干巴菌中活性物质的提取工艺及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种干巴菌活性物质的提取工艺，该提取方法简便、快捷，适用于大规模的工业生产，并能够最大程度地保持干巴菌中化学成分的活性。采用该方法提取的化学活性物质，可以显著抑制癌细胞生长，并且具有良好的抗氧化性和抗菌效果。
【专利说明】
干巴菌中活性物质的提取工艺及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种活性物质的提取工艺，特别涉及干巴菌中活性物质的提取工艺。
【背景技术】
[0002] 干巴菌是云南省特有的珍稀野生食用菌，也叫对花菌、马牙菌。其生长在滇中及滇 西的山林松树间，产于七八月雨季，至今仍未实现人工栽培。干巴菌出土时，呈黄褐色，老熟 时，变成黑褐色。干巴菌含有丰富的钙、铁、蛋白质、硫胺素，具有很高的营养价值。
[0003] 目前，国内外对干巴菌的应用研究主要集中于干巴菌的菌种分离、促繁扩繁、发酵 培养和含菌丝体调味料的制备。但是关于干巴菌活性成分的提取研究和应用几乎未见报 道。事实上，干巴菌具有很重要的食疗价值:例如，干巴菌含有丰富的抗氧化物质，能清除人 体自由基，延缓衰老;含有丰富的抗菌物质，能够抑制炎症的产生;具有抗癌的能力等等。
[0004] 目前常用的浸渍和索式提取法虽然可以提取得到干巴菌中的活性物质，但是这些 方法提取效率较低，提取工艺复杂，消耗时间较长，产出较低，并且容易破坏提取物质的活 性。因此，找到一种可以最大限度提取干巴菌中活性物质的方法具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种简便、快捷的干巴菌活性物质的提取工艺。
[0006] 本发明所采取的技术方案是： 一种干巴菌中活性物质的提取工艺，包含以下步骤： 1) 将干巴菌充分烘干后，物理粉碎； 2) 粉碎后的干巴菌加入提取液，充分混匀； 3) 超声水浴处理后，离心收集上清液。
[0007] 作为优选的:所述粉碎至25~150目。
[0008] 作为优选的:所述提取液为乙醇水溶液，其中乙醇含量(v/v)为40%~80%。
[0009] 作为优选的:所述干巴菌与提取液的质量体积比为1:5~70(g/mL)。
[0010] 作为优选的：所述水浴温度为30~75 °C。
[0011] 作为优选的：提取工艺还包括将提取液与干巴菌充分混匀后，在温度为-20~-40 °C条件下静置4~8h。
[0012] 以上所述的提取工艺提取得到的干巴菌活性物质在制备抗肿瘤制剂中的应用。
[0013] 以上所述的提取工艺提取得到的干巴菌中活性物质在制备抗氧化制剂中的应用。
[0014] 以上所述的提取工艺提取得到的干巴菌中活性物质在制备抗菌制剂中的应用。
[0015] 本提取方法简便、快捷，适用于大规模的工业生产，并能够最大程度地保持干巴菌 中生物活性化合物的活性，具有突破性的进展。
【具体实施方式】
[0016] 实施例1、干巴菌活性物质的提取I 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为100目，称取3g菌类样品，加入70.15mL提取液，提取液为57.38%(v/v)乙醇溶液。在-30°c 低温处理4h后，在40°C条件下超声lOmin，超声频率为SOOwdOOOr离心30 min，收集上清 液。将上清液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.76 g。
[0017] 实施例2、干巴菌活性物质的提取Π 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为100目，称取3g菌类样品，加入70.15mL提取液，提取液为57.38%(v/v)乙醇溶液。在-20°c 低温处理6h后，在40°C条件下超声lOmin，超声频率为SOOwdOOOr离心30 min，收集上清 液。将上清液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.84 g。
[0018] 实施例3、干巴菌活性物质的提取m 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为25目，准确称量3g干巴菌，加入120mL提取液，提取液为40%( v/v)乙醇溶液。在-20°C低温 处理6h后，在75°C条件下超声15min，超声频率为550w。5000r离心30 min，收集上清液。将 上清液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.72 g。
[0019] 实施例4、干巴菌活性物质的提取IV 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为25目，准确称量3g干巴菌，加入15mL提取液，提取液为40%( v/v)乙醇溶液。在-25 °C低温处 理6h后，在75°C条件下超声15min，超声频率为550?。500(^离心30 min，收集上清液。将上 清液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.68g。
[0020] 实施例5、干巴菌活性物质的提取V 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为50目，准确称量3g干巴菌，加入160mL提取液，提取液为50%( v/v)乙醇溶液。在-40°C低温 处理5h后，在30°C条件下超声8min，超声频率为GOOwjOOOr离心30 min，收集上清液。将上 清液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.42g。
[0021] 实施例6、干巴菌活性物质的提取VI 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为50目，准确称量3g干巴菌，加入160mL提取液，提取液为50%( v/v)乙醇溶液。在-35°C低温 处理4h后，在30°C条件下超声8min，超声频率为GOOwjOOOr离心30 min，收集上清液。将上 清液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.66g。
[0022] 实施例7、干巴菌活性物质的提取W 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为150目，准确称量3g干巴菌，加入21 OmL提取液，提取液为80%( v/v)乙醇溶液。在-35°C低温 处理4h后，在60 °C条件下超声20min，超声频率为800w。5000r离心30 min，收集上清液。将 上清液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.72g。
[0023] 实施例8、干巴菌活性物质的提取VI 新鲜食用菌用干净塑料刀片去除表面的杂质，烘干至恒重，去除杂质后用料理机粉碎 为150目，准确称量3g干巴菌，加入21 OmL提取液，提取液为80%( v/v)乙醇溶液。在-40°C低温 处理8h后，60°C条件下超声20min，超声功率为SOOwjOOOr离心30 min，收集上清液。将上清 液在40°C条件下蒸干，称量得到的活性物质的质量为0.64g。
[0024]实施例9、干巴菌活性物质的抗菌效果 各取实施例1~8中制备得到的干巴菌活性物质10mg，分别检测干巴菌活性物质对大肠 杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌等四种细菌的抗菌效果。具体 检测方法是:根据微肉汤稀释法，在96微孔板中加入事先制备好的菌悬液、MH肉汤、样品，使 得每个孔内的菌液浓度相同，生长对照由去离子水、MH肉汤和菌悬液组成。之后，将96微孔 板放在混匀器上混匀。放入酶标仪，在630nm条件下读取培养前吸光度。然后，将其放入37°C 恒温箱中培养21个小时。最后，读取培养后的吸光度(630nm)。通过吸光度改变值计算抑菌 率。得到结果如表1所示： 表1干巴菌活性物质的抗菌效果(％)
实施例10、干巴菌活性物质的抗癌效果 各取实施例1~8中制备得到的干巴菌活性物质10mg，采用MTT法分别检测干巴菌活性 物质对A549肺癌细胞、HepG2肝癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞和HT-29大肠癌细胞四种癌细胞生 长的影响。得到结果如表2所示： 表2干巴菌活性物质的抗癌效果(*100%)
实施例11、干巴菌活性物质的抗氧化效果 各取实施例1~8中制备得到的干巴菌活性物质10 mg，采用ABTS自由基清除能力测定 法测定提取的干巴菌活性物质的抗氧化效果，得到结果如表3所示： 表3干巴菌活性物质的抗氧化效果(μπιο? Trolox/g)
以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明 精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。
【主权项】
1. 一种干巴菌中活性物质的提取工艺，包含以下步骤： 1) 将干巴菌充分烘干后，物理粉碎； 2) 粉碎后的干巴菌加入提取液，充分混匀； 3) 超声水浴处理后，离心收集上清液。2. 根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于:所述粉碎至25~150目。3. 根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于:所述提取液为乙醇水溶液，其中乙醇 含量(v/v)为40%~80%。4. 根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于:所述干巴菌与提取液的质量体积比为 1:5~70(g/mL)。5. 根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于:所述水浴温度为30~75 °C。6. 根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于:提取工艺还包括将提取液与干巴菌充 分混匀后，在温度为-20~-40 °C条件下静置4~8h。7. 权利要求1~6中任一项所述的提取工艺提取得到的干巴菌中活性物质在制备抗肿 瘤制剂中的应用。8. 权利要求1~6任一项所述的提取工艺提取得到的干巴菌中活性物质在制备抗氧化 制剂中的应用。9. 权利要求1~6任一项所述的提取工艺提取得到的干巴菌中活性物质在制备抗菌制 剂中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK106038615SQ201610400704
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月8日
【发明人】李华斌, 徐冬平, 李莎, 郑洁, 周玥, 周通
【申请人】中山大学