一种抗肿瘤药物的制备方法

一种抗肿瘤药物的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗肿瘤药物的制备方法，先将聚合物四唑衍生物和含甲基丙烯酸酯基团的交联剂加入水或者缓冲液中得到浓度为0.5～10 mg/mL的载体溶液；然后将蛋白质药物加入载体溶液中，得到混合液；再将混合液注射到有机溶剂中，得到悬浮液；然后进行紫外光照反应得到抗肿瘤药物。本发明公开的制备方法具有很强的选择性，载体与包载的药物，尤其是蛋白质药物和细胞不反应，能很好的保持药物、蛋白质和细胞的功效，实现完全、可控的释放，到达病灶处，纳米凝胶缓释药物，达到切实有效的治疗效果，不会造成现有技术中药物浪费的问题。
【专利说明】
一种抗肿瘤药物的制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种抗肿瘤药物的制备方法。
【背景技术】
[0002] 在过去几十年，基于抗体、细胞因子、酶以及转录因子的蛋白质药物已被广泛地用 于糖尿病、心血管疾病和恶性肿瘤等疾病的高效治疗(Vermonden T，Censi R，Hennink WE. Chem. Rev. 2012, 112, 2853-2888; Walsh G. Nat. Biotech. 2000, 18, 831-833)。与具有较高毒副作用的化疗药物相比，蛋白质药物通常具有较高的特异性，较好的治 疗效果和较低的毒副作用，在临床上展现出了优越的疾病治疗功效。但这些临床使用的蛋 白质药物都是在细胞外起作用。虽然在细胞内起作用的蛋白质药物很多，但还没有一个进 入临床使用，这主要是因为这些蛋白药物的血浆半衰期短、体内降解快、细胞内吞效率低、 胞内运输过程慢等原因所致(Lu Y, Sun W, Gu Z. J. Controlled Release 2014，194， 1-19)。纳米凝胶通常指由亲水性或两亲性高分子链通过物理或者化学交联形成的三维网 状结构的水凝胶微粒，具有高含水量、良好的生物相容性和多孔结构，纳米凝胶可通过物理 交联和化学交联制备。物理交联包括憎水作用、静电作用、氢键作用等，物理凝胶制备通常 条件温和，不会明显损伤包载药物的活性;但存在稳定性较差、释放包裹的药物较快的缺 点。化学交联包括自由基聚合，迈克尔加成反应，酰胺化反应，酶催化反应，铜催化点击化学 反应等。但这些化学交联反应通常不具备专一性，这可能使药物参与交联反应，导致变性。 而且，尽管已有很多报道使用纳米凝胶输送药物，但很少能够实现治疗药物在体内的靶向 高效输送。所以需要开发专一性强、高效快速、无需催化的交联反应方法，用于制备具有靶 向性的生物可降解纳米凝胶载体，从而得到性能良好的抗肿瘤药物。

【发明内容】

[0003] 本发明的目的是提供一种抗肿瘤药物的制备方法，由纳米凝胶包载蛋白质药物制 备得到，得到的药物专一性强、高效快速。
[0004]为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是:一种抗肿瘤药物的制备方法，包 括以下步骤： (1) 将聚合物四唑衍生物和含甲基丙烯酸酯基团的交联剂加入水或者缓冲液中得到得 到载体溶液;所述聚合物四唑衍生物的浓度为〇. 5~10 mg/mL; (2) 将蛋白质药物加入步骤(1)的载体溶液中，得到混合液； (3) 将步骤(2)的混合液注射到有机溶剂中，得到悬浮液;然后进行紫外光照反应得到 抗肿瘤药物； 所述聚合物四唑衍生物具有式I结构：
式I; 其中η彡2; R为 H、NH2、NMe2、OMe、NO2、CI、Br、Me、CO 2Me 或者 PhNHBo c; P为透明质酸、透明质酸赖氨酸化合物、透明质酸胱胺化合物、葡聚糖、壳聚糖、胶原蛋 白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚酯； 所述含甲基丙烯酸酯基团的交联剂具有式II结构：
式II; 其中m ^ 2; CL为透明质酸、透明质酸胱胺化合物、透明质酸赖氨酸化合物、壳聚糖、葡聚糖、胶原蛋 白、聚乙二醇、聚乙二醇-聚酯、丁二胺、己二胺、胱胺、胱氨酸或者赖氨酸。
[0005] 上述技术方案中，所述聚乙二醇为线性或者多臂聚乙二醇，表示为PEG-X-OH，x=2， 4,6或8;所述聚酯为聚丙交酯、聚（丙交酯-Co-乙交酯）、聚己内酯或者聚碳酸酯;所述聚酯 的聚合度为1~20;所述聚乙二醇的分子量为2~100 kg/mol。
[0006] 上述技术方案中，步骤（1)中，甲基丙烯酸酯基团与四唑基团的摩尔比为1:1;所述 缓冲液包括磷酸盐缓冲液、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸半钠盐缓冲溶液、三羟甲基氨基 甲烷缓冲溶液或者2-吗啉乙磺酸缓冲溶液;所述有机溶剂包括丙酮、乙腈或者乙醇;所述聚 乙二醇为线性聚乙二醇或者多臂聚乙二醇;所述聚酯为聚丙交酯、聚（丙交酯-Co-乙交酯）、 聚己内酯或者聚碳酸酯。
[0007] 上述技术方案中，所述紫外光照反应的波长为302~390 nm，强度为0.8~100 mW/ cm2,时间为90~180s 〇
[0008] 上述技术方案中，步骤(3)紫外光照反应后，旋转蒸发除去有机溶剂，然后用水透 析得到抗肿瘤药物。
[0009] 本发明中，聚合物四唑衍生物以聚合物作为主链，四唑基团通过0或者NH随机接在 聚合物主链末端或侧链上;式I结构中，P表示聚合物，η多2是指四唑基团接在聚合物主链 末端或侧链上的数量为复数个，比如本发明实施例一中，聚合物为透明质酸赖氨酸化合物， 其重复单元上接有多个四唑基团。
[0010]本发明中，含甲基丙烯酸酯基团的交联剂可以为大分子也可以为小分子，m多2 是指交联剂中甲基丙烯酸酯基团的数量为复数个;式II结构中，CL为小分子时，甲基丙烯酸 酯基团接在小分子两端，如本发明实施例三的结构;CL为聚合物时，甲基丙烯酸酯基团通过 〇或者NH接在聚合物主链末端或侧链上，如本发明实施例二的结构，聚合物为透明质酸胱胺 化合物，其重复单元上接有多个甲基丙烯酸酯基团。
[0011] 本发明中，聚合物四唑衍生物的制备方法为，先向四唑溶液中加入缩合剂与催化 剂，反应得到活化的四唑溶液;然后把聚合物水溶液滴加到活化的四唑溶液中，室温反应得 到聚合物四唑衍生物;所述聚合物为透明质酸、透明质酸赖氨酸化合物、透明质酸胱胺化合 物、葡聚糖、壳聚糖、胶原蛋白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚酯。
[0012] 上述技术方案中，四唑溶液的溶剂优选为二甲基亚砜、二甲基亚砜与水的混合溶 液、二氯甲烷或氯仿;聚合物为含有氨基或羟基的水溶性聚合物，优选为透明质酸、透明质 酸赖氨酸化合物、透明质酸胱胺化合物、壳聚糖、葡聚糖、聚乙二醇或者聚乙二醇-寡聚酯； 其中所述聚乙二醇为线性或者多臂聚乙二醇；所述聚酯为聚丙交酯、聚（丙交酯-CO-乙交 酯）、聚己内酯或者聚碳酸酯。
[0013]上述技术方案中，水溶性聚合物中的羟基或者胺基与四唑的摩尔比优选为1:0.1 ~2;四唑与缩合剂、催化剂的摩尔比优选为1:2:0.1。
[0014] 比如：先向四唑小分子(Tet)的DMSO溶液中加入缩合剂二环己基碳二亚胺(DCC)、 4_二甲氨基吡啶(DMAP)，反应过夜得到羧基活化的四唑溶液;然后把含有氨基或羟基的聚 合物水溶液逐滴滴加到上述活化的四唑溶液中，再在室温下搅拌反应18~28小时，得到所 述的聚合物四唑衍生物(P-Tet n);具体反应过程如下：
其中 1?=!1、(：1、8『、]^、順2、匪62、勵2或者016。
[0015] 本发明制备的抗肿瘤药物，包括纳米凝胶以及蛋白质药物，载体与蛋白质药物和 细胞不反应，能很好的保持药物、蛋白质和细胞的功效，实现完全、可控的释放，达到切实有 效的治疗效果，不会造成现有技术中药物浪费的问题。
[0016] 由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点： 1.本发明公开的抗肿瘤药物的制备方法具有"点击化学"的强专一性、快速高效和反 应条件温和的特点，同时无需铜盐等毒性催化剂;特别的，本发明通过设计前驱体原料以及 结合注射、紫外反应，得到的纳米凝胶稳定性强，包载蛋白质后与药物结合稳定，保证药物 在体内循环不受干扰。
[0017] 2.本发明公开的抗肿瘤药物的制备方法具有很强的选择性，载体与包载的药物， 尤其是蛋白质药物和细胞不反应，能很好的保持药物、蛋白质和细胞的功效，实现完全、可 控的释放，到达病灶处，纳米凝胶缓释药物，达到切实有效的治疗效果，不会造成现有技术 中药物浪费的问题。
【附图说明】
[0018] 图1是实施例一中透明质酸赖氨酸四唑衍生物的氢核磁谱图； 图2是实施例二中透明质酸胱胺甲基丙烯酸酯衍生物的氢核磁谱图； 图3是实施例三中胱氨酸甲基丙烯酸酯衍生物的氢核磁谱图； 图4是实施例四中纳米凝胶体外控制释放蛋白质药物的行为，以及释放出的蛋白质药 物的生物活性表征图； 图5是实施例五中纳米凝胶和载蛋白质药物的纳米凝胶的细胞实验表征图； 图6是实施例六中载蛋白纳米凝胶对小鼠皮下人乳腺癌移植瘤的治疗表征图； 图7是实施例七中载蛋白纳米凝胶对小鼠原位肺癌移植瘤的治疗表征图； 图8是实施例七中载蛋白纳米凝胶治疗小鼠原位肺癌移植瘤的组织学分析图。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合附图以及实施例对本发明作进一步描述： 实施例一透明质酸赖氨酸四唑衍生物(HA-Lys-Tet)的合成 在氮气保护条件下，50 mL两颈瓶中加入四唑(608 mg)，二甲亚砜10mL，DCC (120 mg) 搅拌24小时，HA-Lys-NH2(#n=35 K，0.4 g)溶于30 mL甲酰胺中，溶解后加入四唑溶液中， 搅拌10 min，加入DMAP (80 mg，），反应48小时，过滤，滤液用水和二甲亚砜混合溶剂透析后 换成纯水透析，冷冻干燥后得产品HA-Lys-Tet(产率69 %) ;HA-LyS-Tet核磁表征见附图1， 1H NMR (D2〇/DMS〇-d6): HA: δ 1.82， 2.70-3.68， and 4.23-4.38; Lys: δ 0.92， 1.06, 1.52, 2.97, 3.61 and 3.95; Tet: δ 7.91,7.92 and 6.79, 6.80〇
[0020] 四臂聚乙二醇四唑衍生物(PEG_Tet4)、壳聚糖四唑衍生物(Chit-Tet)可更换聚合 物制备得到，结构式如下：
[0021] 实施例二透明质酸胱胺甲基丙烯酸酯衍生物(HA-Cy-MA)的合成 HA-Cy-MA分两步合成，首先胱胺的甲基丙烯酸衍生物(MA-Cy-NH2)由Boc-Cy-NH2和甲 基丙烯酰氯反应后脱Boc保护获得，然后，在氮气保护条件下，将MA-Cy-NH2 (14.5 mg，66 ymol)的溶液加入到HA (50 mg, 1.43 μπιο?)被EDC (75.9 mg, 0.396 mmol)和NHS (22.8 mg，0.198 mmol)活化的5 mL二次水中，置于40°C油浴中避光反应24小时，然后用 水透析，冷冻干燥，产率92 %;HA-Cy-MA核磁表征见附图2/H NMR (D2O): HA: δ 2.00， 2.86-3.88, and 4.44-4.52; Cys: δ 2.70, 3.11-3.15 and 3.56; ΜΑ: δ 1.92, 5.45 and 5.69〇
[0022] 实施例三胱胺酸甲基丙烯酰胺衍生物(MA-Cys-MA)的合成 在冰水浴条件下，将胱氨酸（1.2 g，5.0 mmol)的Na0H(1.5 M，10 mL)溶液滴加到甲基 丙烯酰氯(2.0 mL，20.6 mmol)的DCM(10 mL)中，在冰水浴条件下反应4 h，反应期间用NaOH 溶液调控pH为9.0。反应结束后，用分液漏斗分出水层，再向其逐滴加入约3 mL HC1(2 M)， 过滤，真空干燥，得到白色粉末1.728，产率91%。1^-078-1^核磁表征见附图3， 1!1匪1?(400 MHz，DMS〇-d6):MA (δ 5·72,5·39和1.85)，Cys (δ 12·92,8·24,4·53,3·18 和3.03)。
[0023] 实施例四光控"四唑-烯"点击化学纳米凝胶用于蛋白质药物的包载和体外控制释 放 以包载细胞色素C(CC)为例，将一定量的CC(理论载药量为10%)加入到聚合物总浓度为 1.25 mg/mL的HA-OEG-Tet和HA-Cy-MA的PB(pH 7.4，10 mM)溶液中，然后将该溶液注射到丙 酮中，再用紫外（320-390 nm，50 mW/cm2)光照90秒。最后旋转蒸发除去丙酮，用水透析12 h，得到包载CC的纳米凝胶(CC-NGs)溶液。用类似的方法可以实现对治疗蛋白果粒酶B(GrB) 的高效包裹，得到包载GrB的纳米凝胶(GrB-NGs)。蛋白质CC的释放实验于37°C在两种不同 的释放介质中进行，即PB(pH 7.4，10 mM)和10 mM GSH的PB(pH 7.4，10 mM)溶液。取I mL 包载CC-NGs样品于蛋白释放袋(MffCO 350 K)中，并置于25 mL相应的PB释放介质中。在每个 取样时间点，取出5 mL释放介质，并补充相应的新鲜介质。将各时间点取出的样品冻干，复 溶，用紫外(CC紫外吸收波长是410 nm)测定。每组释放试验平行进行三次，最终显示结果为 实验所得平均值±标准方差。图4是上述纳米凝胶体外控制释放蛋白质药物的行为，以及释 放出的蛋白质药物的生物活性表征图；蛋白质的体外释放实验表明在生理条件下(pH 7.4， 37°C)CC能很好地被包裹在HA-NGs中，经48 h后，释放量约30%(图4a)。相反，在含有10 mM GSH的还原条件下，10 h后从纳米凝胶中释放出了超过80%的CC。这说明CC-NGs在细胞质的 还原环境下能快速释放出包裹的蛋白质药物。
[0024]蛋白质的电子转移活性的测试是通过检测其对ABTS转变为ABTS+的催化效率得到 的。首先释放出的CC用PBS溶液稀释至浓度为0.004 mg/mL。同时配置相同浓度的、未经任何 处理的CC，取相同量两种溶液放入石英样品池中，向两种溶液中加入相同量的含有10 yL的 0.045 M的过氧化氢溶液和100 yL的I mg/mL的ABTS的I3BS溶液。倒置使之混合好并马上用 UV分光光度计读在410 nm处的吸收值，并以此为零点，每个15秒测一次。每个时间点对应的 紫外吸收值减去第一个点的吸收值从而得到吸收值的变化（Δ A)，以Δ A对时间作图表示其 活性变化随时间的变化。附图4b为上述释放出的蛋白活性检测图，结果显示从纳米凝胶里 释放出来的CC仍然能较快地催化ABTS的氧化，催化速率和未经任何处理的CC的接近，证实 了从纳米凝胶中释放出的蛋白质仍能较好地保持活性。
[0025]实施例五空纳米凝胶和包载有蛋白质药物的纳米凝胶的细胞实验 用大分子交联剂综合利用反相纳米沉淀法和光控"四唑-稀"交联法制备透明质酸纳米 凝胶，制备如下：将实施例一和实施例二制备的HA-Lys-Tet和HA-Cy-MA以摩尔比1:1溶于 的ro(pH 7.4，10 mM)中，制备得到浓度为1.25 mg/mL的聚合物溶液，然后混合溶液注射到 IOOmL丙酮中，用紫外光(波长320-390 nm，光强60 mW/cm2)福射3 min，旋蒸除去丙酮后用 PB透析，冷冻干燥得到纳米凝胶。
[0026]测试空纳米凝胶的细胞相容性。将成纤维细胞(L929)、乳腺癌细胞(MCF-7)、脑胶 质瘤细胞(U87)和肺癌细胞(A549)分别铺在96孔细胞培养板上，每个孔大约5000个细胞，再 加入含有10 %小牛血清、1%谷氨酸盐、抗生素青霉素（1〇〇 IU/mL)和链霉素（100 yg/mL)的 DMEM培养基，再置于37°C，5%二氧化碳条件下培养12 h。然后，加20 yL纳米凝胶的ro(10 mM，pH 7.4)溶液(最终纳米凝胶的浓度为0.2，0.4，0.6，0.8和1.0 mg/mL)到每孔中，再在37 °C，5%二氧化碳条件下培养48 h。随后，向每孔加入3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四 氮唑溴盐(MTT)的PBS溶液（15 yL，5 mg/mL)，并放入培养箱中继续培养。4 h后，移除含有 MTT的培养液，再加入150 yL DMSO用于溶解活细胞与MTT生成的紫色结晶甲瓒，并用酶标仪 (Bio Tek)测定每个孔在492 nm处的紫外吸收。细胞相对存活率通过与只有空白细胞的对 照孔在492 nm处的吸收相比得到，每组实验平均进行4次。图5是上述纳米凝胶和载蛋白质 药物的纳米凝胶的细胞实验表征图。
[0027]附图5a为细胞存活率图，可以看出，48小时后加入纳米凝胶细胞的存活率均达到 90 %以上，说明透明质酸纳米凝胶没有毒性。
[0028] CC-NGs和GrB-NGs的细胞毒性也是通过MTT法测定。将包载蛋白药物的纳米凝胶加 入乳腺癌细胞(MCF-7,⑶44受体高表达），肺癌细胞(A549,⑶44受体高表达)和脑胶质瘤细 胞(U87，CD44受体低表达）中，并培育4 h。然后将载蛋白的纳米凝胶的培养基吸走，再加入 新鲜培养基于37°C，5%二氧化碳条件下继续培养92 h。培养结束后向每孔中加入10 yL MTT 的PBS溶液(5 mg/mL)并放入培养箱中，继续培养4 h使MTT与活细胞充分作用。随后移除含 有MTT的培养液，并加入150 yL DMSO用于溶解活细胞与MTT生成的紫色结晶甲瓒，并用酶标 仪(Bio Tek)测定每个孔在492 nm处的紫外吸收。细胞相对存活率计算方法如上。封闭实验 是先用HA(5 mg/mL)与MCF-7细胞孵育4 h，然后再加入包载包载蛋白质的纳米凝胶。结果表 明CC-NGs对MCF-7细胞有较高的抗肿瘤活性，其细胞的半抑制浓度（IC50)为0.52 μΜ(图 5b)。相反，自由CC即便在浓度高达6.2 μΜ时仍无明显的细胞毒性，这主要是因为CC内吞进 入细胞的能力很差。另外，CC-NGs对CD44受体低表达的U87细胞表现出明显减小的凋亡活 性，而且CC-NGs对预先封闭⑶44受体的MCF-7细胞的抗肿瘤活性明显降低，这些结果说明 CC-NGs是通过CD44受体介导内吞机理进入细胞。同时，GrB-NGs对CD44受体高表达的MCF-7 和Α549细胞都表现出了较高的体外抗肿瘤活性，其分别为3.0 ηΜ和8.1 ηΜ(图5c)。
[0029] 实施例六载蛋白纳米凝胶对小鼠皮下人乳腺癌移植瘤的治疗 首先使用皮下注射MCF-7细胞（I X IO7)的PBS溶液(50 yL)到裸鼠的右后侧建立了人 乳腺癌皮下肿瘤模型。当肿瘤的体积达到30 mm3后，裸鼠被随机分成4组，每组5只。然后，通 过静脉注射方法分别向每组荷瘤老鼠注射GrB-NGs (25 yg GrB equiv./kg)、GrB-NGs (100 yg GrB equiv./kg)、空纳米凝胶和PBS缓冲溶液，每三天给药一次，总共给药四次。月中 瘤体积以及裸鼠体重每隔一天测量一次。肿瘤体积的计算公式:体积=y 2*a*b*c，a是肿瘤 最长边，b是肿瘤最宽边，c是肿瘤的高度。附图8为皮下乳腺癌的治疗，可以发现PBS组和空 纳米凝胶组的肿瘤体积生长快速。而GrB-NGs在剂量为25 yg GrB equiv./kg和100 yg GrB equiv./kg时都能有效地抑制肿瘤的生长，且剂量越高对肿瘤生长的抑制效果越明显。同 时，GrB-NGs组与I 3BS组相似，都没有导致动物体重降低，说明GrB-NGs没有明显的毒副作用 (参见图6)。
[0030] 实施例七载蛋白纳米凝胶对小鼠原位人肺癌移植瘤的治疗 首先通过注射带Iuciferase的A549细胞（I X IO7)的I3BS溶液(50 yL)到裸鼠的肺部 建立了人肺癌原位肿瘤模型。当肿瘤细胞的荧光值达到20000 p/s/cm2/sr时，裸鼠被随机 分成3组，每组6只。然后，每三天通过尾静脉注射分别向每组荷瘤老鼠注射GrB-NGs(150 Hg GrB equiv. /kg GrB)、空白纳米凝胶和I3BS，总共给药四次。肿瘤出的荧光和裸鼠体重每三 天记录一次，图7是载蛋白纳米凝胶对小鼠原位肺癌移植瘤的治疗表征图。附图7a_c为肺癌 原位治疗图，PBS组和空纳米凝胶组的肿瘤处荧光强度随时间明显增强，表明肿瘤在快速生 长。而GrB-NGs治疗中的肿瘤荧光强度较弱，这说明GrB-NGs能有效地抑制裸鼠肺癌的生长。 同时，GrB-NGs组的小鼠体重变化并不显著（图7d)，这一方面表明GrB-NGs无明细的毒副作 用，另一方面也说明GrB-NGs能有效地抑制小鼠原位肺癌的生长，使小鼠生长状况良好。相 反，PBS和空白纳米凝胶对照组的小鼠体重均显著降低，这是因为小鼠随着原位肺癌的快速 生长，身体状况急剧下降。小鼠的生存实验也表明GrB-NGs治疗组的小鼠在整个观察期间 (40天），没有死亡发生；而PBS和空白纳米凝胶对照组的小鼠在治疗观察结束后，全部死亡 (图iehH&E染色可以发现GrB-NGs对体内主要脏器(心脏、肝脏、肾等)没有副作用（图8)，这 进一步表明了GrB-NGs不会引起明显的毒副作用。
【主权项】
1. 一种抗肿瘤药物的制备方法，包括W下步骤： (1) 将聚合物四挫衍生物和含甲基丙締酸醋基团的交联剂加入水或者缓冲液中得到载 体溶液;所述聚合物四挫衍生物的浓度为0.5~10 mg/mL (2) 将蛋白质药物加入步骤(1)的载体溶液中，得到混合液； (3) 将步骤(2)的混合液注射到有机溶剂中，得到悬浮液;然后进行紫外光照反应得到 抗肿瘤药物； 所述聚合物四挫衍生物具有式I结构：式I; 其中η > 2; R为山畑2、醒02、〇16、備2、(：1、化、]^、〇)2]^或者化畑8〇。； Ρ为透明质酸、透明质酸赖氨酸化合物、透明质酸脫胺化合物、葡聚糖、壳聚糖、胶原蛋 白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚醋； 所述含甲基丙締酸醋基团的交联剂具有式II结构：式II; 其中m > 2; 化为透明质酸、透明质酸脫胺化合物、透明质酸赖氨酸化合物、壳聚糖、葡聚糖、胶原蛋 白、聚乙二醇、聚乙二醇-聚醋、下二胺、己二胺、脫胺、脫氨酸或者赖氨酸。2. 根据权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:步骤（1)中，甲基丙締酸醋 基团与四挫基团的摩尔比为1:1。3. 根据权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:所述缓冲液包括憐酸盐缓 冲液、4-(2-?乙基)-1-赃嗦乙烧横酸半钢盐缓冲溶液、Ξ径甲基氨基甲烧缓冲溶液或者2- 吗嘟乙横酸缓冲溶液。4. 根据权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:所述有机溶剂包括丙酬、 乙腊或者乙醇。5. 根据权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:所述聚乙二醇为线性聚乙 二醇或者多臂聚乙二醇;所述聚醋为聚丙交醋、聚(丙交醋-C0-乙交醋）、聚己内醋或者聚碳 酸醋。6. 根据权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:聚合物四挫衍生物的制备 方法为，先向四挫溶液中加入缩合剂与催化剂，反应得到活化的四挫溶液;然后把聚合物水 溶液滴加到活化的四挫溶液中，室溫反应得到聚合物四挫衍生物;所述聚合物为透明质酸、 葡聚糖、壳聚糖、胶原蛋白、聚乙二醇或者聚乙二醇-聚醋。7. 根据权利要求6所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:所述四挫与缩合剂、催化 剂的摩尔比为1:2:0.1。8. 根据权利要求6所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:所述缩合剂为二环己基碳 二亚胺;所述催化剂为4-二甲氨基化晚。9. 根据权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于:所述紫外光照反应的波长 为302~390 nm，强度为0.8~100 mW/cm2,时间为90~180s。10. 根据权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法，其特征在于：步骤（3)紫外光照反应 后，旋转蒸发除去有机溶剂，然后用水透析得到抗肿瘤药物。
【文档编号】A61P35/00GK105963703SQ201610536411
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年7月8日
【发明人】邓超, 陈景, 孟凤华, 钟志远
【申请人】苏州大学张家港工业技术研究院