一种牛樟芝三萜类物质的提取方法及提取物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种在超声条件下，利用乙醇提取?水沉淀对牛樟芝中三萜类物质进行提取的方法以及根据该方法获得的提取物。本发明的提取方法避免使用毒性较大的有机溶剂，工艺简单、设备要求低、成本低、产品得率高，所获得的提取物中三萜类物质成分含量高、可直接用于食用或药用，具有较高的药用价值。
【专利说明】
-种牛憧芝Ξ瞄类物质的提取方法及提取物
技术领域
[0001] 本发明属于中药提取技术领域，具体而言，设及一种Ξ祗类物质的提取方法W及 利用该方法获得的提取物，特别是一种牛精芝Ξ祗类物质的提取方法及利用该方法获得的 提取物。
【背景技术】
[0002] 牛精芝又名牛精茹，拉了名为Antrodia camphorata，属于非權菌目、多孔菌科、多 年生葦菌。该菌为中国台湾特有真菌，仅生长于牛精树(Cinnamomum kanehirai)上，被誉为 "森林红宝石"。牛精芝在中国台湾被尝试作为药物有几十年的历史，而真正进入大众视线 则仅有十几年的时间。其药用价值高，产量又稀少，目前众多研究机构正对其有效成分的提 取、分离及应用展开研究。
[0003] 牛精芝含有多糖类、固醇类、Ξ祗类、腺巧类、不饱和脂肪酸、免疫蛋白等多种组 分，有抗癌防癌、抗炎、抗氧化、保肝护肝等功效，有广泛的保健和药用价值。迄今为止，已经 从牛精芝中分离到包括Ξ祗类物质、多糖体、腺巧等在内的70多种化合物，研究表明其功效 主要来自于Ξ祗类物质和多糖体。Ξ祗类化合物是牛精芝苦味的主要来源，1995年首次从 牛精芝子实体中分离出3种W麦角酱醇为骨架的Ξ祗类化合物，分别将其命名为精芝酸 (zhankuic acicOA(化学名称为4α-甲基麦角酱-8,24(28)-二締-3,7，11-^酬-26-酸）、精 芝酸Β(化学名称为3α-径基-4α-甲基麦角酱-8,24(28)-二締-7,11-二酬-26-酸)和精芝酸C (化学名称为3α，1化-二径基-4α-甲基麦角酱-8，24(28)-二締-3，7，11-Ξ酬-26-酸）。动物 试验发现，精芝酸A具有对鼠 Ρ-388白血病细胞株的毒性作用，精芝酸Β具有微弱的抗5-径色 胺能和抗胆碱能活性。后来的研究者又分别在牛精芝子实体中分离到W麦角酱醇和羊毛酱 醇为骨架的两大类共计14种Ξ祗类化合物。
[0004] 牛精芝中含有一些特有的Ξ祗类物质，运些Ξ祗类物质是发挥其功效的主要成 分，且具有不溶于水或难溶于水而易溶于有机溶剂的特点。现有的提取技术包括有机溶剂 (甲醇、乙酸、氯仿等)萃取、二氧化碳超临界萃取和半仿生提取等，但其具有W下缺陷：
[0005] 1.采用甲醇、乙酸、氯仿等有机溶剂进行萃取，虽然能够获得较高的得率，但上述 有机溶剂均具有毒性，其使用存在较大的安全隐患；
[0006] 2.二氧化碳超临界萃取设备和萃取技术要求高，工艺复杂，并且萃取过程需要在 很高的压力下进行，对设备W及整个管路系统的耐压性能要求较高；
[0007] 3.提取成本高。
[000引例如，专利申请CN104324057A公开了一种Ξ祗类化合物的萃取方法，其采用毒性 相对较低的无水乙醇作为提取溶液在超声波辅助下对Ξ祗类化合物进行提取，然而，其后 处理过程中仍需使用氯仿等毒性较大的溶剂，且提取物中Ξ祗类化合物的含量不高;再如， 专利申请CN101530436B公开了一种对灵芝子实体中的灵芝Ξ祗与灵芝多糖进行综合提取 的方法，同样在超声波的辅助下采用乙醇对其中的灵芝Ξ祗进行提取，但是其不经后处理 而采用将乙醇提取液直接喷雾干燥的方法获得提取物，提取物中灵芝Ξ祗的含量均在 52wt % W下，且提取效率不高。
[0009] 因此，有必要通过改进获得新的提取工艺，研究牛精芝中Ξ祗类物质的提取新方 法。
【发明内容】
[0010] 为了克服上述现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种新的牛精芝Ξ 祗类物质的提取方法，避免使用毒性较大的有机溶剂，并且工艺简单、设备要求低、成本低、 产品得率高，所获得的提取物中Ξ祗类物质成分含量高并且可直接用于食用或药用。
[0011] 因此，在一个方面，本发明提供了一种牛精芝Ξ祗类物质的提取方法，所述方法包 括如下步骤：
[0012] (1)将牛精芝原料烘干并粉碎，获得粗粉；
[0013] (2)按照质量(g)体积(mU比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，揽拌得混 合物；
[0014] (3)在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.化-6h，获得 提取液；
[0015] (4)对所述提取液进行离屯、分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3) 对所述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液；
[0016] (5)向合并的上清液中加入2-5倍量的水，揽拌混合，获得悬浊液；
[0017] (6)对所述悬浊液进行离屯、分离，弃去上清液，获得沉淀物；
[0018] (7)将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛精芝Ξ祗类物质的提取物粉末。
[0019] 另一方面，本发明还提供了根据上述提取方法获得的提取物。
[0020] 通过W下段落[1]-[ 10]对本发明进行具体说明：
[0021] [1]-种牛精芝Ξ祗类物质的提取方法，所述方法包括如下步骤：
[0022] (1)将牛精芝原料烘干并粉碎，获得粗粉；
[0023] (2)按照质量(g)体积(mU比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，揽拌得混 合物；
[0024] (3)在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.化-6h，获得 提取液；
[0025] (4)对所述提取液进行离屯、分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3) 对所述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液；
[0026] (5)向合并的上清液中加入2-5倍量的水，揽拌混合，获得悬浊液；
[0027] (6)对所述悬浊液进行离屯、分离，弃去上清液，获得沉淀物；
[0028] (7)将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛精芝Ξ祗类物质的提取物粉末。
[0029] [2巧日段落[1]所述的提取方法，其特征在于，步骤（1)中，所述牛精芝原料为牛精 芝子实体或栽培边料;优选地，将牛精芝原料烘干至水分含量为7wt % W下、优选5wt % W 下，更优选地，将烘干的原料粉碎至10目-40目。
[0030] [3巧日段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇为食品级 乙醇，优选地，其乙醇的体积百分含量为80% W上，优选地，所述粗粉与乙醇的质量(g)体积 (mL)比为1:20-1:40、更优选 1:30。
[0031] [4]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤（3)中，超声波功率为 300W-400W。
[0032] [5]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，对所述提取液W 200〇1'/111；[]1-500〇1'/111；[]1的速率离屯、分离1〇111；[]1-3〇111；[]1。
[0033] [6巧日段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(5)中，所述水为蒸馈水， 优选地，向合并的上清液中加入3-4倍量的水。
[0034] [7]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(6)中，对所述悬浊液W 200〇1'/111；[]1-500〇1'/111；[]1的速率离屯、分离1〇111；[]1-3〇111；[]1。
[0035] [引如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(7)中，将所述沉淀物在40 °C-80°C下干燥至水分含量在5wt% W下，优选地，将所述沉淀物粉碎至100目。
[0036] [9]根据段落[1]-[引中任一段所述的提取方法获得的提取物。
[0037] [10]如段落[9]所述的提取物，其特征在于，所述提取物中Ξ祗类物质的含量在 80wt% W 上。
[0038] 本发明的上述技术方案实现了如下技术效果：
[0039] 根据Ξ祗类物质不溶于水或难溶于水而易溶于乙醇等有机溶剂的特点，本发明采 用毒性较低的乙醇作为提取溶剂，在超声条件下对牛精芝原料中的Ξ祗类物质进行提取， 再用水使其沉淀析出。该方法工艺简单、设备要求低、成本低、产品得率高，避免使用甲醇、 氯仿等毒性较大的有机溶剂，可直接用于食用或药用，并且所获得的提取物粉末中Ξ祗类 物质的含量高达80wt%W上，具有较高的药用价值。另一方面，本发明的方法还可用于对牛 精芝栽培边料进行提取，综合提高牛精芝栽培的经济效益。
【附图说明】
[0040] 图1为本发明所使用的牛精芝原料的照片。
[0041 ]图2为Ξ祗类物质含量的标准曲线。
[0042] 图3为根据本发明的提取方法所获得的提取物。
【具体实施方式】
[0043] 在本发明中，术语"牛精芝子实体"是指牛精芝段木栽培形成的产抱构造，即果实 体，由已组织化了的菌丝体组成。
[0044] 在本发明中，术语"牛精芝栽培边料"是指牛精芝栽培初期，菌丝体在段木表面形 成的菌皮。
[0045] 在本发明中，术语"食用级乙醇"又称食用乙醇、食用酒精、发酵性蒸馈酒精，主要 是利用馨类、谷物类、糖类作为原料经过蒸煮、糖化、发酵等处理而得的供食品工业使用的 酒精。
[0046] 在一个实施方式中，本发明设及牛精芝Ξ祗类物质的提取方法，所述方法包括如 下步骤：
[0047] (1)将牛精芝原料烘干并粉碎，获得粗粉；
[004引（2)按照质量(g)体积(mU比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，揽拌得混 合物；
[0049] (3)在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.化-6h，获得 提取液；
[0050] (4)对所述提取液进行离屯、分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3) 对所述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液；
[0051 ] (5)向合并的上清液中加入2-5倍量的水，揽拌混合，获得悬浊液；
[0052] (6)对所述悬浊液进行离屯、分离，弃去上清液，获得沉淀物；
[0053] (7)将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛精芝Ξ祗类物质的提取物粉末。
[0054] 在优选的实施方式中，可W采用牛精芝子实体或栽培边料作为牛精芝原料，其中， 牛精芝子实体(干物质）中Ξ祗类物质的含量约为12wt%，栽培边料(干物质）中Ξ祗类物质 的含量约为4wt%。更优选地，在提取前对牛精芝原料进行预处理，即，将新鲜采摘的牛精芝 子实体或栽培边料在30°C-7(rC下烘干至水分含量在7wt%W下、甚至在5wt%W下（如图1 所示），然后用粉碎机将其粉碎至10目-40目的粗粉，W便于后续投料操作。
[0055] 在优选的实施方式中，使用食品级乙醇作为提取溶剂对牛精芝原料粗粉进行提 取。一方面，乙醇为目前常用的有机溶剂，较甲醇、乙酸、氯仿等而言具有较低的毒性，同时 能够达到较好的提取效果;另一方面，食品级乙醇通常由粮食发酵而成，不含工业酒精中难 W避免而混入的甲醇、苯等对人体危害较大的化合物，由此提取获得的提取物可直接用于 食用或药用，更加安全。在本发明中，对上述食品级乙醇中乙醇的含量不作限制，但优选的 是，其中乙醇的体积百分含量在80% W上，更优选无水乙醇。
[0056] 可W理解的是，在用乙醇对牛精芝Ξ祗类物质进行提取的过程中，当乙醇的量过 少时，则使得Ξ祗类物质提取不充分，影响提取效率；当乙醇的量过多时，则需要更大量的 水对提取液进行沉淀，造成不必要的浪费。因此，在本发明优选的实施方式中，牛精芝原料 粗粉与乙醇的质量(g)体积(mU比为1:5-1:50、优选1:20-1:40、更优选1:30。
[0057] 本发明采用超声技术对牛精芝Ξ祗类物质进行提取，超声波功率设定为100W- 500W、优选300W-400W。为进一步提高提取效率，对牛精芝粗粉和乙醇的混合物进行加热，使 得在乙醇回流条件下（常压下约为78°C-79°C)进行提取，根据投料量的不同，提取进行 0.化-6h，W获得固液混合状态的提取液。
[0058] 在上述提取液中，大部分Ξ祗类物质溶解于乙醇中，而不溶于乙醇的其它物质则 保留为固态。本发明采用离屯、的方式对该提取液进行分离，获得上清液和固体部分，收集上 清液。对离屯、的速率和时间不作限制，达到分离的目的即可，通常，离屯、速率可W设定为 2000;r/min-5000;r/min，根据投料量的不同，离屯、分离10min-30min。为了能更充分、更完全 地提取牛精芝原料中的Ξ祗类物质，可W向分离得到的固体部分中加入新的乙醇，在同样 的超声、加热条件下进行重复提取，重复2次-3次。收集并合并各次获得的上清液。
[0059] 利用Ξ祗类物质不溶于水或难溶于水的特性，向收集的上清液中加入2-5倍量、优 选3-4倍量的水，将Ξ祗类物质沉淀析出，获得悬浊液。再次通过离屯、的方式对悬浊液进行 分离，获得沉淀物。
[0060] 在优选的实施方式中，将所述沉淀物在4〇°c-8(rc条件下干燥，使其水分含量降低 至5wt % W下，并粉碎过100目筛，得到含有牛精芝Ξ祗类物质的提取物粉末。
[0061] 在另一实施方式中，本发明还设及根据上述任意提取方法获得的提取物，优选 地，所述提取物中Ξ祗类物质的含量在80wt % W上，具有较高的药用价值。
[0062] 分析方法
[0063] 本发明采用W下分析方法，对各样品中Ξ祗类物质的含量进行分析：
[0064] 1、原理
[0065] Ξ祗类物质在高氯酸作用下，与香草醒反应生成有色物质。在545nm波长下，其吸 光度大小与Ξ祗类物质含量成正比。W齐墳果酸为对照品，用比色法测定Ξ祗类物质的含 量。
[0066] 2、试剂
[0067] 氯仿(分析纯）、香草醒(分析纯）、高氯酸(分析纯）、无水乙醇(分析纯）；齐墳果酸 (对照品），购自大连美仑生物技术有限公司。
[0068] 齐墳果酸储备液(0.1 mg/mL):称取在95°C下干燥化的齐墳果酸对照品lO.Omg，用 无水乙醇溶解并定容至lOOmL。
[0069] 5wt %香草醒-冰乙酸溶液:临用前配制。
[0070] 3、仪器
[0071] 紫外可见光分光光度计(石英比色皿）、分析天平(感量为±0.1mg)、水浴锅、干燥 箱、常用玻璃仪器(如容量瓶、具塞比色管、圆底烧瓶等）。
[0072] 4、分析步骤
[0073] (1)制作标准曲线
[0074] 分别吸取齐墳果酸储备液4.0mL、8. OmL、12. OmL、16. OmL和20.0 mL于25mL具塞比色 管中，常压水浴蒸干溶剂;分别加入0.20mL新配制的5wt %香草醒-冰乙酸溶液和0.80mL高 氯酸，摇匀;在70°C水浴中加热15min，取出，冷却至室溫;分别加入5.0血冰乙酸，摇匀；W试 剂空白做对照，在30min内于545nm紫外光下测定吸光度值。W吸光度为纵坐标，从立祗类物 质含量为横坐标，绘制标准曲线(参见附图2)，并得出回归方程：
[0075] y = -〇. 00574+0.010488X
[0076] 相关系数 R = 〇. 99988，p<0.0001 (n = 6)
[0077] (2)样品处理
[007引称取待测试样0.2g±0 . Img;置于150mL圆底烧瓶中，加入30mL氯仿，在60°C ± rC 水浴中回流化，常压过滤，收集滤液，滤渣加入30mL氯仿再回流Ih;合并滤液，常压蒸干;加 入约40mL无水乙醇，70°C水浴加热使其溶解;冷却至室溫后用无水乙醇定容至50mL，为待测 液。
[0079] (3)测定
[0080] 吸取待测液1.00血于25血具塞比色管中，常压水浴蒸干溶剂;加入新配制的5wt% 香草醒-冰乙酸溶液0.20mL和高氯酸0.80mL，摇匀；在70°C下水浴加热15min，取出，冷却至 室溫;加入冰乙酸5.00mL稀释，摇匀；W试剂空白为对照，在30min内于545nm紫外光下测定 其吸光度。通过线性回归方程计算待测样中Ξ祗类物质的含量。
[0081] 5、结果计算
[0082] 试样中Ξ祗类物质的含量按下面公式进行计算：
[0083]
[0084]式中:X:试样中Ξ祗类物质的含量(g/lOOg);
[00化]mi:试样的质量(g);
[0086] m2:通过线性回归方程算得的待测液中Ξ祗类物质的质量(mg);
[0087] VI:待测液定容后的体积(mL);
[0088] V2:测定用的溶液体积(血）；
[0089] X:试样的含水量(g/lOOg)。
[0090] 计算结果保留Ξ位有效数字。
[0091] 6、精密度
[0092] 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
[0093] 实施例
[0094] 下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，W下实施例将帮助更好地理解 本发明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。
[00巧]实施例1
[0096] 根据如下提取方法对牛精芝原料中的Ξ祗类物质进行提取：
[0097] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至40 目，获得粗粉；
[0098] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0099] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0100] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0101] (5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0102] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0103] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 产物14g，产物中Ξ祗类物质含量达86wt %。
[0104] 实施例2
[0105] 根据如下提取方法对牛精芝原料中的Ξ祗类物质进行提取：
[0106] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°c下烘干至水分含量在5wt % W下，并粉碎至40 目，获得粗粉；
[0107] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0108] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为500W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取0.化，获得提取液；
[0109] (4)W2000r/min的速率对提取液离屯、分离30min，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取3次，合并各次获得的上清液；
[0110] (5)向合并的上清液中加入2倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0111] (6)W2000r/min的速率对悬浊液离屯、分离30min，弃去上清液，获得沉淀物；
[0112] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 产物lOg，产物中Ξ祗类物质含量达80.1 wt%。
[011引实施例3
[0114] 根据如下提取方法对牛精芝原料中的Ξ祗类物质进行提取：
[0115] (1)将采收后的牛精芝栽培边料在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至 40目，获得粗粉；
[0116] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0117] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为500W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取0.化，获得提取液；
[0118] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0119] (5)向合并的上清液中加入5倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0120] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0121] (7)将沉淀物于80°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 产物4. Ig，产物中Ξ祗类物质含量达82wt %。
[0122] 实施例4
[0123] 根据如下提取方法对牛精芝原料中的Ξ祗类物质进行提取：
[0124] (1)将采收后的牛精芝栽培边料在50°C下烘干至水分含量在5wt%W下，并粉碎至 10目，获得粗粉；
[0125] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入500mL体积百分含量为80%食品级乙醇，揽 拌下混合均匀；
[0126] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为100W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0127] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0128] (5)向合并的上清液中加入5倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0129] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0130] (7)将沉淀物于80°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 产物3.4g，产物中Ξ祗类物质含量达80.3wt %。
[0131] 比较例1
[0132] 根据如下提取方法对牛精芝原料中Ξ祗类物质进行提取：
[0133] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至40 目，获得粗粉；
[0134] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0135] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为600W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0136] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0137] (5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0138] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0139] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 16g固体粉末，该固体粉末中Ξ祗类物质的含量为65wt%。
[0140] 在该条件下进行提取，与实施例1相比，其提取过程中采用了更高的超声功率 (600W)，然而，可能由于使原料中更多其它物质溶于乙醇，进而被提取出来，造成产物中混 有的其它物质较多（纯度下降），Ξ祗类物质含量下降，从而不利于Ξ祗类物质的进一步分 离或直接使用。
[0141] 比较例2
[0142] 根据如下提取方法对牛精芝原料中Ξ祗类物质进行提取：
[0143] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至40 目，获得粗粉；
[0144] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0145] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为90W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0146] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取3次，合并各次获得的上清液；
[0147] (5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0148] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0149] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 8g固体粉末，该固体粉末中Ξ祗类物质的含量为68wt %。
[0150] 该条件下进行提取，与实施例1相比，其提取过程中采用了较低的超声功率(90W)， 对产品收率及Ξ祗类物质含量造成了较大影响。
[0151] 比较例3
[0152] 根据如下提取方法对牛精芝原料中Ξ祗类物质进行提取：
[0153] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至 40目，获得粗粉；
[0154] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0155] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0156] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0157] (5)向合并的上清液中加入6倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0158] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0159] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 10.3g固体粉末，该固体粉末中Ξ祗类物质的含量为67wt %。
[0160] 该条件下进行提取，与实施例1相比，在提取过程中采用了更高比例的提取溶剂无 水乙醇(粗粉和乙醇的质量体积比1:60)，然而，在收率未随之增加的情况下，反而使产物中 Ξ祗类物质的含量降低；另一方面，随着提取溶剂乙醇用量的增加，不单单增加了提取成 本，同时还增加了进行沉淀时的用水量，为后续处理造成困难，增加了工艺难度。
[0161] 比较例4
[0162] 根据如下提取方法对牛精芝原料中Ξ祗类物质进行提取：
[0163] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至40 目，获得粗粉；
[0164] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入400mL食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0165] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0166] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0167] (5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0168] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0169] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 9.2g固体粉末，该固体粉末中Ξ祗类物质的含量为61 wt %。
[0170] 该条件下进行提取，与实施例1相比，在提取过程中采用了较少的无水乙醇(粗粉 和乙醇的质量体积比1:4)，产物收率和产物中Ξ祗类物质的含量均下降。
[0171] 比较例5
[0172] 根据如下提取方法对牛精芝原料中Ξ祗类物质进行提取：
[0173] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至40 目，获得粗粉；
[0174] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0175] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0176] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0177] (5)向合并的上清液中加入6倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得悬 浊液；
[0178] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0179] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 产物12g，产物中Ξ祗类物质含量为68wt%。
[0180] 该条件下进行提取，与实施例1相比，其沉淀过程中采用了更大量的水(6倍量），然 而，加大的水量使得给离屯、操作带来困难。运种情况下，可W将悬浊液静置沉淀，弃去上清 液，然后再进行离屯、，但运样则导致延长工艺时间，降低工艺效率，并且产物收率和产物中 Ξ祗类物质的含量并不理想。
[0181] 比较例6
[0182] 根据如下提取方法对牛精芝原料中Ξ祗类物质进行提取：
[0183] (1)将采收后的牛精芝子实体在50°C下烘干至水分含量在7wt%W下，并粉碎至40 目，获得粗粉；
[0184] (2)称取lOOg粗粉于圆底烧瓶中，加入化食品级无水乙醇，揽拌下混合均匀；
[0185] (3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上 连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取化，获得提取液；
[0186] (4)W5000r/min的速率对提取液离屯、分离lOmin，获得上清液和固体部分，收集上 清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；
[0187] (5)向合并的上清液中加入1.5倍量的蒸馈水，揽拌混合使Ξ祗类物质析出，获得 悬浊液；
[0188] (6)W5000r/min的速率对悬浊液离屯、分离lOmin，弃去上清液，获得沉淀物；
[0189] (7)将沉淀物于40°C下干燥处理，使水分降至5wt%W下，粉碎过100目筛，可获得 产物8g，产物中Ξ祗类物质含量为68wt%。
[0190] 该条件下进行提取，与实施例1相比，其沉淀过程中采用更少量（1.5倍量)的水，Ξ 祗类物质不能很好地析出，从而影响产物收率，并且产物中Ξ祗类物质的含量也不理想。
【主权项】
1. 一种牛樟芝三萜类物质的提取方法，所述方法包括如下步骤： (1) 将牛樟芝原料烘干并粉碎，获得粗粉； (2) 按照质量体积比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，搅拌得混合物； (3) 在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.5h-6h，获得提取 液； (4) 对所述提取液进行离心分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3)对所 述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液； (5) 向合并的上清液中加入2-5倍量的水，搅拌混合，获得悬浊液； (6) 对所述悬浊液进行离心分离，弃去上清液，获得沉淀物； (7) 将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛樟芝三萜类物质的提取物粉末。2. 如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（1)中，所述牛樟芝原料为牛樟芝子 实体或栽培边料;优选地，将牛樟芝原料烘干至水分含量为7wt%以下、优选5wt%以下，更 优选地，将烘干的原料粉碎至10目-40目。3. 如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇为食品级乙醇， 优选地，其乙醇的体积百分含量为80%以上，优选地，所述粗粉与乙醇的质量体积比为1: 20-1:40、更优选 1:30。4. 如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤（3)中，超声波功率为300W-40015. 如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，对所述提取液以2000r/ min-5000r/min 的速率离心分离 10min-30min。6. 如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤（5)中，所述水为蒸馏水，优选 地，向合并的上清液中加入3-4倍量的水。7. 如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(6)中，对所述悬浊液以2000r/ min-5000r/min 的速率离心分离 10min-30min。8. 如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(7)中，将所述沉淀物在40 °C -80 °C下干燥至水分含量在5wt %以下，优选地，将所述沉淀物粉碎至100目。9. 根据权利要求1-8中任一项所述的提取方法获得的提取物。10. 如权利要求9所述的提取物，其特征在于，所述提取物中三萜类物质的含量在 80wt%以上。
【文档编号】A61K36/07GK105998091SQ201610504019
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月28日
【发明人】罗楚波, 杨善岩
【申请人】广东罗特制药有限公司