花锚抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药应用
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药花锚抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。本发明的提取物通过如下方法得到：先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00，体积比）洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100：01-100:06，体积比）洗脱，二氯甲烷：甲醇100：01-100:06洗脱液干燥即得。
【专利说明】
花锚抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药应用
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药花锚抗肿瘤提取物及其组合物的 制备方法和其在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝 癌等恶性肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 本品为龙胆科花锚属植物花锚的全草，学名Halenia corniculata(L. Wornazt5S 要分布于我国东北、华北及陕西等地。花锚为一年生草本，全株高约20-70cm，夏、秋季采 收，晾干。中医学认为花锚具有清热、促进伤口愈合等功效，临床用于治疗"协日"和"热"过 盛所致疾病。
[0003] 花锚性寒，味甘、苦，具有清热解毒，凉血止血，清热利湿，平肝利胆等作用，可用于 胁痛，胃痛，肝炎，胆囊炎，头痛头晕，脉管炎，外伤出血等症状。现在药理学研究证明花锚具 有促进肝细胞的再生，加速坏死组织的修复，调节体液免疫的作用。
[0004] 本发明通过系统地筛选研究，意外地发现花锚提取物具有显著的抗肿瘤活性，即 花锚提取物对脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤具有 很好的预防及治疗作用，可以应用于癌症的预防和治疗。
[0005] 但是，对其抗肿瘤的有效成分一直不清楚，本发明通过系统地筛选研究，发现了花 锚的有效提取提取物，可以应用于肿瘤的预防和治疗。
【发明内容】
[0006] 本发明所解决的技术问题是提供一种花锚提取物。
[0007] 本发明还提供了以花锚提取物为主要活性成分的组合物。
[0008] 本发明同时提供了花锚提取物及其组合物的制备和在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0009] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0010] 维吾尔药花锚经去离子水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（100 :0-100 :1〇〇)梯度洗脱（二氯甲烷：甲醇，具体比例见 表1)，各二氯甲烷：甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体 系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:〇〇， 体积比）洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100 :01-100:06,体积比）洗 脱，二氯甲烷：甲醇100 :01-100:06洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。优选地，先用二 氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合 溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液干燥即得抗肿 瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提 取物从未见文献报道，其100:06洗脱液TLC分析表征如图I，TLC分析条件：GF254硅胶板， 展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1显色方法：香草醛浓硫酸显色。
[0011] 具体，发现过程如下：
[0012] I、花锚经去离子水超声提取物的制备
[0013] 取维吾尔药花锚20g，经100mL去离子水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 SN0239B 13. 3mg，留样 0· 0348mg，剩余 13. 2652mg。
[0014] 2、二氯甲烷：甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果
[0015] 取维吾尔药花锚20g，经100mL去离子水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 SN0239B13. 3mg，留样0· 0348mg，剩余13. 2652mg。上柱，甲醇溶解，共用甲醇17ml。上硅胶柱 色谱，拌样硅胶500mg，空白硅胶5g，玻璃柱内径1.6cm，二氯甲烷：甲醇系统梯度洗脱（二 氯甲烷：甲醇，体积比，见表1)，柱体积I Iml，每个梯度洗脱100mL，得到，各个浓度提取洗脱 液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷：甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2,图3,色 谱条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1，二氯甲烷：乙酸乙酯：甲 醇=3:1: 1，显色方法：香草醛浓硫酸显色。
[0016] 表 1
[0019] 3、抗肿瘤活性筛选方法和结果
[0020] 1)实验条件
[0021] a)细胞株信息
[0022] 大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库。
[0023] b)药品及试剂
[0024] 样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培 养液稀释至所需浓度（DMSO彡1%。）。
[0025] RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马 生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT)。
[0026] c)仪器
[0027] CO2培养箱（SANYO,日本）
[0028] 垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司）
[0029] 倒置生物显微镜（重庆光电仪器有限公司）
[0030] 低/高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）
[0031] 电子天平（奥豪斯仪器有限公司）
[0032] 酶标仪（伯乐生命医学产品有限公司）
[0033] 立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）
[0034] 鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）
[0035] PH 计（SART0RIUS，德国）
[0036] 2)实验方法和过程
[0037] 大鼠脑胶质瘤C6细胞株以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。 各组分以DMSO溶解为lOOmg/mL储存液，保存于-20°C待用。铺板后12h，观察细胞汇合率 约为40%，加药，浓度均为100yg/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组（培 养基+细胞；含〇. 1% DMSO培养基+细胞），3个空白孔（只有培养基）。加入药物24小 时后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑盐化学名为3- (4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴盐 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，继续培养 4 小时。完全弃去上清液，加入100 μ I DMS0,混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD 值。
[0038]
[0039] 3)实验结果
[0040] 表 2
[0044] 结果发现：维吾尔药花锚经去离子水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上 样后的硅胶柱，先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱，继 用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100 :01-100:06,体积比）洗脱，二氯甲烷：甲 醇100 :01-100:06洗脱液经回收溶剂，干燥，得到高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。 优选地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱，继用二氯 甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱 液干燥即得。该活性提取物从未见文献报道，其100:06洗脱液TLC分析表征如图1。
[0045] 4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究
[0046] 1)提取溶剂的种类研究
[0047] 分别用甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等 溶剂提取，并测试提取物的对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：
[0048]表 3
[0050] 研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇 水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0051] 2)提取溶剂的用量研究
[0052] 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物 的抗肿瘤活性，结果如下：
[0053] 表 4
[0057] 提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
[0058] 3)干燥方法的研究
[0059] 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到 的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干 燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对C6细胞抗肿瘤活性提取物进行干燥，其 中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0060] 表 5
[0062] 因此，花锚抗肿瘤提取物的制备方法为：
[0063] 维吾尔药花锚经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱， 先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:〇〇,体积比）洗脱2-50倍柱体积，继用 二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100 :01-100:06,体积比）洗脱2-50倍柱体积， 二氯甲烷：甲醇100 :01-100:06洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。以上条件最 优为先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继 用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱15倍柱体积。
[0064] 优选地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱 2-50倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱2-50 倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液干燥。更优选地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂 (二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯 甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液干燥即得。
[0065] 其中，
[0066] 提取物提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合 溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇水和乙醇水，提取物提取用有机溶剂用量为药材重 量的2-50倍（重量/体积比）。
[0067] 1)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0068] 5.花锚抗肿瘤有效提取物（二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液得到的提取物）的抗 肿瘤活性研究
[0069] 利用各种肿瘤细胞，如脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝 癌等恶性肿瘤细胞株，分别测试花锚抗肿瘤提取物的抗肿瘤活性，IC5。结果如下：
[0070] 表 6
[0073] 因此，我们发现，花锚抗肿瘤提取物具备抗肿瘤活性，可望用于各种肿瘤如脑胶质 瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤细胞株的预防及治疗。
[0074] 6、花锚抗肿瘤有效提取物的组合物及其制备方法研究
[0075] 1)固体分散体
[0076] 处方
[0077]
[0078] 制备方法：
[0079] 称取花锚提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比分 别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至花锚提取物和载体完全溶解，转入旋蒸仪 中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得花锚提取物PVP包合物。
[0080] 2)环糊精包合物
[0081] 处方：
[0083] 制备方法：
[0084] 将β -环糊精与1-5倍水研匀，加花锚提取物（水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0085] 3)分散片处方：
[0086] 花锚提取物 100 十二烷基硫酸钠 1 预胶化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交联聚维酮 10 微晶纤维素 10 微分硅胶 （U
[0087] 制备方法：
[0088] 1.花锚提取物淀粉分散体的制备，精密称取花锚提取物提取物，加入适量的十二 烷基硫酸钠，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温度下蒸 干，粉碎，过100目筛；
[0089] 2.称取处方量，花锚提取物淀粉分散体，交联聚维酮，预胶化淀粉，用70%乙醇做 湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min后，60°C烘箱烘干45min， 16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
[0090] 7、花锚抗肿瘤有效提取物的检测方法研究
[0091] 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示花锚抗肿瘤有效提取物的 特征。见图1
[0092] 具体条件为：色谱条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1， 显色方法：香草醛浓硫酸显色
【附图说明】：
[0093] 图1花锚C6细胞抑制活性提取物的TLC色谱图；
[0094] 图2花锚得到的化学组分的TLC色谱图；
[0095] 图3花锚得到的化学组分的TLC色谱图。
【具体实施方式】
[0096] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0097] 实施例1 :
[0098] 取维吾尔药花锚20g，经100mL去离子水超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06， 体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为 该提取物，收率0.53%。
[0099] 实施例2 :
[0100] 取维吾尔药花锚20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06， 体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为 该提取物，收率0.45%。
[0101] 实施例3:
[0102] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06， 体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为 该提取物，收率0.43%。
[0103] 实施例4:
[0104] 取维吾尔药花锚20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06， 体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为 该提取物，收率0.39%。
[0105] 实施例5 :
[0106] 取维吾尔药花锚20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06， 体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为 该提取物，收率0.41 %。
[0107] 实施例6:
[0108] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06， 体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为 该提取物，收率0.44%。
[0109] 实施例7 :
[0110] 取维吾尔药花锚20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂 (二氯甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回 收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率0. 46%。
[0111] 实施例8:
[0112] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂 (二氯甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回 收有机溶剂，真空干燥，即为该提取物，收率0. 49%。
[0113] 实施例9:
[0114] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷： 甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱8倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混 合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:06,体积比）洗脱15倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱 液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率0. 47%。
[0115] 实施例10 :
[0116] 取维吾尔药花锚20g，经100mL去离子水超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:5， 体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为 该提取物，收率0.51 %。
[0117] 实施例11 :
[0118] 取维吾尔药花锚20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:5， 体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为 该提取物，收率0.32%。
[0119] 实施例12 :
[0120] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:5， 体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为 该提取物，收率0.31 %。
[0121] 实施例13 :
[0122] 取维吾尔药花锚20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:5， 体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为 该提取物，收率0.35%。
[0123] 实施例14:
[0124] 取维吾尔药花锚20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:5， 体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为 该提取物，收率0.38%。
[0125] 实施例15 :
[0126] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇， 100:00,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:5， 体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为 该提取物，收率0.36%。
[0127] 实施例16 :
[0128] 取维吾尔药花锚20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100: 〇〇,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂 (二氯甲烷：甲醇，100:5,体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收 有机溶剂，真空干燥，即为该提取物，收率0. 47%。
[0129] 实施例17 :
[0130] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取15min， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（1.6cm内径小柱），先用二氯甲烷：甲醇混 合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100: 〇〇,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂 (二氯甲烷：甲醇，100:5,体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液经回收 有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率0. 44%。
[0131] 实施例18 :
[0132] 取维吾尔药花锚20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 6cm内径小柱），先用二氯甲烷： 甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00,体积比）洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷：甲醇混 合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:5,体积比）洗脱40倍柱体积，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液 经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物，收率〇. 42%。
[0133] 实施例19 :固体分散体
[0134] 称取花锚提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质量比分 别放入烧杯中，加入75%乙醇，磁力搅拌器搅拌至花锚提取物和载体完全溶解，转入旋蒸仪 中去除溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得花锚提取物PVP包合物。
[0135] 实施例20 :环糊精包合物
[0136] 将β -环糊精与1-5倍水研匀，加花锚提取物（水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0137] 实施例21:分散片
[0138] 1.称取干燥的花锚提取物，加入适量的十二烷基硫酸钠，使用70%的乙醇充分溶 解，加入水溶性淀粉与花锚提取物（I: 1)，搅拌混合均匀，在70°C下干燥，粉碎，过100目筛， 得花锚提取物分散体。
[0139] 2.精密称取处方量，花锚提取物分散体，交联聚维酮，可压性淀粉，用70%乙醇做 湿润剂，边加入边搅拌，14目筛制成湿颗粒，室温下放置15min后，70°C烘箱烘干45min，16 目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
【主权项】
1. 一种维吾尔药花锚提取物，其特征为，维吾尔药花锚经溶剂超声提取，提取液浓 缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:00的二氯甲烷：甲醇混合溶剂洗 脱，继用体积比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，二氯甲烷-甲醇100 : 01-100:06洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。2. 如权利要求1所述的维吾尔药花锚提取物，其特征为，先用体积比100:00的二氯甲 烷：甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，二氯甲烷-甲 醇100:06洗脱液经回收溶剂，干燥。3. 如权利要求1或2所述的维吾尔药花锚提取物，其特征为，所述的提取用溶剂为甲 醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、甲醇、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂。4. 如权利要求1或3所述维吾尔药花锚提取物，其特征为，先用体积比100:00的二氯 甲烷-甲醇混合溶剂洗脱2-50倍柱体积，继用体积比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇 混合溶剂洗脱2-50倍柱体积，优选地，先用体积比100:00的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱 8倍柱体积，继用体积比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱15倍柱体积。5. 如权利要求2或3所述的维吾尔药花锚提取物，其特征为，先用体积比100:00的二 氯甲烷：甲醇混合溶剂2-50倍柱体积洗脱，继用体积比100 :01-100:06的二氯甲烷-甲醇 混合溶剂2-50倍柱体积洗脱。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的花锚提取物和药 学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的花锚提取物 或权利要求6所述的药物组合物。8. 权利要求1-5任何一项所述的花锚提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求 7所述的药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。9. 如权利要求8所述的应用，其特征为，所述的肿瘤为脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、 结肠癌、胰腺癌、Η颈癌或肝癌。10. 如权利要求1-5任何一项所述的一种维吾尔药花锚提取物，其特征在于，用TLC法 检测，其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1显色方法：香 草醛浓硫酸显色。
【文档编号】A61P35/00GK105982953SQ201510081744
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月15日
【发明人】王金辉, 黄健, 吴霁蓂
【申请人】沈阳药科大学