冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用图
【专利摘要】本发明涉及制药技术，特别涉及冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途。本发明提供一种抗抑郁症的药物，其抗抑郁药效成分为冬凌草甲素。其药效剂量为每千克体重0.01?30mg冬凌草甲素；给药后60分钟内即可产生抗抑郁效果。这种药物具有抗抑郁效果显著、起效快、用药量少、副作用小等优点。在哺乳动物小鼠悬尾实验中，冬凌草甲素比常规抗抑郁药物丙咪嗪的抗抑郁效果更加显著，有望成为快速、高效、无毒副作用的抗抑郁新药。
【专利说明】
冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途
技术领域
[0001]本发明涉及制药技术，特别涉及冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途。
【背景技术】
[0002]抑郁症又称抑郁障碍，以显著而持久的心境低落为主要临床特征。临床可见心境低落与其处境不相称，情绪的消沉可以从闷闷不乐到悲痛欲绝，自卑抑郁，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为。部分病例有明显的焦虑和运动性激越，严重者可出现幻觉、妄想等精神病症状。每次发作持续至少两周以上，长达数年。多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。
[0003]药物治疗是中度以上抑郁发作的主要治疗措施。传统的三环类、四环类抗抑郁药和单胺氧化酶抑制剂由于不良反应较大，应用明显减少。目前临床上一线的抗抑郁药主要包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂等，但使用这类药物起效慢，作用谱窄，停药后易复发。目前，整个业界都在研发见效快、副作用小、更为有效的治疗药物。
[0004]冬凌草甲素是从传统中药冬凌草中提取分离出来的一种四环二萜类化合物，熔点248-250°C，微溶于水，溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。冬凌草甲素具有明显的抗菌消炎作用，对金黄色葡萄球菌甲型链球菌等上呼吸道菌株有较强的杀菌作用，被广泛用于治疗慢性咽炎、扁桃体炎、口腔炎。体外实验发现，冬凌草甲素具有抗肿瘤的功效，对人体食管癌100细胞株及人体BEL-7402肝癌细胞株均有明显的细胞毒作用，对L1210、P388、艾氏腹水癌(ECA)、肝癌及S180腹水型等都有明显抗肿瘤作用，使动物的平均存活期明显延长，部分动物可长期存活。亚急性毒性实验证明，冬凌草甲素对大鼠或犬的骨髓、肝、肾等功能均无明显影响。
[0005]目前，应用冬凌草甲素作为药效成分预防/治疗抑郁症还未见报道。
【发明内容】
[0006]基于发明人的偶然发现，本发明提供一种以冬凌草甲素作为药效成分的抗抑郁药，这种药物具有抗抑郁效果显著、起效快、用药量少、副作用小等优点。
[0007]本发明请求保护的技术方案如下:
[0008]—种抗抑郁症的药物，其特征在于，其抗抑郁药效成分为冬凌草甲素。
[0009]—种抗抑郁症的药物组合物，其特征在于，其抗抑郁药效组分包括冬凌草甲素。
[0010]—种快速抗抑郁症的药物，其特征在于，其抗抑郁药效成分为冬凌草甲素。
[0011 ]所述快速抗抑郁症的药物，其特征在于，其药效剂量为每千克体重0.01_30mg冬凌草甲素;给药后60分钟内可产生抗抑郁效果。
[0012]任一所述的药物，其特征在于，还包括与冬凌草甲素同时施用后对治疗抑郁症有积极作用的药物成分和/或使冬凌草甲素稳定性提高的药学上可接受的成分。
[0013]任一所述的药物，其特征在于，还包括制药学上可接受的辅助成分。
[0014]任一所述的药物，其特征在于，其剂型为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液、
悬浮液或注射液。
[0015]冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途，其特征在于，以冬凌草甲素为药效成分制备抗抑郁症药物。
[0016]所述用途中，所述抗抑郁症药物的药效剂量为每千克体重0.01_30mg冬凌草甲素；给药后60分钟内可产生抗抑郁效果。
[0017]一种治疗/预防抑郁症的方法，其特征在于，使受试者摄入冬凌草甲素，按每天每千克体重提供0.01_30mg冬凌草甲素。
[0018]本发明研究结果表明，在哺乳动物小鼠悬尾实验中，冬凌草甲素具有快速抗抑郁症的功效，且比常规抗抑郁药物丙咪嗪更有效。
[0019]在小鼠动物模型悬尾实验中发现，冬凌草甲素高剂量组小鼠(12mg/kg)在注射后60分钟抑郁症状开始缓解，即活动量相对空白对照组越来越频繁，明显缩短不动时间。而丙咪嗪阳性对照组在注射后60分钟内，活动量与生理盐水对照组无差别，直至60分钟之后，才开始有相对频繁地活动。丙咪嗪阳性对照组和生理盐水组的小鼠相比，注射60分钟后不动时间没有明显缩短，注射90分钟后开始明显缩短悬尾不动时间。冬凌草甲素在剂量低于丙咪嗪的情况下，比丙咪嗪更早地显示出抗抑郁效果。实施例1中列出了在注射60分钟之后各组小鼠在所观察6分钟内，后4分钟内的累计不动时间，结果如图2所示。
[0020]在强迫游泳实验中，冬凌草甲素高剂量组(12mg/kg)的不动时间与丙咪嗪阳性对照组(15mg/kg)的不动时间相当(如图3所示)。和丙咪嗪相比，冬凌草甲素有效剂量更低，具有更强的抗抑郁作用，具有作为快速抗抑郁症药物的潜力。
[0021]本发明抗抑郁药物的有效成分冬凌草甲素，其化学结构式如图1所示，还具有抗肿瘤、抗菌、消炎等功效。因此，冬凌草甲素有望成为快速、高效、无毒副作用的抗抑郁新药。
[0022]基于本发明的实验数据，本发明请求保护以冬凌草甲素为药效成分的抗抑郁症药物，即任何以冬凌草甲素为药效成分且标识着其适应症包含抑郁症的药物或快速抗抑郁症的药物，或以冬凌草甲素为药效组分的药物组合物都是本发明请求保护的专利抗抑郁症药物。本发明还请求保护冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途，任何以冬凌草甲素为药效成分制备抗抑郁症药物、快速抗抑郁症药物、抗抑郁症药物组合物的以盈利为目的生产行为都属于本发明请求保护的范围。
[0023]本发明采用的药物筛选实验为:强迫游泳实验和小鼠悬尾实验，是常用的两种动物行为绝望抑郁症模型实验，能较好地保证筛选结果的可靠性。
[0024]小鼠强迫游泳实验已用于很多抗抑郁药物的筛选。而且大多数有临床治疗作用的抗抑郁药也被证实在强迫游泳实验中能有效减少不动时间。所谓不动是指“动物在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅露出鼻孔保持呼吸，仅有细小的肢体运动，以保持头部浮在水面”。在试验前给予拟筛选的药物。由于动物在强迫状态下游泳使动物不能逃出恶劣环境，导致动物行为绝望。此种模型方法简便，可靠，已广泛用于抗抑郁药剂的筛选和评价。
[0025]小鼠悬尾实验是小鼠在悬尾状态下不再挣扎，呈现特有的安静不动状态，抗抑郁药可明显缩短不动状态的持续时间。试验时，将小鼠尾部固定、倒悬。勿使小鼠尾部扭曲折叠。计录不动时间。不动指标为:“动物除呼吸外所有肢体均不动”。悬尾实验对各种抗抑郁药均很敏感，而且避免了游泳实验中温度和动物运动功能障碍的干扰，因而在用一些鼠种筛选抗抑郁药物时，可以有效地验证和补充强迫游泳实验的结果。
[0026]本发明提供的冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途，所制备而得的抗抑郁症药物，可以基于制药领域的技术人员的常识而加入不影响药物药效的辅助成分，如载体、赋形剂、矫味剂等。由于该药物通过口服、注射、皮下包埋等方式均可见效，因此，剂型可以是多样的，包括但不限于粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液、悬浮液、注射液或滴注液。
[0027]本发明提供的抗抑郁症药物还可以混合有其它与冬凌草甲素或其衍生物配合使用对治疗抑郁症有积极作用的药物成分。
[0028]本领域技术人员可以加入使冬凌草甲素稳定性提高的稳定剂，只要不影响药效的发挥，所得的抗抑郁症药物均在本发明要求保护的范围内。
[0029]本发明所提供的抗抑郁症药物，所述抗抑郁症包括预防和治疗两个阶段。
[0030]所述抗抑郁症药物的用量为:每天每千克体重提供0.01_30mg冬凌草甲素。
[0031 ]所述抗抑郁症药物的给药方式为口服、滴注或注射;给药对象为哺乳动物，所述哺乳动物包括人。
[0032]由于经典抑郁动物模型中动物不动时间的缩短可能是由于药物的中枢兴奋性作用所引起，因此本发明还同时进行了小鼠开野实验(Open field test)，以检验小鼠的自主活动性，避免中枢兴奋药的干扰。结果表明，与对照组相比，高浓度冬凌草甲素对小鼠自主活动无显著影响，故可排除假阳性结果的可能性，证明冬凌草甲素确实具有显著的抗抑郁作用。
[0033]本发明请求保护的药物组合物，是指人工复配的以两种及以上药效组分混合在一起制得的药物。例如这种组合物比如本发明采用的冬凌草甲素与
【申请人】之前申请并公布的虫草素、香菇多糖、虾青素等物质组合而成的抗抑郁症药物组合物。区别于包含某种药效成分但是成分复杂的天然植物。
【附图说明】
[0034]图1.冬凌草甲素的化学结构式。
[0035]图2.冬凌草甲素对小鼠悬尾实验的影响，
[0036]纵坐标:悬尾实验小鼠不动时间(s)，
[0037]横坐标:从左到右依次为:I%DMSO对照组，冬凌草甲素低剂量组(7.5mg/kg)，冬凌草甲素高剂量组(12mg/kg)，生理盐水对照组，丙咪嗪阳性对照组(15mg/kg)，
[0038]结果:⑶I雄性小鼠经不同剂量的冬凌草甲素腹腔注射60分钟后，高剂量组(12mg/kg)在小鼠悬尾实验中显示出极显著的抗抑郁效果(每组动物N= 24，*t检验P <0.05，<
0.0I)。图3.冬凌草甲素对小鼠游泳实验的影响，
[0039]纵坐标:强迫游泳实验小鼠不动时间(s)，
[0040]横坐标:从左到右依次为:I %DMS0对照组，冬凌草甲素低剂量组(7.5mg/kg)，冬凌草甲素高剂量组(12mg/kg)，生理盐水对照组，丙咪嗪阳性对照组(15mg/kg)，
[0041]结果:CDl雄性小鼠经不同剂量的冬凌草甲素腹腔注射五天后，在小鼠强迫游泳实验中显示出极显著抗抑郁效果。这个抗抑郁效果和传统抗抑郁药物丙咪嗪相比有更强的趋势(每组动物 N=8-10，*t 检验 ρ<0.05，林 ρ<0.01)。
【具体实施方式】
[0042]以下通过具体实施例对本发明进行详细说明，需要理解的是，下述实施例仅作为解释和说明，不以任何形式限制本发明的范围。
[0043]下述实施方式中，未特别说明的生物化学试剂均为本领域常规试剂，可以按照本领域常规方法配制而得或商购获得，规格为实验室纯级即可。
[0044]实施例1.冬凌草甲素对动物抑郁模型悬尾实验的影响
[0045]实验动物:
[0046]CDl种小鼠，雄性，重量30-40克，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号:SCXK(京)2012-0001。动物分笼饲养，明暗周期12h/12h，室温20?22°C，食水自由，饲料由中国科学院遗传与发育生物学研究所实验动物中心提供。
[0047]实验药品:
[0048]冬凌草甲素购自中国食品药品检定研究院，货号111721-201403。
[0049]盐酸丙咪嘆(Imipraminehydrochloride)为Sigma公司产品，货号 17379，批号056K1380。
[0050]实验器材:
[0051 ] 横杆；胶布；Sumsung Intelli_200m数码摄像机(韩国三星公司)；JUNSO多功能计时器。
[0052]实验步骤:
[0053]雄性⑶I小鼠经适应性饲养一周，分成5组，每组24只。分别为
[0054]I %DMS0对照组(DMS0溶于生理盐水)、
[0055]冬凌草甲素低剂量组(7.5mg/kg，溶于I %DMS0)、
[0056]冬凌草甲素高剂量组(12mg/kg，溶于1%DMS0)、
[0057]传统抗抑郁药物丙咪嗪阳性对照组(15mg/kg丙咪嗪，生理盐水溶解)、
[0058]生理盐水对照组。
[0059]上午10时按0.3ml/30g体重腹腔注射给药，
[0060]注射60分钟后，每组随机选取12只小鼠进行悬尾实验；
[0061 ]注射90分钟后，对每组剩下的12只小鼠进行悬尾实验；
[0062]小鼠悬尾实验时，用胶布将小鼠尾在距尾尖2厘米处粘在一根水平横杆上，使动物成倒挂状态，其头部离桌面约15厘米。观察6分钟，记录后4分钟内的累计不动时间。不动指标为:动物除呼吸外所有肢体均不动。
[0063]统计方法:
[0064]实验结果用均值土SE表示，两个样本平均数比较用t检验。
[0065]冬凌草甲素高剂量组小鼠在注射后60分钟抑郁症状开始缓解，即活动量相对空白对照组越来越频繁，明显缩短不动时间。而丙咪嗪阳性对照组在注射后60分钟内，活动量与生理盐水对照组无差别，直至60分钟之后，才开始有相对频繁地活动。
[0066]丙咪嗪阳性对照组和生理盐水组的小鼠相比，注射60分钟后不动时间没有明显缩短，注射90分钟后开始明显缩短悬尾不动时间。
[0067]注射60分钟后观察结果，如图2所示，冬凌草甲素的高剂量组小鼠的不动时间与1%0150对照组相比由126.11±16.418降低为61.86±11.318(卩<0.01)，缩短了50.95%。低剂量组不动时间也显示出降低趋势。结果表明，高剂量的冬凌草甲素在很短的时间内即可起效，且效果极显著，可以对抗小鼠因强迫悬尾造成的抑郁症状。
[0068]实施例2.冬凌草甲素对动物抑郁模型强迫游泳实验的影响
[0069]实验动物:
[0070]CDl种小鼠，雄性，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号:SCXK(京)2012-0001。实验前一周将动物分笼饲养，明暗周期12h/12h，室温20?22°C，食水自由，饲料由中国科学院遗传与发育生物学研究所实验动物中心提供。
[0071]实验药物:
[0072]冬凌草甲素购自中国食品药品检定研究院，货号111721-201403。
[0073]阳性对照盐酸丙咪嘆(Imipramine hydrochloride)为Sigma公司产品，货号17379，批号056K1380。
[0074]实验仪器:
[0075]玻璃圆筒(高40cm，直径14cm);小鼠开阔箱(长和宽分别为50cm，高40cm，底部16等分)；温度计;JUNSO多功能计时器。
[0076]实验步骤:
[0077]药物准备同悬尾实验。
[0078]动物药物注射:
[0079]⑶I小鼠，年龄7周，重量30-40克，适应环境一周后开始实验。动物随机分组，共有5组，每组8-10只动物。每天上午10点开始腹腔注射。注射量为0.3毫升/30克，每天腹腔注射一次，注射五天后开始强迫游泳实验。
[0080]强迫游泳实验:
[0081 ] 将各组⑶I鼠单个垂直地放入有机玻璃圆筒中(40cm高X 14cm直径)，水深25cm，水温21-23°C。各给药组和对照组录像6分钟，比较各组小鼠在后4分钟内的累计不动时间。不动时间判定:小鼠漂浮在水面，不努力爬出圆筒，仅做一些必须保持其头部在水面的动作。
[0082]统计分析方法:
[0083]实验结果用均值土SE表示，两个样本平均数比较用t检验。
[0084]结果如图3所示，与1%DMS0对照组比较，冬凌草甲素高剂量组小鼠强迫游泳4分钟内的不动时间显著缩短，且具有一定的剂量依赖性，冬凌草甲素高剂量组小鼠的不动时间与 1%DMS0对照组相比，由89.50±11.96s降低为43.75±16.10s(p<0.01)，缩短了51.11%。和传统抗抑郁药丙咪嗪相比，高剂量(12mg/kg)的冬凌草甲素的抗抑郁作用更强。
[0085]实施例3.小鼠开野实验
[0086]由于经典抑郁动物模型中的动物不动时间的缩短可能是由于药物的中枢兴奋性作用引起，所以我们进行了小鼠开野实验来检验冬凌草甲素的中枢兴奋性。
[0087]实验结果显示，小鼠I小时在开阔箱中运动的总距离在冬凌草甲素高剂量处理后(77.19+7.41111)与对照组(59.28±3.18111)相比，无明显变化(厶110￥34>0.05小=8-10)，故可排除其引发躁狂状态的可能性，因此，冬凌草甲素确实具有显著的抗抑郁效果。
[0088]实施例4药物组合物药效实验
[0089]重复实施例1-3的实验，只是实验药物为冬凌草甲素与虫草素、香菇多糖、虾青素、灵芝酸A等在先公开的抗抑郁有效成分的1:1组合。
[0090]实验结果显示小鼠悬尾实验、强迫游泳实验、开野实验结果与实施里1-3显示相同的趋势和显著性。
【主权项】
1.一种抗抑郁症的药物，其特征在于，其抗抑郁药效成分为冬凌草甲素。2.一种抗抑郁症的药物组合物，其特征在于，其抗抑郁药效组分包括冬凌草甲素。3.一种快速抗抑郁症的药物，其特征在于，其抗抑郁药效成分为冬凌草甲素。4.根据权利要求3所述的快速抗抑郁症的药物，其特征在于，其药效剂量为每千克体重0.01-30mg冬凌草甲素;给药后60分钟内可产生抗抑郁效果。5.根据权利要求1?4任一所述的药物，其特征在于，还包括与冬凌草甲素同时施用后对治疗抑郁症有积极作用的药物成分和/或使冬凌草甲素稳定性提高的药学上可接受的成分。6.根据权利要求1?4任一所述的药物，其特征在于，还包括制药学上可接受的辅助成7.根据权利要求1?4任一所述的药物，其特征在于，其剂型为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液、悬浮液或注射液。8.冬凌草甲素在制备抗抑郁症药物中的用途，其特征在于，以冬凌草甲素为药效成分制备抗抑郁症药物。9.根据权利要求8所述的用途，所述抗抑郁症药物的药效剂量为每千克体重0.01-30mg冬凌草甲素;给药后60分钟内可产生抗抑郁效果。10.一种治疗/预防抑郁症的方法，其特征在于，使受试者摄入冬凌草甲素，按每天每千克体重提供0.01-30mg冬凌草甲素。
【文档编号】A61P25/24GK106038534SQ201610493245
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月28日
【发明人】杜若甫, 陈正华, 单丽萍
【申请人】北京冠瑞金生物科技有限公司