无针注射猪病毒性疫苗系统及应用
【专利摘要】本发明公开了无针注射猪病毒疫苗系统与应用，本发明提供了无针注射猪病毒疫苗系统，包括灌装有猪病毒疫苗的容器和可读载体；所述可读载体记载内容包括：所述猪病毒疫苗的无针注射剂量不大于该猪病毒疫苗标准剂量。本发明实验证明了无针注射安瓿与无针注射器联合应用进行免疫时，抗原用量只需传统肌肉注射抗原用量的一部分，即可与其产生相同或更高的免疫效果。进一步说明无针免疫途径方式为免疫猪病毒疫苗可供选择的理想策略。
【专利说明】
无针注射猪病毒性疫苗系统及应用
技术领域
[0001 ]本发明设及医药领域，尤其是传染性疾病领域。更具体地，设及无针注射猪病毒性 疫苗系统及应用。适用于各类猪病毒性疫苗免疫预防接种。
【背景技术】
[0002] 传统注射技术需要注射的特殊技巧和搁熟的手法才可W操作，需要专业人员进 行，增加了人力成本，针头刺入动物体增加了出血与感染的风险，易发生针头折断在动物体 内的隐患，影响肉品食用安全。近年来，无针注射技术处在飞速发展阶段，W传统的高压无 针注射创伤大，发展到今天低压无针注射创伤小，推动了无针注射技术发展与应用。该技术 通过高速射流将疫苗注射于特定的组织深度，与传统有针注射技术相比具有无针无痛、简 便快速、经济高效及便于操作等诸多优势。例如，可消除针刺带来的感染及交叉污染，并大 幅降低动物攝疫的发生；同时，无针连续注射可提高注射效率，提高疫苗的吸收率、增加肉 品安全性;提高注射速度，喷射注射在瞬间完成，缩短注射时间的同时为大规模免疫接种提 供可能;无针注射也可保证操作人员安全性，传统注射过程中针刺形成的威胁及针头处理 带来的感染隐患被彻底消除;有利于环境保护，针头及其他耗材处理的成本大大降低;减少 动物的创伤性，动物无惊怕反应，同时没有了注射部位反复注射后硬结的形成。
[0003] 猪病毒性疾病主要指猪攝、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病、猪 细小病，也可W是任何一种猪的传染性疾病或流行病。猪攝(CSF)是由猪攝病毒引起的一种 严重危害养猪业的毁灭性传染病。该病死亡率高达80-90%，世界动物卫生组织(0IE)将其 列为0IE疾病名录，我国也将其列为一类传染病。伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬 病病毒引起多种家畜和野生动物的一种重要传染病。猪是PRV的唯一自然宿主，临床W仔猪 的神经症状，严重的呼吸道疾病W及母猪发生流产、死胎和产仔数下降等症状为特征，给畜 牧业特别是养猪业造成了巨大的经济损失。猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratoiT syn化ome,PRRS)也称猪蓝耳病，是危害世界猪业的重要 疾病，其病原为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒，PRRSV感染主要引起母猪严重的繁殖障碍W 及导致仔猪的呼吸困难。猪圆环病毒(Porcine circovirusJCV)是迄今为止发现的一种最 小的脊椎动物病毒。主要引起猪的多系统功能障碍性疾病，主要侵害的是机体的免疫系统， 造成猪的免疫抑制，为病毒和细菌的感染提供了便利，导致猪群的死亡率大大增加。猪细小 病毒(Porcine parvovirus，PPV)是引起猪繁殖障碍的主要病原之一。PPV感染主要引起胚 胎和胎儿死亡、母猪流产、产死胎和木乃伊胎等，此外PPV还与猪非化脈性屯、肌炎、皮炎、肠 炎及病毒血症等有关。
[0004] 运五种猪的传染病对养猪业的危害非常严重，目前免疫接种仍是我国防制猪攝、 伪狂犬、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒2型、猪细小病毒病的重要措施，不仅仅可W 控制机体的混合感染，也是当前最经济、有效的方法。现有的疫苗接种采用有针肌肉或皮下 部位免疫，存在抗原用量大，免疫应答较弱与免疫保护不足及副作用大的现实问题。许多研 究已经证实经皮肤注射的药物或疫苗进入真皮层，因真皮层包含丰富的抗原呈递细胞将抗 原呈递给τ细胞从而引起免疫应答，故皮肤的免疫原性优于肌肉或其他途径。无针皮内注射 仅需肌肉注射的部分剂量即可引起相同或者更强的免疫反应。既节约疫苗用量，降低成本， 解决疫苗短缺的限制，又降低了发生深层渗透的几率。无针皮下注射、无针肌肉注射可减少 出血与感染的风险。无针连续注射可提高免疫速度，适用于大规模免疫接种。因此，利用无 针注射进行常规疫苗的接种能很好的解决下述问题:一、因有针注射引起的动物疾病的的 交叉感染;二、注射速度慢;Ξ、消减注射疼痛带来的应激反应；四、排除断针残留动物体内 的隐患等。因此，该技术减少疫苗所需抗原量，在经济上降低了费用，并为大规模接种提供 可能。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的是提供无针注射猪病毒疫苗系统。
[0006] 本发明提供的无针注射猪病毒疫苗系统，为如下1)或2):
[0007] 1)所示的系统包括灌装有猪病毒疫苗的容器，所述猪病毒疫苗的灌装剂量小于等 于该猪病毒疫苗的标准剂量;其中，灌装有猪病毒疫苗的容器为一次性使用的装有猪病毒 疫苗的容器；
[0008] 2)所示的系统包括灌装猪病毒疫苗的容器和可读载体;所述可读载体记载内容包 括:所述猪病毒疫苗的无针注射剂量小于等于该猪病毒疫苗标准剂量。其中，灌装有猪病毒 疫苗的容器为可多次连续使用的装有猪病毒疫苗的容器。
[0009] 猪病毒疫苗标准剂量为1头份猪病毒疫苗肌肉注射剂量；1头份猪病毒疫苗肌肉注 射剂量通过病毒含量体现：
[0010] 不同的猪病毒疫苗，1头份猪病毒疫苗肌肉注射剂量的体积和病毒含量不同，具体 如下：
[0011] 1头份猪病毒疫苗中猪繁殖与呼吸障碍综合征，病毒含量应>105'*^1'(：1050/头份， 体积一般为每头猪2.0ml。
[0012] 1头份猪病毒疫苗中猪攝兔化弱毒株抗原含量，每头份含病毒15000RID，体积一般 为每头猪2.0ml。
[0013] l头份猪病毒疫苗中伪狂犬病病毒抗原含量>5X103'^^TCID50/头份，体积一般为 每头猪2.0ml。
[0014] 1头份猪病毒疫苗中猪圆环病毒2型灭活前病毒含量>106'5TCID50/ml，体积一般 为每头猪1.0ml。
[0015] 1头份猪病毒疫苗中猪细小病毒抗原，灭活前病毒含量>105'%50/ml，体积一般为 每头猪2.0ml。
[0016] 上述系统中，所述猪病毒疫苗的灌装剂量为1/5-1倍该猪病毒疫苗的标准剂量；
[0017] 所述猪病毒疫苗的无针注射剂量为1/5-1倍该猪病毒疫苗的标准剂量。
[0018] 上述系统中，所述猪病毒疫苗的灌装剂量为1/5-1/^3倍该猪病毒疫苗的标准剂量；
[0019] 所述猪病毒疫苗的无针注射剂量为1/5-1/^3倍该猪病毒疫苗标准剂量。
[0020] 上述系统中，所述猪病毒疫苗为单价猪病毒疫苗或多价猪病毒疫苗；
[0021 ]所述多价猪病毒疫苗为多种猪病毒疫苗联合组成；
[0022]每种猪病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量均为小于等于该猪病毒疫苗的标准 剂量；
[0023] 和/或，每种猪病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5-1倍该猪病毒疫 苗的标准剂量；
[0024] 和/或，每种猪病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5-1Λ倍该猪病毒 疫苗的标准剂量；
[0025] 1/5倍或倍猪病毒疫苗标准剂量为1头份猪病毒疫苗肌肉注射剂量或病毒含量 的的1/5-1倍。
[0026] 和/或，所述多价猪病毒疫苗具体由猪攝疫苗、伪狂犬疫苗、猪繁殖与呼吸障碍综 合征疫苗、猪圆环病毒2型疫苗、猪细小病毒疫苗中至少两种组成;在实施例中，所述猪病毒 疫苗为单价猪病毒疫苗;分别为猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株;猪攝兔化弱毒株(C株）； 伪狂犬病病毒Badha K61株;猪圆环病毒2型(SX07株）；猪细小病毒CP-99株。
[0027] 所述猪攝病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒2型病 毒、细小病毒不限制所用病毒株；
[0028] 所述猪病毒疫苗抗原或所述无佐剂猪病毒疫苗均为病毒灭活疫苗、病毒裂解疫 苗、纳米颗粒疫苗、减毒活疫苗、合成肤疫苗、重组化P疫苗、基因工程疫苗、基因缺失疫苗、 活载体疫苗、核酸疫苗等中的任何一种或几种混合，但不限于此；
[00巧]和/或，所述佐剂具体为SP01、ISA206、氨氧化侣胶、矿物油、卡波姆、Ge 1 01、蜂胶、 黄巧多糖、ISA760VG和弗氏佐剂的一种或几种组合物，但不限于此。
[0030] 上述疫苗中，1)所示的系统或2)所示的系统均还包括与所述灌装有猪病毒疫苗的 容器配套使用的无针注射装置；
[0031] 和/或，所述无针注射装置具体为无针注射器。上述无针注射器为江苏米特公司无 针注射器(例如:MG-0.1;MP-0.1)，本实施例中用的是MP-0.1。
[0032] 上述猪病毒疫苗的剂型为液体、冻干剂、粉末、乳脂或利用生物降解材料包埋的疫 苗制剂等，但不限于此。
[0033] 上述系统中，所述灌装有猪病毒疫苗的容器为灌装有疫苗的无针注射安飯，其包 括：
[0034] 预灌装疫苗的一管体，
[0035] -体设置于所述管体一端的一无针注射器接头，
[0036] 由所述管体另一端滑动设置在所述管体内、并封闭所述管体的一动力推杆，
[0037] 设置在所述无针注射器接头内的一喷射口，
[0038] 易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆，
[0039] 可拆卸地设置在所述无针注射器接头上、并封闭所述喷射口的一密封帽，和
[0040] 可拆卸地设置在所述动力推杆上、并与所述管体的入口相嵌合的一密封锁块；
[0041] 其中，所述喷射口具有一止动槽，所述喷射口通过所述止动槽与所述管体内腔相 连通;所述止动杆与所述止动槽相配合。
[0042] 上述系统中，所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致;所述止动杆和止动槽 为锥形;所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上；
[0043] 所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽 中，从而可拆卸地安装在所述动力推杆上；
[0044] 所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上;所述动力推杆 上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在 所述动力推杆上；
[0045] 所述管体、无针注射器接头、喷射口和止动槽一体制造而成。
[0046] 所述管体、无针注射器接头、动力推杆、喷射口和止动杆均采用优质医用级材料制 成，如玻璃、聚乙締、聚丙締、聚碳酸醋、COP或者环状聚締控等中的一种或几种混合制造而 成，或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物理改性进行优化的材料，但不 限于此。
[0047] 上述管体的长度为1.5-4cm，所述无针注射器接头的长度为0.5-2cm，所述动力推 杆的长度为1.5-6 cm，整个无针注射安爾的长度为2-6 cm;所述喷射口的直径为0.Οδ? ?. 25mm。
[0048] 上述系统中，，1)所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积为0.05-lml;
[0049] 2)所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积为0.5-200ml;
[0050] 和/或，2)所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积具体为50-200ml;
[0051] 和/或，2)所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积具体为50-100ml;
[0052] 2)所示的系统中，所述可读载体记载内容还包括所述猪病毒疫苗的无针注射部位 和所述猪病毒疫苗的无针注射方式；
[0053] 所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉;所述无针注射部位优选为为皮内；
[0054] 所述无针注射方式为多次连续免疫或单次免疫。
[0055] 连续多次免疫为一管疫苗多次或多头（只）免疫，可设定相同剂量多次免疫，或设 定不同剂量多次免疫。
[0056] 上述系统在制备免疫动物产品中的应用也是本发明保护的范围；
[0057] 所述动物具体为家畜，所述家畜尤其具体为猪。
[0058] 本发明还保护一种对动物或人免疫猪病毒疫苗的方法，为用上述系统进行免疫， 免疫剂量为上述系统中的无针注射剂量。
[0059] 上述方法中，免疫方式具体为多次连续免疫或单次免疫;免疫部位具体为皮内、皮 下或肌肉。
[0060] 本发明的疫苗可W单剂量免疫方案递送。或者，本发明的疫苗也可作为初始免疫- 加强免疫的方案的基本单元递送(运意味着在第一次免疫后数周或数月内进行抗原性相似 的第二次免疫）。
[0061] 免疫原性的特征为，与疫苗施用相关的，能够刺激机体形成特异中和抗体，或刺激 特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应。
[0062] 安全性的特征为，与疫苗施用相关的副作用的局限，尤其是注射部位经无针注射 装备注射后的反应减轻或缺乏。
[0063] 皮肤产生免疫应答的基础为，表皮和真皮层富含朗格汉斯细胞和DC细胞，经皮免 疫的抗原被运些抗原提呈细胞捕获，转移至淋己结，从而触发T、B细胞的活化。未被捕获的 抗原也可直接迁移至淋己结，而后被DC细胞捕获并呈递给淋己细胞。
[0064] 本发明的实验证明，本发明提供的无针注射猪病毒性疫苗系统，不经过传统有针 免疫注射途径，能够准确、快速、无痛地将疫苗通过无针注射器注入祀向区域，更具体是不 需要大剂量抗原的途径施用疫苗，该系统预灌装疫苗的无针注射安飯可防止二次利用，避 免交叉污染的发生，免疫前疫苗预灌装，提高注射速度，精确免疫剂量并为大规模快速免疫 接种提供可能。
[0065] 本发明的无针注射安飯联合无针注射器的免疫方式是一种新型的免疫策略，通过 经皮的免疫途径，只需传统有针肌肉注射剂量的1/5、1/^3或更低剂量，即可诱导抗体的产生 和全身免疫应答的免疫效果。
[0066] 本发明证实了无针注射安飯与无针注射器联合应用进行免疫时，注射的准确性与 安全性。组合产品在提高免疫效率，节省免疫时间的同时，为大规模快速免疫接种提供了可 能。
[0067] 本发明的优点还在于，无针注射安飯与无针注射器联合应用进行免疫时，抗原用 量只需传统肌肉注射抗原用量的一部分，即可与其产生相同或更高的免疫效果。说明无针 免疫途径方式为免疫猪病毒性疫苗可供选择的理想策略。
【附图说明】
[0068] 图1为无针注射安飯结构示意图。
[0069] 图2为应用系统中的装配有墨汁的无针注射头，与无针注射器联合使用，在小鼠、 大鼠、兔子皮肤内墨汁分布的照片。
[0070] 图3为Draize scale评分标准。
[0071] 图4为灌装有蓝利佳产品（单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株）的 容器与无针注射器的联合使用经皮内注射猪的DRAIZE评分1。
[0072] 图5为灌装有稳常佳产品（猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株））的容器与无针注射 器的联合使用经皮内注射猪的DRAIZE评分2。
[0073] 图6为灌装有威力佳产品(猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株)的容器与无针 注射器的联合使用经皮内注射猪的DRAIZE评分3。
[0074] 图7为灌装有圆力佳产品（猪病毒疫苗猪圆环病毒2型（SX07株））的容器与无针注 射器的联合使用经皮内注射猪的DRAIZE评分4。
[0075] 图8为灌装有细小力康产品（猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株）的容器与无针注射 器的联合使用经皮内注射猪的DRAIZE评分5。
【具体实施方式】
[0076] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0077] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0078] 下述内容为本发明的示例及时说明，但不意味着因此受此限制，凡是本发明在应 用过程中可能对结构的简单变换、和/或一些实施方式中实现的优点的其中一个或多个均 在本申请的保护范围内。
[0079] 实施例1、无针注射安飯的制备
[0080] 下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。
[0081] 如图1A、图1B所示，本发明提供的预装疫苗或药品的无针注射安飯，其包括一管体 1、一无针注射器接头2、一动力推杆3、一喷射口 4、一止动杆5、一密封帽6和一密封锁块7;其 中，管体1用于预灌装固定精确剂量的疫苗或药品，无针注射器接头2-体设置于管体1的一 端，动力推杆3由管体1的另一端滑动设置在管体1内，并封闭管体1;喷射口4设置在无针注 射器接头纳，其具有一止动槽8，喷射口 4通过止动槽8与管体1内腔相连通;止动杆5易断地 连接于动力推杆3的前端，且止动杆5与止动槽8相配合。当动力推杆3向前运动至管体1底 部，将疫苗从喷射口 4释放时，止动杆5与止动槽8吻合，止动杆5与动力推杆3断开连接，并停 留在止动槽8内，从而防止无针注射安飯的重复利用。密封帽6可拆卸地设置在无针注射器 接头2上，并封闭喷射口 4,密封锁块7可拆卸地设置在动力推杆3上，并且与管体1的入口相 嵌合;在向管体1灌装精确剂量的疫苗或药品后，将密封锁块7安装于动力推杆3的密封锁块 凹槽9中，同时在无针注射器接头2上安装密封帽6,可W避免空气、细菌等与疫苗或药品接 触，达到无菌要求，还可W防止意外碰触导致动力推杆移动带来的药品溢出，有利于疫苗或 药品的长时间储存和运输。
[0082] 上述实施例中，密封帽6采用嵌合结构可拆卸地设置在无针注射器接头2上;动力 推杆3上设置有密封锁块凹槽9,密封锁块7嵌合在密封锁块凹槽9中，从而可拆卸地安装在 动力推杆3上。
[0083] 上述实施例中，动力推杆3的直径与管体1的内径一致。
[0084] 上述实施例中，止动杆5和止动槽8为锥形。
[0085] 上述实施例中，管体1的长度为1.5-4畑1，无针注射器接头2的长度为0.5-2畑1，动力 推杆3的长度为1.5-6cm，整个无针注射安爾的长度为2-6cm;喷射口 4的直径为0.05- 0.25mm〇
[0086] 上述实施例中，管体1内预灌装的疫苗剂量为0.02-1.0ml。
[0087] 上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、动力推杆3、喷射口4和止动杆5均采用具 有良好透明性、较高初性与刚性、耐高溫、阻湿、与疫苗或药品相容性良好的优质医用级材 料制成，例如玻璃、聚乙締、聚丙締、聚碳酸醋、C0P(Cycloolefin polymer，环締控聚合物， 一种光学塑料材料）、环状聚締控或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物 理改性进行优化的材料。
[0088] 上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、喷射口 4及止动槽8-体制造而成，强度 高，制造简单方便。
[0089] 上述实施例中，在疫苗或药品预灌装和无针注射安飯的组装过程中需进行灭菌， 预装疫苗或药品的无针注射安飯的组装和包装均在无菌生产环境下进行，同时检测物理、 化学和生物性能，且需经过不溶性微粒等检查。
[0090] 无针注射安飯应用时，如图1B所示，首先将未使用过的预装疫苗或药品的无针注 射安飯的密封锁块7从动力推杆3上拆卸分离，通过无针注射器接头2与无针注射器连接，再 将密封帽6取下，然后将组合后的无针注射系统抵靠在患者皮肤上定位；启动无针注射器， 无针注射器的动力装置驱动无针注射安飯的动力推杆3相对于管体1运动至管体1底部，推 动管体1内的疫苗从喷射口4释放，将抗原（疫苗)准确、快速、无痛地分布于祀向的皮内、皮 下、肌肉和粘膜等部位，可引起相当于传统针头注射免疫全剂量抗原所达到的机体免疫保 护效果。此时，与动力推杆3连接的止动杆5插入止动槽6中，顶端堵住喷射口4,并与动力推 杆3断开连接;止动杆5停留在止动槽8内，防止二次抽药，二次接种必须更换新的安飯，从而 防止无针注射安飯的重复利用。
[0091] 上述各实施例仅用于说明本发明，其中各部件的结构、设置位置及其连接方式等 都是可W有所变化的，凡是在本发明技术方案的基础上进行的等同变换和改进，均不应排 除在本发明的保护范围之外。
[0092] 实施例2、无针注射猪病毒疫苗系统与应用
[0093] 本实施例的无针注射猪病毒疫苗系统包括灌装有1/5-1倍猪病毒疫苗标准剂量的 无针注射安飯和配套使用的无针注射器；
[0094] 猪病毒疫苗标准剂量为1头份猪病毒疫苗肌肉注射剂量；1头份猪病毒疫苗肌肉注 射剂量通过病毒含量体现：
[0095] 不同的猪病毒疫苗，1头份猪病毒疫苗肌肉注射剂量的体积和病毒含量不同，具体 如下：
[0096] 1头份猪病毒疫苗中猪繁殖与呼吸障碍综合征，病毒含量应>105'<^1'(：1050/头份， 体积一般为每头猪2.0ml。
[0097] 1头份猪病毒疫苗中猪攝兔化弱毒株抗原含量，每头份含病毒15000RID，体积一般 为每头猪2.0ml。
[0098] l头份猪病毒疫苗中伪狂犬病病毒抗原含量>5X103'^^TCID50/头份，体积一般为 每头猪2.0ml。
[0099] 1头份猪病毒疫苗中猪圆环病毒2型灭活前病毒含量>106'5TCID50/ml，体积一般 为每头猪1.0ml。
[0100] 1头份猪病毒疫苗中猪细小病毒抗原，灭活前病毒含量>105'%50/ml，体积一般为 每头猪2.0ml。
[0101] -、无针注射猪病毒疫苗系统的注射深度摸索
[0102] 将墨汁水溶液替换疫苗灌装到实施例1制备的无针注射安飯，得到灌装有墨汁水 溶液的无针注射安飯。
[0103] 墨汁水溶液为将普通用蓝黑色墨水用孔径为0.22um的滤膜过滤，收集过滤液再用 注射用水稀释得到浓度为1 %的墨汁水溶液。
[0104] 将灌装有0.1ml墨汁水溶液的无针注射安飯与MIT无针注射器(江苏丞宇米特医疗 科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)连接，得到无针注射装置;将无针注射装置分别 施用于体重16-18g之间的Ba化/c小鼠和200-250g之间的SD大鼠 W及2.化g的家兔，将待注 射部位剌毛，每只注射0.1ml墨汁水溶液。注射施用位置为小鼠的背部和大鼠、家兔的大腿 外侧。
[0105] 注射后30分钟，处死Balb/c小鼠、SD大鼠和家兔，用手术刀在注射部位皮肤划开 2cm2并将皮肤与肌肉分离，进行液体分布位置及深度观察。
[0106] 结果如图2所示，A、B为Ba化/c小鼠经无针皮内注射，C、D为SD大鼠经无针皮内注 射，E、F为家兔经无针皮内注射;可W看出，只在真皮区域发现墨汁，未在皮下区域中发现墨 汁，未在肌肉区域内发现墨汁。因此本发明采用的无针注射安飯及其配套待注射液体系统 可W将液体注射于表皮内，且无液体注射于肌肉部位。
[0107] 二、无针注射猪病毒疫苗系统的制备
[0108] 本实施例的无针注射猪病毒疫苗系统包括灌装有1/5-1倍猪病毒疫苗标准剂量的 无针注射安飯、Μ口无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG- 0.1)和说明书。
[0109] 说明书记载猪病毒疫苗的无针注射剂量为1/5-1倍猪病毒疫苗标准剂量，无针注 射部位具体为皮内，无针注射方式为单次免疫。
[0110] 1、猪病毒疫苗的获得
[0111] 单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株为购买自成都天邦生物制品有 限公司的蓝利佳产品；
[0112] 单价猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)为购买自成都天邦生物制品有限公司的稳 常佳产品；
[0113] 单价猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株为购买自成都天邦生物制品有限公 司的威力佳产品；
[0114] 单价猪病毒疫苗猪圆环病毒2型(SX07株)为购买自成都天邦生物制品有限公司的 圆力佳产品；
[0115] 单价猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株为购买自武汉中博生物股份有限公司的细小 力康产品。
[0116] 2、灌装有不同量的猪病毒性疫苗的无针注射安飯
[0117] 1/5-1倍猪病毒性疫苗标准疫苗剂量指1头份猪病毒性疫苗肌肉注射剂量的各病 毒含量的1/5-1倍。
[0118] 2.1灌装有不同量的蓝利佳产品（单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R 株)的无针注射安飯
[0119] 灌装有剂量为头份蓝利佳产品（1/5倍单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合 征CH-1R株疫苗标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.2ml;
[0120] 灌装有剂量为1/^3头份蓝利佳产品（1/3倍单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合 征CH-1R株疫苗标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.5ml;
[0121] 灌装有剂量为1头份蓝利佳产品（单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R 株疫苗标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为1.0ml;
[0122] 使用时将上述各种灌装蓝利佳产品（单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征 CH-1R株疫苗）的无针注射安飯分别与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品 型号:]\^-0.1，]\?-0.1)连接。
[0123] 2.2灌装有不同量的稳常佳产品（猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株））的无针注射 安爾
[0124] 灌装有剂量为1/5头份稳常佳产品（1/5倍猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)疫苗 标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.2ml;
[0125] 灌装有剂量为头份稳常佳产品（1/3倍猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)疫苗 标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.5ml;
[0126] 灌装有剂量为1头份稳常佳产品（猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)疫苗标准剂 量)的无针注射安飯，灌装总体积为1.0ml;
[0127] 使用时将上述各种灌装稳常佳产品(猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株））的无针注 射安飯分别与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)连 接。
[01%] 2.3灌装有不同量的威力佳产品（猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株)的无针 注射安爾
[0129] 灌装有剂量为1/5头份威力佳产品（1/5倍猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株 疫苗标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.2ml;
[0130] 灌装有剂量为头份威力佳产品（1/3倍猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株 疫苗标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.5ml;
[0131] 灌装有剂量为1头份威力佳产品（猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株疫苗标 准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为1.0ml;
[0132] 使用时将上述各种灌装威力佳产品（猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株）的 无针注射安飯分别与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG- 0.1)连接。
[0133] 2.4灌装有不同量的圆力佳产品（猪病毒疫苗猪圆环病毒2型（SX07株））的无针注 射安爾
[0134] 灌装有剂量为1/5头份圆力佳产品（1/5倍猪病毒疫苗猪圆环病毒2型（SX07株)疫 苗标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.2ml;
[0135] 灌装有剂量为头份圆力佳产品（1/3倍猪病毒疫苗猪圆环病毒2型（SX07株)疫 苗标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.5ml;
[0136] 灌装有剂量为1头份圆力佳产品（猪病毒疫苗猪圆环病毒2型(SX07株)疫苗标准剂 量)的无针注射安飯，灌装总体积为1.0ml;
[0137] 使用时将上述各种灌装圆力佳产品(猪病毒疫苗猪圆环病毒2型(SX07株））的无针 注射安飯分别与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1) 连接。
[0138] 2.5灌装有不同量的细小力康产品（猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株）的无针注射 安爾
[0139] 灌装有剂量为1/5头份细小力康产品（1/5倍猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株疫苗 标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.2ml;
[0140] 灌装有剂量为头份细小力康产品（1/3倍猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株疫苗 标准剂量)的无针注射安飯，灌装总体积为0.5ml;
[0141] 灌装有剂量为1头份细小力康产品（猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株疫苗标准剂 量)的无针注射安飯，灌装总体积为1.0ml;
[0142] 使用时将上述各种灌装细小力康产品（猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株)的无针注 射安飯分别与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)连 接。
[0143] Ξ、无针注射猪病毒疫苗系统的应用
[0144] 1、免疫蓝利佳产品
[0145] 1.1、免疫蓝利佳产品(单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株）
[0146] 选取猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体阴性的4-6周龄的仔猪42头，6头空白对照组， 其余36头分别随机分为无针注射组1和有针注射组2,每组18头;将组1和组2又进一步分为 Α、ΒΧΞ个组，每组6头仔猪，A组的剂量为1/5头份;B组的剂量为头份;C组的剂量为1头 份。
[0147] 组1:采用上述灌装有不同剂量的上述二获得的蓝利佳产品（单价猪病毒疫苗猪繁 殖与呼吸障碍综合征CH-1R株)的无针注射安飯与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限 公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)，进行免疫，进行皮内免疫，免疫方式为W每剂0.2ml (可多 点注射)的体积施用于耳根后区域中，命名为无针A组(灌装有剂量为倍份猪病毒疫苗猪 繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株疫苗标准剂量的无针注射安飯）；无针B组(灌装有剂量为1/ 3倍猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株疫苗标准剂量的无针注射安飯）；无针C组 (灌装有剂量为1头份猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株疫苗的无针注射安飯）。
[0148] 组2:采用传统0.5mm巧0mm为规格的有针注射器进行免疫上述二获得的蓝利佳产 品（单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株），免疫方式为W每剂2.0ml的体积施 用于耳根后区域中，命名为有针A组(1/5头份）；有针B组(1/3头份）；有针C组(1头份）。
[0149] 对照组:采用传统有针肌肉注射方式免疫PBS，免疫方式为W每剂2.0ml的体积施 用于耳根后区域中。
[0150] 1.2效力检验蓝利佳产品(单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株）：
[0151] 将上述4组、8组和(：组和对照组免疫30日后，用2.〇1111猪繁殖与呼吸障碍综合征邸- 1R株(【专利公开号:CN 1045933354】含104'*^1'(：1050)攻击每头猪，攻毒后每天进行体溫测定 和临床症状观察，并于攻毒后21日剖检，进行各脏器病理变化观察。体溫（>40.5°C)，且伴 随着明显的病理变化即判定为不保护。根据临床症状、病理变化判定免疫保护结果。具体见 表1。
[0152] 表1:猪繁殖与呼吸障碍综合征攻毒实验各指标项
[0153]
~1.3无针注射蓝利佳产品（单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株)系I 统免疫安全性评价一一DRAIZE评分1
[0155]在应用无针注射蓝利佳产品（单价猪病毒疫苗猪繁殖与呼吸障碍综合征CH-1R株） 系统免疫猪后的7天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评 分。评分标准如图3所示。0分:没有红斑，未见水肿；1分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难 W察觉;2分:清晰红斑，可看到明显的隆起;3分：中度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红 斑，且有结挪及深度损伤。评分结果见图4,无针皮内注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果 相似，均在注射后的3天内出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑，且均为两大剂量注射组皮肤 擦伤明显。注射后第4天症状逐渐减轻，在注射后第5天，各组不良反应均消失。由此表明，无 针皮内注射与有针肌肉注射均具有良好的安全性。
[0156] 2、免疫稳常佳产品
[0157] 2.1、免疫稳常佳产品(猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)）
[015引选取猪攝抗体阴性的4-6周龄的仔猪42头，6头空白对照组，其余36头分别随机分 为无针注射组1和有针注射组2，每组18头;将组1和组2又进一步分为Α、ΒΧΞ个组，每组6头 仔猪，A组的剂量为灌装有剂量为1/5倍猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)疫苗标准剂量;Β 组的剂量为灌装有剂量为倍猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)疫苗标准剂量;C组的剂 量为灌装有剂量为1倍猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)疫苗标准剂量。
[0159] 组1:采用上述灌装有不同剂量的上述二获得的稳常佳产品(猪病毒疫苗猪攝兔化 弱毒株(C株））的无针注射安飯与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号： MP-0.1，MG-0.1)，进行免疫，进行皮内免疫，免疫方式为W每剂0.2ml (可多点注射)的体积 施用于耳根后区域中，命名为无针A组（1/5头份）；无针B组（1/3头份）；无针C组（1头份）。
[0160] 组2:采用传统0.5mm巧0mm为规格的有针注射器进行免疫上述二获得的稳常佳产 品(猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株）），免疫方式为W每剂2.0ml的体积施用于耳根后区域 中，命名为有针A组(1/5头份）；有针B组(1/3头份）；有针C组(1头份）。
[0161 ]对照组:采用传统有针肌肉注射方式免疫PBS，免疫方式为W每剂2.0ml的体积施 用于耳根后区域中。
[0162] 2.2效力检验稳常佳产品(猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株)）：
[0163] 将上述A组、B组和C组和对照组免疫30日后，用2ml猪攝C株病毒强毒（【专利公开 号:CN 104630159A】105TCID50)攻击每头猪，攻毒后每天进行体溫测定和临床症状观察，并 于攻毒后16天进行剖检，进行各脏器病理变化观察。根据临床症状、病理变化判定免疫保护 结果。体溫（>40.5°C)，且伴随着明显的病理变化即判定为不保护。具体见表2。
[0164] 表2:猪攝攻毒实验各指标项
[01 化]
[0166] 2.3无针注射稳常佳产品（猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株））系统免疫安全性评 价--DRAIZE评分2
[0167] 在应用无针注射稳常佳产品(猪病毒疫苗猪攝兔化弱毒株(C株））系统免疫猪后的 7天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准如 图3所示。0分:没有红斑，未见水肿；1分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难W察觉;2分:清 晰红斑，可看到明显的隆起;3分：中度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红斑，且有结挪及 深度损伤。评分结果见图5,无针皮内注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果相似，均在注射 后的3天内出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑，且均为两大剂量注射组皮肤擦伤明显。注射 后第4天症状逐渐减轻，在注射后第5天，各组不良反应均消失。由此表明，无针皮内注射与 有针肌肉注射均具有良好的安全性。
[016引3、免疫威力佳产品
[0169] 3.1、免疫威力佳产品(猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株）
[0170] 选取伪狂犬病抗体阴性的4-6周龄的仔猪42头，6头空白对照组，其余36头分别随 机分为无针注射组1和有针注射组2,每组18头;将组1和组2又进一步分为Α、ΒΧΞ个组，每 组6头仔猪，4组的剂量为1作头份;8组的剂量为1 /^3头份;巧且的剂量为1头份。
[0171] 组1:采用上述灌装有不同剂量的上述二获得的威力佳产品(猪病毒疫苗伪狂犬病 病毒Badha Κ61株)的无针注射安飯与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品 型号:1?-0.1，16-0.1)，进行免疫，进行皮内免疫，免疫方式为^每剂0.21111(可多点注射)的 体积施用于耳根后区域中，命名为无针A组(灌装有剂量为1/5倍猪病毒疫苗伪狂犬病病毒 Bartha K61株疫苗标准剂量）；无针B组（灌装有剂量为倍猪病毒疫苗伪狂犬病病毒 Bartha K61株疫苗标准剂量）;无针C组(灌装有剂量为1倍猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株疫苗标准剂量）。
[0172] 组2:采用传统0.5mm巧0mm为规格的有针注射器进行免疫上述二获得的威力佳产 品（猪病毒疫苗伪狂犬病病毒8曰的]1曰1(61株），免疫方式为^每剂2.〇1111的体积施用于耳根 后区域中，命名为有针A组(1/5头份）；有针B组(1/3头份）；有针C组(1头份）。
[0173] 对照组:采用传统有针肌肉注射方式免疫PBS，免疫方式为W每剂2.0ml的体积施 用于耳根后区域中。
[0174] 3.2效力检验威力佳产品(猪病毒疫苗伪狂犬病病毒日3的}13 1(61株）：
[01巧]将上述A组、B组和C组和对照组免疫30日后，用2.0ml伪狂犬病强毒(【专利公开号： CN 102727882A】104'5TCID50)攻击每头猪，攻毒后每天进行体溫测定和临床症状观察，并于 攻毒后21天进行剖检，进行各脏器病理变化观察。根据临床症状、病理变化判定免疫保护结 果。体溫（>40.5°C)，且伴随着明显的病理变化即判定为不保护。具体见表3。
[0176] 表3:伪狂犬病攻毒实验各指标项
[0177]
[0178] 3.3无针注射威力佳产品(猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株)系统免疫安全 性评价--DRAIZE评分3
[0179] 在应用无针注射威力佳产品（猪病毒疫苗伪狂犬病病毒Badha K61株)系统免疫 猪后的7天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分 标准如图3所示。0分:没有红斑，未见水肿；1分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难W察觉； 2分:清晰红斑，可看到明显的隆起;3分：中度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红斑，且有 结挪及深度损伤。评分结果见图6,无针皮内注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果相似，均 在注射后的3天内出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑，且均为两大剂量注射组皮肤擦伤明 显。注射后第4天症状逐渐减轻，在注射后第5天，各组不良反应均消失。由此表明，无针皮内 注射与有针肌肉注射均具有良好的安全性。
[0180] 4、免疫圆力佳产品
[0181] 4.1、免疫圆力佳产品(猪病毒疫苗猪圆环病毒2型(SX07株)）
[0182] 选取猪圆环病毒抗体阴性的4-6周龄的仔猪63头，9头空白对照组，其余54头分别 随机分为无针注射组1和有针注射组2,每组27头;将组1和组2又进一步分为Α、ΒΧΞ个组， 每组9头仔猪，A组的剂量为1/5头份;Β组的剂量为1/3头份;C组的剂量为1头份。
[0183] 组1:采用上述灌装有不同剂量的上述二获得的圆力佳产品(猪病毒疫苗猪圆环病 毒2型（SX07株））的无针注射安飯与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型 号:1?-0.1，16-0.1)，进行免疫，14天后加强免疫一次。进行皮内免疫，免疫方式为^每剂 0.2ml(可多点注射)的体积施用于耳根后区域中，命名为无针A组(灌装有剂量为倍猪病 毒疫苗猪圆环病毒2型（SX07株)疫苗标准剂量）；无针B组(灌装有剂量为倍猪病毒疫苗 猪圆环病毒2型（SX07株)疫苗标准剂量）；无针C组(灌装有剂量为1倍猪病毒疫苗猪圆环病 毒2型(SX07株)疫苗标准剂量）。
[0184] 组2:采用传统0.5mm巧0mm为规格的有针注射器进行免疫上述二获得的圆力佳产 品(猪病毒疫苗猪圆环病毒2型(SX07株）），免疫方式为W每剂1.0ml的体积施用于耳根后区 域中，14天后加强免疫一次。命名为有针A组（1/5头份）；有针B组（1/3头份）；有针C组（1头 份)。
[0185] 对照组:采用传统有针肌肉注射方式免疫PBS，免疫方式为W每剂1.0ml的体积施 用于耳根后区域中。
[0186] 4.2效力检验圆力佳产品（猪病毒疫苗猪圆环病毒2型（SX07株））：
[0187] 将上述A组、B组和C组和对照组免疫30日后，用2.0ml PCV2 SX07株(【专利公开号： CN 1045933344】含105'*^1'(：1050/1111 )攻击每头猪，攻毒后每天进行体溫测定和临床症状观 察，并于攻毒后28日剖检，进行各脏器病理变化观察。根据临床症状、病理变化判定免疫保 护结果。体溫（>40.5°C)，且伴随着明显的病理变化即判定为不保护。具体见表4。
[0188] 表4:猪圆环病毒2型攻毒实验各指标项
[0189]
[0190] ~4.3无针注射圆力佳产品（猪病毒疫
苗猪圆环病毒2型（SX07株））系统免疫安全性I 评价--DRAIZE评分4
[0191] 在应用无针注射圆力佳产品（猪病毒疫苗猪圆环病毒2型(SX07株））系统免疫猪后 的7天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准 如图3所示。0分:没有红斑，未见水肿；1分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难W察觉;2分： 清晰红斑，可看到明显的隆起;3分：中度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红斑，且有结挪 及深度损伤。评分结果见图7,无针皮内注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果相似，均在注 射后的3天内出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑，且均为两大剂量注射组皮肤擦伤明显。注 射后第4天症状逐渐减轻，在注射后第5天，各组不良反应均消失。由此表明，无针皮内注射 与有针肌肉注射均具有良好的安全性。
[0192] 5、免疫细小力康产品
[0193] 5.1、免疫细小力康产品(猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株）
[0194] 选取猪细小病毒抗体阴性的4-6周龄的仔猪63头，9头空白对照组，其余54头分别 随机分为无针注射组1和有针注射组2,每组27头;将组1和组2又进一步分为Α、ΒΧΞ个组， 每组9头仔猪，A组的剂量为1/5头份;Β组的剂量为1/3头份;C组的剂量为1头份。
[0195] 组1:采用上述灌装有不同剂量的上述二获得的细小力康产品（猪病毒疫苗猪细小 病毒CP-99株)的无针注射安飯与无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号： MP-0.1，MG-0.1)，进行免疫，进行皮内免疫，免疫方式为W每剂0.2ml (可多点注射)的体积 施用于耳根后区域中，命名为无针A组(灌装有剂量为倍猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株 疫苗标准剂量）；无针B组(灌装有剂量为倍猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株疫苗标准剂 量）；无针C组(灌装有剂量为1倍猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株疫苗标准剂量）。
[0196] 组2:采用传统0.5mm巧0mm为规格的有针注射器进行免疫上述二获得的细小力康 产品（猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株），免疫方式为W每剂2.0ml的体积施用于耳根后区域 中，命名为有针A组(1/5头份）；有针B组(1/3头份）；有针C组(1头份）。
[0197] 对照组:采用传统有针肌肉注射方式免疫PBS，免疫方式为W每剂2.0ml的体积施 用于耳根后区域中。
[0198] 5.2效力检验细小力康产品(猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株）：
[0199] 对于A组、B组和C组免疫30日采集各组仔猪血清，测定猪细小病毒的HI抗体效价 【专利公开号:CN 102961742ALPPV血清阳性数是指抗体效价大于1:64,可W提供对于保护 的疫苗。具体见表5。
[0200] 表5:猪细小病毒实验指标项
[0201]
[0203] 5.3无针注射细小力康产品（猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株)系统免疫安全性评 价--DRAIZE评分5
[0204] 在应用无针注射细小力康产品(猪病毒疫苗猪细小病毒CP-99株)系统免疫猪后的 7天内，每天观察注射部位的皮肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准如 图3所示。0分:没有红斑，未见水肿；1分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难W察觉;2分:清 晰红斑，可看到明显的隆起;3分：中度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红斑，且有结挪及 深度损伤。评分结果见图8,无针皮内注射与有针肌肉注射DRAIZE评分结果相似，均在注射 后的3天内出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑，且均为两大剂量注射组皮肤擦伤明显。注射 后第4天症状逐渐减轻，在注射后第5天，各组不良反应均消失。由此表明，无针皮内注射与 有针肌肉注射均具有良好的安全性。
[0205] 由表1，表2，表3，表4，表5可W看出，无针A组和无针B组无针注射猪病毒性疫苗系 统接种的保护率明显高于经传统有针注射器经肌肉注射的保护率。且无针皮内注射与有针 肌肉注射均具有良好的安全性。
[0206] 四、无针注射猪病毒疫苗系统的注射部位研究
[0207] W猪圆环病毒2型灭活疫苗为例，注射部位可W注射皮内、皮下、肌肉注射。
[0208] 猪圆环病毒2型灭活疫苗按照如下方法制备:将购买成都天邦生物制品有限公司 的圆力佳产品猪圆环病毒2型灭活疫苗破乳后提取抗原，后与SP01佐剂按比例混合，得到含 有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗。
[0209] 其中，抗原:佐剂的体积比=1:1
[0210] 佐剂:采用SP01佐剂【专利公开号:CN 102370977 A】；
[0211] 将上述制备的含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗按照剂量为1头份猪病毒 疫苗灌装到实施例1的无针注射安飯中，灌装总体积为1.0ml，得到灌装有含有SP01佐剂的 猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射安飯。
[0212] 经查无猪圆环病毒血清抗体的仔猪18头，随机分为无针肌肉注射组1、有针肌肉注 射组2、无针皮下注射组3、无针肌肉连续5点注射组4、无针皮下连续5点注射组5,每组3头； 空白对照3头，具体如下：
[0213] 组1:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射 安飯与无针注射器连接，进行肌肉免疫，14天加强免疫一次，免疫方式为W每剂1.0ml的体 积施用于耳根后区域中。
[0214] 组2:采用传统0.5mm*20mm为规格的有针注射器进行肌肉免疫上述制备的含有 SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射安飯，进行肌肉免疫，14天加强免疫一次， 免疫方式为W每剂1.0ml的体积施用于耳根后区域中。
[0215] 组3:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射 安飯与无针注射器连接，进行皮下免疫，14天加强免疫一次，免疫方式为W每剂1.0ml的体 积施用于皮下区域中。
[0216] 组4:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射 安飯与无针注射器连接，进行肌肉连续5点注射，每点0.2ml，14天加强免疫一次，免疫方式 为W总剂量1.0ml的体积施用于耳根后肌肉区域中。
[0217] 组5:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射 安飯与无针注射器连接，进行皮下连续5点注射，每点0.2ml，14天加强免疫一次，免疫方式 为W总剂量1.0ml的体积施用于皮下区域中。
[0218] 将上述18头仔猪免疫30日，用2ml PCV2SX07株（【专利公开号：CN 104593334A】含 105'*^1'(：1050/1111)攻毒每头猪攻击，攻毒后每天进行体溫测定和临床症状观察，并于攻毒后 28日剖检，进行各脏器病理变化观察。根据临床症状、病理变化判定免疫保护结果。体溫 40.5°C)，且伴随着明显的病理变化即判定为不保护。具体见表6。
[0219] 表6:免疫猪圆环病毒2型灭活疫苗不同部位的结果
[0220]
[0221] 由表6表明，无针肌肉注射、有针肌肉注射、无针皮下注射、无针肌肉连续5点注射、 无针皮下连续5点注射均具有良好的保护性。
[0222] 五、无针注射猪病毒疫苗系统的疫苗佐剂研究
[0223] 1、不同佐剂疫苗的制备
[0224] 1)含有ISA206佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗
[0225] 购买自成都天邦生物制品有限公司的圆力佳产品的含有ISA206佐剂猪圆环病毒2 型灭活疫苗。
[02%] 2)含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗
[0227]猪圆环病毒2型灭活疫苗按照如下方法制备:将购买成都天邦生物制品有限公司 的圆力佳产品的猪圆环病毒2型灭活疫苗破乳后提取抗原，后与SPOl佐剂按比例混合，得到 含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗。
[0。引其中，抗原:佐剂的体积比=1:1
[02巧]佐剂:采用SP01佐剂【专利公开号:CN 102370977 A】；
[0230] 2、灌装有含有佐剂猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射安飯
[0231] 将上述制备的含有ISA206佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗按照剂量为1头份猪病 毒疫苗灌装到实施例1的无针注射安飯中，灌装总体积为1.0ml，得到灌装有含有ISA206佐 剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射安飯；
[0232] 将上述制备的含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗按照剂量为1头份猪病毒 疫苗灌装到实施例1的无针注射安飯中，灌装总体积为1.0ml，得到灌装有含有SP01佐剂的 猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射安飯。
[0233] 3、免疫攻毒
[0234] 经查无猪圆环病毒2型血清抗体的仔猪9头，随机分为无针ISA206佐剂疫苗组1、无 针SP01佐剂疫苗组2，每组3只；空白对照3只。
[0235] 组1:采用上述制备的灌装有含有ISA206佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注 射安飯与无针注射器连接，进行肌肉免疫，14天加强免疫一次，免疫方式为W每剂1.0ml的 体积施用于耳根后区域中。
[0236] 组2:采用上述制备的灌装有含有SP01佐剂的猪圆环病毒2型灭活疫苗的无针注射 安飯与无针注射器连接，进行肌肉免疫，14天加强免疫一次，免疫方式为W每剂1.0ml的体 积施用于耳根后区域中。
[0237] 将上述9头仔猪免疫30日，用2ml PCV2SX07株（【专利公开号：CN 1045933：34A】含 105'<"rCID50/ml)攻击每头猪，攻毒后每天进行体溫测定和临床症状观察，并于攻毒后28日 剖检，进行各脏器病理变化观察。根据临床症状、病理变化判定免疫保护结果。体溫（>40.5 °C)，且伴随着明显的病理变化即判定为不保护。具体见表7.
[0238] 由表7表明，无针ISA206佐剂疫苗和无针SP01佐剂疫苗均具有良好的保护性。表7: 免疫不同佐剂猪圆环病毒2型灭活疫苗的结果
[0239]
【主权项】
1. 无针注射猪病毒疫苗系统，为如下1)或2): 1) 所示的系统包括灌装有猪病毒疫苗的容器，所述猪病毒疫苗的灌装剂量小于等于该 猪病毒疫苗的标准剂量； 2) 所示的系统包括灌装猪病毒疫苗的容器和可读载体;所述可读载体记载内容包括： 所述猪病毒疫苗的无针注射剂量小于等于该猪病毒疫苗标准剂量。2. 根据权利要求1所述的系统，其特征在于:所述猪病毒疫苗的灌装剂量为1/5-1倍该 猪病毒疫苗的标准剂量； 所述猪病毒疫苗的无针注射剂量为1/5-1倍该猪病毒疫苗的标准剂量。3. 根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于： 所述猪病毒疫苗的灌装剂量为1/5-1/3倍该猪病毒疫苗的标准剂量； 所述猪病毒疫苗的无针注射剂量为1/5-1/3倍该猪病毒疫苗标准剂量。4. 根据权利要求1-3中任一所述的系统，其特征在于： 所述猪病毒疫苗为单价猪病毒疫苗或多价猪病毒疫苗； 所述多价猪病毒疫苗为多种猪病毒疫苗联合组成； 每种猪病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量均为小于等于该猪病毒疫苗的标准剂量； 和/或，每种猪病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5-1倍该猪病毒疫苗的 标准剂量； 和/或，每种猪病毒疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体均为1/5-1/3倍该猪病毒疫苗 的标准剂量； 和/或，所述多价猪病毒疫苗具体由猪瘟疫苗、伪狂犬疫苗、猪繁殖与呼吸障碍综合征 疫苗、猪圆环病毒2型疫苗、猪细小病毒疫苗中至少两种组成。5. 根据权利要求4所述的系统，其特征在于： 所述猪病毒疫苗为无佐剂猪病毒疫苗或由猪病毒疫苗抗原和佐剂组成的疫苗， 所述猪病毒疫苗抗原或所述无佐剂猪病毒疫苗均为病毒灭活疫苗、病毒裂解疫苗、纳 米颗粒疫苗、减毒活疫苗、合成肽疫苗、重组VLP疫苗、基因工程疫苗、基因缺失疫苗、活载体 疫苗、核酸疫苗等中的任何一种或几种混合，但不限于此； 和/或，所述佐剂具体为SP0UISA206、氢氧化铝胶、矿物油、卡波姆、Gel 01、蜂胶、黄芪 多糖、ISA760VG、弗氏佐剂的一种或几种组合物。6. 根据权利要求1-5中任一所述的系统，其特征在于:所述系统还包括与所述灌装有猪 病毒疫苗的容器配套使用的无针注射装置； 所述无针注射装置具体为无针注射器。7. 根据权利要求1-6所述的系统，其特征在于： 所述灌装有猪病毒疫苗的容器为灌装有疫苗的一次性无针注射安瓿，其包括： 预灌装疫苗的一管体， 一体设置于所述管体一端的一无针注射器接头， 由所述管体另一端滑动设置在所述管体内、并封闭所述管体的一动力推杆， 设置在所述无针注射器接头内的一喷射口， 易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆， 可拆卸地设置在所述无针注射器接头上、并封闭所述喷射口的一密封帽，和 可拆卸地设置在所述动力推杆上、并与所述管体的入口相嵌合的一密封锁块； 其中，所述喷射口具有一止动槽，所述喷射口通过所述止动槽与所述管体内腔相连通； 所述止动杆与所述止动槽相配合。8. 根据权利要求7所述的系统，其特征在于： 所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致;所述止动杆和止动槽为锥形;所述密封 帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上； 所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从 而可拆卸地安装在所述动力推杆上； 所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上;所述动力推杆上设 置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在所述 动力推杆上； 所述管体、无针注射器接头、喷射口和止动槽一体制造而成。9. 根据权利要求1-8中任一所述的系统，其特征在于： 1) 所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积为〇.〇5-lml; 2) 所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积为0.05-200ml; 和/或，2)所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积具体为50-200ml; 和/或，2)所示的系统中，所述猪病毒疫苗的灌装体积具体为50-100ml; 2)所示的系统中，所述可读载体记载内容还包括所述猪病毒疫苗的无针注射部位和所 述猪病毒疫苗的无针注射方式； 所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉;所述无针注射部位具体为皮内； 所述无针注射方式为多次连续免疫或单次免疫。10. 权利要求1-9中任一所述系统在制备免疫动物产品中的应用； 所述动物具体为家畜，所述家畜尤其具体为猪； 或，一种对动物或人免疫猪病毒疫苗的方法，为用权利要求1-9中任一所述系统进行免 疫，免疫剂量为权利要求1-9中任一所述系统中的无针注射剂量;免疫方式具体为多次连续 免疫或单次免疫;免疫部位具体为皮内、皮下或肌肉。
【文档编号】A61M5/303GK105999258SQ201610313310
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】王鋮, 连梦瑶, 任天宇, 王林叶, 王欢, 孙治华, 李敏, 杨晓岚, 木其尔
【申请人】内蒙古华希生物科技有限公司