榼藤子酸的应用及其制备方法

榼藤子酸的应用及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种榼藤子酸的应用及其制备方法。榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用：榼藤子酸作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成防治糖尿病药物或药物组合物。与现有的降糖药相比，EA具有有效剂量小、作用可靠、毒副作用小等优点，其疗效不仅在于降低血糖，同时在防治糖尿病并发症中也具有重要作用。因此EA在抗糖尿病方面具有可观的开发和应用价值。
【专利说明】
極藤子酸的应用及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体设及天然药物来源的磕藤子酸的应用及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 糖尿病(DM)是一种由膜岛素绝对或相对分泌不足而导致的W高血糖为主要特征 的慢性代谢性疾病。在全球范围内DM发病率成逐年升高的趋势，已成为继癌症、屯、脑血管之 后威胁人类健康的第Ξ大疾病。据世界卫生组织报告，2014年全球糖尿病患者人数已达 3.87亿，预计到2035年将增至5.92亿，增幅达53%。在DM患者中二型糖尿病(T2DM)患者占90〇/〇 W上，因此针对二型糖尿病的治疗是防治糖尿病的关键。目前治疗糖尿病的药物主要有双 脈类、嚷挫烧二酬类、横脈类、α-糖巧酶抑制剂类等，但都有各种不等的毒副作用。天然的活 性成分具有毒副作用小、多位点效应等优点而成为开发抗糖尿病药物的主要来源。
[0003] 磕藤子为豆科磕藤子属植物磕藤子Entada Ρ化seoloides化inn. ) Merr.的干 燥种仁，又名象豆、合子、眼镜豆。味涩、甘、平，归胃、肝、大肠经。磕藤子在俸族、壮族等多个 少数民族地区常用，主要用于治疗持疮、胃痛、便秘、水肿等病症。磕藤子酸，英文名为 Entagenic acid,简称EA，其为磕藤子皂巧的一巧元形式，是W齐墳果烧为母核的五环Ξ祗 皂巧类化合物，结构式如下所示：


【发明内容】

[0004] 本发明所要解决的技术问题是：目前治疗糖尿病的药物存在各种不等的毒副作 用。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供磕藤子酸在制备抗糖尿病药物中 的应用，为民族药物开发及寻找新型抗糖尿病药物提供依据。
[0006] 本发明提供了磕藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用。
[0007] 优选地，磕藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用为:磕藤子酸作为活性成分与 药学上可接受的载体或辅料制备成防治糖尿病药物或药物组合物。
[000引优选地，所述防治糖尿病药物为防治二型糖尿病的药物。
[0009]优选地，所述的防治糖尿病药物为增加葡萄糖摄取、降低血糖的药物。
[0010] 优选地，所述的防治糖尿病药物为增强机体糖耐量，降低膜岛素抵抗指数的药物。
[0011] 优选地，所述的防治糖尿病药物为改善脂代谢素乱的药物。
[0012] 本发明提供一种防治糖尿病的药物，所述药物的药效成分含有磕藤子酸。
[0013] 优选地，所述防治糖尿病药物为防治二型糖尿病的药物。
[0014] 优选地，所述的防治糖尿病药物为增加葡萄糖摄取、降低血糖的药物;或者为增强 机体糖耐量，降低膜岛素抵抗指数的药物;或者为改善脂代谢素乱的药物。
[0015] 本发明还提供制备磕藤子酸的方法，包括如下步骤： 1) 磕藤子总皂巧的制备:取磕藤子种仁粉碎，用体积浓度70%的乙醇水溶液浸泡提取， 合并提取液，回收乙醇得到浸膏，浸膏用热水溶解，上HP-20大孔树脂柱，用体积浓度30%的 乙醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度50%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得磕 藤子总皂巧； 2) 磕藤子酸的制备:取磕藤子总皂巧，加肥1水溶液，90°C水解反应，水解液用化0H调抑 至5~6,用乙酸乙醋萃取，取乙酸乙醋层，回收乙酸乙醋，得到的固体用甲醇溶解，过MCI柱色 谱，用体积浓度50%的乙醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度60%乙醇的乙醇水溶液洗脱，收集洗 脱液蒸干即得磕藤子酸。
[0016] 优选地，步骤(1)中浸膏用50~70°C的水溶解。
[0017]优选地，步骤(2)中肥冰溶液的浓度为2 mol/L冰解反应的溫度为85~95°C。
[0018] 与现有的技术相比，本发明具有W下有益的效果： 本发明公开了磕藤子酸(EA)在制备防治糖尿病药物中的应用:EA具有抗糖尿病的作 用，本发明用不同浓度的EA分别处理大鼠骨骼肌化6)细胞，发现EA可显著增加 L6细胞葡萄 糖消耗量，且其效药物浓度均比二甲双脈及结构相似的同类化合物低，结果表明EA具有潜 在的降血糖活性。本发明用EA作用于糖尿病模型小鼠，结果发现，EA能显著减少糖尿病模型 小鼠进水量;改善其餐后化血糖水平及葡萄糖、膜岛素耐量;可降低二型糖尿病模型小鼠空 腹膜岛素水平，改善膜岛素抵抗状态;可降低血清总胆固醇、甘油Ξ醋、低密度脂蛋白胆固 醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平而改善脂质代谢素乱状态。因此EA具有显著的抗二 型糖尿病作用。
[0019] 与现有的降糖药相比，EA具有有效剂量小、作用可靠、毒副作用小等优点，其疗效 不仅在于降低血糖，同时在防治糖尿病并发症中也具有重要作用。因此EA在抗糖尿病方面 具有可观的开发和应用价值。
【附图说明】
[0020] 图1该化合物的核磁共振氨谱。
[0021] 图2该化合物的HPLC图谱。
[0022] 图3 EA对糖尿病模型小鼠 IPGTT的影响。
[0023] 图4 EA对糖尿病模型小鼠 IPITT的影响。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，W使本领域的技术人员可W 更好的理解本发明并能予W实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0025]实施例1:磕藤子总皂巧及磕藤子酸的制备 1磕藤子总皂巧的制备:取磕藤子种仁巧.3 kg)粉碎，用6倍量体积百分比浓度70%乙醇 水溶液浸泡提取Ξ次，每次24小时，合并提取液，回收乙醇，得到浸膏（1288g)，浸膏用60°C 热水溶解上HP-20大孔树脂柱，上样量W药材量计与树脂重量比为（1:13)，用10个柱体积的 体积百分比浓度为30%的乙醇水溶液冲洗除杂，用5个柱体积的体积百分比浓度为50%乙醇 水溶液洗脱，收集50%乙醇水溶液的洗脱液，浓缩，干燥，即得磕藤子总皂巧。
[00%] 2磕藤子酸(EA)的制备：取磕藤子总皂巧，加20倍量2 mol/L的HC1，90°C水解反应 池，水解液用化0H调抑至5.4，用等量乙酸乙醋萃取立次，取乙酸乙醋层，回收乙酸乙醋，得 到的固体用2倍量(g/ml = l:2)甲醇溶解，过MCI柱色谱，用10个柱体积的体积百分比浓度为 50%乙醇水溶液冲洗除杂，用5个柱体积的体积百分比浓度为60%乙醇水溶液洗脱，收集60% 乙醇水溶液洗脱液，蒸干即得EA(HPLC法测定纯度为96%)。
[0027] 3对实施例1中提取得到的磕藤子酸进行结构鉴定 该化合物为白色无定型粉末。结合核磁共振氨谱(图1)及HPLC图谱（图2)与标准品对照 鉴定该化合物为磕藤子酸，结构式如下所示：
实施例2:EA及结构相似的同类化合物对大鼠骨骼肌细胞化6)葡萄糖消耗的对比。
[002引1材料与方法 1.1材料:齐墳果酸、熊果酸(含量>98%，中国药品生物制品检定所）、积雪草酸(含量> 98%，上海源叶生物科技有限公司），刺囊酸(含量>98%，天津一方科技有限公司）;L6细胞株 购自中科院上海细胞库;膜蛋白酶、胎牛血清(Hyc 1 on，美国），α-ΜΕΜ培养基化化CO，美国）， 葡萄糖氧化酶法测定试剂盒(英科新创科技有限公司），C02培养箱(ThermoScientif ic公 司，美国）；XDS-1型倒置显微镜（重庆光学仪器厂）；酶标仪(Tecan infinite M2000型，瑞 ±);超净工作台（苏州净化设备厂）。
[0029] 1.2细胞培养 L6细胞生长于含10 %胎牛血清的α-ΜΜ培养基中，37°C恒溫，5% C〇2,饱和湿度的培 养箱中生长，0.25%膜酶消化传代。取对数生长期的细胞用于实验。
[0030] 1.3 L6细胞葡萄糖量消耗测定 取对数生长期的L6细胞W1X104的密度接种于96孔板，每孔l(K)yL。待细胞单层贴壁后 换上含2%胎牛血清的α-ΜΕΜ培养基，每2天换液一次，至第6天使细胞分化为成熟骨骼肌细 胞。用0%胎牛血清的培养基饥饿细胞2 h后，对照组换上含0%胎牛血清的培养基，各给药组 换上含不同药物浓度的含0%胎牛血清的培养基继续解育2地，按葡萄糖氧化酶法测定每孔 葡萄糖含量:按试剂盒说明，从培养板中吸取化1细胞培养液与200ul工作液混合，37°C反应 30 min,505nm波长处测定各孔吸光度值。每孔葡萄糖含量=(标准孔吸光度值/测定孔吸光 度值）X标准液葡萄糖浓度。每孔葡萄糖消耗量=空白培养基中葡萄糖含量一每孔葡萄糖 含量。
[0031] 葡萄糖含量测定后按MTT法测定细胞活性:弃掉培养基，每孔加10化1新培养基及 10yl(0.5mg/mL) MTT解育4h后，弃掉培养基，每孔加150μ1 DMS0溶解紫色晶体，492nm波长 下测定各孔0D值。葡萄糖消耗量用每孔细胞实际消耗量与每孔0D值的比值表示用于消除细 胞增殖或是药物毒性等综合因素造成的实验误差。最后计算各组细胞葡萄糖消耗量与对照 组的比值得到各组葡萄糖消耗率。每组设6个复孔，实验重复3次。
[0032] 2统计学处理:采用SPSS10.0对各组实验数据进行检验:各组数据W均数±标准差 (x±s)表示，组间比较用单因素方差分析及t检验，WP<0.05为有统计学意义。
[0033] 3试验结果： 结果如表1所示，齐墳果酸、熊果酸、磕藤子酸均在一定程度上促进了大鼠骨骼肌L6细 胞葡萄糖消耗，显示有良好的体外降糖活性。与对照组相比，齐墳果酸80μΜ时可显著增加 L6 葡萄糖消耗量（117.41%, Ρ<0.05)，leOiiM时虽可极显著地增加葡萄糖消耗量（179.33%，Ρ< 0.001)，但是其也具有显著的细胞毒性(Ρ<〇.001);熊果酸在80μΜ时可显著增加葡萄糖消耗 量（131.20%，Ρ<0.01);磕藤子酸40ιχΜ时即可显著增加葡萄糖消耗量（122.54%，Ρ<0.01)，80μ Μ时虽有一定的细胞毒性（Ρ< 0.05)，但仍可及显著地增加葡萄糖消耗量（163.99%，Ρ< 0.001)，其增加葡萄糖消耗的活性成剂量依赖性增强。刺囊酸和积雪草酸在安全剂量范围 内均不能显著增加细胞葡萄糖消耗量。
[0034] 表1同类化合物促进L6细胞葡萄糖消耗活性的对比
注：与对照组相比中<0.05，*中<0. ο 1，**中<0.001 4结论:实验结果表明，磕藤子酸具有促进L6细胞葡萄糖消耗的作用，显示了一定的体 外降糖活性。与结构类似的同类化合物相比，磕藤子酸的有效药物浓度低于齐墳果酸和熊 果酸。
[0035] 实施例5: EA对自发性二型糖尿病模型化/化小鼠的影响 1.实验材料 1.1给药样品：自制EA样品（册LC法测定纯度>96%)，对照药品：盐酸二甲双脈（阿拉 下，批号:M107827)。所有样品均用0.25%CMC-fe配制。
[0036] 1.2实验动物:7周龄雄性BKS-dbMb小鼠40只，同窝杂合子db/m小鼠8只，均购自南 京模式动物研究所(合格证编号:SCXK(苏)2010-0001 )。化Mb纯合子小鼠餐后两小时血糖 均> 15mmol/L，符合糖尿病症状。均给予普通饲料喂养，1化光照/黑暗，室溫22 ± rc，湿度 50%-60%〇
[0037] 1.3主要试剂及设备 诺和锐;甘油Ξ醋试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20150127),总胆固醇测试 盒(南京建成生物工程研究所，批号：20150521),高密度脂蛋白胆固醇测试盒(南京建成生 物工程研究所，批号：20150522),低密度脂蛋白胆固醇测试盒(南京建成生物工程研究所， 批号：20150605)，小鼠膜岛素 ELISA试剂盒（Mercodia，批号：10-1247-01),血糖仪 (ο肥TOUCH叫tra)，酶标仪(Tecan infinite M2000型，瑞±)，高速冷冻离屯、机(长沙平凡 仪器仪表有限公司）。
[0038] 2.实验方法 2.1分组及给药:化Mb小鼠随机分成5组，每组8只，分别为模型组、EA高剂量组(20mg/ kg)、EA中剂量组（1 Omg/kg)、EA低剂量组巧mg/kg)及阳性药物组（15Omg/kg),化/m小鼠做为 正常对照组。各组均灌胃给药，模型组及正常对照组灌胃给予等剂量溶剂(0.25% CMC-Na)。 每天一次，共计6周。
[0039] 2.2标本采集及处理:实验结束前一天，小鼠禁食不禁水12h，摘眼圈取血，血凝后 于4°(：，350化.111山-1离屯、1〇111111后分装于-80°(：保存待用。断颈处死小鼠，迅速取出肝脏、肾 脏、附睾脂肪及膜腺浸泡于4%多聚甲醒或放液氮中速冻待用。
[0040] 2.3检测指标 2.3.1体重、进水量测定:观察实验期间各组小鼠精神状态及健康状况，记录实验前后 体重、饮水量变化，饮水量W连续Ξ天进水量的平均值表示。
[0041] 2.3.2餐后化血糖检测：各组小鼠分别于给药前，及给药后每周禁食不禁水化，采 用血糖仪尾端静脉取血测定血糖值。
[0042] 2.3.2 IPGTT测定:给药六周后测定IPGTT，具体方法为:各组小鼠禁食不禁水12h， 测定其空腹血糖作为0 min血糖值，立即腹腔注射Ig/kg葡萄糖，分别测定注射后30min、 60min、120min 血糖值。
[0043] 根据一下公式计算其糖耐量曲线下面积： AUC=0.5X(^FBG〇min+BG30min)/2+0.5X(BG30min+BG60min)/2+lX(BG60min+BGl20min)/2 2.3.3 IPITT测定:给药六周后测定?ρητ:各组小鼠禁食不禁水4h，测定其血糖作为0 min血糖值，立即腹腔注射0.75U/kg膜岛素，分别测定注射后3〇111111、6〇111111、12〇111111血糖值。
[0044] 根据公式计算其膜岛素耐量曲线下面积： AUC=0.5X (BG〇min+BG30min)/2+0.5 X (BG30min+BG60min)/2+l X ( BG60min+BGl20min )/2 2.3.4血清指标测定： 将分离的血清用于检测总胆固醇(TC)、甘油Ξ醋(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDkC)、 低密度脂蛋白胆固醇(U)L-C)、空腹血糖(FBG)，均严格按照试剂盒说明操作。空腹膜岛素 (FINS)用化ISA法按照试剂盒操作说明测定。
[0045] 按稳态模型H0MA-IR分析法，计算膜岛素抵抗指数（IRI)，W此来评价膜岛素抵抗 程度。
[0046] IRI=(FINSXFBG)/22.5 3.统计学处理 采用SPSS10.0对各组实验数据进行检验:各组数据W均数±标准差(x±s)表示，组间 比较用单因素方差分析及t检验，WP<0.05为有统计学意义。
[0047] 4.实验结果 4.1EA对小鼠体重的影响 给药前，化Mb小鼠各组之间体重无显著性差异。给药后，化/化小鼠各组之间体重亦无 显著性差异。与给药前相比化/化各组小鼠体重增长率大于对照组小鼠，且各给药组体重增 长率均小于模型组，但各组之间无显著性差异。结果见表1。
[004引表1 EA对糖尿病模型小鼠体重的影响(x±s，n=8)
4.2 EA对小鼠进水量的影响 化Mb糖尿病小鼠进水量显著多于正常对照组，给药前，化Mb各组小鼠进水量无显著 性差异。给药6周后，与模型组相比，各给药组化/化小鼠进水量均显著减少。EA药物处理组 小鼠进水量呈剂量依赖性减少。结果见表2。
[0049] 表2 EA对糖尿病模型小鼠进水量的影响(x±s，n=8)
注：与对照组比较#P<〇. 05，##P<0.01，与模型组比较中<0.05，*中<0.01 4.3 EA对糖尿病模型小鼠餐后化血糖的影响 各个时期化/化各组小鼠餐后化血糖水平显著高于对照组。给药前化/化各组之间血糖 水平无显著性差异，给药两周后高剂量组能显著降低餐后化血糖，效果与阳性药物组相当， 给药4周后各组均能显著降低餐后化血糖。结果见表3。
[0化日]表3 EA对糖尿病模型小鼠餐后化血糖的影响(x±s，n=8)_
注：与对照组比较"P<〇. 05，""P<0.01，与模型组比较中<0.05，*中<0.01 4.4 EA对化/化小鼠 IPGTT的影响 经过对各组小鼠 IPGTT的测定，结果表明，各组小鼠腹腔注射Ig/kg葡萄糖后0.化血糖 值达到高峰。正常对照小鼠在化后血糖开始下降，化时已降至注射前水平。模型组小鼠血糖 达到峰值后一直处于高糖状态，且与对照组有极显著性差异。各给药组在化时血糖明显下 降，与模型组相比阳性组及高剂量组具显著性差异。结果见表4与图3。
[0051 ] 表4 EA对糖尿病模型小鼠 IPGTT的影响(x±s，n=8)
注：与对照组比较#P<〇. 05，##P<0.01，与模型组比较中<0.05，*中<0.01 4.5 EA对化/化小鼠 ΙΡηΤ的影响 结果如表5与图4所示，对照组小鼠腹腔注射0.75U/kg膜岛素后0.化对照组血糖显著下 降，化时下降到最低值。EA给药组在化时血糖值开始下降，化时虽仍在下降，但各时间的血 糖值均低于模型小鼠。AUC显示，阳性组和EA高剂量组可显著增加模型小鼠对膜岛素的耐量 (P<0.05)。
[0化2] 表5 EA对糖尿病模型小鼠 IPITT的影响(x±s，n=8)
注：与对照组比较咕<0.05，##P<0.01，与模型组比较*P<0.05，**P<0.01 4.6 EA对化Mb小鼠血脂的影响 与对照组相比，模型组血清了(：、了6、0)心(：均显著升高(？<0.01)，与模型组相比，各给药 组均可显著降低了(：、了6、0)心(：水平，升高皿心(：水平，并呈一定的剂量依赖性。结果见表6。 [0化3] 表6 EA对糖尿病模型小鼠血脂的影响(x±s，n=6)_

注：与对照组比较咕<0.05，##P<0.01，与模型组比较*P<0.05，**P<0.01 4.7 EA对糖尿病模型小鼠空腹血糖(FBG)、膜岛素(FINS)、膜岛素抵抗指数化OMA-IR) 的影响 如表7所示，与对照组相比，模型组FBG、FINS、HOMA-IR均显著增加，提示化/化模型小鼠 存在明显的高血糖、高膜岛素血症，并且表现出显著的膜岛素抵抗。与模型组相比，各给药 组可不同程度的减轻膜岛素抵抗状态，表明EA可有效降低空腹血糖、空腹膜岛素水平，可有 效改善膜岛素抵抗。
[0054] 表7 EA对糖尿病模型小鼠 FINS、膜岛素抵抗的影响(x±s，n=6)
从上可看出，本发明公开了磕藤子酸(EA)在制备防治糖尿病药物中的应用:EA具有抗 糖尿病的作用，本发明用不同浓度的EA分别处理大鼠骨骼肌化6)细胞，发现EA可显著增加 L6细胞葡萄糖消耗量，且其效药物浓度均比二甲双脈及结构相似的同类化合物低，结果表 明EA具有潜在的降血糖活性。本发明用EA作用于二型糖尿病模型小鼠，结果发现，EA能显著 减少糖尿病模型小鼠进水量;改善其餐后化血糖水平及葡萄糖、膜岛素耐量;可降低二型糖 尿病模型小鼠空腹膜岛素水平，改善膜岛素抵抗状态;可降低血清总胆固醇、甘油Ξ醋、低 密度脂蛋白胆固醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平而改善脂质代谢素乱状态。因此EA 具有显著的抗二型糖尿病作用。
[0055] W上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范 围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明 的保护范围之内。本发明的保护范围W权利要求书为准。
【主权项】
1. 榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用。2. 根据权利要求1所述的榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，榼藤 子酸作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成防治糖尿病药物或药物组合物。3. 根据权利要求1或2所述的榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于， 所述防治糖尿病药物为防治二型糖尿病的药物。4. 根据权利要求1所述的榼藤子酸在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述 防治糖尿病药物为增加葡萄糖摄取、降低血糖的药物;或者，所述防治糖尿病药物为增强机 体糖耐量，降低胰岛素抵抗指数的药物;或者，所述防治糖尿病药物为改善脂代谢紊乱的药 物。5. -种防治糖尿病的药物，其特征在于，所述药物的药效成分含有榼藤子酸。6. 根据权利要求5所述的防治糖尿病的药物，其特征在于，所述防治糖尿病药物为防治 二型糖尿病的药物。7. 根据权利要求5所述的防治糖尿病的药物，其特征在于，所述防治糖尿病药物为增加 葡萄糖摄取、降低血糖的药物;或者为增强机体糖耐量，降低胰岛素抵抗指数的药物;或者 为改善脂代谢紊乱的药物。8. -种制备榼藤子酸的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 榼藤子总皂苷的制备:取榼藤子种仁粉碎，用体积浓度70%的乙醇水溶液浸泡提取， 合并提取液，回收乙醇得到浸膏，浸膏用水溶解，上HP-20大孔树脂柱，用体积浓度30%的乙 醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度50%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得榼藤 子总皂苷； 2) 榼藤子酸的制备:取榼藤子总皂苷，加 HC1水溶液，水解反应，水解液用NaOH调pH至5~ 6,用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，得到的固体用甲醇溶解，过MCI柱色谱， 用体积浓度50%的乙醇水溶液冲洗除杂，用体积浓度60%乙醇的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱 液蒸干即得榼藤子酸。9. 根据权利要求8所述的制备榼藤子酸的方法，其特征在于，步骤（1)中浸膏用50~70°C 的水溶解。10. 根据权利要求8所述的制备榼藤子酸的方法，其特征在于，步骤(2)中HC1水溶液的 浓度为2 mol/L，水解反应的温度为85~95°C。
【文档编号】C07J63/00GK105998031SQ201610365584
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】熊慧, 梅之南, 赵平, 张胜男
【申请人】中南民族大学