一种自身免疫性神经炎治疗药物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种自身免疫性神经炎治疗药物，该技术方案通过对中药材成分的大量筛选，获取了多种对人体免疫系统具有调节作用的中药，在此基础上研究了各成分对自身免疫性神经炎的疗效和相互协同作用，从而设计了本发明的药物配方。针对该药物，通过实验手段证实了其对自身免疫性神经炎具有确切的治疗作用，口服该药物后可降低实验动物相关症状的临床评分，缓解体重下降趋势，同时还可以缓解神经细胞炎性浸润，从而对自身免疫性神经炎起到治疗作用。ELISA检测发现，该药物能确切降低多种促炎性因子的表达量，为该药物的药理作用提供了可靠的实验依据。
【专利说明】
一种自身免疫性神经炎治疗药物
技术领域
[0001 ]本发明涉及自身免疫性疾病治疗技术领域，具体涉及一种自身免疫性神经炎治疗药物。
【背景技术】
[0002]自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。自从Donath与Landsteiner提出此概念以来，许多疾病相继被列为自身免疫性疾病。自身免疫性神经炎是以神经根、周围神经的炎性反应以及周围血管炎性浸润为病理现象的自身免疫性神经疾病，其发病原因尚不明确，可能与免疫耐受丢失、免疫反应调节异常、遗传因素甚至病毒因素有关。
[0003]鉴于自身免疫性疾病病理特点的复杂性，现有技术中对该疾病的治疗主要围绕症状展开，即以缓解炎症作为治疗着眼点。现有技术中应用于该疾病的治疗药物主要包括免疫球蛋白和糖皮质激素。其中免疫球蛋白作为具有抗体活性的混合物，其发挥药效的根本原理是抗原抗体反应，因此特异性是其具备疗效的前提，而由于目前自身免疫性神经炎的机理尚未完全明确，因此在利用免疫球蛋白治疗该疾病时往往存在疗效不稳定的缺陷。而糖皮质激素在抑制免疫应答、抗炎、抗毒等方面作用广泛，临床发现其对自身免疫性神经炎具有较为确切的治疗作用，但由于不良反应发生率较高、不良反应严重，极大的限制了相关药物的应用。
【发明内容】
[0004]本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种自身免疫性神经炎治疗药物，以解决现有技术中该疾病治疗药物疗效不佳的技术问题。
[0005]本发明要解决的另一技术问题是降低自身免疫性神经炎治疗药物的不良反应。
[0006]为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案:
[0007]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物包括以下重量份的成分:碧桃干5?7份，布渣叶3?5份，地牯牛3?5份，法罗海2?3份，翻白草2?4份，飞来鹤5?7份，蜂蜡2?3份，当归I?2份，佛手参I?2份，岗梅根I?2份。
[0008]优选的，还包括I?2重量份的汉桃叶。
[0009]优选的，还包括I?2重量份的核桃仁。
[0010]优选的，还包括I?2重量份的桦菌芝。
[0011 ]优选的，还包括I?2重量份的椒目。
[0012]优选的，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干6份，布渣叶4份，地牯牛4份，法罗海2.5份，翻白草3份，飞来鹤6份，蜂蜡2.5份，当归1.5份，佛手参1.5份，岗梅根1.5份。
[0013]优选的，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干5.5份，布渣叶3.5份，地牯牛3.5份，法罗海2.2份，翻白草2.7份，飞来鹤5.6份，蜂蜡2.3份，当归1.2份，佛手参1.2份，岗梅根1.2份，汉桃叶1.5份，核桃仁1.5份，桦菌芝1.5份，椒目1.5份。
[0014]本发明通过对中药材成分的大量筛选，获取了多种对人体免疫系统具有调节作用的中药，在此基础上研究了各成分对自身免疫性神经炎的疗效和相互协同作用，从而设计了本发明的药物配方。针对该药物，通过实验手段证实了其对自身免疫性神经炎具有确切的治疗作用，口服该药物后可降低实验动物相关症状的临床评分，缓解体重下降趋势，同时还可以缓解神经细胞炎性浸润，从而对自身免疫性神经炎起到治疗作用。药理研究发现，该药物能降低炎性因子几^?几^?^^丫^即?的表达量’因此上述疗效具有确切的实验依据。
[0015]本发明将现有技术中并非用于自身免疫性疾病治疗的多种中药进行了优化组合，所得组合物不仅具有突出的治疗效果，同时由于取自天然成分，因此未发现不良反应，安全可靠。此外，本发明药物化学稳定性良好，丸剂、散剂、胶囊剂等常规剂型均可满足要求，因此制剂成本较低。本发明以创新性的技术改进实现了突出的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有突出的推广前景。
【附图说明】
[0016]图1是实施例8中诱导后首日以及症状出现后分别口服本发明药物(200mg/kg)降低实验动物身免疫性神经炎的临床评分图。
[0017]图2是实施例8中诱导后首日以及症状出现后分别口服本发明药物(200mg/kg)缓解患病动物体重减轻图。
[0018]图3是实施例8中诱导后首日以及症状出现后分别口服本发明药物(200mg/kg)缓解实验动物外周神经炎性细胞浸润图。
[0019]图4是实施例8中诱导后首日以及症状出现后分别口服本发明药物(200mg/kg)降低实验动物11-2、11^-6、正^丫、1,-€[表达量图。
【具体实施方式】
[0020]以下将对本发明的【具体实施方式】进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
[0021]实施例1
[0022]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干5份，布渣叶3份，地牯牛3份，法罗海2份，翻白草2份，飞来鹤5份，蜂蜡2份，当归I份，佛手参I份，岗梅根I份。
[0023]实施例2
[0024]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干7份，布渣叶5份，地牯牛5份，法罗海3份，翻白草4份，飞来鹤7份，蜂蜡3份，当归2份，佛手参2份，岗梅根2份。
[0025]实施例3
[0026]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干6份，布渣叶4份，地牯牛4份，法罗海2.5份，翻白草3份，飞来鹤6份，蜂蜡2.5份，当归1.5份，佛手参1.5份，岗梅根1.5份。
[0027]实施例4
[0028]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干5.5份，布渣叶4.5份，地牯牛4.5份，法罗海2.3份，翻白草3.3份，飞来鹤5.8份，蜂蜡2.1份，当归1.4份，佛手参1.9份，岗梅根1.3份，汉桃叶1.7份。
[0029]实施例5
[0030]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干6.5份，布渣叶3.5份，地牯牛3.5份，法罗海2.9份，翻白草2.3份，飞来鹤6.3份，蜂蜡2.8份，当归I.7份，佛手参I.2份，岗梅根I.4份，核桃仁I.5份，椒目I份。
[0031 ] 实施例6
[0032]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干5.5份，布渣叶4.5份，地牯牛4.5份，法罗海2.3份，翻白草3.3份，飞来鹤5.8份，蜂蜡2.1份，当归1.4份，佛手参1.9份，岗梅根1.3份，汉桃叶2份，桦菌芝1.4份，椒目2份。
[0033]实施例7
[0034]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干6.5份，布渣叶3.5份，地牯牛3.5份，法罗海2.9份，翻白草2.3份，飞来鹤6.3份，蜂蜡2.8份，当归1.7份，佛手参1.2份，岗梅根1.4份，桦菌芝I份。
[0035]实施例8
[0036]—种自身免疫性神经炎治疗药物，该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干5.5份，布渣叶3.5份，地牯牛3.5份，法罗海2.2份，翻白草2.7份，飞来鹤5.6份，蜂蜡2.3份，当归1.2份，佛手参1.2份，岗梅根1.2份，汉桃叶1.5份，核桃仁1.5份，桦菌芝1.5份，椒目1.5份。
[0037]针对本实施例药物，通过以下实验验证其对自身免疫性神经炎的治疗效果。
[0038]I患病动物模型的建立
[0039]1.1实验动物来源
[0040]雄性野生型Lewis大鼠18只，6?8周龄，体重170?190克，饲养环境为室温20?25°C，相对湿度为40?60%。
[0041 ] 1.2制备抗原佐剂乳化物
[0042]200yg的P0180-199多肽和8mg灭活的结核分支杆菌与500yL磷酸盐缓冲液和500yLFreund’s佐剂完全混合，乳化。
[0043]1.3实验分组
[0044]大鼠随机分三组，每组6只大鼠，分别为生理盐水组，预防组和治疗组。预防组即免疫后立即给药200mg/kg/天;治疗组即出现首发症状后给药200mg/kg/天。
[0045]1.4模型构建
[0046]大鼠双侧后足垫皮下注射乳化剂(150μ!7侧)。预防组给药从免疫诱导后第一天开始用本实施例药物灌胃给药，剂量为200mg/kg/天。治疗组给药从首发症状出现开始用本实施例药物灌胃给药，剂量为200mg/kg/天。一般首发症状出现是在免疫诱导后第7?9天。免疫诱导后，每天检查记录大鼠临床神经功能评分及体重变化。
[0047]1.5临床评分标准
[0048]大鼠经P0180-199免疫后，每日采用盲法由两名观察者，采用国际通用的10分评分制对小鼠进行临床评分，每天检查并记录疾病的临床神经功能分级，直至PO免疫后16天。大鼠EAN动物模型神经功能评分具体标准如下:O分正常；I分尾部变软;2分尾部无法抬起;3分体位不能自行纠正;4分共济失调;5分后肢轻度麻痹;6分后肢中度麻痹;7分后肢重度麻痹；8分四肢轻瘫;9分四肢重瘫;10分死亡。
[0049]2疗效验证实验
[0050]2.1坐骨神经肌电图
[0051]大鼠经水合氯醛3mg/kg腹腔麻醉后，碘伏消毒表面皮肤，钝性分离左侧坐骨神经，进行肌电图检测。
[0052]2.2坐骨神经石蜡切片
[0053]坐骨神经固定:在免疫诱导后第十六天取坐骨神经，将神经置于包埋盒中，4%中性多聚甲醛，30min以上或过夜。
[0054]组织脱水:流水冲洗神经组织中的甲醛30min，75 %酒精50min，85 %酒精50min，95%酒精Ilh，95%酒精II2h，95%酒精III过夜或2h，无水乙醇I30min，无水乙醇II30min，无水乙醇III30min。
[0055]组织透明(低温):二甲苯I15min，二甲苯IllOmin，二甲苯IlllOmin。
[0056]组织浸蜡(60°C ):石(熔)蜡190min，石(熔)蜡II60min，打开包埋盒，取出组织，放入预热的模具(包含熔蜡)中，包埋盒置顶，继续添加石(熔)蜡，直至包埋盒底部浸没于石(熔)蜡中。
[0057]冷却:取出模具，置于4°C冰箱过夜，充分冷却后，常温贮藏备用。
[0058]石蜡切片:坐骨神经切片厚度为ΙΟμπι，将蜡片放入45°C温水中，使其自然展开。持防脱玻片捞取蜡片，然后60 °C烘片4h。
[0059]2.3坐骨神经组织石蜡切片染色
[0060]石錯切片脱錯:石錯切片，二甲苯I 1min，二甲苯IllOmin，二甲苯I IllOmin。
[0061 ] 石蜡切片水化:100%酒精2min，95%酒精2min，85%酒精2min，75%酒精2min，蒸馏水冲洗Imin
[0062]石蜡切片HE染色:苏木精1min，自来水漂洗I?3s，盐酸酒精迅速分化(I滴浓盐水加入70%乙醇10ml中)I?3s，0.I %氨水/PBS(7.5?8.0)返蓝30s?Imin，自来水冲洗2?5min，蒸馏水漂洗I?38，0.5%伊红染色11^11，蒸馏水漂洗1?38，75%酒精10?308，85%酒精10?30s，95%酒精30s?Imin，无水酒精2?3min，透明封片:二甲苯13?5111；[11，二甲苯113?5min，(二甲苯湿润)滴树胶，加盖玻片。
[0063]2.4脾细胞ELISA检测
[0064]单核细胞准备:麻醉大鼠，无菌分离脾脏。用注射器活栓轻轻研磨脾脏至完全破碎，加入40mL无菌I3BS溶液迅速混匀。离心1500rpm 5min，弃上清，加入5mL无菌红细胞裂解液，4°C冰箱裂解1min，加入30mLPBS终止裂解，离心1500rpm 5min，弃上清，加入30mLPBS，混匀，离心1500rpm 5min，弃上清，用2mL RPMI1640完全培养基重悬细胞
[0065]单核细胞培养:进行细胞计数，用RPMI1640完全培养基稀释细胞至浓度为I X 16个/mL，取培养皿，每个皿加入2mL，37°C，5%CO2孵育72h。
[0066]ELISA实验:吸取细胞培养上清液，离心12000rpm/min5min，取上清，做ELISA检测。
[0067]3实验结果
[0068]如图1、2所示，以每日200mg/kg体重的剂量口服本实施例药物可以显著降低实验性自身免疫性神经炎临床评分及体重减轻趋势;如图3所示，口服本实施例药物后炎性神经细胞浸润现象得到显著抑制，分泌物明显减少，表明药物对炎症起到了治疗作用；如图4所示，ELISA检测发现口服本实施例药物后IL-2、IL-6、IFN- γ以及TNF-α等促炎性细胞因子的表达量显著下降，由此在一定程度上揭示了本发明药物对自身免疫性神经炎的治疗机理。
[0069]以上实验结果证明了本发明药物对自身免疫性神经炎具有确切的治疗作用，且实验中未发现不良反应，因此本发明药物可用于该疾病的治疗。
[0070]以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种自身免疫性神经炎治疗药物，其特征在于该药物包括以下重量份的成分:碧桃干5?7份，布渣叶3?5份，地牯牛3?5份，法罗海2?3份，翻白草2?4份，飞来鹤5?7份，蜂錯2?3份，当归I?2份，佛手参I?2份，岗梅根I?2份。2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于还包括I?2重量份的汉桃叶。3.根据权利要求1所述的药物，其特征在于还包括I?2重量份的核桃仁。4.根据权利要求1所述的药物，其特征在于还包括I?2重量份的桦菌芝。5.根据权利要求1所述的药物，其特征在于还包括I?2重量份的椒目。6.根据权利要求1所述的药物，其特征在于该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干6份，布渣叶4份，地牯牛4份，法罗海2.5份，翻白草3份，飞来鹤6份，蜂蜡2.5份，当归1.5份，佛手参1.5份，岗梅根1.5份。7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该药物由以下重量份的成分组成:碧桃干.5.5份，布渣叶3.5份，地牯牛3.5份，法罗海2.2份，翻白草2.7份，飞来鹤5.6份，蜂蜡2.3份，当归1.2份，佛手参1.2份，岗梅根1.2份，汉桃叶1.5份，核桃仁1.5份，桦菌芝1.5份，椒目1.5份。
【文档编号】A61K35/64GK105998700SQ201610528898
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月28日
【发明人】林海燕
【申请人】林海燕