一种菠萝蛋白酶脂质体及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种菠萝蛋白酶脂质体及其制备方法，该一种菠萝蛋白酶脂质体包含重量百分比的如下成分：菠萝蛋白酶0.2～0.5％，卵磷脂1～5％，胆固醇0.4～0.8％，吐温?80 0.2～0.8％，果胶0.1～0.5％。本发明实施例能够提供一种菠萝蛋白酶脂质体，既能够提高菠萝蛋白酶的透皮吸收率，又能够提高脂质体的稳定性和生物利用性。
【专利说明】
一种菠萝蛋白酶脂质体及其制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及蛋白酶脂质体技术领域，特别涉及一种菠萝蛋白酶脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]菠萝蛋白酶是从菠萝皮和菠萝茎中提取的一种蛋白质水解酶，在食品、化妆品、制药等领域具有广泛的应用，具有嫩白、美白、祛斑等优异的功效。但由于菠萝蛋白酶对环境条件敏感，容易氧化变质，并且难以透过皮肤造成应用上的缺陷。脂质体是由磷脂双分子层形成的内部包含水相的封闭囊泡，具有缓释性、细胞亲和性、组织相容性等优点，已成功应用于医药、化工、化妆品等领域中。但传统的脂质体存在稳定性不足、药物易泄露、皮肤亲和性不佳等问题。因此，提供一种菠萝蛋白酶脂质体，既能够提高菠萝蛋白酶的透皮吸收率，又能够提高脂质体的稳定性和生物利用性，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
【发明内容】
[0003]为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种菠萝蛋白酶脂质体及其制备方法，其能够提供一种菠萝蛋白酶脂质体，既能够提高菠萝蛋白酶的透皮吸收率，又能够提尚脂质体的稳定性和生物利用性。
[0004]本发明的目的采用以下技术方案实现:
[0005]—种菠萝蛋白酶脂质体，包含重量百分比的如下成分:
[0006]菠萝蛋白酶0.2?0.5%，
[0007]卵磷脂I?5%，
[0008]胆固醇0.4 ?0.8%，
[0009]吐温-800.2?0.8%，
[0010]果胶0.1?0.5%。
[0011]优选的，菠萝蛋白酶脂质体包含重量百分比的如下成分:
[0012]菠萝蛋白酶0.2%，
[0013]卵磷脂2%，
[0014]胆固醇0.4%，
[0015]吐温-800.4%,
[0016]果胶0.2%。
[0017]优选的，所述果胶包括苹果果胶、薜荔籽果胶、柑橘果胶。
[0018]优选的，所述果胶为薜荔籽果胶。
[0019]优选的，所述菠萝蛋白酶脂质体还包括缓冲溶液，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，所述磷酸盐缓冲溶液的PH值为6.0-7.0，所述磷酸盐缓冲溶液的摩尔浓度为0.05mol/L。
[0020]优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的PH值为6.8。本发明还提供一种菠萝蛋白酶脂质体的制备方法，包括如下步骤:
[0021]a)将卵磷脂、胆固醇与吐温-80溶解在无水乙醇中得到第一溶液；
[0022]b)将第一溶液经磁力搅拌处理使混合液变成均匀的单相，将第一溶液置于旋转蒸发仪中减压蒸发直至形成脂质薄膜；
[0023]c)将菠萝蛋白酶溶解在PH值为6.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液中得到第二溶液；
[0024]d)向脂质薄膜中加入第二溶液，溶解脂质薄膜，得到第三溶液；
[0025]e)用动态高压微射流处理第三溶液，压力为120?130Mpa，得到菠萝蛋白酶纳米脂质体；
[0026]f)将果胶溶解在PH值为6.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液中得到第四溶液；
[0027]g)将第四溶液加入至菠萝蛋白酶纳米脂质体中得到果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体；
[0028]所述菠萝蛋白酶脂质体包含重量百分比的如下成分:
[0029]菠萝蛋白酶0.2%，
[0030]卵磷脂I?5%，
[0031]胆固醇0.4?0.8%，
[0032]吐温-800.2?0.8%，
[0033]果胶0.1?0.5%。
[0034]优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的PH值为6.8;
[0035]所述菠萝蛋白酶脂质体包含重量百分比的如下成分:
[0036]菠萝蛋白酶0.2%，
[0037]卵磷脂2%，
[0038]胆固醇0.4%，
[0039]吐温-800.4%,
[0040]果胶0.2%。
[0041]优选的，所述果胶包括苹果果胶、薜荔籽果胶、柑橘果胶。
[0042]优选的，所述果胶为薜荔籽果胶。
[0043]相比现有技术，本发明的有益效果在于:
[0044]本发明实施例提供的菠萝蛋白酶脂质体，因采用脂质体包埋菠萝蛋白酶，能够保证菠萝蛋白酶在生产、使用和存储过程中的稳定性和透皮吸收性，克服菠萝蛋白酶对环境条件的敏感、易氧化以及难以透过皮肤的缺点。其次，因采用果胶包覆脂质体，保证了脂质体在生产、使用和存储过程中的稳定性，防止脂质体上的药物泄露，促进了药物的透皮吸收。此外，本发明实施例提供的菠萝蛋白酶脂质体的制备方法，能够显著提高菠萝蛋白酶的稳定性和透皮吸收性，同时也提高了脂质体的稳定性，通过调整确定了脂质成分及缓冲溶液的比例，经过磁力搅拌、旋转蒸发等工艺步骤，可有效控制菠萝蛋白酶脂质体的粒径，提高包封率;本发明实施例的菠萝蛋白酶脂质体开拓了脂质体的应用范围，运用脂质体作为载体包埋菠萝蛋白酶，其制备工艺简单，设备要求低，便于推广应用，提高了脂质体的生物利用率。
【具体实施方式】
[0045]下面，结合【具体实施方式】，对本发明做进一步描述:
[0046]本发明提供一种菠萝蛋白酶脂质体，包含重量百分比的如下成分:菠萝蛋白酶0.2?0.5%，卵磷脂I?5%，胆固醇0.4?0.8%，吐温-80 0.2?0.8%，果胶0.1?0.5%。
[0047]本发明实施例通过采用脂质体包埋菠萝蛋白酶，能够保证菠萝蛋白酶在生产、使用和存储过程中的稳定性和透皮吸收性，克服菠萝蛋白酶对环境条件的敏感、易氧化以及难以透过皮肤的缺点。其次，因采用果胶包覆脂质体，保证了脂质体在生产、使用和存储过程中的稳定性，防止脂质体上的药物泄露，促进了药物的透皮吸收。
[0048]优选的，菠萝蛋白酶脂质体包含重量百分比的如下成分:菠萝蛋白酶0.2%，卵磷月旨2 %，胆固醇0.4 %，吐温-80 0.4%,果胶0.2 %。菠萝蛋白酶脂质体还包括缓冲溶液，缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液的PH值为6.0-7.0，磷酸盐缓冲溶液的摩尔浓度为
0.05mol/L，如此能够进一步克服菠萝蛋白酶对环境条件的敏感、易氧化以及难以透过皮肤的缺点，同时提高脂质体的稳定性和药物的透皮吸收性。
[0049]本发明还提供一种菠萝蛋白酶脂质体的制备方法，包括如下步骤:
[0050]a)将卵磷脂、胆固醇与吐温-80溶解在无水乙醇中得到第一溶液；
[0051]b)将第一溶液经磁力搅拌处理使混合液变成均匀的单相，将第一溶液置于旋转蒸发仪中减压蒸发直至形成脂质薄膜；
[0052]c)将菠萝蛋白酶溶解在PH值为6.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液中得到第二溶液；
[0053]d)向脂质薄膜中加入第二溶液，溶解脂质薄膜，得到第三溶液；
[0054]e)用动态高压微射流处理第三溶液，压力为120?130Mpa，得到菠萝蛋白酶纳米脂质体；
[0055]f)将果胶溶解在PH值为6.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液中得到第四溶液；
[0056]g)将第四溶液加入至菠萝蛋白酶纳米脂质体中得到果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体。
[0057]在实施例1、实施例3和实施例5中，缓冲溶液为磷酸缓冲溶液，磷酸缓冲溶液的PH值为6.8，摩尔浓度为0.05mol/L。在实施例2中，缓冲溶液为磷酸缓冲溶液，磷酸缓冲溶液的PH值为6.0，摩尔浓度为0.05mol/L。在实施例4中，缓冲溶液为磷酸缓冲溶液，磷酸缓冲溶液的PH值为7.0，摩尔浓度为0.05mol/L。
[0058]实施例1:
[0059]称取100.0g卵磷脂溶解于5L无水乙醇中，称取20.0g胆固醇和30.0g的吐温-80于前述卵磷脂溶液中，放置在磁力搅拌器搅拌30min直至完全溶解，再将混合溶液置于旋转蒸发仪上，在40°C水浴条件下旋转蒸发1H，除去无水乙醇形成一层脂质薄膜;称取30.0g菠萝蛋白酶完全溶解在1L磷酸盐缓冲溶液中，得到菠萝蛋白酶缓冲溶液，将混合均匀的菠萝蛋白酶缓冲溶液加入到上述制得的脂质薄膜中旋转洗膜得到菠萝蛋白酶脂质体溶液，再用动态高压微射流装置在120MPa下处理2次后得到菠萝蛋白酶纳米脂质体;称取30.0g苹果果胶完全溶解在5L磷酸盐缓冲溶液中，将苹果果胶缓冲溶液加入到上述制得的菠萝蛋白酶纳米脂质体中，充分搅拌，即制得苹果果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体。
[0060]本实施例制得的苹果果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的包封率为53.5%，平均粒径为117.28_，2^&电位为-23.8611^。在透皮试验中，与不添加苹果果胶的菠萝蛋白酶脂质体相比，苹果果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的透皮吸收率提高了2.09倍。
[0061 ] 实施例2:
[0062]称取500.0g卵磷脂溶解于20L无水乙醇中，称取80.0g胆固醇和80.0g的吐温-80于前述卵磷脂溶液中，放置在磁力搅拌器搅拌30min直至完全溶解，再将混合溶液置于旋转蒸发仪上，在40°C水浴条件下旋转蒸发1H，除去无水乙醇形成一层脂质薄膜;称取50.0g菠萝蛋白酶完全溶解在20L磷酸盐缓冲溶液中，得到菠萝蛋白酶缓冲溶液，将混合均匀的菠萝蛋白酶缓冲溶液加入到上述制得的脂质薄膜中旋转洗膜得到菠萝蛋白酶脂质体溶液，再用动态高压微射流装置在120MPa下处理2次后得到菠萝蛋白酶纳米脂质体;称取50.0g苹果果胶完全溶解在15L磷酸盐缓冲溶液中，将苹果果胶缓冲溶液加入到上述制得的菠萝蛋白酶纳米脂质体中，充分搅拌，即制得苹果果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体。
[0063]本实施例制得的苹果果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的包封率为50.2%，平均粒径为179.38mm，Zeta电位为-20.67mV。在透皮试验中，与不添加苹果果胶的菠萝蛋白酶脂质体相比，苹果果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的透皮吸收率提高了 1.92倍。
[0064]实施例3:
[0065]称取200.0g卵磷脂溶解于1L无水乙醇中，称取50.0g胆固醇和55.0g的吐温-80于前述卵磷脂溶液中，放置在磁力搅拌器搅拌30min直至完全溶解，再将混合溶液置于旋转蒸发仪上，在40°C水浴条件下旋转蒸发1H，除去无水乙醇形成一层脂质薄膜;称取50.0g菠萝蛋白酶完全溶解在20L磷酸盐缓冲溶液中，得到菠萝蛋白酶缓冲溶液，将混合均匀的菠萝蛋白酶缓冲溶液加入到上述制得的脂质薄膜中旋转洗膜得到菠萝蛋白酶脂质体溶液，再用动态高压微射流装置在120MPa下处理2次后得到菠萝蛋白酶纳米脂质体;称取60.0g薜荔籽果胶完全溶解在15L磷酸盐缓冲溶液中，将薜荔籽果胶缓冲溶液加入到上述制得的菠萝蛋白酶纳米脂质体中，充分搅拌，即制得薜荔籽果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体。
[0066]本实施例制得薜荔籽果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的包封率为63.5%，平均粒径为129.62_，2^&电位为-35.5311^。在透皮试验中，与不添加薜荔籽果胶的菠萝蛋白酶脂质体相比，薜荔籽果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的透皮吸收率提高了2.67倍。
[0067]实施例4:
[0068]称取250.0g卵磷脂溶解于12L无水乙醇中，称取100.0g胆固醇和50.0g的吐温-80于前述卵磷脂溶液中，放置在磁力搅拌器搅拌30min直至完全溶解，再将混合溶液置于旋转蒸发仪上，在40°C水浴条件下旋转蒸发1H，除去无水乙醇形成一层脂质薄膜;称取50.0g菠萝蛋白酶完全溶解在20L磷酸盐缓冲溶液中，得到菠萝蛋白酶缓冲溶液，将混合均匀的菠萝蛋白酶缓冲溶液加入到上述制得的脂质薄膜中旋转洗膜得到菠萝蛋白酶脂质体溶液，再用动态高压微射流装置在120MPa下处理2次后得到菠萝蛋白酶纳米脂质体；称取25.0g薜荔籽果胶完全溶解在5L磷酸盐缓冲溶液中，将薜荔籽果胶缓冲溶液加入到上述制得的菠萝蛋白酶纳米脂质体中，充分搅拌，即制得薜荔籽果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体。
[0069]本实施例制得的薜荔籽果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的包封率为60.3%，平均粒径为123.52_，2^&电位为-28.7811^。在透皮试验中，与不添加薜荔籽果胶的菠萝蛋白酶脂质体相比，薜荔籽果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的透皮吸收率提高了2.42倍。
[0070]实施例5:
[0071 ] 称取150.0g卵磷脂溶解于8L无水乙醇中，称取30.0g胆固醇和40.0g的吐温-80于前述卵磷脂溶液中，放置在磁力搅拌器搅拌30min直至完全溶解，再将混合溶液置于旋转蒸发仪上，在40°C水浴条件下旋转蒸发1H，除去无水乙醇形成一层脂质薄膜;称取45.0g菠萝蛋白酶完全溶解在1L磷酸盐缓冲溶液中，得到菠萝蛋白酶缓冲溶液，将混合均匀的菠萝蛋白酶缓冲溶液加入到上述制得的脂质薄膜中旋转洗膜得到菠萝蛋白酶脂质体溶液，再用动态高压微射流装置在120MPa下处理2次后得到菠萝蛋白酶纳米脂质体;称取50.0g柑橘果胶完全溶解在1L磷酸盐缓冲溶液中，将柑橘果胶缓冲溶液加入到上述制得的菠萝蛋白酶纳米脂质体中，充分搅拌，即制得柑橘果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体。
[0072]本实施例制得的柑橘果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的包封率为58.5%，平均粒径为119.38mm，Zeta电位为-25.27mV。在透皮试验中，与不添加柑橘果胶的菠萝蛋白酶脂质体相比，柑橘果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的透皮吸收率提高了2.25倍。
[0073]在实施例3中，薜荔籽果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体的包封率和透皮吸收率较优。
[0074]综上，本发明实施例提供的菠萝蛋白酶脂质体，因采用脂质体包埋菠萝蛋白酶，能够保证菠萝蛋白酶在生产、使用和存储过程中的稳定性和透皮吸收性，克服菠萝蛋白酶对环境条件的敏感、易氧化以及难以透过皮肤的缺点。其次，因采用果胶包覆脂质体，保证了脂质体在生产、使用和存储过程中的稳定性，防止脂质体上的药物泄露，促进了药物的透皮吸收。此外，本发明实施例提供的菠萝蛋白酶脂质体的制备方法，能够显著提高菠萝蛋白酶的稳定性和透皮吸收性，同时也提高了脂质体的稳定性，通过调整确定了脂质成分及缓冲溶液的比例，经过磁力搅拌、旋转蒸发等工艺步骤，可有效控制菠萝蛋白酶脂质体的粒径，提高包封率;本发明实施例的菠萝蛋白酶脂质体开拓了脂质体的应用范围，运用脂质体作为载体包埋菠萝蛋白酶，其制备工艺简单，设备要求低，便于推广应用，提高了脂质体的生物利用率。
[0075]对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
【主权项】
1.一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，包含重量百分比的如下成分: 菠萝蛋白酶0.2?0.5%， 卵磷脂I?5%， 胆固醇0.4?0.8%， 吐温-80 0.2?0.8%， 果胶0.1?0.5%。2.如权利要求1所述的一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，包含重量百分比的如下成分: 菠萝蛋白酶0.2%， 卵磷脂2%， 胆固醇0.4%， 吐温-80 0.4%, 果月父0.2% ο3.如权利要求1或2所述的一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，所述果胶包括苹果果胶、薜荔籽果胶、柑橘果胶。4.如权利要求3所述的一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，所述果胶为薜荔籽果胶。5.如权利要求3所述的一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，所述菠萝蛋白酶脂质体还包括缓冲溶液，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，所述磷酸盐缓冲溶液的PH值为6.0-7.0，所述磷酸盐缓冲溶液的摩尔浓度为0.05mol/L。6.如权利要求5所述的一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的PH值为6.8。7.—种菠萝蛋白酶脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: a)将卵磷脂、胆固醇与吐温-80溶解在无水乙醇中得到第一溶液； b)将第一溶液经磁力搅拌处理使混合液变成均匀的单相，将第一溶液置于旋转蒸发仪中减压蒸发直至形成脂质薄膜； c)将菠萝蛋白酶溶解在PH值为6.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液中得到第二溶液； d)向脂质薄膜中加入第二溶液，溶解脂质薄膜，得到第三溶液； e)用动态高压微射流处理第三溶液，压力为120?130Mpa，得到菠萝蛋白酶纳米脂质体； f)将果胶溶解在PH值为6.0-7.0的磷酸盐缓冲溶液中得到第四溶液； g)将第四溶液加入至菠萝蛋白酶纳米脂质体中得到果胶包覆菠萝蛋白酶脂质体； 所述菠萝蛋白酶脂质体包含重量百分比的如下成分: 菠萝蛋白酶0.2?0.5%， 卵磷脂I?5%， 胆固醇0.4?0.8%， 吐温-80 0.2?0.8%， 果胶0.1?0.5%。8.如权利要求7所述的一种菠萝蛋白酶脂质体的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的PH值为6.8; 所述菠萝蛋白酶脂质体包含重量百分比的如下成分: 菠萝蛋白酶0.2%， 卵磷脂2%， 胆固醇0.4%， 吐温-80 0.4%, 果月父0.2% ο9.如权利要求7或8所述的一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，所述果胶包括苹果果胶、薜荔籽果胶、柑橘果胶。10.如权利要求9所述的一种菠萝蛋白酶脂质体，其特征在于，所述果胶为薜荔籽果胶。
【文档编号】A61K38/48GK106075414SQ201610475396
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月22日
【发明人】周伟, 潘琪, 曹玉坡, 李积华, 付调坤
【申请人】中国热带农业科学院农产品加工研究所