一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物及其制备方法，属于中药领域。林蛙油50～70份、五味子450～550份、葡萄籽200～280份。本发明为中药制剂，无毒副作用。近年来，运用中医理论治疗亚健康提高免疫力引起了众多医家的重视，本发明具有抗疲劳、增强免疫力、治疗亚健康的功能。药效学实验结果表明，五林强力胶囊能延长小鼠负重游泳时间，显著抑制小鼠游泳后尿素氮水平的升高和小鼠耳廓肿胀程度，增加肝糖原的储备，明显增大体内碳廓清吞噬指数，从而提高对单核巨噬细胞的吞噬功能增加，增强小鼠迟发型变态反应，提高机体非特异性免疫机能的作用。制成胶囊剂生产工艺简单，生产效率高，使用及携带方便，具有很好的市场前景。
【专利说明】
一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药领域，尤其是指一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物及其制 备方法。
【背景技术】
[0002] 亚健康的主要特征包括:身心上不适应的感觉所反映出来的种种症状，如疲劳、虚 弱、情绪改变等，其状况在相当时期内难以明确;与年龄不相适应的组织结构或生理功能减 退所致的各种虚弱表现;微生态失衡状态;某些疾病的病前生理病理学改变。临床表现多种 多样，躯体方面可表现为疲乏无力、肌肉及关节酸痛、头昏头痛、心悸胸闷、睡眠紊乱、食欲 不振、脘腹不适、便溏便秘、性功能减退、怕冷怕热、易于感冒、眼部干涩等；心理方面可表现 有情绪低落、心烦意乱、焦躁不安、急躁易怒、恐惧胆怯、记忆力下降、注意力不能集中、精力 不足、反应迟钝等。
[0003] 免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细 菌等），处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞，以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染 细胞的能力，是人体识别和排除"异己"的生理反应。免疫力低下的身体易于被感染或患癌 症;免疫力超常也会产生对身体有害的结果，如引发过敏反应、自身免疫疾病等。
[0004] 《本草纲目》记载:哈士蟆，《本草纲目》中称之〃山哈〃，别名哈士蟆、雪蛤。现今被命 名为中国林蛙。主要产于中国东北的长白山区，是东北地区特有的蛙种，其雌蛙输卵管的干 燥物称之为"雪蛤油"，具有补虚润肺、强身健体的功效，自古在民间就被誉为与东北三宝齐 名的传世滋补佳品。千百年来广为人们应用，其药理作用亦早已为人所知。
[0005]林蛙油的主要成分是蛙醇，具有"补肾益精，养阴润肺"的功效。《中国药典》收载： 蛤蟆油具有"补肾益精，养阴润肺"之功效。用于"阴虚体弱，神疲乏力、心悸失眠、盗汗不止、 劳嗍咳血"等正的治疗。
[0006] 《中药大词典》记载:蛤蟆油具有独特的"补肾益精、润肺养阴"之功效。用于治疗 "病后、产后虚弱、肺痨咳嗽吐血、盗汗"等症。
[0007] 《中国药物学》记载:蛤蟆油是"润肺、生津、补虚的身体增强剂，是身体衰弱的滋补 佳品"。
[0008] 经专家考证:吉林省长白山区域出产的中国林蛙药用历史悠久，宋代苏颂的《本草 图经》和明代李时珍的《本草纲目》对此均有记载；明清时期，以其为原动物加工制成的道地 蛤蟆油药材就已成为名贵滋补珍品，受到医学专家推崇;清明时期，道地蛤蟆油药材更被誉 为"八珍之首"，并作为"上等宫廷贡品"共达官贵人享用。
[0009] 近些年，道地蛤蟆油药材以特有的历史文化内涵和极高的营养药用价值，被赞为 "东北新三宝"之一。
[0010] 五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz · )Baill ·或华中五味 子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实。前者习称〃北五味子〃，后者 习称"南五味子"。秋季果实成熟时采摘，晒干或蒸后晒干，除去果梗及杂质。唐等《新修本 草》载〃五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味〃，故有五味子之名。五味子分为南、北二种。古医 书称它室藉、玄及、会及，最早列于神农本草经上品中药，能滋补强壮之力，药用价值极高， 有强身健体之效，与琼珍灵芝合用治疗失眠。本品处方中所用药材为北五味子。
[0011]葡萄籽是葡萄酒厂的下脚料，经晒干后分离葡萄皮、葡萄梗后所得产物。葡萄籽含 有丰富各种氨基酸、维生素及矿物质等。葡萄籽油因其具有保健、美容之功效。
[0012]葡萄籽提取物0PC具有超强抗氧化能力，是维他命E的50倍，能延缓老化，预防动脉 硬化，也有皮肤维他命之称，是维他命C的20倍，其中的酚花青素，据脂溶性及水溶性的特 质，有美白作用
[0013] 研究发现，葡萄籽提取物具有清除自由基、抗氧化、抗前列腺癌、抗肝脏肿瘤的作 用，还可以对抗神经系统的损伤。
【发明内容】
[0014] 本发明提供一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物及其制备方法。
[0015] 本发明药物各组分用量也是经发明人进行大量摸索总结得出，各组分用量在下述 重量范围内都具较好疗效：
[0016] 林蛙油50~70份、五味子450~550份、葡萄籽200~280份；
[0017]优选的：
[0018] 林硅油60份、五味子500份、葡萄轩240份；
[0019] 本发明药物可以采用中药制剂的常规方法制备成任何常规制剂。优选的本发明药 物活性组分的制备方法如下：
[0020] 五味子和葡萄籽分别酌予碎断，五味子用70%~80%乙醇回流提取2~3次，每次1 ~3小时，加醇量为7~9倍，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压条件下，浓缩至80°C时 测相对密度1.30~1.35的稠膏，葡萄籽加7~9倍药材量水煎煮3~5次，每次1~3小时，合并 煎液，滤过，滤液减压浓缩至80°C时测相至密度1.30~1.35的稠膏，合并两种稠膏，加入微 晶纤维素适量混匀，减压干燥，粉碎成细粉;林蛙油，加入蒸馏水，在10~15°C温度下放置过 夜，使林蛙油将水完全吸净充分膨胀;加入微晶纤维素混合均匀成软材，冷冻干燥，粉碎成 细粉。
[0021] 优选的：
[0022] 五味子和葡萄籽分别酌予碎断，五味子用75%乙醇回流提取2次，每次2小时，加醇 量为8倍，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压条件下，浓缩至80°C时测相对密度1.30~ 1.35的稠膏。葡萄籽加8倍药材量水煎煮4次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至 相至80°C时测密度1.30~1.35的稠膏，合并两种稠膏，加入微晶纤维素适量混匀，减压干 燥，粉碎成细粉。林蛙油，加入蒸馏水，在10~15 °C温度下放置过夜，使林蛙油将水完全吸净 充分膨胀;加入微晶纤维素混合均匀成软材，冷冻干燥，粉碎成细粉。
[0023]本发明的优选剂型是胶囊剂。
[0024]本发明为中药制剂，无毒副作用。近年来，运用中医理论治疗亚健康提高免疫力引 起了众多医家的重视，本发明具有抗疲劳、增强免疫力、治疗亚健康的功能。药效学实验结 果表明，五林强力胶囊能延长小鼠负重游泳时间，显著抑制小鼠游泳后尿素氮水平的升高 和小鼠耳廓肿胀程度，增加肝糖原的储备，明显增大体内碳廓清吞噬指数，从而提高对单核 巨噬细胞的吞噬功能增加，增强小鼠迟发型变态反应，提高机体非特异性免疫机能的作用。
[0025] 本发明制成胶囊剂生产工艺简单，生产效率高，使用及携带方便，具有很好的市场 前景。
【具体实施方式】
[0026] 实施例1
[0027] 林蛙油125g、五味子1125g、葡萄籽500g;
[0028] 五味子和葡萄籽分别酌予碎断，五味子用70%乙醇回流提取2次，每次3小时，加醇 量为7倍，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压条件下，浓缩至80°C时测相对密度1.30的 稠膏，葡萄籽加7倍药材量水煎煮3次，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至80°C时 测相至密度1.30的稠膏，合并两种稠膏，加入微晶纤维素适量混匀，减压干燥，粉碎成细粉； 林蛙油，加入蒸馏水，在l〇°C温度下放置过夜，使林蛙油将水完全吸净充分膨胀;加入微晶 纤维素混合均匀成软材，冷冻干燥，粉碎成细粉;制粒，加入辅料适量，混匀，装胶囊，制成胶 囊1000粒，即得。
[0029] 实施例2
[0030] 林蛙油150g、五味子1250g、葡萄籽600g;
[0031] 五味子和葡萄籽分别酌予碎断，五味子用75%乙醇回流提取2次，每次2小时，加醇 量为8倍，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压条件下，浓缩至80°C时测相对密度1.33的 稠膏。葡萄籽加8倍药材量水煎煮4次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相至80 °(：时测密度1.33的稠膏，合并两种稠膏，加入微晶纤维素适量混匀，减压干燥，粉碎成细粉。 林蛙油，加入蒸馏水，在13°C温度下放置过夜，使林蛙油将水完全吸净充分膨胀;加入微晶 纤维素混合均匀成软材，冷冻干燥，粉碎成细粉，制粒，加入辅料适量，混匀，装胶囊，制成胶 囊1000粒，即得。
[0032] 实施例3
[0033] 林蛙油175g、五味子1375g、葡萄籽700g;
[0034] 五味子和葡萄籽分别酌予碎断，五味子用80%乙醇回流提取3次，每次1小时，加醇 量为9倍，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压条件下，浓缩至80°C时测相对密度1.35的 稠膏，葡萄籽加9倍药材量水煎煮5次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至80°C时 测相至密度1.35的稠膏，合并两种稠膏，加入微晶纤维素适量混匀，减压干燥，粉碎成细粉； 林蛙油，加入蒸馏水，在15°C温度下放置过夜，使林蛙油将水完全吸净充分膨胀;加入微晶 纤维素混合均匀成软材，冷冻干燥，粉碎成细粉，制粒，加入辅料适量，混匀，装胶囊，制成胶 囊1000粒，即得。
[0035]实验例1提取方法优选 [0036] 五味子的提取方法：
[0037]由于五味子中的主要成分为木质素类，因此采用乙醇回流提取的方法。参考文献 方法，五味子用75%乙醇回流提取2次，每次2小时，加醇量为8倍，合并提取液，滤过，滤液回 收乙醇并减压条件下，浓缩至相对密度1.30~1.35(80°C)的稠膏，备用。
[0038]葡萄籽的提取方法
[0039]葡萄籽中以水溶性成分为主，因此采用水煎的方法提取，参考文献方法，葡萄籽加 8倍药材量水煎煮4次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相至密度1.30~1.35 (80°C)的稠膏，备用
[0040]林蛙油的粉碎方法
[0041 ]林蛙油干燥后，由于含有脂肪和磷脂，已及组织纤维，不易直接粉碎，因此采用水 润湿后，使其充分膨胀，然后，冷冻干燥，去除水分，使组织膨化，然后粉碎。使得粉碎容易， 易于制剂。
[0042]浓缩工艺方法 [0043]浓缩：
[0044]回收乙醇采用减压蒸发。乙醇减压回收浓缩时，在60~70°C，压力为0.08~O.lmpa 时蒸发较快，且不爆沸。稠膏干燥前的相对密度，80~85°C测定，为1.30~1.35。
[0045] 干燥方式的选择：
[0046] 曾采用常压干燥及减压干燥两种方法将中间体稠浸膏干燥，常压下干燥的干膏较 坚硬，难粉碎，且费时长，而减压干燥则可克服上述缺点，故选择减压干燥。为了使干膏易于 粉碎，适当添加微晶纤维素。
[0047]干燥条件的选择：
[0048] 经多次试验，我们发现温度为60~70°C，压力为O.OSmpa时干燥效果好。温度低时， 水分不易散失，干燥效果差;温度高，易出现糊化现象。压力低，水分不易散失，干燥效果差。
[0049] 实验例2制剂成型工艺的研究
[0050] 剂型的选择
[0051] 因本品粉末味道微苦涩，制成胶囊剂可以掩盖其苦涩味，故设计制成胶囊剂型。除 了可掩盖不良味道外，因胶囊剂生物利用度较片剂高，它制备时不加粘合剂和压力，易于制 备，且在胃肠内崩解快，一般服后30分钟左右即可崩解释放药物，显效较丸、片剂快，吸收 好。另外，胶囊剂还可提高药物的稳定性，并具有储运、携带、服用方便等特点。基于以上原 因，将本品制成胶囊剂。
[0052] 将制得的成品胶囊于室温放置，观察稳定性，结果各项指标均符合规定。
[0053]实验例3药效学实验研究
[0054]目的:观察本发明药物、以下简称五林强力胶囊的抗疲劳、提高免疫力的功能。 [0055]五林强力胶囊由实施例2制成，具有抗疲劳、提高免疫力等功能。为验证其疗效，我 们对五林强力胶囊进行了主要药理作用实验研究。现将结果报告如下。
[0056] 1.试验材料 [0057] 1.1试验动物：
[0058]昆明种小白鼠，体重18~22g，雄性。动物均购自长春生物制品研究所有限责任公 司。动物合格证号:SCXK(吉)-2011-0003。
[0059] 1.2试验药物：
[0060] (1)五林强力胶囊：规格0 · 45g/粒，吉林省中医药科学院提供，批号：20140509，实 验时用蒸馏水配成所需浓度供灌胃给药；
[0061 ] (2)生理盐水山东鲁抗辰欣药业有限公司，批号：20140129;
[0062] (3)蒽酮上海依赫生物科技有限公司，批号:20140203;
[0063] (4)98%浓硫酸广西玉林宏宇化工有限公司，批号：20131210;
[0064] (5)血乳酸试剂盒广州鸿泉生物有限公司批号:20140312;
[0065] (6)绵羊红细胞(SRBC)广州鸿泉生物有限公司批号:20140415;
[0066] (7)二硝基氟苯上海将来实业股份有限公司批号:20140518;
[0067] (8)鸡红细胞广州鸿泉生物有限公司批号:20140420;
[0068] 1.3实验仪器
[0069] (1)游泳箱（大小5〇cmX5〇cmX40cm);
[0070] (2)千分之一天平FA1604B上海越平科学仪器有限公司；
[0071] (3)721型分光光度计上海分析仪器厂；
[0072] (4)离心机北京时代北利离心机有限公司；
[0073] (5)匀浆器北京明阳科华生物科技有限公司；
[0074] (6)数显游标卡尺上海塞拓五金工具有限公司；
[0075] 2.试验方法与结果
[0076] 2.1小鼠负重游泳实验
[0077]昆明种小鼠60只，雄性，体重18_22g。适应性喂养3天，随机分成四组，即空白对照 组、五林强力胶囊0.88/1^、0.48/1^、0.28/1^。五林强力胶囊各剂量组每日灌胃一次，连续 给药30天，空白对照组给予同体积生理盐水，末次给药30min后，将鼠尾根部负荷5%体重铅 皮，后置于游泳箱中游泳，水深不少于30cm，水温24°C，小鼠自游泳开始至死亡时间，即小鼠 负重游泳时间。结果见表1。
[0078] 表1五林强力胶囊对小鼠负重游泳时间的影响(X 土S)
[0079]
[0080] 注：※表示与空白对照组比较，P〈0 · 05。
[0081]由表1结果表明，五林强力胶囊各剂量组与空白对照组相比部分能延长小鼠负重 游泳时间，五林强力胶囊〇.8g/kg剂量组与空白对照组相比有显著性(P〈0.05)，五林强力胶 囊0.4g/kg、0.2g/kg剂量组与空白对照组比较无显著性(P>0.05)，说明五林强力胶囊0.8g/ kg剂量组能延长小鼠负重游泳时间，具有抗疲劳功能。
[0082] 2.2血清尿素氮的测定
[0083]昆明种小鼠75只，雄性，体重18-22g。适应性喂养3天，随机分成四组，即空白对照 组、模型组、五林强力胶囊0.88/1^、0.48/1^、0.28/1^剂量组。五林强力胶囊各剂量组每日 灌胃一次，连续给药30天，空白对照组、模型组给予同体积生理盐水，末次给药30min后，除 空白对照组外，其余动物在温度为30 °C的水中不负重游泳90min后，休息60min，所有动物拔 眼球采全血0.5mL，取血清，测尿素氮含量。结果见表2。
[0084]表2五林强力胶囊对小鼠游泳后血清尿素氮的影响(X 土S)
[0085]
[0086] 注:※表示与空白对照组比较，P〈0.01; ▲表示与模型组比较，P〈0.05。
[0087] 由表2结果表明，模型组尿素氮水平与空白对照组比较，均明显高于空白对照组， 有高度显著性(P〈〇.01)，说明造模型成功;五林强力胶囊0.8g/kg、0.4g/kg剂量组与模型组 相比有显著性(P〈〇.05)，五林强力胶囊高、中剂量组有抑制小鼠游泳后尿素氮水平升高的 作用。
[0088] 2.3肝糖原的测定
[0089] 上述动物处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，用蒽 酮法测肝糖原的含量。结果见表3。
[0090] 表3五林强力胶囊对小鼠游泳后肝糖原消耗量的影响(Z 土S)
[0091]
[0092] 注：※表示与空白对照组比较，P〈0 · 05。
[0093]由表3结果表明，五林强力胶囊0.8g/kg剂量组与空白对照组相比差异显著（P〈 0.05);0.4g/kg、0.2g/kg剂量组无显著性(P>0.05)，说明五林强力胶囊0.8g/kg剂量组有增 加肝糖原储备的作用。
[0094] 2.4血乳酸的测定
[0095]昆明种小鼠75只，雄性，体重18-22g。适应性喂养3天，随机分成四组，即空白对照 组、五林强力胶囊0 · 8g/kg、0 · 4g/kg、0 · 2g/kg剂量组。五林强力胶囊各剂量组每日灌胃一 次，连续给药30天，空白对照组给予同体积生理盐水，末次给药30min后，在温度为30°C的水 中不负重游泳lOmin,在游泳前，游泳lOmin后立即和游泳休息30min后采血各20uL，用血乳 酸试剂盒测定血乳酸含量。结果见表4。
[0096]表4五林强力胶囊对小鼠游泳后血乳酸升高值的影响(X ±S)
[0097]
[0098] 注：※表示与空白对照组比较，P〈0.05。
[0099]由表4结果表明，模型组与空白对照组相比有显著性(P〈 0.0 5 )，表明造模成功，五 林强力胶囊各剂量组与模型组相比，血乳酸含量下降，但差异无显著性(P>〇.05)。
[0100] 2.5小鼠碳粒廓清实验
[0101]取18-22g小鼠60只，随机分成四组，空白对照组、五林强力强力胶囊组0.8g/kg、 0.4g/kg、0.2g/kg剂量组。五林强力胶囊各剂量组每日灌胃一次，连续给药10天，空白对照 组给予同体积生理盐水，于末次给药后24小时，尾静脉注射印度墨汁0.1mL/10g，注射后 lmin，5min用吸管分别从眶后静脉丛取血20ul，0.1 %Na2C03溶液中摇匀，置721型分光光度 计在波长600~680nm下比色，测定光密度(0D)。最后将小鼠颈椎脱臼处死，分别称取肝、脾 重量。计算K值、α值。结果见表5。
[0102]
[0103] 表5五林强力胶囊对小鼠体内碳粒廓清功能的影响(X 土S)
[0104]
[0105] 注:※表示与空白对照组比较，Ρ〈0.05;※※表示与空白对照组比较，Ρ〈0.01。 [0106]由表5结果显示，五林强力胶囊0.8g/kg剂量组Κ值与空白对照组相比有显著性(Ρ〈 0.05); 0.8g/kg剂量组吞噬指数α值明显高于对照组，有高度显著性(ρ〈0 . 〇1)，〇 . 4g/kg、 0.2g/kg剂量组也高于对照组，但无显著性(P>0.05)，五林强力胶囊0.8g/kg剂量组可明显 提高对单核巨噬细胞的吞噬功能，增加机体免疫力。
[0107] 2.6绵羊红细胞(51^〇诱导小鼠01'!1(足拓增厚法）
[0108] 取18-22g小鼠60只，适应性喂养3天，随机分成四组，空白对照组、五林强力强力胶 囊0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg剂量组。五林强力胶囊各剂量组每日灌胃一次，连续给药30 天，于给药第26d，小鼠腹腔注射2 % SRBC(0.2g/每鼠）致敏后4d，测量左后足跖厚度，然后在 测量部位下注射20%SRBC(20ul/每鼠），于注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量 三次，取平均值。结果见表6。
[0109] 表6五林强力胶囊对小鼠迟发型变态反应的影响(X 土S)
[0110]
[0111] 注：※表示与空白对照组比较，P〈〇. 05。
[0?12]由表六结果可见，五林强力胶囊0.8g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg剂量组均足妬肿胀度 明显高于空白对照组，但只有〇.8g/kg剂量组差异有显著性(P〈0.05)，0.4g/kg、0.2g/kg剂 量组无显著性(P>〇. 05)，五林强力胶囊0.8g/kg剂量组可明显提高对单核巨噬细胞的吞噬 功能。
[0113] 2.7二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验
[0114] 取雄性小鼠60只，随机分为四组，空白对照组，五林强力强力胶囊0.8g/kg、0.4g/ kg、0.2g/kg剂量组，每天给药一次，连续给药30天，末次给药后，每鼠腹部涂50ul二硝基氟 苯溶液(涂皮前24h脱毛，面积约3cm X 3cm)。5天后用二硝基氟苯溶液10ul涂抹于小鼠右耳 进行攻击，24h后处死动物，剪下耳壳，用打孔器取下直径8_的耳片，称重。结果见表7。
[0115] 表7五林强力胶囊对小鼠二硝基氟苯耳廓肿胀的影响(X 土S)
[0116]
[0117] 注:※※表示与空白对照组比较，P〈0.01。
[0118] 由表7结果表明，五林强力胶囊0.8g/kg、0.4g/kg剂量组与空白对照组相比有高度 显著性(P〈0.01)，明显能抑制小鼠耳廓肿胀作用。
[0119] 2 · 8小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法）
[0120] 取雄性小鼠60只，随机分为四组，空白对照组，五林强力胶囊0.8g/kg、0.4g/kg、 0.2g/kg剂量组，每天给药一次，连续给药30天，动物处死前40min，每鼠腹腔内注射20 % (v/ v)鸡红细胞悬液lml，处死后再注入2ml生理盐水，取腹腔液滴片，37°C温箱孵育30min，固 定，染色，镜检，计数100个，计算吞噬率及吞噬指数。结果见表8。
[0121] 表8五林强力胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬巨红细胞的影响? 士S)
[0122]
[0123] ~由表8结果表明，五林强力胶囊各剂量组对吞噬率无显著性(Ρ>0.05)，无统计学意, 义。
[0124] 3.结论
[0125] 1、五林强力胶囊能延长小鼠负重游泳时间，能抑制小鼠游泳后血清尿素氮水平的 升高，能增加肝糖原的储备，说明五林强力胶囊具有抗疲劳功能。
[0126] 2、五林强力胶囊显著增大体内碳粒廓清吞噬指数，增强腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细 胞的能力，抑制小鼠耳廓肿胀程度，增强了细胞的免疫功能，增加足跖厚度，提高绵羊红细 胞诱导的小鼠迟发型变态反应能力，具有增强细胞免疫功能的作用。
[0127] 上述实验结果证明了五林强力胶囊具有治疗亚健康、抗疲劳、增强免疫力的功能。
[0128] 实验例4五林强力胶囊急性毒性试验
[0129] 摘要:给小鼠灌胃30%五林强力胶囊提取物混悬液20ml/kg，24小时内给药3次，次 间隔8小时，单次给药剂量5.5g/kg，日剂量为16.5g/kg，14日内小鼠饮食、活动、粪便、皮毛 光泽度均正常，鼻、眼、口腔无异常分泌物，无毒性反应，无死亡。处死，解剖肉眼观察心、肝、 脾、肺、肾均无明显改变。相当于临床剂量的213倍，表明五林强力胶囊灌胃后毒性很低。
[0130] 实验材料
[0131 ]药物:五林强力胶囊，黄色粉末内容物，依本发明实施例2方法制备，人体推荐摄入 量标示量为 1 · 8g/日，即 1 · 8g/70kg = 0 · 025g/kg。
[0132] 配制方法：取五林强力胶囊内容物12g，加0.5 % CMC-Na研匀并稀释至30m 1，制成 30%最大浓度的混悬液，现用现配。
[0133] 动物昆明种小鼠，40只，体重18~20g，雌雄各半。由长春生物制品研究所有限责任 公司提供，合格证号:SCXK (吉)-2011 -0003.
[0134] 统计学方法:计量资料以均数土标准差(.X 土s)表示。
[0135] 方法与结果
[0136] 取小鼠40只（雌雄各半），随机分为2组，每组20只（雌雄各半），第一组为溶媒对照 组，第二组为五林强力胶囊给药组。禁食不禁水12小时，第一组灌胃0.5%CMC-Na，第二组灌 胃30%五林强力胶囊胶囊混悬液，按0.4ml/10g体重灌胃，一日内连续给药3次。观察14日内 小鼠饮食、活动、粪便、皮毛光泽度、存亡动物数，以及鼻、眼、口腔是否有异常分泌物等情 况。处死，解剖肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器的变化。
[0137] 表9.五林强力胶囊急性毒性实验14日内体重情况(i ±s,n = 10)
[0138]
[0139] 由表9可见，与溶媒对照组比较，五林强力胶囊给药组于给药后第1日至第14日小 鼠体重呈增长趋势，与溶媒对照组比较无显著性差异。
[0140]表10.五林强力胶囊胶囊急性毒性试验14日内一般行为观察
[0141]
[0142] 由表10结果可见，与溶媒对照组比较，小鼠灌胃五林强力胶囊后，动物一般行为与 溶媒对照组无明显区别。动物14日内饮食、活动、粪便、皮毛光泽度均正常，无死亡。
[0143] 表11.五林强力胶囊急性毒性实验14日内一般指标观察
[0144]
[0145] 由表11可见，14日内小鼠鼻、眼、口腔无异常分泌物，无毒性反应。处死，解剖肉眼 观察心、肝、脾、肺、肾均无明显改变。
[0146] 结论
[0147]实验结果表明，给小鼠灌胃30%的五林强力胶囊胶囊混悬液，体积为0.4ml/10g， 14日内小鼠体重增长趋势与溶媒对照组比较无显著性差异。小鼠饮食、活动、粪便、皮毛光 泽度均正常，鼻、眼、口腔无异常分泌物，无毒性反应，无死亡。处死，解剖肉眼观察心、肝、 脾、肺、肾均无明显改变。按公斤体重计算分别相当临床(成年人按70公斤计算，人平均用药 量为1.8g/日，0.025g/kg)剂量的213倍，无明显毒性反应。表明五林强力胶囊灌胃后毒性很 低。
【主权项】
1. 一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物，其特征在于:是由下列重量份的原料制 成的 林硅油50~70份、五味子450~550份、葡萄轩200~280份。2. 根据权利要求1所述的一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物，其特征在于:是由 下列重量份的原料制成的 林硅油60份、五味子500份、葡萄籽240份。3. 如权利要求1或2所述的一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物的制备方法，其特 征在于:包括下列步骤： 五味子和葡萄籽分别酌予碎断，五味子用70%~80%乙醇回流提取2~3次，每次1~3 小时，加醇量为7~9倍，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压条件下，浓缩至80°C时测相 对密度1.30~1.35的稠膏，葡萄籽加7~9倍药材量水煎煮3~5次，每次1~3小时，合并煎 液，滤过，滤液减压浓缩至80°C时测相至密度1.30~1.35的稠膏，合并两种稠膏，加入微晶 纤维素适量混匀，减压干燥，粉碎成细粉;林蛙油，加入蒸馏水，在10~15°C温度下放置过 夜，使林蛙油将水完全吸净充分膨胀;加入微晶纤维素混合均匀成软材，冷冻干燥，粉碎成 细粉。4. 如权利要求3所述的一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物的制备方法，其特征 在于:包括下列步骤： 五味子和葡萄籽分别酌予碎断，五味子用75%乙醇回流提取2次，每次2小时，加醇量为 8倍，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压条件下，浓缩至80°C时测相对密度1.30~1.35 的稠膏。葡萄籽加8倍药材量水煎煮4次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相至 80°C时测密度1.30~1.35的稠膏，合并两种稠膏，加入微晶纤维素适量混匀，减压干燥，粉 碎成细粉。林蛙油，加入蒸馏水，在10~15°C温度下放置过夜，使林蛙油将水完全吸净充分 膨胀;加入微晶纤维素混合均匀成软材，冷冻干燥，粉碎成细粉。5. 如权利要求1或2所述的一种治疗亚健康提高免疫力的药物组合物的剂型是是胶囊 剂。
【文档编号】A61K36/79GK106038845SQ201610511762
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月1日
【发明人】李延忠, 李惠津, 牛志多
【申请人】吉林省中医药科学院