一种从云南黑木耳提取多酚的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从云南黑木耳提取多酚的方法，该方法包括预处理、提取、大孔树脂吸附与洗脱等步骤。本发明方法能够制备得到具有抗氧化作用的云南黑木耳多酚，它的DPPH自由基清除能力比传统50％乙醇水提法提高1.40～1.75倍，具有明显高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基体系中，云南黑木耳多酚的IC50为36.14～45.22μg/mL。本发明的方法是一种绿色环保、前景广阔的生物活性成分提取技术，适宜于工业化生产。
【专利说明】
一种从云南黑木耳提取多酚的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然活性物质提取技术领域。更具体地，本发明涉及一种从云南黑木耳提取多酚的方法。
【【背景技术】】
[0002]黑木耳(Auricularia auriculajudae)营养丰富，食味鲜美，不但是营养价值很高的食用菌，而且是药用价值高的药用菌，是世界公认的保健品。我国黑木耳资源丰富，为开发应用黑木耳提供了有利的条件。云南省是我国黑木耳主产地之一，所产黑木耳通称为云耳。“云耳”以细嫩、条大、肉厚、色黑发亮者为上品。云南黑木耳作为药用子实体，具有益气强身、补气血、润肺、止血、止痛、通便等功效。现代药理学研究发现其可用于治疗高血压、血管硬化、月经、白带过多、便血、子宫出血、反胃多痰、吐血、便秘等。
[0003]黑木耳中含有多酚类化合物、生物碱、维生素等多种生理活性物质，但对这些物质进行提取、成分分析的研究报道很少，尤其是对云南黑木耳多酚的研究就较少。多酚在增强免疫力、降血糖、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面发挥着生物活性作用。随着技术的发展和人类认识的不断加深，人们发现多酚类在生物体中除作结构材料和能源性材料夕卜，更重要地是还参与了生命现象中细胞的各种活动中；多酚广泛应用于食品、纺织、化妆品和医药领域等领域，其在生物学上的重要意义决定了它在食品及医药领域有广阔的前景。
[0004]现有乙醇水溶液提取方法效率不高，许多有用成分没有充分提取出来。
[0005]因此，本发明人针对现有技术中存在的一些技术缺陷，通过大量实验研究与分析，终于完成了本发明。
【
【发明内容】
】
[0006][要解决的技术问题]
[0007]本发明的目的是提供一种从云南黑木耳提取多酚的方法。
[0008][技术方案]
[0009]本发明是通过下述技术方案实现的。
[0010]本发明涉及一种从云南黑木耳提取多酚的方法。
[0011]该方法的步骤如下:
[0012]A、预处理
[0013]将云南黑木耳在烘箱中在温度58?62°C下烘干，然后在恒温恒湿干燥器中在温度102?108°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到云南黑木耳粉；
[0014]B、提取
[0015]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:10?50，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到乙醇水溶液中，混合均匀，再在高压脉冲电场下进行处理，减压过滤，滤渣经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；
[0016]C、大孔树脂吸附
[0017]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床进行吸附，接着转移到水浴中在恒温振荡器里进行振荡吸附；
[0018]D、洗脱
[0019]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，用蒸馏水洗涤2?3次，滤干，接着用乙醇水溶液洗脱，洗脱液经减压浓缩与真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。
[0020]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤A中，所述云南黑木耳粉的粒度是60目以上。
[0021]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，所述的乙醇水溶液浓度为以体积计40?70 %。
[0022]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率300?800W的条件下进行高压脉冲电场处理6?12h。
[0023]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，在高压脉冲电场下处理的物料在压力0.008?0.01210^下过滤0.8?1.211。
[0024]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C中，所述的水溶液在吸附速度4?6BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比28?32:1的条件下吸附2?4h。
[0025]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C中，在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附18?22h。
[0026]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，洗涤时振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:2?4。
[0027]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，使用浓度为以体积计45?55%的乙醇水溶液在洗脱速度4?6BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比28?32:1的条件下进行洗脱。
[0028]根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，洗脱液在压力0.08?0.12MPa下浓缩1.6?2.4h，接着在压力0.08?0.12MPa与温度-20°C下进行真空冷冻干燥。
[0029]下面将更详细地描述本发明。
[0030]本发明以提高云南黑木耳多酚抗氧化活性为目的的超高压脉冲辅助提取法，能够克服常规乙醇水提取对活性物质带来的不利影响;利用超高压脉冲技术能够强化溶剂与样品相接触，并破坏云南黑木耳中的细胞组分，将所需化合物从样品基体中分离进入溶剂中，因此能够提高其云南黑木耳多酚的得率。本方法具有快速、成本低等特点，其在生产中使用时，可以减少溶剂的用量，提高提取得率，提高纯度。
[0031]一种从云南黑木耳提取多酚的方法。
[0032]该方法的步骤如下:
[0033]A、预处理
[0034]将云南黑木耳在烘箱中在温度58?62°C下烘干，然后在恒温恒湿干燥器中在温度102?108°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到云南黑木耳粉；
[0035]在本发明中，云南黑木耳在温度58?62°C下烘干的主要作用是除去水分。本发明使用的烘箱是一种常规的干燥设备，例如由上海一恒科技有限公司以商品名DZF-6063销售的烘箱。
[0036]根据本发明，烘干的云南黑木耳再在恒温恒湿干燥器中烘干的主要作用是除去可能残余的水分。本发明使用的恒温恒湿干燥器是一种目前市场上销售的干燥设备，例如由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器。
[0037]在步骤A中，烘干云南黑木耳研磨所使用的设备是本技术领域里在研磨时通常使用的设备，是目前市场上销售的研磨设备。
[0038]在本发明中，所述云南黑木耳粉的粒度是60目以上。如果所述云南黑木耳粉的粒度小于60目，则会使原料料层过厚，物料粒子能量吸收不均，作用效果不均衡，得率小。
[0039]B、提取
[0040]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:10?50，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到乙醇水溶液中，混合均匀，再在高压脉冲电场下进行处理，减压过滤，滤渣经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；
[0041 ]在本发明中，乙醇水溶液提取剂从云南黑木耳粉中提取多酚的基本机制是极性相近的体系相近相溶的原理。
[0042]根据本发明，所述的乙醇水溶液浓度是以体积计40?70%。这个乙醇水溶液浓度或者太高或者太低都是不妥的，这主要是因为此浓度条件的体系与提取目标对象极性更近，提取效率更高。
[0043]根据本发明，如果云南黑木耳粉与乙醇水溶液的固液比大于1:10，则多酚组分无法在乙醇水溶液中完全溶出；如果云南黑木耳粉与乙醇水溶液的固液比小于I:50，则溶剂量达到一定程度之后，多酚类物质已经基本完全溶出，得率变化不明显，此时处理成本明显提高；因此，云南黑木耳粉与乙醇水溶液的固液比为1:10?50是合理的，优选地是1:18?42，更优选地是1:26?34。
[0044]高压脉冲电场法是利用细胞膜电穿孔原理在瞬间使细胞破壁，造成细胞膜电位混乱，细胞壁和细胞膜发生可逆或小可逆的破坏，细胞组分流出，因此具有处理时间短、能耗低、不易引起目标产物变性等优点。
[0045]在本发明中利用了高压脉冲电场法处理云南黑木耳粉。有云南黑木耳粉的乙醇水溶液在脉冲宽度为2ys、脉冲频率为200Hz与功率300?800W的条件下进行高压脉冲电场处理6?12h0
[0046]在本发明中，如果高压脉冲电场的脉冲宽度与脉冲频率为其它值时，溶出的多酚物质太低或者溶出的杂质成分太高。
[0047]高压脉冲电场的脉冲宽度为2ys与脉冲频率为200Hz时，如果高压脉冲电场的功率小于300W，则高压脉冲电场对植物细胞破坏的程度和数量均不够;如果高压脉冲电场的功率大于500W，则造成多酚物质的降解，提取率降低；因此，高压脉冲电场的功率为300?800W是可行的，优选地是400?680W，更优选地是480?580W。
[0048]这种高压脉冲电场是由目前市场上销售的美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备。
[0049]根据本发明，对经高压脉冲电场处理的物料使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-DdII)循环水式真空栗在压力0.008?0.012MPa下进行减压过滤0.8?1.2h。
[0050]得到的滤渣使用本发明提取溶剂乙醇水溶液洗涤2?4次，洗涤的滤渣是所述的云南黑木耳多酚粗产品。采用下面将描述的硝酸铝显色法可以测定得到该云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量。
[0051]C、大孔树脂吸附
[0052]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床进行吸附，接着转移到水浴中在恒温振荡器里进行振荡吸附；
[0053]所述的大孔树脂吸附的基本作用是纯化多酚成分。
[0054]本发明使用的大孔树脂是目前市场上销售的各种大孔树脂产品，例如南开大学化工厂生产的Da1n HP-20大孔树脂、Amberlite XAD-4大孔树脂等。
[0055]本发明使用的大孔树脂需要进行预处理，首先，筛分收集有效粒径为0.6mm的大孔树脂。然后，这种大孔树脂在2倍体积的无水乙醇中浸泡10h，分离乙醇，用去离子水洗涤，直至洗涤液无白色混浊，无醇味。接着，这种大孔树脂在2倍体积、浓度为以重量计5%的NaOH水溶液中浸泡3h，再分离NaOH水溶液，用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。然后，在2倍体积、浓度为以重量计5%的HCl水溶液中浸泡3h;分离HCl水溶液，再用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。
[0056]在这个步骤中，所述的云南黑木耳多酚粗产品水溶液在吸附速度4?6BV/h、水溶液与大孔树脂的体积比28?32:1的条件下吸附2?4h。
[0057]在大孔树脂床吸附后，在恒温振荡器里，让这种大孔树脂在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下在所述的水溶液中振荡吸附18?22h。
[0058]本发明使用的恒温振荡器是目前市场上销售的产品，例如上海一恒WSZ-1OA恒温振荡器。
[0059]D、洗脱
[0060]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，用蒸馏水洗涤2?3次，滤干，接着用乙醇水溶液洗脱，洗脱液经减压浓缩与真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。
[0061 ]在这个步骤中，用蒸馏水洗涤的基本作用是除去树脂表面杂质。用蒸馏水洗涤时，振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:2?4。
[0062]根据本发明，使用乙醇水溶液洗脱的基本作用是洗脱出多酚物质。使用浓度为以体积计45?55%的乙醇水溶液在洗脱速度4?6BV/h、乙醇水溶液与大孔树脂的体积比28?32:1的条件下进行洗脱，收集洗脱液。
[0063]收集的洗脱液进行浓缩的目的在于得到浓缩的多酚产品。收集洗脱液在压力0.08?0.12MPa下浓缩1.6?2.4h，接着在压力0.08?0.12MPa与温度-20°C下进行真空冷冻干燥。
[0064]本发明使用的真空冷冻干燥器是目前市场上销售的产品，例如由北京博医康实验仪器有限公司以商品名FD-1A-50真空冷冻干燥器销售的产品。
[0065]本发明制备得到的云南黑木耳多酚固体样品采用常规紫外分光光度法进行了分析。
[0066]硝酸铝络合分光光度法测定总多酚是在中性或弱碱性环境与亚硝酸钠的存在下，多酚类化合物与铝盐生成螯合物，加入氢氧化钠后其溶液则显红橙色，在波长510nm处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律。因此，可以硝酸铝络合分光光度法测定其云南黑木耳多酸纯度与得率。
[0067]本发明采用常规硝酸铝络合分光光度法，使用UV2000紫外可见分光光度计测定在波长510nm处的吸光值，由这个吸光值测得本发明云南黑木耳多酚的纯度。按照下述公式计算得到云南黑木耳多酚的得率:
[0068]得率(mg/g)=提取多酚产品质量(mg)/云南黑木耳原料总量(g)
[0069]DPPH自由基有单电子，在波长517nm处有一个强吸收峰，其醇溶液呈紫色特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受电子数量成定量关系，因而可以采用分光光度计进行快速定量分析。
[0070]本发明采用分光光度法测定517nm处的吸光值变化计算云南黑木耳多酚清除DPPH自由基的能力。
[0071]采用本发明方法制备得到的云南黑木耳多酚产品DPPH自由基清除能力比传统50 %乙醇水提法提高1.40?1.75倍，具有明显高的DPPH自由基清除能力。如图1所显示的，在DPPH自由基体系中，云南黑木耳多酚的IC5q为36.14?45.22yg/mL。
[0072][有益效果]
[0073]本发明的有益效果是:本发明从云南黑木耳提取多酚的方法能够制备得到具有抗氧化作用的云南黑木耳多酚，它的DPPH自由基清除能力比传统50%乙醇水提法提高1.40?1.75倍，具有明显高的DPPH自由基清除能力。在DPPH自由基体系中，云南黑木耳多酚的IC50为36.14?45.22yg/mL。本发明的方法是一种绿色环保、前景广阔的生物活性成分提取技术，适宜于工业化生产。
【【附图说明】】
[0074]图1是本发明提取云南黑木耳多酚的纯度、得率与清除DPPH自由基能力结果示意图。
【【具体实施方式】】
[0075]通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
[0076]实施例1:从云南黑木耳提取多酚
[0077]该实施例的实施步骤如下:
[0078]A、预处理
[0079]将云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度60°C下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度104°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0080]B、提取
[0081]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:30，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到浓度为以体积计5 O %的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率400W的条件下进行高压脉冲电场处理9h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空栗，在压力0.0lMPa下减压过滤0.9h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤3次，经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品;采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量为1.56g/100g;
[0082]C、大孔树脂吸附
[0083]南开大学化工厂生产的Da1nHP-20大孔树脂预处理，首先进行筛分收集有效粒径为0.5mm的大孔树脂。将收集的大孔树脂在2倍体积的无水乙醇中浸泡10h，分离乙醇，用去离子水洗涤，直至洗涤液无白色混浊，无醇味。接着再在2倍体积、浓度为以重量计5%的NaOH水溶液中浸泡3h，再分离NaOH水溶液，用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。然后，在2倍体积、浓度为以重量计5%的HCl水溶液中浸泡3h;分离HCl水溶液，再用去离子水洗涤至洗涤液呈中性。
[0084]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液在吸附速度4BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比30:1的条件下吸附2.4h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒温振荡器里在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附21.2h;
[0085]D、洗脱
[0086]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，然后按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:3用蒸馏水洗涤2次，滤干，接着使用浓度为以体积计46%的乙醇水溶液在洗脱速度4BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比30:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.08MPa下浓缩1.6h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名Π)-1Α-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.0SMPa与温度-20°C下进行真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
[0087]实施例2:从云南黑木耳提取多酚
[0088]该实施例的实施步骤如下:
[0089]A、预处理
[0090]将云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度58°C下烘干，然后在上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度102°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0091]B、提取
[0092]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:10，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到浓度为以体积计40 %的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率400W的条件下进行高压脉冲电场处理12h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空栗，在压力0.0OSMPa下减压过滤0.8h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤2次，经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量为1.44g/100g;
[0093]C、大孔树脂吸附
[0094]使用南开大学化工厂生产的Amberlite XAD-4大孔树脂预处理，其预处理与实施例I的相同。
[0095]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液在吸附速度6BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比28:1的条件下吸附2.0h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒温振荡器里在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振汤吸附18.0h;
[0096]D、洗脱
[0097]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，然后按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1: 2用蒸馏水洗涤2次，滤干，接着使用浓度为以体积计45%的乙醇水溶液在洗脱速度5BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比28:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.1OMPa下浓缩2.4h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名Π)-1Α-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.0SMPa与温度-20°c下进行真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
[0098]实施例3:从云南黑木耳提取多酚
[0099]该实施例的实施步骤如下:
[0100]A、预处理
[0101]将云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度62°C下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度108°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0102]B、提取
[0103]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:50，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到浓度为以体积计7 O %的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率800W的条件下进行高压脉冲电场处理6h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空栗，在压力0.012MPa下减压过滤1.2h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤3次，经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量为1.52g/100g;
[0104]C、大孔树脂吸附
[0105]使用南开大学化工厂生产的Da1n HP-20大孔树脂预处理，其预处理与实施例1的相同。
[0106]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液在吸附速度5BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比320:1的条件下吸附3.6h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒温振荡器里在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附20.5h;
[0107]D、洗脱
[0108]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，然后按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:3用蒸馏水洗涤3次，滤干，接着使用浓度为以体积计50%的乙醇水溶液在洗脱速度6BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比32:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.12MPa下浓缩1.8h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名Π)-1Α-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.1OMPa与温度-20°c下进行真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
[0109]实施例4:从云南黑木耳提取多酚
[0110]该实施例的实施步骤如下:[0111 ] A、预处理
[0112]将云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度60°C下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度106°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0113]B、提取
[0114]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:10，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到浓度为以体积计60 %的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率300W的条件下进行高压脉冲电场处理9h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空栗，在压力0.0lOMPa下减压过滤1.0h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤4次，经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量为1.47g/100g;
[0115]C、大孔树脂吸附
[0116]使用南开大学化工厂生产的Amberlite XAD-4大孔树脂预处理，其预处理与实施例I的相同。
[0117]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液在吸附速度4BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比31:1的条件下吸附2.7h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-10A恒温振荡器里在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振汤吸附22.0h ；
[0118]D、洗脱
[0119]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，然后按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:4用蒸馏水洗涤3次，滤干，接着使用浓度为以体积计55%的乙醇水溶液在洗脱速度4BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比31:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.1OMPa下浓缩2.0h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名Π)-1Α-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.12MPa与温度-20°C下进行真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
[0120]实施例5:从云南黑木耳提取多酚[0121 ]该实施例的实施步骤如下:
[0122]A、预处理
[0123]将云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度58°C下烘干，然后在在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度104°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0124]B、提取
[0125]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:10，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到浓度为以体积计7 O %的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率300W的条件下进行高压脉冲电场处理9h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空栗，在压力0.012MPa下减压过滤0.8h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤3次，经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量为1.32g/100g;
[0126]C、大孔树脂吸附
[0127]使用南开大学化工厂生产的Da1nHP-20大孔树脂预处理，其预处理与实施例1的相同。
[0128]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液在吸附速度6BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比290:1的条件下吸附4.0h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒温振荡器里在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附19.2h;
[0129]D、洗脱
[0130]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，然后按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:3用蒸馏水洗涤3次，滤干，接着使用浓度为以体积计52%的乙醇水溶液在洗脱速度5BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比29:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力0.09MPa下浓缩2.2h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名Π)-1Α_50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.1OOMPa与温度-20°C下进行真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
[0131 ]实施例6:从云南黑木耳提取多酚
[0132]该实施例的实施步骤如下:
[0133]A、预处理
[0134]将云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度62°C下烘干，然后在在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度102°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0135]B、提取
[0136]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:30，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到浓度为以体积计40 %的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率800W的条件下进行高压脉冲电场处理6h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空栗，在压力0.0lOMPa下减压过滤1.2h，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤3次，经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量为1.41g/100g;
[0137]C、大孔树脂吸附
[0138]使用南开大学化工厂生产的Da1n HP-20大孔树脂预处理，其预处理与实施例1的相同。
[0139]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液在吸附速度5BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比30:1的条件下吸附3.3h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒温振荡器里在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振汤吸附19.8h;
[0140]D、洗脱
[0141]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，然后按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:4用蒸馏水洗涤2次，滤干，接着使用浓度为以体积计48%的乙醇水溶液在洗脱速度6BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比30:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力
0.1OMPa下浓缩1.9h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名Π)-1Α-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.09MPa与温度-20°C下进行真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
[0142]实施例7:从云南黑木耳提取多酚
[0143]该实施例的实施步骤如下:
[0144]A、预处理
[0145]将云南黑木耳在由上海一恒科技有限公司公司以商品名DZF-6063销售的烘箱中在温度60°C下烘干，然后在由上海跃进医疗器械厂公司以商品名LRHS-150B销售的恒温恒湿干燥器中在温度108°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到粒度60目云南黑木耳粉；
[0146]B、提取
[0147]按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:50，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到浓度为以体积计60 %的乙醇水溶液中，混合均匀，再使用美国俄亥俄州州立大学生产的0SU-4L型实验室规模高压脉冲电场连续处理设备，在脉冲宽度2ys、脉冲频率200Hz与功率500W的条件下进行高压脉冲电场处理9h，再使用上海子期实验设备有限公司销售的SHZ-D(III)循环水式真空栗，在压力0.009MPa下减压过滤1.lh，滤渣使用所述提取溶剂乙醇水溶液洗涤4次，经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品；采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚粗产品的多酚含量为1.37g/100g;
[0148]C、大孔树脂吸附
[0149]使用南开大学化工厂生产的Amberlite XAD-4大孔树脂预处理，其预处理与实施例I的相同。
[0150]将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液在吸附速度5BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比30:1的条件下吸附3.0h，接着转移到水浴中在上海一恒WSZ-1OA恒温振荡器里在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附18.6h;
[0151]D、洗脱
[0152]让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，然后按照振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1: 2用蒸馏水洗涤2次，滤干，接着使用浓度为以体积计54%的乙醇水溶液在洗脱速度5BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比28:1的条件下进行洗脱，洗脱液在压力
0.1OMPa下浓缩2.1h，接着使用由北京博医康实验仪器有限公司以商品名Π)-1Α-50销售的真空冷冻干燥器，在压力0.1OMPa与温度-20°c下进行真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。采用本说明书中描述的方法测定得到云南黑木耳多酚纯度、得率与清除DPPH自由基的能力，其结果列于附图1中。
【主权项】
1.一种从云南黑木耳提取多酚的方法，其特征在于该方法的步骤如下: A、预处理 将云南黑木耳在烘箱中在温度58?62°C下烘干，然后在恒温恒湿干燥器中在温度102?108°C的条件下烘干直至达到恒重，再研磨得到云南黑木耳粉； B、提取 按照以克计云南黑木耳粉与以毫升计乙醇水溶液的固液比为1:10?50，把在步骤A得到的云南黑木耳粉加到乙醇水溶液中，混合均匀，再在高压脉冲电场下进行处理，减压过滤，滤渣经洗涤后得到云南黑木耳多酚粗产品； C、大孔树脂吸附 将步骤B得到的云南黑木耳多酚粗产品配制成10.0mg/mL的水溶液，然后让所述水溶液通过大孔树脂床进行吸附，接着转移到水浴中在恒温振荡器里进行振荡吸附； D、洗脱 让步骤C振荡吸附大孔树脂过滤，用蒸馏水洗涤2?3次，滤干，接着用乙醇水溶液洗脱，洗脱液经减压浓缩与真空冷冻干燥，得到所述的云南黑木耳多酚。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤A中，所述云南黑木耳粉的粒度是60目以上。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤B中，所述的乙醇水溶液浓度为以体积计40?70 %。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤B中，在脉冲宽度2ys、脉冲频率.200Hz与功率300?800W的条件下进行高压脉冲电场处理6?12h。5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤B中，在高压脉冲电场下处理的物料在压力0.008?0.012MPa下过滤0.8?I.2h。6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤C中，所述的水溶液在吸附速度4?6BV/h、所述水溶液与大孔树脂的体积比28?32:1的条件下吸附2?4h。7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤C中，在水浴温度25°C与振荡频率1000r/min的条件下振荡吸附18?22h。8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤D中，洗涤时振荡吸附的大孔树脂与蒸馏水的体积比是1:2?4。9.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤D中，使用浓度为以体积计45?.55 %的乙醇水溶液在洗脱速度4?6BV/h、所述乙醇水溶液与大孔树脂的体积比28?32:1的条件下进行洗脱。10.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于在步骤D中，洗脱液在压力0.08?.0.12MPa下浓缩1.6?2.4h，接着在压力0.08?0.12MPa与温度-20°C下进行真空冷冻干燥。
【文档编号】A61P39/06GK105998092SQ201610522241
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月5日
【发明人】袁毅, 谷向春, 郑新涛, 张静, 卢乐华
【申请人】华宝食用香精香料（上海）有限公司