一种氢溴酸加兰他敏的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种氢溴酸加兰他敏的药物组合物及其医药用途，本发明提供的氢溴酸加兰他敏的药物组合物中含有氢溴酸加兰他敏和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，氢溴酸加兰他敏、化合物(Ⅰ)单独作用时，对急性胃溃疡损伤具有保护作用；氢溴酸加兰他敏和化合物(Ⅰ)联合作用时，对急性胃溃疡损伤的保护作用进一步增强，可以开发成治疗急性胃溃疡损伤的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种氢溴酸加兰他敏的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及氢溴酸加兰他敏的新用途，具体涉及氢溴酸加兰 他敏的药物组合物及其在急性胃溃疡损伤中的应用。
【背景技术】
[0002] 氢溴酸加兰他敏为抗胆碱酯酶药，有较弱的抗胆碱酯酶作用，能透过血脑屏障，故 对中枢神经系统作用比较强。使受阻碍的神经肌肉传导恢复，改善各种末梢神经肌肉障碍 的麻痹状态。其治疗范围广，毒性较小，病人较易耐受。临床主要用于治疗脊髓灰质炎(小儿 麻痹症)后遗症、肌肉萎缩及重症肌无力等。也可用于儿童脑型麻痹、外伤性感觉运动障碍、 多发性神经炎及脊神经根炎等。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种氢溴酸加兰他敏的药物组合物，该药物组合物中含有 氢溴酸加兰他敏和一种天然产物，氢溴酸加兰他敏和该天然产物可以协同治疗急性胃溃疡 损伤。
[0004] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0005] 一种具有下述结构式的化合物a)，
[0006]
[0007] -种氢溴酸加兰他敏的药物组合物，包括氢溴酸加兰他敏、如权利要求1所述的化 合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0008] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0009] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0010] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将淡竹叶粉碎，用80~90%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇取物用 大孔树脂除杂，先用30 %乙醇洗脱6个柱体积，再用85 %乙醇洗脱12个柱体积，收集85 %洗 脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分 离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体 积百分浓度为88%的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩 得到化合物(I)。
[0011]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用85%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0012]进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0013]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制备治疗急性胃溃疡损伤的药物中的应用。
[0015] 上述氢溴酸加兰他敏的药物组合物在制备治疗急性胃溃疡损伤的药物中的应用。
[0016] 本发明的优点：
[0017] 本发明提供的氢溴酸加兰他敏的药物组合物中含有氢溴酸加兰他敏和一种结构 新颖的天然产物，氢溴酸加兰他敏和该天然产物单独作用时，对急性胃溃疡损伤具有治疗 作用;二者联合作用时，对急性胃溃疡损伤的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗急性胃 溃疡损伤的药物。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021]分离方法：（a)将淡竹叶（2kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（15LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用DlOl型大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙醇洗脱 12个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中85%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1 (12个柱体积）、50:1 (10个柱体积）、25:1 (8个柱体积)和12:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(6个柱体积）、12:1(8个柱体积)和2:1(6 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0022] 结构确证:HR-ESI-MS显示[Μ+Na]+为m/z 319.1208,结合核磁特征可得分子式为 C15H2QO6，不饱和度为 6。核磁共振氢谱数据 δΗ (ppm，DMS〇-d6，600MHz ):H-l(6.37，d，J = 3.0)， Η-3(6· 10，s)，H-5(2.35，d，J = 4.2)，H-6(4.63，d，J = 3.0)，H-7(4.51，d，J = 3.0)，H-9 (2.19，t，J=4.2)，H-10(3.48，m)，H-10(3.85，m)，H-ll(5.03，s)，H-ll(5.09，s)，H-2' (2.07，m，2H)，H-3'（2.13，m)，H-4'（0.89，d，J = 7.2)，H-5'（0.91，d，J = 6.6);核磁共振碳谱 数据Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz ):89.5(CH，1-C)，98.8(CH，3-C)，139.7(C，4-C)，35.6(CH，5-C)，91.1(CH，6-C)，78.2(CH，7-C)，97.3(C，8-C)，40.1(CH，9-C)，62.4(CH2，10-C)，111.6 (CH2，ll-C)，171.3(C，r-C)，42.8(CH2,2'-C)，25.2(CH，3'-C)，21.7(CH 3,4'-C)，21.8(CH3， 5'-C) 光谱表明该化合物含有羟基，羰基和烯烃结构（3457cm-S 1745cm-1和1666cm-4。 1H-NMR 谱显示一个异戊酰基结构[5!10.89(3!1，(1，1 = 7.2抱，!1-4'），0.91(3!1，(1，1 = 6.6!^，!1-5'），2.13(1!1，111，!1-3'），2.07(2!1，111，!1-2'）]，一个环外亚甲基质子信号[3!15.03(8，!1-11)和 5.09(8，!1-11)]，一个含氧亚甲基信号[6!13.48(111，!1-10)和3.85(111，!1-10)]，四个含氧次甲基 质子信号[3财.51((1，了 = 3.0!^，!1-7)，4.63((1，了 = 3.0!^，!1-6)，6.10(8，!1-3)，6.37((1，了 = 3. OHz，H-I)]。13C-NMR谱显示了 15个碳信号，包括两个甲基，三个亚甲基(一个含氧亚甲基， 一个烯属亚甲基），七个次甲基（四个含氧次甲基），以及三个季碳(一个烯烃季碳，一个含氧 季碳，一个酯羰基碳）dHMBC谱中，H-I和H 2-2'与C-Γ的相关性表明异戊酰基位于C-I位。 HMBC谱中，H-6与C-4、C-8和C-9以及H-3与C-l、C-5和C-6的相关性表明C-3和C-6之间形成了 一个氧桥。此外，H-7与C-9和C-IO的相关性以及C-7和C-8的核磁数据可知C-7和C-8形成环 氧结构;H 2-IO与C-7，C-8和C-9的相关性表明羟甲基位于C-8位上。ROESY谱中，H-9与H-IO和 H-5，H-5与H-IO的相关性表明H-5和H-9为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以及文 献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确 定，理论值与实验值基本一致。
[0023] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0024]
[0025] 实施例2:药理作用
[0026]本实施例采用乙醇制备小鼠急性胃粘膜损伤模型，测定胃粘膜损伤指数包括小鼠 胃组织SOD活性、MAD及PEG2含量，观察药物对急性胃黏膜损伤的治疗作用。
[0027] 1、材料与方法
[0028] 1.1动物
[0029]昆明小鼠，（25 ±4)g，雌雄各半，山东中医药大学动物中心提供。
[0030] 1.2试剂与样品
[0031]氢溴酸加兰他敏购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施 例1。三九胃泰颗粒购自三九医药股份有限公司。超氧化物歧化酶（SOD)试剂盒、丙二醛 (MD)试剂盒均购自上海蓝基生物科技有限公司。
[0032] 1.3仪器
[0033] 紫外可见分光光度计(型号:UV-2450/2550)，日本岛津公司生产。
[0034] 1.4小鼠分组及模型制备
[0035]选取健康小鼠60只（雌雄各半），随机分为6组，分别为空白对照组、模型对照组、阳 性对照组(三九胃泰颗粒)和氢溴酸加兰他敏组(80mg · kg<)、化合物（I)组(80mg · kg-4、 氢溴酸加兰他敏与化合物（I)组合物组【40mg · kg<氢溴酸加兰他敏+40mg · kg<化合物 (I )】。模型对照组和空白对照组给予生理盐水，其他给药连续灌胃IOd。末次给药后禁食不 进水24h，在最后一次给药Ih后，除空白对照组外，每只均灌胃给无水乙醇，按0.1mL/10g给 药。
[0036] 1 · 5胃组织SOD活性、MAD含量测定
[0037]胃大体标本的制备:动物处死后，将其置于冰盒上，快速取全胃，沿胃大弯剪开，用 生理盐水冲洗胃壁内侧，展平置于体显微镜下观察胃粘膜损伤程度。根据试剂盒说明测定 组织SOD活性、MD含量测定。
[0038] 1 · 6胃组织PGE2含量测定
[0039] 取胃组织匀浆2mL，4°C3000rpm离心15min后取上清液，以放射法测定PGE2含量。
[0040] 1.7统计学方法
[0041] 用Excel工作表进行分析，各试验组与对照组之间采用t检验进行比较。
[0042] 2、实验结果
[0043] 2.1对急性胃粘膜损伤模型小鼠胃组织中S0D、MAD、PGE2含量的影响
[0044] 与空白对照组比，模型对照组SOD含量降低(P〈0.05)、MAD含量升高(P〈0.05)、PGE2 含量降低（P〈 〇 . 〇 5)，说明造模成功；与模型对照组比，阳性对照组S 0 D含量显著升高（P〈 0.01)、MAD含量显著降低(P〈0.01)、PGE2含量升高(P〈0.05);与模型对照组比，氢溴酸加兰 他敏与化合物（I)组合物组SOD含量显著升高(P〈0.01)、MAD含量显著降低(P〈0.01)、PGE 2含 量显著升高(P〈〇. 01);与模型对照组比，氢溴酸加兰他敏组、化合物（I)组SOD含量升高(P〈 0.05)、MAD含量降低(P〈0.05)、PGE 2含量升高(P〈0.05)。
[0045] 试验结果见表1。
[0046]表1对急性胃粘膜损伤模型小鼠胃组织中S0D、MAD、PGE2含量的影响
[0048] 急性胃粘膜损伤是临床常见的急症，近几年发现病理机制主要是内源及外源性攻 击因子和胃粘膜保护机制的平衡关系失衡，目前已证实，〇Η·自由基和0·自由基与多种类 型的胃粘膜损伤有关，研究认为〇 ·自由基既参与组织细胞的损伤过程，也是细胞正常代谢 的中间产物。由于氧自由基与胃粘膜损伤有关，即参与组织细胞的损伤也是细胞正常代谢 产物。MAD含量的高低间接反映了机体受氧自由基攻击的程度，SOD能消除自由基，其活性高 低间接反映了机体清除氧自由基的能力。PGE2有抑制胃酸分泌的作用，并且能促进胃粘液 分泌并增加胃粘膜血流量而发挥保护作用，所以其含量高低反映了对胃粘膜的保护能力。
[0049] 上述结果表明，氢溴酸加兰他敏、化合物（I)单独作用时，对急性胃溃疡损伤具有 保护作用;氢溴酸加兰他敏和化合物（I)联合作用时，对急性胃溃疡损伤的保护作用进一步 增强，可以开发成治疗急性胃溃疡损伤的药物。
[0050] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，~' 〇2. -种氨漠酸加兰他敏的药物组合物，其特征在于:包括氨漠酸加兰他敏、如权利要求 1所述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的氨漠酸加兰他敏的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受 的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸 附载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的氨漠酸加兰他敏的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片 剂、胶囊剂、日服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将淡 竹叶粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步骤(a)中正下醇取物用大孔树脂除杂，先用30%乙醇洗脱6个柱体积，再用85%乙醇洗脱 12个柱体积，收集85%洗脱液，减压浓缩得85%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中85%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烧-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1 和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为88 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集13~16个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用85%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烧代 替乙酸乙醋进行萃取，得到二氯甲烧萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗急性胃溃瘍损伤的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的氨漠酸加兰他敏的药物组合物在制备治疗急性胃溃瘍损 伤的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/366GK105963303SQ201610366836
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月28日
【发明人】王昌荣
【申请人】王昌荣