一种佛甲草总黄酮的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种佛甲草总黄酮的制备方法，具体涉及一种采用酶解?超临界CO2提取佛甲草总黄酮的方法。其处理步骤包括：（1）原料的酶解；（2）超临界CO2萃取；（3）大孔吸附树脂纯化。本发明具有快速、高效、溶剂使用量少、环保等优点，且重现性好，树脂可重复使用。
【专利说明】
一种佛甲草总黄酮的制备方法
[0001 ] 技术领域:
本发明涉及一种佛甲草总黄酮的制备方法，属于中药有效成分提取领域。
[0002]【背景技术】:
佛甲草又名鼠牙半支莲、禾雀劂、佛指甲、铁指甲、狗牙菜，为景天科佛甲草属多年生草本植物。全草用药，有清热解毒、散瘀消肿、止血之功效，民间常用佛甲草治疗咽喉肿痛、痈月中、丹麦、烫伤、蛇咬伤、黄疸、痢疾等症。
[0003]黄酮类化合物是佛甲草的主要药效成分之一。研究表明，黄酮类化合物在生理学、医学和营养学上都有较高的应用价值，特别是在心血管疾病的临床治疗方面显示了良好的生理药理作用，具有扩张血管、强心且抗心律失常、防止心肌缺血、可有效地降低血脂、预防动脉粥样硬化等多种作用，并且能有效抑制血小板聚集防止血栓形成。此外，黄酮类化合物还具有较强的天然抗氧化性，及强有力的自由基清除性，还有抗病毒、抗癌、抗炎、抗衰老等多方面的作用。
[0004]超临界流体萃取技术是近年发展起来的一种新的萃取技术，和传统的溶剂萃取相比，具有易于分离，萃取速度快，产品无残留毒性，不损害活性物质的结构等优点。
[0005]
【发明内容】
:
本发明是针对现有技术的不足，旨在提供一种高效性和选择性、操作简便、产率高、副产物少、可工业化实现的制备佛甲草总黄酮的方法。
[0006]本发明的技术方案按照下列步骤进行:
(1)原料的酶解:取佛甲草粉末加入到其等量的溶有生物酶的缓冲溶液中，搅拌均匀，密封，于40?50 °C发酵3天；
(2)超临界CO2萃取:将酶解后的物料加入萃取釜中，以流速为25?35L/h的CO2作为萃取剂，设置萃取压力为20~30MPa、温度45?55°C，分离釜的温度10?15°C、压力6?lOMPa，收集萃取液；
(3)大孔吸附树脂纯化:将所得萃取液浓缩上大孔吸附树脂柱，先用2?3BV的蒸馏水洗脱，后用3?5BV的75?85%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得佛甲草总黄酮。
[0007 ]步骤(I)中所述的生物酶用量为原料质量的4%。
[0008]步骤(I)中所述的生物酶为质量比3:1的纤维素酶和半纤维素酶。
[0009]步骤(I)中所述的缓冲溶液为pH4.5?5.5的醋酸/醋酸钠缓冲溶液。
[0010]步骤(2)中所述的萃取剂CO2最适流速为28L/h。
[0011]步骤(3)中所述的大孔吸附树脂类型为NKA-9、D-201、XDA-1。
[0012]本发明的优点在于:
1.本发明选用酶液来分解构成细胞壁和细胞质的纤维素、半纤维素，使其疏松、膨胀、崩溃，从而增大了有效成分的扩散面积，减小了阻力，提高了有效成分的得率。
[0013]2.本发明采用酶解-超临界⑶2法提取佛甲草总黄酮，具有生产成本低、快速、高效、提取率尚的优点。
[0014]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0015]【具体实施方式】:
实施例1:
取Ikg的佛甲草粉末加入到其等量的溶有生物酶(用量为原料质量4%的质量比3:1的纤维素酶与半纤维素酶)的缓冲溶液(PH5.0的醋酸/醋酸钠缓冲溶液)中，搅拌均匀，密封，于40°C发酵3天;将酶解后的物料加入萃取釜中，以流速为25L/h的CO2作为萃取剂，设置萃取压力为20MPa、温度45 °C，分离釜的温度10 °C、压力6MPa，收集萃取液;将所得萃取液浓缩上AB-8大孔吸附树脂柱，先用2BV的蒸馏水洗脱，后用3BV的75%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得佛甲草总黄酮，经UV检测，其总黄酮的含量为80.45%。
[0016]实施例2:
取Ikg的佛甲草粉末加入到其等量的溶有生物酶(用量为原料质量4%的质量比3:1的纤维素酶与半纤维素酶)的缓冲溶液(PH4.5的醋酸/醋酸钠缓冲溶液)中，搅拌均匀，密封，于45°C发酵3天;将酶解后的物料加入萃取釜中，以流速为28L/h的CO2作为萃取剂，设置萃取压力为25MPa、温度50°C，分离釜的温度15 °C、压力1MPa，收集萃取液;将所得萃取液浓缩上XDA-1大孔吸附树脂柱，先用3BV的蒸馏水洗脱，后用5BV的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得佛甲草总黄酮，经UV检测，其总黄酮的含量为88.94%。
[0017]实施例3:
取Ikg的佛甲草粉末加入到其等量的溶有生物酶(用量为原料质量4%的质量比3:1的纤维素酶与半纤维素酶)的缓冲溶液(PH5.5的醋酸/醋酸钠缓冲溶液)中，搅拌均匀，密封，于50°C发酵3天;将酶解后的物料加入萃取釜中，以流速为35L/h的CO2作为萃取剂，设置萃取压力为30MPa、温度55°C，分离釜的温度12°C、压力8MPa，收集萃取液;将所得萃取液浓缩上NKA-9大孔吸附树脂柱，先用3BV的蒸馏水洗脱，后用4BV的85%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得佛甲草总黄酮，经UV检测，其总黄酮的含量为85.12%。
【主权项】
1.一种佛甲草总黄酮的制备方法，其特征在于: (1)原料的酶解:取佛甲草粉末加入到其等量的溶有生物酶的缓冲溶液中，搅拌均匀，密封，于40?50 °C发酵3天； (2)超临界CO2萃取:将酶解后的物料加入萃取釜中，以流速为25?35L/h的CO2作为萃取剂，设置萃取压力为20~30MPa、温度45?55°C，分离釜的温度10?15°C、压力6?lOMPa，收集萃取液； (3)大孔吸附树脂纯化:将所得萃取液浓缩上大孔吸附树脂柱，先用2?3BV的蒸馏水洗脱，后用3?5BV的75?85%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥至恒重，即得佛甲草总黄酮。2.根据权利要求1所述的一种佛甲草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(I)中所述的生物酶用量为原料质量的4%。3.根据权利要求1所述的一种佛甲草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(I)中所述的生物酶为质量比3:1的纤维素酶和半纤维素酶。4.根据权利要求1所述的一种佛甲草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(I)中所述的缓冲溶液为PH4.5-5.5的醋酸/醋酸钠缓冲溶液。5.根据权利要求1所述的一种佛甲草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的萃取剂CO2流速为28L/h。6.根据权利要求1所述的一种佛甲草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的大孔吸附树脂类型为NKA-9、D-201 ,XDA-1。
【文档编号】A61K36/41GK106038664SQ201610299667
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月9日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司