广金钱草提取物治疗泌尿性结石的应用
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体涉及广金钱草提取物治疗泌尿性结石的应用。本发明通过将广金钱草的三个部位进行提取，采用腹腔注射乙醛酸盐溶液制作小鼠草酸钙结晶模型分别研究各部位对草酸钙结晶产生的作用。结果表明：广金钱草提取物能够促使小鼠血肌酐、尿素氮水平显著下降，肾脏组织钙含量显著下降、肾组织草酸钙结晶沉积及肾脏病理组织损伤均显著减轻、CAT、CuZn?SOD、GSH、骨桥蛋白、CD44、TRPV5、Calbindin?D28和Ki67水平显著升高；MDA和TUNEL含量显著降低。
【专利说明】
广金钱草提取物治疗泌尿性结石的应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及广金钱草提取物治疗泌尿性结石的应用。
【背景技术】
[0002] 肾脏是人体重要的功能器官，它的功能是生成尿液的同时清除体内代谢产物及废 物、毒物，经重吸收功能保留体内水份及其它有用的物质，如蛋白质、葡萄糖、氨基酸、钾离 子、钠离子、碳酸氢钠等，调节水、电解质平衡及体内酸碱平衡，肾脏保证了机体内环境的稳 定，使得新陈代谢能够正常进行。泌尿系结石是危害人类健康的重要疾病，我国属于全球结 石的高发区，且发病率呈逐年上升的趋势。随着医疗技术的发展，尽管肾结石的治疗方法已 有不少，但始终没有非常有效的预防及防止复发的方法。泌尿系结石中，梗阻性肾病最为常 见，左、右肾结石的发病率持平，双肾均有结石的发病率约为7%_10%，其中草酸钙结石占 肾结石的80%。肾结石对人体的危害不仅是梗阻，结石可致肾功能不全，但其介导的肾损害 发生机制并不明确。
[0003] 结石的早期表现是结晶，其成分约80%是草酸钙，是泌尿系结石中最常见的种类， 由于其复发率高，目前已成为泌尿系结石的研究重点。目前临床治疗结石的主要方法以碎 石手术为主，随着经皮肾镜、体外冲击波碎石术、腹腔镜、输尿管镜等技术的逐渐成熟，尿路 结石的治疗方法已不再棘手，但术后结石复发的概率高达50%，且其对患者的伤害较大。利 用中草药治疗肾脏结石效果显著且副作用少，因此近年来对中药在抗石方面的研究越来越 多，目前，广金钱草各提取部位对于减轻结晶肾损伤的作用尚未见报道。
【发明内容】
[0004] 为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种广金钱草提取物 治疗泌尿性结石的应用。
[0005] 为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 本发明的第一方面，提供了广金钱草提取物在制备泌尿性结石治疗药物中的用 途。
[0007] 进一步地，所述泌尿性结石为肾脏结石。
[0008] 进一步地，所述结石为草酸钙结石。
[0009] 进一步地，所述药物起到以下任一项或多项的作用：（1)用于降低血肌酐或尿素氮 水平；（2)用于减少肾脏组织中钙含量；（3)用于修复肾脏组织损伤；（4)用于减少肾脏组织 中的结晶；（5)用于提高肾脏组织中抗氧化剂和自由基清除剂含量；（6)用于提高肾组织中 骨桥蛋白和⑶44表达水平；（7)用于提高肾组织中Calbindin-D28蛋白表达水平；（8)用于促 进肾小管上皮细胞增殖；（9)用于抑制肾小管上皮细胞凋亡。
[0010] 广金钱草，为豆科植物广金钱草Desmodium styraci foLium, (Osb. )Merr.的干燥 地上部分。
[0011]进一步地，所述广金钱草提取物为广金钱草经提取溶剂提取制得的提取物。
[0012] 所述提取溶剂，只要不损害本发明的效果，则没有特别的限制，可以为水；甲醇、乙 醇等一元醇；1，3_丁二醇、丙二醇等多元醇;醋酸乙酯等低级烷基酯；乙醚，丙酮等。在本发 明中，也可以将上述溶剂组合使用。优选的提取溶剂为水、甲醇、乙醇、1，3_丁二醇或其组 合。尤其优选的提取溶剂为水、乙醇或其组合(即乙醇水溶液）。
[0013] 更为具体地，所述广金钱草提取物采用包括下列步骤的方法制得：以广金钱草为 原料，用提取溶剂提取，然后采用萃取溶剂进行萃取，获得广金钱草提取物。
[0014] 进一步地，所述提取溶剂选用乙醇水溶液。优选地，所述提取溶剂选用95%的乙醇 水溶液。在本发明中，95 %的乙醇水溶液中的95 %是指乙醇体积分数占95 %，亦即100体积 中含95体积的乙醇。
[0015] 进一步地，所述萃取溶剂选自石油醚、乙酸乙酯或正丁醇中的任一种。
[0016]再进一步地，所述广金钱草提取物采用包括下列步骤的方法制得：以广金钱草为 原料，粉碎，用提取溶剂提取，合并提取液，浓缩，获得浓缩液;然后将所得浓缩液用水分散， 分别采用萃取溶剂进行萃取，浓缩，获得广金钱草提取物。
[0017]所述浓缩的方法包括但不限于:常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发、多效蒸发。
[0018] 所述绿萼梅提取物制备时，满足下列条件中的任一项或多项：
[0019] (1)所述广金钱草与提取溶剂的料液比为Ig: (5~13 )ml;
[0020] (2)萃取时，浓缩液与萃取溶剂之间的体积比为1:1至1:3,萃取次数为1-3次。
[0021] 本发明的第二方面，还提供了广金钱草提取物在制备药物中的用途，所述药物起 到以下任一项或多项的作用：（1)用于降低血肌酐或尿素氮水平；（2)用于减少肾脏组织中 钙含量；（3)用于修复肾脏组织损伤；（4)用于减少肾脏组织中的结晶；（5)用于提高肾脏组 织中抗氧化剂和自由基清除剂含量；（6)用于提高肾组织中骨桥蛋白和CD44表达水平；（7) 用于提高肾组织中Calbindin-D28蛋白表达水平；（8)用于促进肾小管上皮细胞增殖；（9)用 于抑制肾小管上皮细胞凋亡。
[0022] 本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，含有前述广金钱草提取物以及药学 上可接受的载体。
[0023] 药学上可接受的载体为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂，包括(但不限于)糖 类(如乳糖、葡萄糖和蔗糖），淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉），纤维素及其衍生物(如羧甲基 纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素），黄蓍胶粉末，麦芽，明胶，滑石，固体润滑剂(如硬脂 酸和硬脂酸镁），硫酸钙，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油，多元 醇（如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇），海藻酸，乳化剂(如Tween、聚氧乙烯 蓖麻油），润湿剂(如月桂基硫酸钠），着色剂，调味剂，压片剂、稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无 热原水，等渗盐溶液和磷酸盐缓冲液等;该载体可根据需要提高配方的稳定性、活性及生物 有效性等。
[0024] 本发明药物组合物使用时，所述广金钱草提取物作为唯一有效成分，或者所述广 金钱草提取物作为有效成分之一，可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成 不同给药途径的药物剂型。
[0025] 优选的，所述药物组合物的制剂形式为片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、 口服液、醑剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、注射剂、注射用无菌粉末，或者栓剂。上述制剂类型可 以按照药剂学(第六版，人民卫生出版社，崔福德）中的相关定义理解，上述制剂的制备可以 按照药剂学(第六版，人民卫生出版社，崔福德）中的相关制剂的方法配制。
[0026] 优选的，所述药物组合物的制剂形式为片剂或口服液。
[0027] 优选的，本发明所述药物组合物可经过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。
[0028] 优选的，本发明的药物组合物生产时可以通过滤膜过滤除菌，或者进行高压灭菌。
[0029] 广金钱草提取物作为活性成分的有效剂量可随给药模式和疾病的严重程度而变 化。对大部分大型哺乳动物而言，每天有效成分的服用剂量均在本领域技术人员或医师所 熟知的范围内。
[0030] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0031]本发明通过将广金钱草的三个部位进行提取，采用腹腔注射乙醛酸盐溶液制作小 鼠草酸钙结晶模型分别研究各部位对草酸钙结晶产生的作用。结果表明：广金钱草提取物 能够促使小鼠血肌酐、尿素氮水平显著下降，肾脏组织钙含量显著下降、肾组织草酸钙结晶 沉积及肾脏病理组织损伤均显著减轻、CAT、CuZn-SOD、GSH、骨桥蛋白、CD44、TRPV5、 Calbindin-D28和Ki67水平显著升高;MDA和TUNEL含量显著降低。
【附图说明】
[0032]图1:各组小鼠肾脏H-E染色结果(200 X )。
[0033] 图2:各组小鼠肾脏病理评分结果;注:与A组比较，*P〈0.05;与B组比较，#P〈0.05。
[0034]图3:各组小鼠肾脏冯库萨染色结果（100X)。
[0035] 图4:各组小鼠肾脏结晶评分结果;注:与A组比较，*P〈0.05;与B组比较，#P〈0.05。
[0036]图5:各组小鼠骨桥蛋白定量结果;注:与A组比较，*P〈0.05;与B组比较，#P〈0.05。 [0037]图6:各组小鼠 CD44定量结果;注:与A组比较，*P〈0.05;与B组比较，#P〈0.05。
[0038] 图7:各组小鼠肾组织TRPV5免疫组化染色结果(200X )。
[0039] 图8 :各组小鼠肾脏TRPV5免疫组化评分结果；注：与A组比较，*P〈0.05 ;与B组比 较，#Ρ〈0·05。
[0040] 图9:各组小鼠肾组织Calbindin-D28免疫组化染色结果(200Χ )。
[0041 ] 图10:各组小鼠肾脏Calbindin-D28免疫组化评分结果；注：与A组比较，*P〈0.05; 与B组比较，#P〈0.05。
[0042] 图11:各组小鼠肾组织Ki67免疫组化染色结果(200 X )。
[0043] 图12 :各组小鼠肾脏Ki67免疫组化评分结果；注：与A组比较，*P〈0.05 ;与B组比 较，#Ρ〈0·05。
[0044] 图13:各组小鼠肾组织TUNEL染色结果(200Χ )。
[0045] 图14 :各组小鼠肾脏TUNEL评分结果；注：与A组比较，*Ρ〈0.05 ;与B组比较，#Ρ〈 0.05〇
【具体实施方式】
[0046]在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案;还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体 实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法， 通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。
[0047] 当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端 点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和 科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、 材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本 发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实 现本发明。
[0048] 除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领 域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及 相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等 MOLECULAR CL0NING:A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989and Third edition，2001;Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,John Wiley&Sons,New York,1987and periodic updates；the series METHODS IN ENZYM0L0GY,Academic Press,San Diego；Wolffe,CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION,Third edition,Academic Press,San Diego,1998；METH0DS IN ENZYM0L0GY,Vol.304,Chromatin(P.M.ffassarman and A.P.ffolffe,eds.),Academic Press，San Diego,1999;和METHODS IN MOLECULAR BI0L0GY，Vol.119,Chromatin Protocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
[0049] 实施例1
[0050] 一、广金钱草提取物的制备：
[00511以广金钱草为原料，粉碎，用浓度为95 %乙醇水溶液渗漉或者热回流提取，所述广 金钱草与95 %乙醇水溶液的料液比为Ig: (5~13)ml，合并乙醇水溶液提取液，浓缩至无醇 味，获得浓缩液。所述提取液浓缩后到无醇味指的醇的浓度小于10%。
[0052]然后将所得浓缩液用水分散，分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇作为萃取溶剂 进行萃取，浓缩液与萃取溶剂之间的体积比为1:1至1:3,萃取次数为1-3次，获得萃取液。然 后浓缩各萃取液，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位以及萃取后的水层部位(水 溶液)。
[0053] 二、动物实验：
[0054] C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(A组）、乙醛酸盐结晶组(B组）、石油醚部位干预 组(C组）、乙酸乙酯部位干预组(D组）、正丁醇部位干预组(E组)和剩余水溶液干预组(F组）。 A组腹腔注射100mg/kg生理盐水，B组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐，C组腹腔注射100mg/kg乙 醛酸盐+20mL/kg石油醚部位，D组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20mL/kg乙酸乙酯部位，E组 腹腔注射l〇〇mg/kg乙醛酸盐+20mg/kg正丁醇部位，F组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20mL/ kg剩余水溶液，连续给药5天后，通过血生化分析仪、HE染色、冯库萨染色检测各组小鼠血生 化指标、肾组织钙含量、各组小鼠肾组织切片中草酸钙结晶体分布及组织病理改变，同时利 用相关试剂盒、荧光实时定量PCR技术和免疫组化技术检测CAT、CuZn-SOD，GSH、MDA、TRPV5、 Calbindin-D28、骨桥蛋白、CD44、Ki67 和 TUNEL 表达改变。
[0055]三、实验结果：
[0056] 1、各组小鼠血生化指标测定结果
[0057]为明确广金钱草三个不同提取部位对于小鼠草酸钙结晶模型小鼠生化指标是否 有影响，首先测定了各组小鼠的血肌酐、尿素氮的含量。结果显示:B组小鼠血肌酐及尿素氮 水平显著高于对照组A组(P〈0.05); C组、D组、E组小鼠血肌酐及尿素氮水平明显低于B组(P〈 0.05) ;F组小鼠血肌酐及尿素氮水平较对照组A组显著升高(P〈0.05)，与B组小鼠血肌酐及 尿素氮水平无明显差异(P>〇.05)。具体结果见表1。此结果说明B组乙醛酸盐造肾结晶模型 成功，小鼠血肌酐、尿素氮水平明显升高，C、D、E组小鼠血肌酐、尿素氮水平低于B组小鼠，说 明广金钱草石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分对小鼠生化指标有效;而F组剩余水溶 液灌胃对小鼠血肌酐、尿素氮无影响，其结果与B组相近，说明剩余水溶液对小鼠草酸钙结 晶造模小鼠的血生化指标没有影响。
[0058] 表1.各组小鼠血肌酐、尿素氮含量检测结果(7±s，n = 5)
[0060] 注:与A组比较，*P〈0.05;与B组比较，#P〈0.05 [0061 ] 2、各组小鼠肾脏组织钙含量测定
[0062]进一步验证广金钱草三个部位对于小鼠肾脏组织中钙含量是否有影响，分别测定 6组小鼠肾脏组织中的钙含量，结果显示B组小鼠肾脏组织钙含量显著高于对照组A组(P〈 0.05); C组、D组、E组小鼠肾脏组织钙含量明显低于B组(P〈0.05); F组小鼠肾脏组织钙含量 较对照组A组显著升高(P〈0.05)，与B组小鼠肾脏组织钙含量无明显差异(P>0.05)。具体结 果见表2。其结果说明广金钱草石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分可以有效减少草酸 钙结晶小鼠肾脏组织中钙含量，而剩余水溶液对小鼠草酸钙结晶模型小鼠肾脏组织中钙含 量没有影响。
[0063] 表2.各组小鼠肾脏组织钙含量检测结果(T±s，n = 5)
[0065] 注:与A组比较，*P〈0.05;与B组比较，#P〈0.05
[0066] 3、各组小鼠肾脏组织病理损伤
[0067]利用H-E染色各组小鼠肾脏组织切片验证广金钱草三个提取部位对于小鼠肾脏组 织形态结构是否有影响。在光学显微镜下观察6组小鼠肾脏组织病理切片，结果显示:B组、F 组肾脏皮髓质充血明显，间质水肿，大量炎细胞浸润，肾小管腔体积明显增大，同时肾小管 内上皮细胞肿胀及变性坏死脱落;C组、D组、E组肾脏皮髓质充血程度轻，间质轻度水肿，少 许炎细胞浸润，肾小管腔体积轻度增大，同时可见少许肾小管内上皮细胞肿胀及变性坏死 脱落。病理评分结果为:B组肾脏病理评分显著高于对照组A组(P〈0.05) ;C组、D组、E组小鼠 肾脏病理评分明显低于B组（P〈0.05) ;F组小鼠肾脏病理评分较对照组A组显著升高（P〈 0.05)，与B组小鼠肾脏病理评分无明显差异(P>0.05)。（见图1、图2)结果说明乙醛酸盐造模 草酸钙结晶小鼠和剩余水溶液灌胃小鼠的肾脏组织损害较严重，而广金钱草石油醚部分、 乙酸乙酯部分和正丁醇部分灌胃对小鼠肾脏组织有明显修复作用。
[0068] 4、各组小鼠肾脏组织结晶沉淀
[0069]利用冯库萨染色各组小鼠肾脏组织切片，在光学显微镜下观察各组小鼠肾脏结晶 情况，结果显示:B组、F组较A组小鼠肾小管腔中出现大量黑色钙盐结晶体;C组、D组、E组小 鼠肾小腔中出现少量黑色钙盐结晶体。溶液沉淀评分结果为:B组肾脏结晶评分显著高于对 照组A组(P〈0.05); C组、D组、E组小鼠肾脏结晶评分明显低于B组(P〈0.05);F组小鼠肾脏结 晶评分较对照组A组显著升高(P〈0.05)，与B组小鼠肾脏结晶评分无明显差异(P>0.05)。（见 图3、图4)结果说明乙醛酸盐造模B组小鼠结晶较多，广金钱草石油醚部分、乙酸乙酯部分和 正丁醇部分灌胃对小鼠肾脏组织的结晶有明显减少，剩余水溶液灌胃对肾脏组织结晶无明 显作用。
[0070] 5 ·各组小鼠肾组织CAT、CuZn-SOD、GSH和MDA含量测定
[0071] 结果显示B组小鼠肾脏组织CAT、CuZn-SOD、GSH含量显著低于对照组A组(P〈0.05)， 而MDA含量显著高于对照组A组(P〈0.05); C组、D组、E组小鼠肾脏组织CAT、CuZn-SOD、GSH含 量明显高于B组(P〈0.05)，而MDA含量显著低于对照组A组(P〈0.05); F组小鼠肾脏组织CAT、 CuZn-S0D、GSH和MDA含量较对照组A组显著升高（P〈0.05)，与B组小鼠肾脏组织CATXuZn-S0D、GSH和MDA含量无明显差异(P>0.05)。具体结果见表3。结果说明乙醛酸盐造模草酸钙结 晶小鼠和剩余水溶液灌胃小鼠肾组织抗氧化剂和自由基清除剂含量下降，氧自由基产物升 高；而广金钱草石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位灌胃对肾脏组织抗氧化剂和自由 基清除剂含量有恢复作用。
[0072] 表3各组小鼠肾组织CAT、CuZn-SOD、GSH和MDA活性测定(?±8, η = 5)
[0074] 注:与A组比较，*P〈0.05;与B组比较，#P〈0.05
[0075] 6、各组小鼠肾组织骨桥蛋白和⑶44含量的测定
[0076] 实时荧光定量PCR结果显示B组小鼠肾脏组织骨桥蛋白和⑶44含量显著高于对照 组A组(P〈0.05); C组、D组、E组小鼠肾脏组织骨桥蛋白和CD44含量较B组明显降低(P〈0.05); F组小鼠肾脏组织骨桥蛋白和⑶44含量较对照组A组显著升高(P〈0.05)，与B组小鼠肾脏组 织骨桥蛋白和CD44含量无明显差异(P>0.05)(见图5和图6)。结果说明乙醛酸盐造模草酸钙 结晶小鼠和剩余水溶液灌胃小鼠肾组织骨桥蛋白和CD44表达下降；而广金钱草石油醚部 位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位灌胃对肾组织中骨桥蛋白和⑶44表达有恢复作用。
[0077] 7、各组小鼠肾组织TRPV5蛋白表达
[0078] 免疫组化染色结果显示B组小鼠肾脏组织T R P V 5含量显著低于对照组A组（P〈 0.05); C组、D组、E组小鼠肾脏组织TRPV5含量较B组明显升高(P〈0.05);F组小鼠肾脏组织 TRPV5含量较对照组A组显著升高(P〈0.05)，与B组小鼠肾脏组织相比无明显差异(P>0.05)。 (见图7和图8)
[0079] 8、各组小鼠肾组织Calbindin_D28蛋白表达
[0080] 免疫组化染色结果显示B组小鼠肾脏组织Calbindin-D28含量显著低于对照组A组 (P〈0.05);C组、D组、E组小鼠肾脏组织Calbindin-D28含量较B组明显升高(P〈0.05) ;F组小 鼠肾脏组织Calbindin-D28含量较对照组A组显著降低(P〈0.05)，与B组小鼠肾脏组织相比 无明显差异(P>〇. 05)。（见图9和图10)
[0081 ] 10、各组小鼠肾小管上皮细胞增殖分析
[0082] 免疫组化染色结果显示B组小鼠肾脏组织Ki67染色强度显著低于对照组A组(P〈 0.05); C组、D组、E组小鼠肾脏组织Ki67染色强度较B组明显升高(P〈0.05);F组小鼠肾脏组 织Ki67染色强度较对照组A组显著降低(P〈0.05)，与B组小鼠肾脏组织相比无明显差异(P> 0.05)(见图11和图12)。结果说明乙醛酸盐造模草酸钙结晶小鼠和剩余水溶液灌胃抑制肾 小管上皮细胞增殖；而广金钱草石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位灌胃对肾小管上 皮细胞增殖具有恢复和促进作用。
[0083] 12、各组小鼠肾小管上皮细胞凋亡分析
[0084] TUNEL染色结果显示B组小鼠肾脏组织TUNEL染色强度显著高于对照组A组（P〈 0.05);C组、D组、E组小鼠肾脏组织TUNEL染色强度较B组明显降低(P〈0.05);F组小鼠肾脏组 织TUNEL染色强度较对照组A组显著升高(P〈0.05)，与B组小鼠肾脏组织相比无明显差异(P> 0.05)(见图13和图14)。结果说明乙醛酸盐造模草酸钙结晶小鼠和剩余水溶液灌胃促进肾 小管上皮细胞凋亡；而广金钱草石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位灌胃对肾小管上 皮细胞凋亡具有抑制作用。
[0085]以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制， 应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出 若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员， 在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更 动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对 上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围 内。
【主权项】
1. 广金钱草提取物在制备泌尿性结石治疗药物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述泌尿性结石为肾脏结石。3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述结石为草酸钙结石。4. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物起到以下任一项或多项的作用： (1)用于降低血肌酐或尿素氮水平；（2)用于减少肾脏组织中钙含量；（3)用于修复肾脏组织 损伤；（4)用于减少肾脏组织中的结晶；（5)用于提高肾脏组织中抗氧化剂和自由基清除剂 含量；（6)用于提高肾组织中骨桥蛋白和⑶44表达水平；（7)用于提高肾组织中Calbindin-D28蛋白表达水平；（8)用于促进肾小管上皮细胞增殖；（9)用于抑制肾小管上皮细胞凋亡。5. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述广金钱草提取物为广金钱草经提取溶 剂提取制得的提取物。6. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述广金钱草提取物采用包括下列步骤的 方法制得：以广金钱草为原料，用提取溶剂提取，然后采用萃取溶剂进行萃取，获得广金钱 草提取物。7. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述绿萼梅提取物制备时，满足下列条件 中的任一项或多项： (1) 所述提取溶剂选用乙醇水溶液； (2) 所述萃取溶剂选自石油醚、乙酸乙酯或正丁醇中的任一种。8. 广金钱草提取物在制备药物中的用途，所述药物起到以下任一项或多项的作用：（1) 用于降低血肌酐或尿素氮水平；（2)用于减少肾脏组织中钙含量；（3)用于修复肾脏组织损 伤；（4)用于减少肾脏组织中的结晶；（5)用于提高肾脏组织中抗氧化剂和自由基清除剂含 量；（6)用于提高肾组织中骨桥蛋白和⑶44表达水平；（7)用于提高肾组织中Calbindin-D28 蛋白表达水平；（8)用于促进肾小管上皮细胞增殖；（9)用于抑制肾小管上皮细胞凋亡。9. 一种药物组合物，含有广金钱草提取物以及药学上可接受的载体。10. 根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述广金钱草提取物为唯一有效 成分或有效成分之一。
【文档编号】A61P13/12GK105982930SQ201610614237
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2016年7月29日
【发明人】钱勇, 谌卫, 董昕, 郭志勇, 娄子洋, 辛振强, 张田勇, 谢天培
【申请人】上海诗丹德生物技术有限公司, 上海长海医院, 上海诗丹德标准技术服务有限公司