本文或 本申请中）中所述的工序来获得。本发明的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物的各对映异构体 和非对映异构体可以由包含不对称中心或立体异构中心的市售可得的起始材料以合成方 式制备，或者通过制备外消旋的混合物、然后通过本领域普通技术人员公知的拆分方法来 制备。这些拆分方法例如有：（1)使对映异构体的混合物附着在手性助剂上，通过重结晶或 色谱法分离所得的非对映异构体的混合物，并从助剂上释放光学纯产物；（2)使用光学活 性拆分剂形成盐；（3)在手性液相色谱柱上直接分离光学对映异构体的混合物;或者(4)使 用立体选择性化学试剂或酶试剂进行动力学拆分。此外，外消旋的混合物还可以通过公知 的方法(例如手性相色谱法或使化合物在手性溶剂中结晶）而拆分成它们的构成成分的对 映异构体。
[0216] 如果需要，本发明所公开的噻吩并三唑并二氮杂草化合物的特定对映异构体可以 通过不对称合成或者通过使用手性助剂诱导来制备，其中所得的非对映异构体的混合物被 分离并且辅助基团被切割，从而提供所需的纯的对映异构体。可选地，在所述分子包含碱性 官能团（例如氨基)或酸性官能团（例如羧基）的情况下，非对映异构体的盐是通过以下过程 形成的:使用合适的光学活性的酸或碱，然后对非对映异构体(通过本领域公知的分级结晶 或色谱手段而由此形成)进行拆分，并在随后回收纯的对映异构体。可使用本领域公知的多 种方法来制备式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物，其中对映异构体的过量百分比通常 超过约80%。有利的是，优选的对映异构体的过量百分比大于80%，优选大于90%，更优选 大于95%，并且最优选为99%以上。
[0217] 本发明的固体分散体可以通过多种方法来制备，包括熔融和溶剂蒸发方法。本发 明的固体分散体还可以根据如下文中所描述的工序制备：Chiou WL，Riegelman S: "Pharmaceutical applications of solid dispersion systems"，J.Pharm.Sci.1971; 60:1281-1302；Serajuddin ATM:uSolid dispersion of poorly water-soluble drugs: early promises,subsequent problems,and recentbreakthroughs，：，,J.Pharm.Sci . 1999； 88:1058-1066;Leuner C,Dressman J:"Improving drug solubility for oral delivery using solid dispersions"，Eur · J · Pharm · Biopharm · 2000; 50:47-60;以及Vasconce I os T,Sarmento B, Costa P: "Solid dispersions as strategy to improve oral bioavailability of poor water soluble drugs'，，Drug Discovery Today 2007;12: 1068-1075，所有这些文献均以引用的方式将其全文并入本文中D
[0218] 在一个实施方案中，本发明的固体分散体是通过熔融工艺制备的。在一个实施方 案中，熔融工艺包括在载体中将式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩的多个实施方案的一个或 多个熔融。在一个实施方案中，熔融工艺包括使本发明的熔融化合物和载体冷却。在一个实 施方案中，熔融工艺包括将熔融的化合物和载体粉碎。在一个实施方案中，在冷却步骤之后 将本发明的熔融的化合物和载体粉碎。
[0219] 在一些实施方案中，式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩或者其药学可接受的盐、溶剂 化物(包括水合物）、外消旋物、对映异构体、异构体或同位素标记的形式与载体间不相容， 在这种情况中，可以在熔融步骤中加入表面活性剂，从而防止在加热的混合物中形成两个 液相或悬液。在一些实施方案中，式(1)的噻吩并三唑并二氮杂罩的多个实施方案中的一个 或多个实施方案悬浮于之前熔融的载体中，而并未使用熔融状态的药品和载体，由此降低 了工艺的温度。在一个实施方案中，在冰浴搅拌下使熔融的药品和载体的混合物冷却。在一 个实施方案中，通过喷雾冷却(可选的通过喷雾冷凝)使熔融的药品和载体混合物冷却并固 化。
[0220] 在一个实施方案中，通过将熔融物喷雾至冷却室(使环境温度或冷却温度的低温 空气通过该冷却室）中以将熔融物形成颗粒，从而使熔融的药品和载体的混合物冷却或固 化。在一个实施方案中，通过在合适的流化床处理器中使熔融分散体雾化和再固化，从而使 熔融的药品和载体混合物冷却和固化。在一个实施方案中，通过在可加热的高剪切混合器 中进行熔融制粒，从而使熔融的药品和载体的混合物冷却并固化。
[0221] 在一些实施方案中，可以采用热阶段挤出（hot-stage extrusion)或恪融团聚物 来避免药物的熔融局限。热阶段挤出包括如下过程:在熔融温度下将预先混合的药品和载 体以高转速在短时间内挤出;在室温下冷却后收集所得的产物并研磨。
[0222] 在一个实施方案中，将式（1)的噻吩并三唑并二氮杂革的多个实施方案中的一个 或多个实施方案在较低的温度下加工，从而避免任何热不稳定的化合物发生降解。在一个 实施方案中，通过将热阶段挤出与暂时性增塑剂(例如二氧化碳)结合而实现较低的处理 温度。在一个实施方案中，在根据本发明的固体分散体的制备中，在常规的高剪切混合器或 旋转处理器中使用了熔融团聚物。在一个实施方案中，通过将包含根据本发明的噻吩并三 唑并二氮杂罩化合物的熔融载体加入至加热的赋形剂中，从而制备根据本发明的固体分散 体。在一个实施方案中，通过将包含根据本发明的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物、载体和一 种或多种赋形剂的混合物加热至载体的熔融范围内或以上的温度，从而制备根据本发明的 固体分散体。
[0223] 在一些实施方案中，通过溶剂蒸发方法来制备根据式（1)的噻吩并三唑并二氮杂 罩的制剂的多个实施方案中的一个或多个实施方案。在一个实施方案中，溶剂蒸发方法包 括使根据式（1)的噻吩并三唑并二氮杂草和载体溶解于挥发性溶剂中，然后使挥发性溶剂 蒸发。在一个实施方案中，挥发性溶剂可以为一种或多种赋形剂。在一个实施方案中，一种 或多种赋形剂包括但不限于抗粘剂、惰性填料、表面润湿剂、PH调节剂和添加剂。在一个实 施方案中，赋形剂可以溶解于挥发性溶剂中，或者在挥发性溶剂中呈悬浮或膨胀状态。
[0224] 在一个实施方案中，根据本发明的固体分散体的制备包括使悬浮于挥发性溶剂中 的一种或多种赋形剂干燥。在一个实施方案中，所述的干燥包括真空干燥、使挥发性溶剂在 低温下缓慢蒸发、使用旋转蒸发仪、喷雾干燥、喷雾制粒、冷冻干燥或使用超临界流体。
[0225] 在一个实施方案中，使用了喷雾干燥制备根据式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩组 合物的制剂，其包括使所述的组合物的悬液或溶液雾化成小滴，然后快速除去制剂中的溶 剂。在一个实施方案中，根据本发明的制剂的制备涉及喷雾制粒，其中将位于溶液中的组合 物的溶液或悬液喷雾至合适的化学惰性和/或物理惰性填料上，例如乳糖或甘露醇。在一个 实施方案中，通过双通或三通喷嘴对所述的组合物的溶液或悬液进行喷雾制粒。
[0226] 在一些实施方案中，根据本发明的固体分散体的制备包括使用超临界流体。术语 "超临界流体"是指在临界温度和临界压力以上以单一液相存在的物质。在一个实施方案 中，根据本发明的制剂的制备包括使用超临界二氧化碳流体。在一个实施方案中，利用超 临界流体技术制备根据本发明的制剂，其包括:将根据式(1)的噻吩并三唑并二氮杂章组合 物和载体溶解于常见溶剂中，该溶剂通过喷嘴与二氧化碳同时被引入至颗粒形成容器中； 以及将所述溶液喷雾，从而使溶剂被超临界流体快速萃取，由此使得固体分散体颗粒沉淀 在容器的壁上。
[0227] 在一些实施方案中，根据本发明的固体分散体的制备包括使用共沉淀方法。在一 个实施方案中，在持续搅拌下将非溶剂滴加至根据式（1)的噻吩并三唑并二氮杂章组合物 和载体溶液中。在一个实施方案中，在添加非溶剂的过程中，使根据式（1)的噻吩并三唑并 二氮杂章组合物和载体进行共沉淀，从而形成微颗粒。在一个实施方案中，过滤并干燥所得 的微颗粒，从而提供所需的固体分散体。
[0228] 对于式（1)的化合物与聚合物载体(一种或多种）的混合比例没有特别限定，只要 其可以改善式(1)的化合物的生物利用率即可，并且该比例根据聚合物的种类而改变。
[0229] 通过以下非限定性实施例来说明本发明。
[0230] VIII.例子：
[0231 ]通过以下非限定性实施例来说明本发明。
[0232] 实施例1:化合物(1-1)的固体分散体的体外筛选
[0233] 使用化合物（1-1)以及五种聚合物中的一种来制备十种固体分散体，其中所述聚 合物包括醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS-M)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯 (HPMCP-HP55)、聚乙烯吡咯烷酮（PVP)、PVP-乙酸乙烯酯（PVP-VA)和Eudragi t L100-55,并 且对于每种聚合物，化合物（1-1)的负载率为25%和50%。使用喷雾干燥，然后在低温对流 烘箱中进行二次干燥，从而通过溶剂蒸发法来制备固体分散体。通过非沉降溶解性能测试 (non-sink dissolution performance test)来评估各固体分散体的性能，所述测试测量 药物的总量和随着时间溶液中所存在的游离药物的量。选择非沉降溶解是由于其能够最好 地代表低溶解度化合物在体内的情况。该测试包括在分散体被引入至测试介质后约30分钟 至40分钟，分散体由胃？!1(0.謂恥(：1，？!11.0)至肠?!1卬 &?33正，？!16.5)的"胃转移"，从而 模拟了体内的情况。[FaFSSIF为禁食状态的人工肠液，其由3mM的牛黄胆酸钠、0.75mM的卵 磷脂、0.174g NaOH颗粒、1.977g NaH2PO4 ·Η20、3.0938 NaCl和适量纯净水500mL组成]。使 用高效液相色谱(HPLC)法和AgiIent 1100串联HPLC来定量溶解药物的量。制剂的溶解情况 (图1A-1J)表明：相对于在相同介质中的未经配制的化合物而言，在所有的分散体候选物 中，药物的溶解度均大幅升高。在所有的固体分散体中，基于在肠 pH下释放的游离药物的水 平较高这一发现可知，与未经配制的化合物相比，25 %化合物（1-1)在PVP中的分散体、25 % 化合物（I-1)在HPMCAS-M中的分散体、以及50 %化合物（1-1)在HPMCAS-M中的分散体提供了 增强的经口吸收。
[0234] 实施例2:化合物(I -1)的固体分散体的体内筛选
[0235] 以更大的规模制备化合物（1-1)的固体分散体，即25%化合物（1-1)在PVP中的分 散体、25 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散体、以及50 %化合物（I -1)在HPMCAS-M中的分 散体，以用于体内研究。各制剂均经过了实施例1所述的体外溶解测试的评估。为了确保这 些分散体是无定形且均质的，通过X射线粉末衍射法（PXRD)和修正的差示扫描量热法 (mDSC)来评估各分散体。X射线衍射计为Bruker D-2Phaser。另外，为了了解水对各种分散 体的玻璃化转变温度(Tg)的影响，对首先在设定的相对湿度（即，25 %、50 %和75 %RH)下平 衡至少18小时的样品进行mDSC。[水可以用作固体分散体的增塑剂，并且由活性化合物或聚 合物导致的体系的吸湿性可以影响被这些体系吸收的水的量]。
[0236]非沉降溶解结果（图2A-2C)与实施例1中分散体的结果相当。PXRD结果（图3)显示 没有证据表明任意一种分散体中存在结晶化合物，并且mDSC结果（图4A-4C)显示各分散体 均存在单一的玻璃化转变温度(Tg )，这表明各分散体是均匀的。对于各分散体，观察到Tg与 相对湿度之间逆相关(M)。值得注意的是，对于在75%冊下平衡的 25%化合物（卜1)在pVp 中的固体分散体，出现了两个Tg，这表明发生了相分离，并且该分散体还显示出在75%RH 下发生了熔化，这表明在RH平衡过程中发生了结晶(_)。该发现表明25%化合物（1-1)在 PVP中的分散体的稳定性弱于HPMCAS-M分散体。
[0237] 为了评估这三种分散体的生物利用度，向多组雄性猎兔犬(每组3只）给予剂量为 3mg/kg的化合物（1-1)的固体分散体的水性悬液(通过口服填喂法给药），或者给予剂量为 3mg/kg的溶解于水：乙醇:聚乙二醇(PEG) 400 (60: 20: 20)中的化合物（I -1)(并以静脉推注 给药至头静脉中）。在静脉给药后的0分钟(服药之前）、5分钟、15分钟和30分钟、和1小时、2 小时、4小时、8小时、12小时和24小时，以及在口服填喂给药后的0分钟(服药之前）、15分钟 和30分钟、和1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时由各动物的颈静脉收集血液样 品。使用合格的LC-MS/MS法检测各样品中存在的化合物（1-1)的量，并且量化下限为0.5ng/ mL。通过使用线性梯形法则(直至最终可测的浓度，而未将终末消除相外推至无穷大)来测 定血浆浓度-时间曲线的曲线下面积(AUC)。通过对对数浓度-时间曲线的终末线性部分进 行最小二乘回归分析来计算消除半衰期（t 1/2)。由血浆浓度数据直接得到最大血浆浓度 (Cmax)和达到Cmax的时间（U ax)。通过用口服给药后的剂量归一化的AUC除以静脉给药后的剂 量归一化的AUC来计算口服生物利用度(F)，并以百分数（％)形式报告。下表1中总结的结果 给出了 2 5 %化合物（1 -1)在PVP中的固体分散体、2 5 %化合物（1 -1)在HPMCAS-M中的固体分 散体和50%化合物（I-1)在HPMCAS-M中的固体分散体的平均口服生物利用度，分别为58%、 49 % 和 74 %。
[0238] 表1:狗口服(Po)和静脉(iv)给药后的化合物（1-1)的药物动力学参数(数值为3只 狗的平均值）
[0240] AUC:血浆浓度-时间曲线下的面积;Cmax :最大血浆浓度;F:生物利用度;HPMCAS:醋 酸羟丙基甲基纤维素钠；IV:静脉内；PEG:聚乙二醇;PO:经口，口服;PVP:聚乙烯吡咯烷酮； tmax:达到Cmax的时间；t1/2:血浆消除半衰期
[0241] 实施例3:包含化合物(1-1)的固体分散体的胶囊的制备和临床应用
[0242] 制备IOmg强度的明胶胶囊，在患有恶性血液病的患者中进行初步的临床研究。基 于实施例1和2中所述的化合物（1-1)的固体分散体的体外和体内测试结果，选择50%化合 物（I -1)在HPMCAS-M中的固体分散体用于胶囊的研发。以3号尺寸的硬明胶胶囊，190mg的填 充量为目标来开始胶囊的研发，因为这样的构造可以通过填充更大尺寸的胶囊而潜在地增 加胶囊的强度，同时保持药物组合物。根据经验，设计了 4种胶囊制剂，其中具有不同量的崩 解剂并且具有或不具有润湿剂。由于所有4种制剂都显示出相似的崩解测试和溶解测试结 果，所以选择最简单的制剂(不具有润湿剂，并具有最少量的崩解剂)用于制造。进行制造工 艺的研发和规模扩大的研究，以确定固体分散体的喷雾干燥工艺和干燥后的时间；共混的 参数;为获得约〇. 60g/cc的目标堆密度的共混物的辊压和研磨；以及胶囊填充的条件。
[0243] 将结晶化合物（1-1)和聚合物醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS-M)溶解于 丙酮中，并喷雾干燥，从而生产包含50%化合物（1-1)载量的固体分散体中间体（SDI)颗 粒。PXRD分析显示SDI是无定形的，mDSC分析显示SDI是均匀的（即在环境条件下具有单一的 Tg)。在V型搅拌机的多个段中将50%化合物（1-1)在HPMCAS-M中的固体分散体(1000 g)和赋 形剂(包括微晶纤维素填料-粘结剂(4428g)、交联羧甲基纤维素钠崩解剂(636g)、胶体二氧 化硅分散剂/润滑剂（156g)、硬脂酸镁分散剂/润滑剂（156g)和乳糖一水合物填料(5364g)) 共混。然后将混合物压制并制粒，从而得到约〇.6g/mL的堆密度。使用自动化的填充机将混 合物分配至3号尺寸的硬明胶胶囊（目标填充量：190mg)中，并使用胶囊抛光机将制得的胶 囊抛光。
[0244] 在口服给药IOmg胶囊(包含50%化合物（1-1)在HPMCAS中的固体分散体)后进行药 物动力学的评估，并将结果与对健康志愿者口服给药4x IOmg胶囊(其包含化合物（1-1)的 Eudragit固体分散体)后进行的药物动力学评估加以对比。
[0245] 在下表2A和2B中提供了这两种药物组合物的比较。之前的Eudragit制剂在2009年 1月8日公开的美国专利申请2009/0012064A1中的实施例5中有所描述。该申请记载:通过在 水和乙醇的混合物中溶解和/或分散式(A)所示的噻吩并三唑并二氮杂罩和包裹用赋形剂 (包含氨溶甲基丙稀酸酯共聚物B型（Eudragit RS)、甲基丙稀酸共聚物C型（Eudragit L100-55)、滑石和硅酸铝镁)来制备Eudragit固体分散体制剂。然后，使用离心流化床制粒 机将上述的非均勾混合物施加在微晶纤维素球(Nonpareil 101，Freund)上，从而生产分配 至2号尺寸的羟丙基甲基纤维素胶囊中的颗粒。
[0246] 在这两个临床研究中，使用经验证的LC-MS/MS方法来测定化合物（1-1)的血液水 平，并根据在胶囊给药后24小时内各时间点测量的化合物（1-1)的血浆浓度来进行药物动 力学分析。下表3中总结的结果显示，根据AUC(924*4/1140,由于给药剂量的差异而改变）， HPMCAS-M固体分散体制剂在人中的生物利用度比Eudrag i t固体分散体制剂高3倍以上。此 外，根据观察到的Tmax，HPMCAS制剂的吸收速度快于Eudragit制剂（T maxS 1小时vs 4-6小 时）^PMCAS-M固体分散体制剂的在系统暴露方面的明显改善是意料之外的。
[0247] 表2A:用于临床应用的化合物(1-1)的固体分散体胶囊
[0248] 包含化合物（1 -1)的50 %HPMCAS固体分散体的药物组合物：IOmg强度，3号尺寸的 硬明胶胶囊
[0250] 表2B:包含化合物（1-1)的Eudragit L100-55固体分散体的药物组合物：IOmg强 度，2号尺寸的硬明胶胶囊
[0252] *为无水形式
[0253] 表3:在将化合物(1-1)的固体分散体经口施用给人后的药物动力学参数
[0255] AUCo-24h:24小时内0TX015血浆浓度对时间曲线下的面积
[0256] Cmax:最大血浆浓度
[0257] hr:小时
[0258] HPMCAS:醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯
[0259] mL:毫升
[0260] ng:纳克
[0261] PO:经口，口服
[0262] Tmax :达到Cmax的时间
[0263] 实施例4:在大鼠中的口服暴露
[0264] 在大鼠中测定化合物（1-1)的固体分散体的3种制剂的口服生物利用度。所选的3 种分散体为25 %化合物（I -1)在PVP中的分散体、25 %化合物（I -1)在HPMCAS-MG中的分散体 和50 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散体。在该研究中使用的动物为得自土尔库大学 (芬兰）的中央动物实验室（Central Animal Laboratory)的无特定病体（SPF)的Hsd: Sprague Dawley大鼠。大鼠最初购自位于荷兰的Harlan。大鼠为雌性，并且为10周龄，12只 大鼠用于该研究中。在聚碳酸酯Makro I on II笼中饲养动物(每个笼中3只），动物室温为21 +/-3°C，动物室内的相对湿度为55+/-15%，并且动物室内照明为人工照明，而且为12小时 明暗周期的循环(暗周期为18:00至06:00之间）。白杨木肩（Tapvei Oy ,Estonia)用于垫料， 并且每周至少更换1次垫料。在对动物定量给药之前提供食物和水，但是在定量给药后最初 的2个小时中移除食物和水。
[0265] 将预先计算的量的注射用无菌水加入至装有采用合适的量的分散体的容器中， 获得化合物（1-1)的浓度为〇.7511^/1^，由此制备包含25%化合物（1-1)在?￥?中的分散体的 口服定量给药溶液、包含25 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的口服定量给药溶液和 包含50 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的口服定量给药溶液。在每次给药之前，将 口服定量给药溶液进行涡旋混合20秒。用于静脉给药的定量给药溶液包含0.25mg/mL的化 合物（1-1)，该定量给药溶液是通过将5mg的化合物（1-1)溶解于这样的混合物中来制备的， 所述混合物包含4mL的平均分子量为400Da的聚乙二醇(PEG400)、4mL的乙醇（96 %纯度）和 12mL的注射用无菌水。在加入水后的30分钟之内使用含有25%化合物（Η)在PVP中的分散 体的定量给药溶液。在加入水后的60分钟之内使用含有25 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的 分散体的定量给药溶液和含有50%化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散体的定量给药溶液。 使用4mL/kg定量给药量，从而使化合物（1-1)的静脉给药的给药水平为lmg/kg，口服给药的 给药水平为3mg/kg。定量给药方案在表4中给出。
[0266] 表4.用于大鼠口服暴露研究的定量给药方案
[0268] 在定量给药后的0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时 的时间点，将约50yL的血液样品收集至包含5yL乙二胺四乙酸(EDTA)溶液的Eppendorf管 中，并且每个样品都是在距所述时间点5分钟时间窗内收集的。由各样品获得20yL血浆并储 存在干冰温度下以用于分析。使用经验证的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法对各样品中化 合物（1-1)的浓度进行分析，其定量下限为〇. 5ng/mL。
[0269] 使用Phoenix WinNonlin软件包（6.2.1版，Pharsight Corp公司，CA,USA)，米用标 准的非房室模型方法来计算药物动力学参数。通过对对数浓度-时间曲线的终末线性部分 进行最小二乘回归分析来计算消除半衰期（t 1/2)。通过使用线性梯形法则直至最终可测的 浓度，此后将终末消除相外推至无穷大来测定血浆浓度-时间曲线的曲线下面积(AUC)。通 过将药物浓度曲线外推至无穷大来计算平均保留时间(MRT)，其代表了化合物在房室或系 统中保留的平均时间量。由血浆浓度数据直接得到最大血浆浓度(C max)和达到Cmax的时间 (tmax)。通过用口服给药后的剂量归一化的AUC除以静脉给药后的剂量归一化的AUC来计算 试验性口服生物利用度(F)，即F=(AUC(口服)/剂量（口服））/(AUC(静脉)/剂量(静脉））]， 并以百分数（％ )形式报告。
[0270] 药物动力学参数在表5中给出，血浆浓度对时间的图示于图7和8中。
[0271] 表5. 口服和静脉给药后的化合物（1-1)的药物动力学参数。值为得自3只动物的平 均值。
[0273] 实施例5.喷雾干燥分散体的制备
[0274]使用五种所选的聚合物来制备化合物（1-1)的喷雾干燥的分散体，这5种聚合物 为：HPMCAS-MG(Shin Etsu Chemical公司）、HPMCP-HP55(Shin Etsu Chemical公司）、PVP (ISP，Ashland公司的部门）、PVP_VA(BASF公司）和Eudragit L100_55(Evonik Industries AG)。使用每种聚合物以25 %和50 %制备所有的喷雾干燥溶液。除了 PVP溶液以外，所有的溶 液都是在丙酮中制备的，PVP溶液是在乙醇中制备的。对于各溶液而目，在IOg溶剂中制备 1.0 g固体(聚合物和化合物（1-1))。使用具有1.5mm喷嘴的Biichi B-290，PE-024喷雾干燥器 和Biichi B-295，P-002冷凝器将溶液喷雾干燥。将喷雾干燥器的喷嘴压力设定为80psi，目 标出口温度设定为40°C，冷却器的温度设定至_20°C，栗速设定为100%，并且抽吸器设定为 100%。在喷雾干燥后，收集固体分散体，并在低温对流烘箱中过夜干燥，从而除去残余的溶 剂。
[0275] 实施例6:湿度和温度的稳定性
[0277] 通过在高温下暴露于水分来评估化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的喷雾干燥分散体 的稳定性。通过在75%相对湿度和40°C下放置1、2和3个月，来测定作为相对湿度的函数的 玻璃化转变温度(Tg)。在HDPE瓶中将喷雾干燥的分散体储存在LDPE袋内，从而模拟散装物 品包装。结果总结于表6中。在时间0时，Tg为134°C，在1个月时Tg为134°C，在2个月时Tg为 135°C，在3个月时Tg为134°C，并且在各测量中仅观测到单一的拐点。对每种样品还获得了 X 射线衍射图谱。图9示出了在稳定性测试的时间0时，化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的固体分 散体的X射线粉末衍射图谱。图1〇、11和12示出了分别在暴露于40°C和75%相对湿度1个月、 2个月和3个月后，化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的固体分散体的X射线粉末衍射图谱。图案未 显示与化合物(1-1)有关的任何衍射线。
[0278] 实施例7:化合物（1-1)作为单试剂以及与标准化疗药物联合使用对人类白血病细 胞系的效果的体外评价
[0279] 材料和方法：
[0280]用剂量增加的化合物（1-1)处理来自急性和慢性急性骨髓性白血病(AML，即HL-60 和U-937 ; CML，即K-562和NALM-I)和急性淋巴细胞性白血病（ALL，即Jurkat、CCRF-CEM、 M0LT-3和-4)的8种已建立的人细胞系。暴露72小时后进行MTT检验。利用市售抗体通过通过 Western Blot分析蛋白质水平。用Qiagen RNAEasy试剂盒提取RNA，并在StepOnePlus实时 PCR系统中利用Fast SYBRGreen进行RT-PCR。在4种细胞系(HL60、U937、Jurkat和K562)中评 价组合效果;化合物（1-1)与道诺霉素、氮杂胞苷、地塞米松、阿糖孢苷或甲氨蝶呤一起施 用。利用CalcuSyn软件通过中效图（median effect plot)分析确定48小时联合指数(Cl)， 以在细胞系中CI的中值和范围（Chou&Talalay analysis)表示。CICl表示协同作用;CI = I 表不累加作用；以及CI>1表不诘抗作用。
[0281] 结果：
[0282] 在一组AMUALL和CML细胞系中评价单试剂化合物（1-1)的的抗增殖效果，HL60、 U937和Jurkat在暴露72小时后GI50值在230nm和384nm之间，而剩余细胞系的GI50彡1， OOOnM。化合物（1-1)敏感和耐受的细胞均示出8^)4/3/2、(：-1^(：、8(^-2、？21和细胞周期蛋白 Dl蛋白质基础表达水平类似。在敏感性细胞系中，化合物（1-1)以时间依赖的方式导致细胞 周期停止在Gl期，而不会诱导细胞凋亡。类似地，在用500nM化合物（1-1)处理6小时和至多 72小时后，cMYC mRNA和蛋白质水平下调。在Jurkat细胞中，化合物（1-1)诱导BRD2和BRD4的 mRNA水平的上调而不改变蛋白质水平。另一方面，化合物（1-1)-耐受性细胞系K562在暴露4 小时和24小时后示出c-MYC RNA水平的降低，而cMYC蛋白质水平即使在处理72小时后依然 恒定。在化合物（1-1)敏感和耐受的细胞系中观察到化合物（1-1)与道诺霉素的协同作用 (CI = 0.8; 0.4-0.9)。化合物（1 -1)与氮杂胞苷或阿糖孢苷的联合是协同性的（分别为CI = 0.6; 0.6-0.7和CI = 0.8; 0.4-0.9)，尽管Jurkat和K562细胞系对这些药物中单独任一者具 有原发耐药性。甲氨蝶呤、地塞米松和帕比司他(广谱HDAC抑制剂)与化合物(1-1) 一起在四 种细胞系中的三者中示出了协同效应(Cl = 0.5; 0.2-0.9; CI = 0.3; 0.1-0.7和CI = 0.6; 0.5-0.7)〇
[0283] 实施例8:化合物（1-1)作为单试剂以及与标准化疗药物联合使用对人类白血病细 胞系的效果的体外评价
[0284] 将来自急性(HL60、U937)、慢性(K562)骨髓性白血病以及急性淋巴细胞性白血病 (Jurkat)的四种已建立的人细胞系用剂量增加的化合物（1-1)处理。暴露72小时后进行MTT 检验。利用Pr ism 5. OO通过S形剂量应答的等式来计算Gl5〇和Emax值。结果表示三次进行的 至少3个独立试验的平均值±95%(：ΙΧΙ50值<500nM的细胞系被认为是对化合物（1-1)敏感 的。利用市售抗体通过通过Western Blot分析蛋白质水平。对于细胞周期分析和细胞凋亡 诱导，细胞分别用PI或Annex in V分别染色，并用FACScan流式细胞仪进行分析。在 StepOnePlus实时PCR系统中利用Fast SYBR Green Master Mix进行 RT-PCR。米用Anova之 后采用Dunnett ' s多重比较检验，细胞周期、细胞凋亡诱导和qRT-PCR结果是至少3个独立试 验的平均值土 SD，其中邙〈0.05、*吨〈0.001和#吨〈0.0001相对于对照细胞(0.1%0150)。在 细胞系中进行化合物（1-1)联合研究，所述细胞系单独暴露于增加剂量的化合物（1-1)48小 时或暴露于增加剂量的化合物（1-1)与若干常规抗白血病药物（如表观遗传调节剂、类固 醇、m-TOR抑制剂和典型的细胞毒性剂）的联合48小时，并利用Chou&Talalay方法评价。对于 连续的联合方案，细胞系暴露于氮杂胞苷或帕比司他48小时或72小时，用不含药物的培养 液洗涤，然后用化合物（1-1)处理24小时或48小时。利用CalcuSyn软件通过中效图（median effectplot)分析确定联合指数(Cl) <ΧΙ<1表示协同作用;CI = I表示累加作用；以及CI>1 表示拮抗作用。结果表示三次进行的4个独立试验的中值和范围。
[0285] 通常，化合物（1-1)在白血病细胞系中示出体外的抗增殖作用、在亚微摩尔范围伴 随细胞周期停止在Gl期的发生。化合物（1-1)增强了标准抗白血病试剂的体外抗增殖作用， 这为作为临床研发计划中前景良好的联合疗法提供了支持。如图13所示，在三种具有不同 致癌突变的化合物（1-1)敏感的细胞系(HL60、U937和Jurkat)以及一种耐受细胞系(K562) 中，化合物（1-1)以在体内可实现的浓度诱导了抗增殖作用。在图14中，在化合物（1-1)敏感 的白血病细胞暴露于500nM化合物（1-1 )48小时后，化合物（1-1)提高了处于细胞周期G0/G1 的比例并且略微诱导细胞凋亡。
[0286] 在图15A至15F中，在化合物（1-1)敏感的细胞系中，化合物（1-1)诱导c-MYC mRNA 和蛋白质快速持续的下调。在图16A至16G中，示出了化合物（1-1)的抗增殖活性不与BRD2/ 3/4、c-MYC、BCL2或P2ImRNA或蛋白质表达的基础水平直接相关。在图17A和17B中，在OTXO15 敏感和耐受的白血病细胞系中，化合物（1-1)在与去甲基化试剂、HDAC和mTOR抑制剂、糖皮 质激素以及常规的细胞毒性药物联合时示出了强的协同效应。
[0287] 本领域技术人员应该理解的是，在不脱离本发明的宽泛的发明构思的条件下可 以对上文所示的并描述的示例性实施方案进行修改。因此，应该理解的是本发明不限于所 示的并描述的示例性实施方案，其旨在涵盖在权利要求书所限定的本发明的精神和范围内 的修改。例如，示例性实施方案的特定特征可以为所要求保护的发明的一部分或不是其一 部分，并且所公开的实施方案的特征可以结合。除非本发明作出具体说明，术语"一个"、"一 种"和"所述"不限于一个元素，而是应该理解为"至少一个"。
[0288]应该理解的是，本发明的至少一些特征和描述被简化为集中于与清楚地理解本发 明有关的元素，同时为了清晰起见，除去了本领域普通技术人员将理解的其他元素(也可以 包含本发明的一部分）。但是由于此类元素是本领域公知的，并且由于它们不一定会更有利 于更好地理解本发明，所以在本发明中未提供此类元素的描述。
[0289]此外，所述的方法并非依赖于本发明列出的步骤的特定顺序，就此而言，步骤的特 定顺序不应该解释为对权利要求的限定。涉及本发明的方法的权利要求不应该限于书写顺 序的步骤的性能，并且本领域的技术人员可以容易理解这些步骤可以改变，并且仍然保持 在本发明的精神和范围内。
【主权项】
1. 一种治疗哺乳动物白血病的方法，包括以下步骤： 向需要的患者施用药学可接受的量的式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物，或其可 药用的盐、或其水合物或溶剂化物：其中R1为具有1至4个碳的烷基;妒为氢原子、卤素原子、或任选地被卤素原子或羟基取 代的具有1至4个碳的烷基;R3为卤素原子;任选地被卤素原子、具有1至4个碳的烷基、具有1 至4个碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一冊 5-( CH2 )m-R6，其中R5为氢原子、或具有1至4个 碳的烷基，m为0至4的整数，并且R 6为任选地被卤素原子取代的苯基或吡啶基;或-NR7-C0- (CH2) n-R8,其中R7为氢原子或具有1至4个碳的烷基，η为0至2的整数，并且R 8为任选地被卤 素原子取代的苯基或吡啶基;并且R4为一(CH2) a-C0-NH-R9,其中a为1至4的整数，并且R9 为具有1至4个碳的烷基;具有1至4个碳的羟烷基;具有1至4个碳的烷氧基;或任选地被具有 1至4个碳的烷基、具有1至4个碳的烷氧基、氨基或羟基取代的苯基或吡啶基;或一 (CH2)b- COOR1()，其中b为1至4的整数，并且R 1()为具有1至4个碳的烷基。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述白血病独立地选自由以下疾病构成的组:急性 淋巴细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)(或急性成髓细胞性白血病）、慢性淋巴 细胞性白血病(CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)。3. 根据权利要求1所述的方法，其中所述白血病独立地选自由以下疾病构成的组:急性 骨髓性白血病、慢性急性骨髓性白血病和急性淋巴细胞性白血病。4. 根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中所述由式I表示的噻吩并三唑并二氮 杂章化合物选自由以下化合物构成的组： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮杂罩-6-基]4-(4-羟苯基）乙酰胺或其二水合物；（丨丨）（5)-{4-(3'-氰基联苯-4-基）-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-幻[1，2,4]三唑并[4,3- &][1，4]二氮杂罩-6-基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮杂罩-6-基}乙酸甲酯；以及(iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 酰基氨基)苯基]-6H-噻吩并[3，2-f_] [ 1，2，4]三唑并[4，3-a] [ 1，4]二氮杂罩-6-基}乙酸甲 酯。5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述由式I表示的噻吩并三唑并二氮杂萆化合物为 (S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3，2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4] 二氮杂罩-6-基)-N-( 4-羟苯基）乙酰胺二水合物。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮杂罩化合物形 成为固体分散体。7. 根据权利要求6所述的方法，其中所述固体分散体含有无定形的式（1)的噻吩并三唑 并二氮杂罩化合物和其可药用的盐、或其水合物；以及可药用的聚合物。8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述固体分散体展示出基本不存在与结晶的式（1) 表示的噻吩并三唑并二氮杂罩合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案。9. 根据权利要求7所述的方法，其中所述固体分散体展示出基本不存在与结晶的噻吩 并三唑并二氮杂罩化合物有关的衍射线的X射线粉末衍射图案，所述结晶的噻吩并三唑并 二氮杂章化合物为(S) -2-[4-(4-氯代苯基)-2，3，9-三甲基-6H-噻吩并[3，2-f ] [ 1，2，-4 ]三 唑并[4,3-a][l，4]二氮杂罩-6-基]-N-(4-羟苯基)乙酰胺二水合物。10. 根据权利要求6至9中任一项所述的方法，其中所述可药用的聚合物为醋酸羟丙基 甲基纤维素琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮杂草化合物与醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸 酯(HPMCAS)的重量比为1:3至1:1。11. 根据权利要求6至9中任一项所述的方法，其中所述固体分散体表现出约130°C至约 140 °C的单一的玻璃化转变温度(Tg)拐点。12. 根据权利要求1至11中任一项所述的方法，还包括向所述患者施用至少一种其他的 治疗剂。13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述式（1)的噻吩并三唑并二氮杂罩化合物或其 可药用的盐以及至少一种其他的治疗剂是同时施用的。14. 根据权利要求12所述的方法，其中所述式（1)的噻吩并三唑并二氮杂草化合物或其 可药用的盐以及至少一种其他的治疗剂是依次施用的。15. 根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述至少一种其他的治疗剂独立 地选自由以下化合物构成的组:表观遗传调节剂、糖皮质激素、m-TOR抑制剂、HDAC-抑制剂、 去甲基化试剂、蒽环霉素、胞嘧啶核苷的类似物和细胞毒性药物。16. 根据权利要求15所述的方法，其中所述去甲基化试剂为地西他滨。17. 根据权利要求15所述的方法，其中所述HDAC-抑制剂为伏立诺他或帕比司他。18. 根据权利要求15所述的方法，其中所述mTOR抑制剂为依维莫司。18. 根据权利要求15所述的方法，其中所述糖皮质激素为地塞米松。19. 根据权利要求15所述的方法，其中所述细胞毒性药物选自由阿糖孢苷或甲氨蝶呤 构成的组。20. 根据权利要求15所述的方法，其中所述胞嘧啶核苷的类似物为氮杂胞苷。21. 根据权利要求15所述的方法，其中所述蒽环霉素为道诺霉素。
【文档编号】A61K31/573GK105960239SQ201480065213
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2014年11月26日
【发明人】马里亚·E·里韦罗, 埃里克·雷蒙德
【申请人】翁科埃斯克斯有限公司