莲子心提取物在制备治疗肺纤维化药物的应用
【专利摘要】本发明公开了莲子心提取物在制备治疗肺纤维化药物的应用。本发明中所涉及中药莲子心为卫生部颁布的药食同源品种，实验证明：莲子心提取物能够明显抑制由TGF?β1诱导的HELF细胞增殖；显著降低博来霉素诱导的小鼠血清中TGF?β1的含量，抑制博来霉素诱导的小鼠肺脏中HYP、MDA的表达，显著改善博来霉素所致小鼠肺纤维化，对肺纤维化治疗具有确切的疗效。与现有的抗肺纤维化药物相比，安全无毒无副作用。
【专利说明】
莲子心提取物在制备治疗肺纤维化药物的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及药物领域，涉及一种莲子心提取物在制备治疗肺纤维化药物的应用。
【背景技术】
[0002] 特发性肺纤维化（IPF)是由多种诱因引起的肺部炎症反应、肺泡持续性损伤以及 胞外基质反复被破坏、修复、重建，从而导致基质过度沉积，最终造成肺组织结构的改变和 肺功能丧失的一类疾病。临床表现为干咳、进行性呼吸困难，经数月或数年逐渐恶化至衰竭 或死亡。
[0003] 近年来，全球范围IPF发病率呈现逐年上升态势。美国国立卫生研究院(NIH)网站 2012年6月公布的数据显示，美国IPF患者达到50万人，并且大约每年新增病人5万人，每年 有4万人死于该病。英国IPF患者约为13.2万~20万人，IPF发病率以每年约11 %的速度增 长。目前在欧洲有8~8.5万患者。在我国IPF发病率为5/10万每年，根据中华医学会呼吸病 分会间质病学组对我国十余家医院住院患者调查，IPF的患者同样呈现逐年增多的趋势。 IPF严重危害病人的生命和生活质量，该病具有病情急剧恶化、存活时间短、病死率高的特 点。患者随着病情的发展，肺功能逐渐下降以至于日益限制患者的日常活动，自确诊之日后 患者的平均存活时间通常是2~5年，5年生存率仅有20%。
[0004] 肺间质纤维化的形成中有炎症免疫反应参与，因此糖皮质激素和免疫抑制剂是传 统治疗肺纤维化的药物，它们可以抑制炎症反应和免疫过程，减轻肺泡炎症，从而延缓肺纤 维化的进程。然而最近研究发现，糖皮质激素仅对20 %的IPF患者有效，并且长期服用糖皮 质激素往往会合并肺部的细菌或真菌感染，存在明显的局部及全身副作用。免疫抑制剂经 常使用不仅存在潜在的严重副作用，而且对IPF治疗基本无效。随着我国中医药学的发展， 近年来发现许多中药单体成分或复方在肺纤维化治疗上具有显著的疗效，中药治疗肺纤维 化的方案得到广泛关注，因此从中药寻找新型的低毒高效抗肺纤维化药物成为药学研究的 重要课题。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服现有技术的不足，提供莲子心提取物在制备治疗肺纤维化药 物的应用。
[0006] 本发明的技术方案概述如下：
[0007] 莲子心提取物在制备治疗肺纤维化药物的应用。
[0008] 含莲子心提取物的制剂在制备治疗肺纤维化药物的应用。
[0009] 所述制剂的剂型为颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、口服液、泡腾片、分散 片、滴丸剂或糖浆剂。
[0010] 本发明的优点：本发明中所涉及中药莲子心为卫生部颁布的药食同源品种，实验 证明：莲子心提取物能够明显抑制由TGF-βΙ诱导的HELF细胞增殖；显著降低博来霉素诱导 的小鼠血清中TGF-βΙ的含量，抑制博来霉素诱导的小鼠肺脏中HYP、MDA的表达，显著改善博 来霉素所致小鼠肺纤维化，对肺纤维化治疗具有确切的疗效。与现有的抗肺纤维化药物相 比，安全无毒无副作用。
【附图说明】
[0011]图1为实施例6制备的莲子心提取物不同剂量灌胃给药对肺纤维化小鼠肺组织病 理影响(HE染色）
[0012] 其中A:正常对照组B:模型组C:阳性对照组D:高剂量组E:中剂量组F:低剂量组。
[0013] 图2为实施例6制备的莲子心提取物不同剂量灌胃给药对肺纤维化小鼠肺组织病 理影响（masson染色）
[0014] 其中A:正常对照组B:模型组C:阳性对照组D:高剂量组E:中剂量组F:低剂量组。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。下面实施例用于进一步说明本发 明但不限于本发明。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明范围。
[0016] 莲子心提取物，是用下述方法制成：
[0017] 1)莲子心药材粉碎；
[0018] 2)按重量比为1:8-10的比例，将粉碎后的莲子心用水或体积浓度为30 % -85 %的 乙醇水溶液加热回流提取2-4次，每次0.5-1.5小时，减压浓缩得浸膏，冷冻干燥，冻干粉为 莲子心提取物。
[0019] 上述浸膏的相对密度为1.30-1.35。
[0020] 实施例1
[0021]莲子心提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0022] 1)莲子心药材粉碎；
[0023] 2)将粉碎后的莲子心用水加热回流提取3次，每次1小时，合并滤液，减压浓缩得相 对密度为1.35的浸膏，冷冻干燥，冻干粉为莲子心提取物。
[0024] 3次提取，水为被提取物料的重量倍依次为10、8、8。
[0025] 实施例2
[0026]莲子心提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0027] 1)莲子心药材粉碎；
[0028] 2)将粉碎后的莲子心用体积浓度为30 %乙醇水溶液，加热回流提取4次，每次1小 时，合并滤液，减压浓缩得相对密度为1.30的浸膏，冷冻干燥，冻干粉为莲子心提取物。 [0029] 4次提取，30 %乙醇水溶液为被提取物料的重量倍依次为10、8、8、8。
[0030] 实施例3
[0031]莲子心提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0032] 1)莲子心药材粉碎；
[0033] 2)将粉碎后的莲子心用体积浓度为50%乙醇水溶液，加热回流提取4次，每次0.5 小时，合并滤液，减压浓缩得相对密度为1.30的浸膏，冷冻干燥，冻干粉为莲子心提取物。 [0034] 4次提取，50 %乙醇水溶液为被提取物料的重量倍依次为10、8、8、8。
[0035] 实施例4
[0036]莲子心提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0037] 1)莲子心药材粉碎；
[0038] 2)将粉碎后的莲子心用体积浓度为60 %乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1小 时，合并滤液，减压浓缩得相对密度为1.35的浸膏，冷冻干燥，冻干粉为莲子心提取物。 [0039] 3次提取，60 %乙醇水溶液为被提取物料的重量倍依次为10、8、8。
[0040] 实施例5
[0041] 莲子心提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0042] 1)莲子心药材粉碎；
[0043] 2)将粉碎后的莲子心用体积浓度为70 %乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次1小 时，合并滤液，减压浓缩得相对密度为1.32的浸膏，冷冻干燥，冻干粉为莲子心提取物。 [0044] 3次提取，70 %乙醇水溶液为被提取物料的重量倍依次为10、8、8。
[0045] 实施例6
[0046] 莲子心提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0047] 1)莲子心药材粉碎；
[0048] 2)将粉碎后的莲子心用体积浓度为85%乙醇水溶液，加热回流提取2次，每次1.5 小时，合并滤液，减压浓缩得相对密度为1.34的浸膏，冷冻干燥，冻干粉为莲子心提取物。 [0049] 2次提取，85 %乙醇水溶液为被提取物料的重量倍依次为8、8。
[0050] 实施例7
[00511将实施例1制备的莲子心提取物，加入适量糊精，混合均匀，加入体积浓度70%乙 醇水溶液少许，制成软材，过14目筛制粒，湿颗粒于60°C干燥，干颗粒过14目筛整粒，再过4 号筛筛取细粉，即得颗粒剂。
[0052] 实施例8
[0053] 将实施例2制备的莲子心提取物，加入适量乳糖，混匀，用体积浓度95 %乙醇水溶 液制粒，干燥，装入胶囊，制成硬胶囊剂。
[0054] 实施例9
[0055] 将实施例3制备的莲子心提取物，加入适量蜂蜜，混合均匀，制成丸剂。
[0056] 实施例10
[0057] 将实施例4制备的莲子心提取物，加入枸橼酸、碳酸氢钠、甜叶菊苷、木糖醇混匀， 用无水乙醇制粒，干燥，加入硬脂酸镁，混匀，压制成片，即得泡腾片。
[0058] 实施例11
[0059] 将实施例5制备的莲子心提取物，加入纤维素、微晶纤维素、碳酸氢钙混匀，用体积 浓度为50 %乙醇水溶液制粒，干燥，压制成片，即得分散片。
[0060] 实施例12
[0061 ]将实施例6制备的莲子心提取物，加入体积浓度为95 %乙醇水溶液使含醇量达到 50 %，冷藏静置过夜，取上清液，浓缩，加入适量的苯甲酸钠、山梨醇、吐温-80、蔗糖，搅拌混 合均匀，加水定容，过滤，分装，灭菌，即得口服液。
[0062]还可以采用常规技术手段制备片剂、软胶囊剂、滴丸剂或糖浆剂。
[0063] 药理实验例
[0064] 一、莲子心提取物对TGF-βΙ诱导的人胚肺成纤维(HELF)细胞增殖的影响
[0065] 1.实验方法：
[0066] HELF细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，每2~3天传代1次，取对数生长 期HELF细胞接种于96孔板(每孔8000个细胞），培养24h后吸去培养基。模型组及药物干预组 加入TGF-βΙ (终浓度为lng/ml)进行刺激，药物干预组同时加入药物(终浓度为0.1mg/ml)， 充分混匀，孵育48h后，每孔加入IOul的噻唑蓝(MTT，5mg/ml)，继续孵育4小时。4小时后弃去 上清液，加入150ul DMSO，振荡IOmin，上酶标仪检测各孔的吸光度(OD)值。
[0067] 2.实验结果
[0068]表1莲子心提取物对TGF-βΙ诱导的HELF增殖的影响（?土s>
[0070] *ρ〈0 · 05 ;#Ρ〈0 · Ol 与模型组比较
[0071 ]二、莲子心提取物对肺纤维化模型小鼠的干预作用
[0072] 1.实验动物：昆明小鼠，雄性，体重18~20g，由军事医学科学院实验动物研究中心 提供，动物生产许可证号:SCXK-(军)-007。
[0073] 2.动物模型制作
[0074] (1)动物分组:实验小鼠随机分12组，每组10只。分别设为空白对照组、博来霉素模 型组、阳性对照组[地塞米松(天津金耀氨基酸有限公司生产）]和给药组(按实施例1，2,6分 另Ij制备高、中、低剂量组）。
[0075] (2)造模方法:采用一次性气管滴注法造小鼠肺纤维化模型。各组小鼠腹腔注射 100mg/kg戊巴比妥0.04ml麻醉，取仰卧固定位，常规消毒，行颈部正中切口，钝性分离暴露 气管，按照小鼠体重2mg/kg于气管软骨环间隙穿刺注入博来霉素，立即将动物直立并行旋 转2min，尽量使药液在肺内分布均匀，然后缝合皮肤，待动物自然清醒后放置笼内常规饲 养。NS组同前方法注入等体积生理盐水。
[0076] (3)给药方法:造模后第二天，给药组给予实施例1，2，6的高中低剂量组，阳性对照 组给予地塞米松2mg/kg/d，空白对照组、模型组均以相同剂量的生理盐水代替。每天1次，连 续21天。
[0077] (4)标本采集：
[0078] 于给药后第21天小鼠眼眶静脉取血分离血清用于检测TGF-βΙ，然后处死小鼠，开 胸分离双肺，取右肺置于4%甲醛溶液中固定，常规石蜡切片。左肺组织匀浆，3 000r/min离 心IOmin后，提取上清用于组织MDA、HYP检测(表2,3)。
[0079] 表2莲子心提取物对博来霉素致肺纤维化小鼠血清TGF-βΙ的影响（s)
[0081 ] *p〈0 · 05 ;#P〈0 · 01 与模型组比较
[0082] 由上表结果可见，模型组小鼠血清中TGF-βΙ高于正常对照组，具有极显著性差异 (P〈0.01)。实施例1、2中剂量组与模型组比较具有显著性差异(P〈0.05)，高剂量组与模型组 比较具有极显著性差异(P〈〇.01);实施例6给药高剂量组、中剂量组较模型组有极显著性差 异(P〈0.01)，低剂量组较模型组有显著性差异(P〈0.05)，且呈现一定的量效关系。
[0083] 表3莲子心提取物对博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织中HYP、MDA的影响（I 土 s )
[0085] *p〈0 · 05 ;#P〈0 · 01 与模型组比较
[0086] 由上表结果可见，模型组小鼠肺组织中HYP、MDA高于正常对照组，有极显著性差异 (P〈0.01)。莲子心提取物能够降低小鼠肺组织中HYP含量，实施例1、2给药高剂量组，与模型 组比较具有显著性差异（P〈〇. 05)，实施例6给药高剂量组较模型组有极显著性差异（P〈 O.Ol)，中剂量组较模型组有显著性差异(P〈〇.05);莲子心提取物对MDA的影响由表中可见， 实施例1、2、6中剂量组与模型组比较具有显著性差异(P〈0.05)，高剂量组与模型组比较具 有极显著性差异(P〈〇. 01)。
[0087] (5)组织病理学观察
[0088]利用HE染色的病理切片将肺泡炎分为4级:无肺泡炎（1分）；轻度肺泡炎(2分）：肺 泡隔因细胞浸润增宽，病变范围局限在全肺的20 %以下；中度肺泡炎(3分）：病变范围占全 肺的20%~50%;重度肺泡炎(4分）：呈弥漫性分布，病变范围>50%。利用Masson三色染色 的切片将肺间质纤维化分为4级:无纤维化(1分）；轻度纤维化(2分）：受累范围小于20%;中 度纤维化(3分）：受累范围占全肺的20%~50%，肺泡结构紊乱;重度肺纤维化(4分）：受累 范围大于50%，肺泡融合，肺实质结构紊乱。
[0089]表4莲子心提取物对肺纤维化小鼠肺组织形态学的影响(?土s)
[0091]实施例6制备的莲子心提取物不同剂量灌胃给药对肺纤维化小鼠肺组织病理影响 (HE染色），见图1，图中A:正常对照组B:模型组C:阳性对照组D:高剂量组E:中剂量组F:低剂 量组。
[0092]实施例6制备的莲子心提取物不同剂量灌胃给药对肺纤维化小鼠肺组织病理影响 (masson染色)见图2,图中A:正常对照组B:模型组C:阳性对照组D:高剂量组E:中剂量组F: 低剂量组。
[0093]实验证明：莲子心提取物能够明显抑制由TGF-βΙ诱导的HELF细胞增殖；显著降低 博来霉素诱导的小鼠血清中TGF-β 1的含量，抑制博来霉素诱导的小鼠肺脏中HYP、MDA的表 达，显著改善博来霉素所致小鼠肺纤维化，对肺纤维化治疗具有确切的疗效。
【主权项】
1. 莲子心提取物在制备治疗肺纤维化药物的应用。2. 含莲子心提取物的制剂在制备治疗肺纤维化药物的应用。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征是所述制剂的剂型为颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软 胶囊剂、丸剂、口服液、泡腾片、分散片、滴丸剂或糖浆剂。
【文档编号】A61K36/62GK106074719SQ201610569792
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月18日
【发明人】高颖, 郭鹏, 曹波, 陈虹, 王火, 李覃, 谢红, 李艳晓
【申请人】中国人民武装警察部队后勤学院