一种防治猪圆环病毒病的中草药复方及其制备方法和应用

一种防治猪圆环病毒病的中草药复方及其制备方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种防治猪圆环病毒病的中草药复方及其制备方法和应用，属于兽药领域，该中草药复方主要包括以下原料：所述中草药复方由叶下珠、黄芪、白术、防风、斑种草、夏至草组成，所述叶下珠、黄芪、白术、防风、斑种草和夏至草的质量配比比例为3:1:1:1:1:1。本发明能有效提高动物免疫抗体效价，降低发病率，促进动物的生长发育，全面增强动物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食品安全隐患，研发前景乐观，临床应用广阔。
【专利说明】
一种防治猪圆环病毒病的中草药复方及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于兽药领域，具体的涉及一种中草药复方及其制备方法和作为兽药在防 治猪圆环病毒病中的应用。
【背景技术】
[0002] 目前我国养猪生产面临着日趋严峻的疫病威胁，发病情况复杂多变，生产风险与 日倶增，控制成本显著提高，经济损失无法估量。其重要原因在于猪群中普遍存在免疫抑制 性疾病。猪的免疫系统是机体保护自身的防御性结构，不仅能抵御外来细菌、病毒和其他有 害物质的侵袭，还能清除体内衰老、突变、恶化或死亡的细胞，增进健康。猪免疫抑制性疾病 直接导致在疾病诊治过程中使用大量药物，造成病原微生物的耐药性日新月异。同时动物 机体的特异性和非特异性免疫力下降，对各种疫苗无法免疫应答，或产生的抗体效价低下。 造成低致病力的病原体或弱毒疫苗也可能感染猪体发病，更为严重的是由免疫抑制所带来 的混合感染，使疾病更为复杂，有时会造成新的综合征，甚至达到难以控制的程度。给养猪 生产造成巨大的经济损失，同时带来公共卫生安全隐患。由于这些免疫抑制性疾病常以亚 临床感染的形式出现，易被忽视，因此，必须加强对免疫抑制性疾病的重视，并做好防控工 作。
[0003] 猪群中最为普遍存在的免疫抑制性疾病即为猪圆环病毒2型感染。现已知PCV有两 个血清型，PCV1为非致病性的病毒。PCV2为致病性的病毒，它是断奶仔猪多系统衰竭综合征 (Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)的主要病原。本病最早发现于加 拿大（1991)，除PMWS外，PDNS(猪皮炎与肾病综合征）、PNP(增生性坏死性肺炎）、PRDC(猪呼 吸道疾病综合征）、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联。
[0004] PVC2组织学上的显著的病变是淋巴滤泡区减小或缺失，淋巴细胞耗竭，大量组织 细胞浸润髓样组织。PCV2既不在树突状细胞(DC)中复制，也不诱导DC的凋亡，DC吞噬PVC2 后，不对其进行抗原加工和递呈，所以DC是PCV2的良好避难所。又因为DC可以在机体到处移 行，所以它成为PCV2散播到机体各处的良好载体。参与免疫调节的细胞因子表达数量的改 变导致抗原递呈细胞表面抗原MHCI类分子和MHCII类分子表达下降，继而使得PCV2感染后 淋巴细胞不能有效地激活和增殖，最终破坏免疫功能。PCV2可以感染T淋巴细胞和B淋巴细 胞，并可以复制，但却引起T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞亚群都明显减少。原因可能是:其一， PCV2可以诱导淋巴细胞凋亡;其二，可能直接导致淋巴细胞的增殖减少。
[0005] 应用中药调节机体免疫功能和防治传染病在我国已有数千年的历史，并以确切的 疗效和较低的毒副残留及抗药性而广受欢迎。我国拥有丰富的中草药资源，应加速对其的 研究与开发，打造具有中国特色的品牌。对解决长期困扰畜牧业发展的抗生素残留问题，发 展绿色畜牧业，满足人们对食品安全的需求，增强我国畜产品在国际市场的竞争力，具有重 要的经济意义和社会效益。
[0006] 玉屏风散，中医方剂名。为补益剂，具有益气固表止汗之功效。主治表虚自汗证，汗 出恶风，面色苍白，舌淡苔薄白，脉浮虚。亦治虚人腠理不固，易感风邪。临床常用于治疗免 疫低下及微生物感染属表虚不固而外感风邪者，以及易于伤风感冒而致病情反复者。
[0007] 叶下珠，本种药用，全草有解毒、消炎、清热止泻、利尿之效，可治赤目肿痛、肠炎腹 泻、痢疾、肝炎、小儿疳积、肾炎水肿、尿路感染等。
[0008] 现有的疫苗、抗生素、化药等不足以明显降低猪圆环病毒病的发病率，导致养殖产 业巨大的经济损失。抗生素、激素、化学类合成药物可以促进动物生长、减少疾病发生，但这 些药物长期使用会使病原微生物产生耐药性、产品药物残留及环境污染等，严重威胁人类 健康。同时影响到我国农副产品的出口。然而，本发明作者通过大量实验发现叶下珠等中药 联用具有防治猪圆环病毒病和提高机体免疫功能的作用，现有技术中没有公开过该中药复 方具有防治猪圆环病毒病和提高机体免疫功能的作用，也没有该中药复方作为饲料添加剂 替代抗生素在畜禽养殖中的应用。

【发明内容】

[0009] 本发明的目的是提供一种防治猪圆环病毒病的中草药复方及其应用，同时本发明 还提供一种所述防治猪圆环病毒病的中草药复方的制备方法，该中草药复方能有效提高动 物免疫抗体效价，降低发病率，促进动物的生长发育，全面增强动物免疫功能和防御疾病的 能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食品安全隐患，研发前景乐观，临床应用广 阔，以解决上述现有技术存在的问题。
[0010] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0011] 本发明中一种防治猪圆环病毒病的中草药复方，所述中草药复方由叶下珠、黄芪、 白术、防风、斑种草、夏至草组成，所述叶下珠、黄芪、白术、防风、斑种草和夏至草的质量配 比比例为3:1:1:1:1: 1。
[0012] 优选地，所述中草药复方为散剂。
[0013] 本发明中一种防治猪圆环病毒病的中草药复方的制备方法，所述中草药复方为药 液，其工艺步骤为:将叶下珠、黄芪、白术、防风、斑种草和夏至草按所述配比比例制成散剂 后，将其加10倍体积蒸馏水于容器内，浸泡lh后加热回流lh，趁热用纱布过滤得一次药渣， 所述一次药渣再加8倍体积水加热回流lh后趁热用纱布过滤得二次药渣，所述二次药渣加6 倍体积水加热回流lh后趁热用纱布过滤得三次药渣，合并上述三次药渣对应的三次滤液， 减压浓缩成生药浓度为lg/mL的药液。
[0014] 本发明中一种防治猪圆环病毒病的中草药复方作为饲料添加剂的应用，具体步骤 为:将所述中草药复方散剂以质量比1:100与猪基础饲料混合均匀即可。
[0015] 本发明中一种防治猪圆环病毒病的中草药复方作为注射剂的应用，具体步骤为： 将所述中药复方药液对猪进行肌肉注射，每天一次，每次2ml，持续2周即可。
[0016] 相对于现有技术，本发明的有益效果为:本发明提出一种中草药复方作为兽药防 治猪圆环病毒病的应用，能有效提高动物免疫抗体效价，降低发病率，促进动物的生长发 育，全面增强动物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食 品安全隐患，研发前景乐观，临床应用广阔。
【具体实施方式】
[0017] 结合以下具体实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发 明，并非用于限定本发明的范围。
[0018] 实施例1
[0019] 本实例基础饲粮由南京禾嘉吉升农牧发展有限公司提供，基础饲粮组成及营养水 平见表1。取同仁堂药店购得的中药叶下珠:黄芪：白术:防风:斑种草:夏至草配比比例为3: 1:1:1:1:1制成散剂后，再按质量比1:100与基础饲粮混合均匀，进行仔猪体内试验。
[0020] 表1基础饲粮组成及营养水平(风干基础）
[0021]
[0022] 40头健康普通级"杜X大X长"三元杂交断奶仔猪，50日龄，购自南京农业大学江 浦试验猪场。适应环境后随机分为4组，每组10头，公母各半。空白组和PCV2组饲喂不添加中 药复方的基础日粮、预防组和药物对照组饲喂添加1 %中药复方的基础日粮2周后，饲喂不 添加中药复方的基础日粮。于试验的第三周第Id PCV2组和预防组以107TCID5Q/mL的PCV2AH 株攻毒，每头颈部肌肉注射2.OmL，同时滴鼻2.OmL 1次，然后隔离饲养。试验总周期为4周。
[0023] 分别于试验的第Id和最后Id早上8:00空腹称重，根据初重和末重计算平均日增 重。平均日增重=头均净增重/试验天数。记录仔猪的采食量，计算日均采食量，试验结束后 计算料重比。料重比=日均采食量/平均日增重。结果发现，PCV2组的平均日增重为 434.22g，预防组的平均日增重为537.79g，两者差异极显著，空白组的平均日增重为 527.24g，药物对照组的平均日增重为558.35 g(3PCV2组的日均采食量为835.72g，预防组的 日均采食量为960.71g，两者差异极显著，空白组的日均采食量为956.75g，药物对照组的日 均采食量为1088. lOgJCV〗组的料重比为1.92,预防组的料重比为1.79,空白组的料重比为 1.81，药物对照组的料重比1.95。实验表明，该中药复方可以大幅提升仔猪的日增重，对饲 料的适口性没有任何影响，采食量的增加与仔猪消化能力的提高有关。同时料重比下降，说 明动物生长性能明显改善，营养状态良好。
[0024] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，酶联免疫吸附法检测血清中PCV2的抗体 水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果发现，PCV2组的PCV2抗体水平0D值为0.276，预防组 的PCV2抗体水平0D值为0.397，两者差异极显著，空白组的PCV2抗体水平0D值为0.064，药物 对照组的PCV2抗体水平0D值为0.089 JCV2组的血清SOD含量为8.24ng/mL，预防组的SOD含 量为11.35ng/mL，两者差异极显著，空白组的SOD含量为9.82ng/mL，药物对照组的SOD含量 为10.70ng/mL。实验表明，该中药复方可以大幅上调仔猪PCV2的抗体水平，特异性的中和、 消灭PCV2病原，从而增强机体免疫功能，预防疫病的发生。SOD水平可反应出机体细胞受自 由基攻击的严重程度和机体清除自由基的能力，该中药复方可以减少过氧化作用的发生， 通过抑制肌肉的脂质氧化，参与调控胴体品质和肉质风味。
[0025]试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，血液分析仪测定机体红细胞(RBC)和血 红蛋白（HGB)含量，全自动生化分析仪检测血液尿素(UREA)水平。结果发现，PCV2组的RBC含 量为4.9110 12/L，预防组的RBC含量为5.961012/L，两者差异极显著，空白组的RBC含量为 5.2810 12/L，药物对照组的RBC含量为5.701012/Ι^Ρ(：ν2组的血清HGB含量为94g/L，预防组的 HGB含量为114g/L，两者差异极显著，空白组的HGB含量为103g/L，药物对照组的HGB含量为 lOgg/LlCV〗组的血清尿素水平为3.75mmol/L，预防组的尿素水平为2.86mmol/L，两者差异 极显著，空白组的尿素水平为3.16mmol/L，药物对照组的尿素水平为2.94mmol/L。实验表 明，该中药方剂能显著上调仔猪红细胞数量，提高血红蛋白含量，改善机体贫血状态，增强 动物体质。同时降低机体的尿素水平，这意味着蛋白质沉积增加，氨基酸平衡理想，加快了 新陈代谢的速度，促进生长发育。
[0026] 实施例2
[0027] 取同仁堂药店购得的中药叶下珠:黄芪：白术:防风:斑种草:夏至草配比比例为3: 1:1:1:1:1制成散剂后，加10倍蒸馏水于圆底烧瓶中，浸泡lh后加热回流lh，趁热用纱布过 滤。药渣再分别加8倍水和6倍水加热回流lh。合并3次滤液，减压浓缩生成药浓度为lg/mL的 药液，进行仔猪体内试验。
[0028] 40头健康普通级"杜X大X长"三元杂交断奶仔猪，50日龄，购自南京农业大学江 浦试验猪场。适应环境后随机分为4组，每组10头，公母各半。空白组和PCV2组不进行颈部肌 肉注射该中药复方液、PCV2组和治疗组以107TCID5Q/mL的PCV2AH株攻毒，每头颈部肌肉注射 2.OmL，同时滴鼻2.0mL，l次，然后隔离饲养2周。于试验的第三周第Id治疗组和药物对照组 肌肉注射该中药复方液每天1次，每次2. OmL，持续2周。试验总周期为4周。
[0029] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，实时荧光定量PT-PCR法检测血清中PCV2 的抗原含量。结果发现，PCV2组的抗原含量为6.25(lg)AxL，治疗组的抗原含量为4.97(lg)/ yL，两者差异极显著，空白组和药物对照组的PCV2抗原均未检测到。实验表明，该中药方剂 能显著降低机体内的病毒含量，抑制病毒血症的产生，具有明显的抗PCV2病毒作用。
[0030] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，全自动生化分析仪检测机体中IgG、IgM、 白蛋白（ALB)和球蛋白（GL0)的水平。结果发现PCV2组的IgG水平为1.47mg/mL，治疗组的IgG 水平为1 · 86mg/mL，两者差异极显著，空白组的IgG水平为1 · 55mg/mL，药物对照组的IgG水平 为1 · 71π^/πιΙ^Ρ(：ν2组的IgM水平为0 · 58mg/mL，治疗组的IgM水平为0 · 97mg/mL，两者差异极 显著，空白组的IgM水平为0 · 66mg/mL，药物对照组的IgM水平为0 · TTmg/mUPCV〗组的血清 ALB含量为30.2g/L，治疗组的ALB含量为36.8g/L，两者差异显著，空白组的ALB含量为 34 · 6g/L，药物对照组的ALB含量为35 · 28/11(^2组的血清GL0含量为29 · 2g/L，治疗组的GL0 含量为39.6g/L，两者差异极显著，空白组的GL0含量为36.2g/L，药物对照组的GL0含量为 38.lg/L。实验表明，该中药方剂能大幅上调仔猪血清中IgG的水平，从而提高防病抗病能 力。同时还能显著提高IgM水平，影响体液免疫反应。白蛋白作为一种贮存蛋白质，可随时修 补组织和提供能量。该中药方剂能显著上调ALB水平，增加机体肝脏代谢功能。同时还能显 著提高GLO水平，增强机体免疫功能。
[0031 ]试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉米血，酶联免疫吸附法检测血清中IL_4、IL-10、IL-2和IFN- γ的含量。结果发现，PCV2组的IL-4含量为108.07pg/mL，治疗组的IL-4含量 为85.15pg/mL，两者差异极显著，空白组的E-4含量为81.39pg/mL，药物对照组的E-4含量 为 82 · 66ρ8/πιΙ^Ρ(：ν2 组的 IL-10 含量为 162 · 34pg/mL，治疗组的 IL-10 含量为 133 · 31pg/mL，两 者差异极显著，空白组的IL-10含量为125.20pg/mL，药物对照组的IL-10含量为123.09pg/ πιΙ^Ρ(：ν2组的IL-2含量为281.00pg/mL，治疗组的IL-2含量为317.39pg/mL，两者差异极显 著，空白组的IL-2含量为251.83pg/mL，药物对照组的IL-2含量为266·56ρ 8/πιΙ^Ρ(：ν2组的 IFN- γ含量为193.16pg/mL，治疗组的IFN- γ含量为242.56pg/mL，两者差异极显著，空白组 的IFN- γ含量为173 · 89pg/mL，药物对照组的IFN- γ含量为180 · 52pg/mL。实验表明，该中药 方剂能显著下调IL-4和IL-10水平，减弱静止性ThO细胞向Th2方向分化，抑制Th2效应，从而 解除机体免疫耐受情况；同时该中药方剂能显著上调IL-2和IFN-γ水平，促进静止性ThO细 胞向Thl方向分化，增强Thl效应，从而改善机体免疫抑制状态。
[0032]尽管本发明是参照具体实施例来描述，但这种描述并不意味着对本发明构成限 制。参照本发明的描述，所公开的实施例的其他变化，对于本领域技术人员都是可以预料 的，这种的变化应属于所属权利要求所限定的范围内。
【主权项】
1. 一种防治猪圆环病毒病的中草药复方，其特征在于，所述中草药复方由叶下珠、黄 芪、白术、防风、斑种草、夏至草组成，所述叶下珠、黄芪、白术、防风、斑种草和夏至草的质量 配比比例为2. 根据权利要求1所述的一种防治猪圆环病毒病的中草药复方，其特征在于，所述中草 药复方为散剂。3. -种如权利要求1所述的防治猪圆环病毒病的中草药复方的制备方法，其特征在于， 所述中草药复方为药液，其工艺步骤为:将叶下珠、黄芪、白术、防风、斑种草和夏至草按所 述配比比例制成散剂后，将其加10倍体积蒸馏水于容器内，浸泡lh后加热回流lh，趁热用纱 布过滤得一次药渣，所述一次药渣再加8倍体积水加热回流lh后趁热用纱布过滤得二次药 渣，所述二次药渣加6倍体积水加热回流lh后趁热用纱布过滤得三次药渣，合并上述三次药 渣对应的三次滤液，减压浓缩成生药浓度为lg/mL的药液。4. 一种如权利要求2所述的防治猪圆环病毒病的中草药复方作为饲料添加剂的应用， 其特征在于，具体步骤为:将所述中草药复方散剂以质量比1:100与猪基础饲料混合均匀即 可。5. -种如权利要求3所述的防治猪圆环病毒病的中草药复方作为注射剂的应用，其特 征在于，具体步骤为:将所述中药复方药液对猪进行肌肉注射，每天一次，每次2ml，持续2周 即可。
【文档编号】A61P31/20GK106038684SQ201610488456
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月28日
【发明人】胡屹屹, 茅爱华, 何孔旺, 温立斌, 倪艳秀, 刘传敏, 肖琦
【申请人】江苏省农业科学院