维药斯米孜·欧提提取物在制备肝保护药物和保健品中的应用

文档序号:10632709
维药斯米孜·欧提提取物在制备肝保护药物和保健品中的应用
【专利摘要】本发明提供了一种维药斯米孜·欧提提取物在制备肝保护药物和保健品中的应用。
【专利说明】
维药斯米孜?欧提提取物在制备肝保护药物和保健品中的 应用
技术领域
[0001] 本发明设及一种维药的新应用,具体的说设及一种维药斯米孜.欧提提取物在制 备肝保护药物和保健品中的应用。
【背景技术】
[0002] 肝脏是维持机体生命活动至关重要的器官,它不仅参与机体消化、排泄、解毒、合 成W及免疫等多种生物化学过程,而且在机体糖类、蛋白质、脂肪的代谢方面发挥至关重要 的作用。肝脏作为机体代谢有毒物质的主要器官,承载着为机体解毒的使命,一旦短时间内 摄入大量的有毒物质,如病毒、酒精W及化学性毒物等,超过肝脏的承受范围,则引起肝脏 的急、慢性损伤。肝损伤主要表现为血清中多种酶活性增高,如丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天 冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性憐酸酶(ALP)、乳酸脱氨酶化DH)和总胆红素(TBIL)等,其中 转氨酶(ALT、AST)是肝损伤最敏感的指标之一,转氨酶的升高在一定程度上反映了肝损伤 的程度;同时,肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)的含量降低、脂质过氧化反应的终产物丙二醒 (MDA)的含量增加,使Ξ簇酸障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢,致使甘油Ξ醋(TG)含 量升高;自由基还可激活单核细胞和巨隧细胞,产生多种炎症因子,如肿瘤坏死因子(TNF- α)、白介素-1(化-1β)、白介素-6(比-6)等。TNF-a不仅具有直接的肝毒性,能引起肝细胞的 坏死,并可激活Bax和化S等基因表达,从而引起细胞调亡。在形态上,肝损伤后肝细胞结构 破坏,如肝小叶结构素乱,肝细胞明显变形,细胞有浸润现象,细胞核数量明显减少,细胞中 出现大量脂滴,胞浆淡染等。由肝损伤引起的肝功能障碍疾病在临床比较多见,如药物及化 学性中毒、病毒性肝炎、重症消耗性疾病等,它是多种肝脏病变的共同病理基础,是多种严 重肝脏疾病的发生、发展及最终走向肝功能衰竭的始动因子和必经途径。因此,治疗肝损伤 药物的筛选和肝损伤发病机制的深入研究,对急、慢性肝病、肝炎、肝硬化及肝癌的防治具 有重要意义。
[0003] 维药斯米孜?欧提(Portulaca oleracea L.),属马齿宽科植物,是新疆地区特有 的药食同源植物。维吾尔药学古籍《药物之园》(汉文音译名:《阿大依库力艾地维也》)中记 载:"斯米孜?欧提,是一种植物的全草;全株平邸或斜向上,红淡褐红色或紫色,茎圆柱形, 叶片肥厚肉质,小匙形,光滑,花白色,种子多数,黑褐色;全株具有生瓜气味。"根据上述维 吾尔医本草所述药物特征和实物对照,斯米孜.欧提在植物学上属马齿宽科植物,但是由 于新疆地处内陆、远离海洋、四周有高山阻隔,形成了降水量少、空气干燥、日照时间长、季 节及昼夜溫差大的极端溫带大陆性气候,其特殊的气候与环境因素造就了斯米孜?欧提与 中原地区的马齿宽从药性、有效成分等方面都有显著的不同。维吾尔族医学独有的医学理 论体系赋予了斯米孜?欧提不同于马齿宽的药理学功效。中医理论认为马齿宽性寒,味酸, 无毒,入肝、脾、大肠 Ξ经,有疏肝理气,健脾养胃,润肠解毒之功效,主治腹泻、频疾等胃肠 炎症。而维吾尔医学理论认为斯米孜?欧提属二级湿、Ξ级寒,具有生湿生寒,清热止痛、退 烧消炎、解渴肥体、凉血止血、通利小便的功效,主治热性或胆液质性疾病。
[0004] 因此,无论是医学理论还是成分组成,斯米孜·欧提与马齿宽都有显著差异,不能 将斯米孜?欧提与马齿宽视为同一药物,也不能将中药学中对马齿宽的研究直接应用于维 药斯米孜?欧提。与此同时,现代医学理论对斯米孜?欧提的研究很少,未见有斯米孜?欧 提在肝保护活性上的研究和报道,更未见有斯米孜?欧提对肝保护作用机制的研究,W及 斯米孜?欧提在基因调节方面的研究。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的是提供一种维药斯米孜·欧提在现代医学中的新用途,即提供一种 维药斯米孜?欧提提取物在制备肝保护药物和保健品中的应用。
[0006] 进一步的,本发明提供一种维药斯米孜.欧提提取物在制备肝保护药物和保健品 中的应用,其中所述肝保护是指防治四氯化碳、对乙酷氨基酪等药物所致的肝损伤,酒精性 肝损伤,糖尿病肝损伤,肥胖肝损伤,病毒性肝炎,肝纤维化。
[0007] 进一步的,本发明提供一种维药斯米孜?欧提提取物在制备肝保护药物和保健品 中的应用,其中所述肝保护是指在肝损伤个体中降低肝脏指数,降低血浆中丙氨酸氨基转 移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性憐酸酶(ALP)、甘油Ξ醋(TG)、乳酸脱氨酶 (LDH)和总胆红素(TBIL)的水平,降低肝脏组织中丙二醒(MDA)水平、增加超氧化物歧化酶 (SOD)水平,降低血浆中IL-li3、IL-6、TNF-a的水平,降低肝脏脂肪性病变程度,减轻炎性侵 润,改善肝细胞结构,恢复肝索形态。
[000引进一步的,本
【申请人】通过大量的研究,首次发现了斯米孜.欧提在基因水平上实 现肝保护活性的作用祀点。因此,本发明进一步提供一种维药斯米孜?欧提提取物在制备 肝保护药物和保健品中的应用,其中所述肝保护是指在肝损伤个体中上调基因 CYP26A1、 CYP2C37、CYP2C44、CYP2C50、CYP2C54 的表达,下调基因 CYP2A4、CYP2A5 的表达。
[0009] 进一步的,本发明提供一种维药斯米孜?欧提提取物在制备肝保护药物和保健品 中的应用,其中所述斯米孜·欧提提取物按质量比含有芦下至少lOOug/g、搬皮巧至少 300ug/g、搬皮素至少400ug/g、山奈酪至少30ug/g。
[0010] 进一步的,本发明提供一种维药斯米孜?欧提提取物在制备肝保护药物和保健品 中的应用,其中所述斯米孜·欧提提取物是通过将斯米孜?欧提原料药进行蒸馈水回流提 取制备而成的。
【附图说明】
[0011] 图1:实施例1中斯米孜?欧提提取物与马齿宽提取物成分比较的HPLC色谱图。
[0012] 图2:实施例2中斯米孜?欧提提取物与马齿宽提取物对ALT、AST活性影响的实验 结果。
[OOK]图3:实施例3中斯米孜?欧提提取物对肝脏指数、41;1\451\了8比、了6、1畑水平影响 的实验结果。
[0014] 图4:实施例3中斯米孜·欧提提取物对ALP、MDA、S0D、比-1β、比-6、TNF-a水平影响 的实验结果。
[001引图5:实施例3中小鼠肝脏组织的形态学变化。
[0016]图6:实施例4中斯米孜?欧提提取物对基因表达水平影响的实验结果。
【具体实施方式】
[0017]下面实施例对本发明进一步详细说明,本领域技术人员应当意识到在不脱离本发 明的范围和精神的情况下所作的改动,均属于本发明的范围。
[001引材料;
[0019] 斯米孜?欧提原料药来自:采集自新疆塔城。
[0020] 安徽马齿宽原料药来自:购自于巧花堂国药股份有限公司(批号:150115)
[0021] 河北马齿宽原料药来自:购自于浙江钱江中药材饮片有限公司(批号:140210)
[0022] 芦下、山奈酪、搬皮素、搬皮巧对照品购自:芦下购自于南京替斯艾么中药研究所 (批号:TCM027-080118)、山奈酪购自于上海同田生物技术有限公司(批号:E-0013)、搬皮素 购自于中国药品生物制品检定所(批号:100081 -200406 )、搬皮巧购自于中国药品生物制品 检定所(批号:111538-200403)。
[0023] 实施例1:斯米孜?欧提提取物的制备方法:
[0024] 称量斯米孜.欧提原料药化g,蒸馈水回流提取两次,每次2小时,弃药渣将两次水 溶液混合,减压浓缩至5000mL,制成浓度为0.2g/ml(相当于每ml溶液中含有0.2g原料药)的 斯米孜?欧提的提取物储备液。临用前用蒸馈水将储备液稀释为〇.14g/ml斯米孜?欧提的 提取物溶液。
[0025] 实施例2:斯米孜?欧提提取物与马齿宽提取物的成分比较
[0026] 1.供试品溶液和标准品溶液的制备:
[0027] 供试品溶液:精密称取斯米孜?欧提Ig加入50ml的Ξ角烧瓶中,加入甲醇10ml,精 密称定重量,超声30min(250W,60Hz),称重,补足减失液体,摇匀,离屯、(3000rpm,lOmin), 0.45um滤膜过滤,取续滤液作为斯米孜?欧提的供试品溶液。另根据上述方法制备安徽马 齿宽的供试品溶液和河北马齿宽的供试品溶液。
[00%]标准品溶液:精密称量芦下、山奈酪、搬皮素、搬皮巧对照品适量,置于10ml的容量 瓶中,甲醇超声溶解,定容,放冷,作为对照品储备液。
[0029] 2. HPLC色谱条件:色谱柱为Hypersi 1 0DS2(250mm X 4.6mm,5um);柱溫为室溫;流 速为1.0ml · min-i;流动相为乙腊(A)和水(B);梯度洗脱为:0-30min,5%A^12%A;30- 75min,25%A;75-90min,25%A 一 50%4;90-110111111,50%4一60%4;检测波长280皿;进样量 lOuLo
[0030 ] 3.标准曲线绘制:
[0031]精密吸取上述对照品储备液适量,用甲醇稀释制成系列浓度的对照品溶液,按上 述色谱条件分析,测定各峰面积,W浓度(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线, 求得上述四个组分的回归方程,见下表。
[0032]
[0033] 4.实验结果
[0034] 斯米孜?欧提提取物、马齿宽提取物W及标准品的HPLC色谱图见附图1。根据HPLC 结果计算斯米孜?欧提提取物与马齿宽提取物的各组分含量为:
[0035]
[0036] 从附图1和上表可知,斯米孜.欧提虽属马齿宽科植物,但是由于地域特点,其提 取物中所含有的芦下、山奈酪、搬皮素、搬皮巧等成分都与中原的马齿宽植物有显著不同, 从而不能将中药学中对马齿宽的研究直接应用于维药斯米孜·欧提。
[0037]实施例3:斯米孜?欧提提取物与马齿宽提取物的药效比较 [003引 1.药物制备:
[0039] 根据实施例1的方法制备得浓度为0.14g/ml斯米孜?欧提的提取物溶液。
[0040] 另参照实施例1的方法,将安徽马齿宽原料药和河北马齿宽原料药分别制备得浓 度为0.14g/ml的安徽马齿宽的提取物溶液,W及浓度为0.14g/ml的河北马齿宽的提取物溶 液。
[0041] 2.实验方法:
[0042] 将50只小鼠随机分成5组,每组10只,分别为:空白组、模型组、斯米孜?欧提提取 物组、安徽马齿宽提取物组、河北马齿宽提取物组。空白组和模型组给予蒸馈水(lOml/kg, 灌胃),各提取物组分别给药步骤1中的各提取物溶液(给药体积为lOml/kg,灌胃),每天给 药一次,连续给药5天。
[0043] 在末次给药2小时后,模型组与各提取物组小鼠分别腹腔注射(i.p. )0.2% (v/v) CC^花生油溶液(给药体积为lOml/kg);空白组小鼠腹腔注射(i.p.)花生油(给药体积为 lOml/kg)〇
[0044] 随后禁食不禁水,23小时后取血。室溫静置化,350化pm离屯、12min,制备血清。日立 7020全自动生化分析仪检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移 酶(AST)的活性。
[0045] 3.实验结果:
[0046] 各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性见 附图2和下表:
[0047]
[0048] 胖 <0.001,冲<0.05,*冲<0.001,ΔP<0.05ΔΔP<0.001
[0049] 从附图2和上表可知,斯米孜.欧提提取物对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠血 清中转氨酶活性的抑制作用明显优于中原的马齿宽提取物。
[0050] 实施例4:斯米孜.欧提的肝保护活性研究
[0化1] 1.药物制备:
[0052] 根据实施例1的方法制备得浓度为0.14g/ml斯米孜.欧提的提取物溶液。
[0053] 另称取2g水飞劑宾原料药,加入100ml 0.5%〔1(:-化中,制备成2〇111旨/1111的水飞劑 宾溶液。
[0化4] 2.实验方法:
[0055] 将40只小鼠随机分成4组,每组10只,分别为:空白组、模型组、斯米孜?欧提提取 物组、阳性对照组。其中空白组和模型组给予蒸馈水(lOml/kg,灌胃),斯米孜?欧提提取物 组给药步骤1中的斯米孜?欧提提取物溶液(给药体积为lOml/kg,灌胃),阳性对照组给药 步骤1中的水飞劑宾溶液(给药体积为lOml/kg,灌胃),每天给药一次,连续给药5天。
[0056] 在末次给药2小时后,模型组、斯米孜·欧提提取物组、阳性对照组的小鼠分别腹 腔注射(i.P.)〇.2%(v/v)CCl4花生油溶液(给药体积为lOml/kg);空白组小鼠腹腔注射 (i.p.)花生油(给药体积为lOml/kg)。
[0化7] 随后禁食不禁水,23小时后眼眶取血,脱白处死小鼠。将全血于室溫静置2h, 350化pm离屯、12min,制备血清,保存于-80°C冰箱,准备后续测定。摘取全部小鼠肝脏,用4 °C 预冷的生理盐水冲洗表面浮血,滤纸拭干、称重,用于计算肝脏指数。每组随机选取3只小鼠 的肝脏,取最大叶置于10%福尔马林中固定,准备后续做病理检查。每组再随机选取3只小 鼠的肝脏,取〇.2g肝脏组织,剪碎,放于玻璃匀浆器中,加预冷的9倍体积的0.9%生理盐水 匀浆,30(Κ)巧m离屯、lOmin,上清液置于4°C,保存备用W检测脂质过氧化指标。剩余肝脏组织 置于液氮冷冻,再转移至-80°C冰箱保存。
[0化引 3.检测指标及结果:
[0059] (1)肝脏指数:
[0060] 按W下公式计算肝脏指数:肝脏指数(%)=肝脏重量(g)/小鼠体重(g)XlOO。
[0061] (2)血清指标:使用日立7020全自动生化分析仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性憐酸酶(ALP)、甘油Ξ醋(TG)、乳酸脱氨酶化DH)和 总胆红素(TBIL)的活性水平,操作步骤按照仪器操作说明执行,上述指标可W评价CC^诱 导的肝损伤程度。
[0062] (3)脂质过氧化水平:肝脏组织中丙二醒(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平可 W反映肝脏脂质过氧化水平。称取适量小鼠肝脏组织,生理盐水匀浆,制备10%肝脏匀浆混 悬液,于4°C,300化pm,离屯、lOmin,取上清液,按照丙二醒(MDA)测定试剂盒(TBA法)、总超氧 化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(黄嚷岭氧化酶法)(均购自南京建成生物工程研究所)说明测 定MDA和SOD的含量。
[0063] (4)炎症因子表达水平:按照小鼠肿瘤坏死因子aELISA试剂盒、小鼠白介素- 6ELISA试剂盒、小鼠白介素-1化LISA试剂盒(均购自武汉博±德生物工程有限公司)说明, 巧憶小鼠血清中TNF-a、比-6和比-1β的含量。
[0064] 上述检测指标的实验结果如下表与图3和图4:
[00 化]
[0066]
[0067] 胖 <0.001,冲 <0.05,*冲 <0.001
[0068] 从上表、图3和图4中可知,斯米孜.欧提可有效降低四氯化碳急性肝损伤小鼠的 肝脏指数,可降低四氯化碳急性肝损伤小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基 转移酶(AST)、碱性憐酸酶(ALP)、甘油Ξ醋(TG)、乳酸脱氨酶化DH)和总胆红素(TBIL)的活 性,降低四氯化碳急性肝损伤小鼠肝脏组织MDA水平,提高SOD水平,可降低四氯化碳急性肝 损伤小鼠血清中IL-li3、IL-6、TNF-a的含量,修复四氯化碳对小鼠肝脏造成的损伤。
[0069] 4.组织病理学分析
[0070] 将各组随机选取的3只小鼠肝脏组织用10%福尔马林固定液中固2地,用水冲洗后 经梯度乙醇脱水,二甲苯透明,进行石蜡包埋处理后切成扣m厚的薄片,苏木精和伊红染色 化&E染色)、油红染色,光镜下观察小鼠肝脏组织的形态学变化,结果见附图5。从附图5可W 看出,斯米孜?欧提能有效降低肝脏脂肪性病变程度,减轻炎性侵润,改善肝细胞结构,恢 复肝索形态。
[0071] 实施例4:斯米孜?欧提提取物对基因的表达调节
[0072] 1.实验方法:
[0073] 利用定量即时PCR(real-t ime PCR)技术对空白组、模型组与斯米孜·欧提组(各 组随机选取4只)小鼠的肝脏组织中基因 CYP26A1、CYP2C37、CYP2C44、CYP2C50、CYP2C54、 CYP2A4、CYP2A5的表达进行测定。
[0074] 其中反转录步骤中的化FiScript cDNA试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公 司,即时PCR步骤中的SYBR FAST 化cr Ki t Master Mix试剂盒购自ΚΑΡΑ Biosystems。
[0075] (1)引物设计合成如下表
[0076]
[0077]

[0084] 2)PCR 程序:
[0085]
[0086] (4)数据分析:将原始数据、扩增曲线和烙解曲线等信息从定量软件Stepone software v2.3中导出进行分析,得到样本基因相对表达水平的图谱。
[0087] 2.实验结果:
[0088] 实验结果见表下表和图6。从下表和图6可W看出,斯米孜·欧提能够有效上调肝 损伤小鼠基因〔¥口2641、〔¥口2〔37、〔¥口2〔44、〔¥口2(:50、〔¥口2(:54的表达,下调基因〔¥口2八4、 CYP2A5的表达。
[0089]
[0090]
【主权项】
1. 一种维药斯米孜?欧提提取物在制备肝保护药物和保健品中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用,其中所述肝保护是指防治四氯化碳、对乙酰氨基酚药物 所致的肝损伤,酒精性肝损伤,糖尿病肝损伤,肥胖肝损伤,病毒性肝炎,肝纤维化。3. 根据权利要求1所述的应用,其中所述肝保护是指在肝损伤个体中降低肝脏指数,或 是降低血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平,或是降低血浆中天冬氨酸氨基转移酶(AST) 的水平,或是降低血浆中碱性磷酸酶(ALP)的水平,或是降低血浆中甘油三酯(TG)的水平, 或是降低血浆中乳酸脱氢酶(LDH)的水平,或是降低血浆中总胆红素(TBIL)的水平;或是降 低肝脏组织中丙二醛(MDA)的水平,或是增加肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)的水平;或 是降低血浆中IL-Ιβ、或IL-6、或TNF-α的水平。4. 根据权利要求1所述的应用,其中所述肝保护是指在肝损伤个体中降低肝脏脂肪性 病变程度,减轻炎性侵润,改善肝细胞结构,恢复肝索形态。5. 根据权利要求1所述的应用,其中所述肝保护是指在肝损伤个体中上调基因 CYP26A1、CYP2C37、CYP2C44、CYP2C50、CYP2C54 的表达,下调基因 CYP2A4、CYP2A5 的表达。6. 根据权利要求1-5中任一项所述的应用,其中所述斯米孜?欧提提取物按质量比含 有芦丁至少l〇〇ug/g、槲皮苷至少300ug/g、槲皮素至少400ug/g、山奈酸至少30ug/g。7. 根据权利要求1-5中任一项所述的应用,其中所述斯米孜?欧提提取物是通过将斯 米孜?欧提原料药进行蒸馏水回流提取制备而成的。8. 根据权利要求6所述的应用,其中所述斯米孜·欧提提取物是通过将斯米孜?欧提 原料药进行蒸馏水回流提取制备而成的。
【文档编号】A61K36/185GK105998101SQ201610460036
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月22日
【发明人】鲁碧楠, 庞宗然, 宋新龙, 陈书, 张耀丹, 苏冷高娃
【申请人】中央民族大学
再多了解一些
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1