一种具有淋巴靶向的氟碳乳剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开一种具有淋巴靶向的氟碳乳剂的制备方法，将8~10份壳聚糖加入到4~5份的1%醋酸溶液中，将4~5份三聚磷酸钠加入到4~5份的去离子水中，将1~2份三聚磷酸钠溶液缓慢滴加到4~5份的壳聚糖溶液中，将8~10份壳聚糖纳米粒子分散在4~5份去离子水中，加入1~2份交联剂、0.5~1份透明质酸钠，搅拌至少12小时后，得到对淋巴具有靶向作用的壳聚糖乳液；在所得壳聚糖乳液中加入0.5～10份全氟碳化合物，0?5份增溶剂，即得到具有淋巴靶向作用的氟碳乳剂。本产品制备方法简单，能大批量制备。
【专利说明】
一种具有淋巴靶向的氟碳乳剂及其制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种氟碳化合物乳剂的制备方法，特别是一种具有对淋巴靶向作用的氟碳化合物乳剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]淋巴转移是实体瘤的主要转移形式，也是导致肿瘤患者死亡的主要原因。淋巴转移一般发生在肿瘤早期或中期，如果不能及时控制就可能会导致肿瘤细胞随淋巴回流至血液扩散，引发更广泛的肿瘤转移。此外，随着医学工程和计算机技术的发展，分子影像学为肿瘤临床诊断提供了更为快捷、直观的判断依据。这其中，磁共振成像由于其具有软组织分辨率高、成像参数多、图像信息量大和无电离损害等优点，已经在临床上广泛应用。而目前，常规的纳米药物载体在进行静脉注射后容易聚集在肝、脾等脏器，难以到达淋巴转移灶。因此，能制备出一种针对淋巴转移灶的磁共振造影剂对肿瘤的诊断有很大的意义。
[0003]透明质酸(hyaluronan, HA)与淋巴管系统有密切关系--组织中的HA需要进入淋巴管内并随淋巴液的循环到达淋巴结内进行降解，而在淋巴管内皮细胞的表面存在HA的特异性受体LYVE-1 (lymphatic endothelial hyaluronan receptor-1)。而LyP-1 短肽是一种通过噬菌体展示技术得到的九环肽，其不仅对肿瘤具有靶向性，而且对淋巴转移瘤也具有靶向能力。将二者结合，能够达到对淋巴转移瘤进行准确定位的效果。
[0004]全氟碳化合物是一类具有广泛的生物医学用途的大家族化合物，氟取代基赋予氟碳分子特殊的性质，如热学、化学和生物学惰性，射线不透过性，良好的扩散性，低表面张力，低黏度，高密度以及高气体溶解度等。因此，全氟碳化合物可以用作超声成像、CT成像(电子计算机X射线断层扫描技术)等。但全氟碳化合物是惰性的，不能溶于血浆中，故其表面需经活化剂乳化后才可输入机体静脉。因此，研究全氟碳化合物的制剂已成为研究热点。
【发明内容】
[0005]本发明目的在于针对现有技术的不足，提供以壳聚糖为介质，透明质酸为靶向分子，得到具有淋巴靶向的氟碳乳剂。该氟碳乳剂性能稳定，能够长时间保持其物理化学性能稳定，不发生团聚现象。能够在肿瘤部位长时间停留，对肿瘤内的淋巴管和血管的成像效果良好。
[0006]—种具有具有淋巴靶向的氟碳乳剂的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，以下步骤中份数是指质量分数:
a、将8?1份壳聚糖加入到4~5份的I%醋酸溶液中，搅拌至少I个小时，待壳聚糖完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸；
b、将4?5份三聚磷酸钠加入到4?5份的去离子水中，搅拌至少30分钟，待三聚磷酸钠完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸；
C、将I?2份三聚磷酸钠溶液缓慢滴加到4?5份的壳聚糖溶液中，搅拌至少30分钟形成壳聚糖纳米粒子;随后在10000转以上转速离心，离出物再在冻干机中冻干得到壳聚糖纳米粒子粉末；
d、将8?10份壳聚糖纳米粒子分散在4?5份去离子水中，加入I?2份交联剂、0.5?I份透明质酸钠，搅拌至少12小时后，得到对淋巴具有靶向作用的壳聚糖乳液；
e、在所得壳聚糖乳液中加入0.5?10份全氟碳化合物，0-5份增溶剂，在60°(:及惰性气氛下、以10000转/分钟的转速下搅拌30分钟，冷却至250C，静置24小时;然后离心分离;取上清液，即得到具有淋巴靶向作用的氟碳乳剂。
[0007]所述的交联剂为四异氰酸酯、丙二胺、聚乙二醇、聚丙二醇、三羟甲基丙烷、聚丙二醇缩水甘油醚、a_甲基苯乙烯、丙烯腈、丙烯酸、甲基丙烯酸、乙二醛、正硅酸乙酯、正硅酸甲酯、三甲氧基硅烷、对甲苯磺酸、对甲苯磺酰氯、二丙烯酸-1，4_丁二醇酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、丙烯酸丁酯、过氧化二异丙苯、过氧化双2，4一二氯苯甲酰、丙烯酸、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟丙酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸羟丙酯、二乙烯基苯、N-羟甲基丙烯酰胺、双丙酮丙烯酰胺中的至少一种。
[0008]所述的氟碳化合物为FC-77(全氟环醚)，PF0B(全氟辛基溴)，PFD(全氟萘烷)或FC-3283(全氟三丙胺)的一种或几种混合物。
[0009]所述的增溶剂为Tu_80(聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯)，6501(椰油脂肪酸二乙醇酰胺)，AE0-9(脂肪醇聚氧乙稀醚)，Bri j-35(月桂醇聚氧乙稀醚)或Triton X_100(聚乙二醇辛基苯基醚)中的至少一种。
[0010]一种具有淋巴靶向的氟碳乳剂，其特征在于，根据上述任一所述方法制备得到。[0011 ]与现有技术相比，本发明具有以下优势:
本产品制备方法简单，能大批量制备。制备出的氟碳乳剂，具有超声和CT成像功能，且对淋巴系统具有靶向作用，能够长时间保持其物理化学性能稳定，不发生团聚现象。在肿瘤部位能长时间停留，对肿瘤内的淋巴管和血管的成像效果良好。
【具体实施方式】
[0012]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
[0013]实施例1:
a、将8份壳聚糖加入到5份的1%醋酸溶液中，搅拌I个小时，待壳聚糖完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸。
[0014]b、将5份三聚磷酸钠加入到4份的去离子水中，搅拌45分钟，待三聚磷酸钠完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸。
[0015]C、将2份三聚磷酸钠溶液缓慢滴加到4份的壳聚糖溶液中，搅拌30分钟形成壳聚糖纳米粒子。随后在12000转转速离心，离出物再在冻干机中冻干得到壳聚糖纳米粒子粉末。
[0016]d、将10份壳聚糖纳米粒子分散在4份去离子水中，加入2份丙二胺、0.5份透明质酸钠，搅拌12小时后，得到对淋巴具有靶向作用的壳聚糖乳液。
[0017]e、在所得壳聚糖乳液中加入10份PFOB，I份Tu_80，在60 °C及惰性气氛下、以10000转/分钟的转速下搅拌30分钟，冷却至25 °C，静置24小时;然后离心分离;取上清液，即得到具有淋巴靶向作用的氟碳乳剂。
[0018]用该方法制备得到的氟碳乳剂的粒径为426nm，具有良好的超声成像效果。
[0019]实施例2:
a、将9份壳聚糖加入到5份的1%醋酸溶液中，搅拌1.5个小时，待壳聚糖完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸。
[0020]b、将5份三聚磷酸钠加入到5份的去离子水中，搅拌30分钟，待三聚磷酸钠完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸。
[0021 ] C、将2份三聚磷酸钠溶液缓慢滴加到5份的壳聚糖溶液中，搅拌30分钟形成壳聚糖纳米粒子。随后在12000转转速离心，离出物再在冻干机中冻干得到壳聚糖纳米粒子粉末。
[0022]d、将10份壳聚糖纳米粒子分散在5份去离子水中，加入2份乙二醛、0.7份透明质酸钠，搅拌12小时后，得到对淋巴具有靶向作用的壳聚糖乳液。
[0023]e、在所得壳聚糖乳液中加入5份PFOB，5份Triton X-100，在60°C及惰性气氛下、以10000转/分钟的转速下搅拌30分钟，冷却至25 °C，静置24小时;然后离心分离;取上清液，即得到具有淋巴靶向作用的氟碳乳剂。
[0024]用该方法制备得到的氟碳乳剂的粒径为583nm，具有良好的超声成像效果。
[0025]实施例3:
a、将10份壳聚糖加入到4份的1%醋酸溶液中，搅拌2个小时，待壳聚糖完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸。
[0026]b、将5份三聚磷酸钠加入到4份的去离子水中，搅拌30分钟，待三聚磷酸钠完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸。
[0027]c、将1.5份三聚磷酸钠溶液缓慢滴加到5份的壳聚糖溶液中，搅拌至少30分钟形成壳聚糖纳米粒子。随后在11000转转速离心，离出物再在冻干机中冻干得到壳聚糖纳米粒子粉末。
[0028]d、将10份壳聚糖纳米粒子分散在5份去离子水中，加入I份过氧化双2，4一二氯苯甲酰、I份透明质酸钠，得到对淋巴具有靶向作用的壳聚糖乳液。
[0029]e、在所得壳聚糖乳液中加入0.5份FC-77，1份Brij-35，在60°C及惰性气氛下、以10000转/分钟的转速下搅拌30分钟，冷却至25 °C，静置24小时;然后离心分离;取上清液，即得到具有淋巴靶向作用的氟碳乳剂。
[0030]用该方法制备得到的氟碳乳剂的粒径为256nm，具有良好的CT成像效果。
[0031]实施例4:
a、将8份壳聚糖加入到5份的醋酸溶液中，搅拌I个小时，待壳聚糖完全溶解后，将溶液依次通过0.45μηι和0.22μηι的滤纸。
[0032]b、将4份三聚磷酸钠加入到5份的去离子水中，搅拌30分钟，待三聚磷酸钠完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸。
[0033]C、将2份三聚磷酸钠溶液缓慢滴加到4份的壳聚糖溶液中，搅拌45分钟形成壳聚糖纳米粒子。随后在10000转转速离心，离出物再在冻干机中冻干得到壳聚糖纳米粒子粉末。
[0034]d、将9份壳聚糖纳米粒子分散在5份去离子水中，加入I份丙烯酸、0.5份透明质酸钠，搅拌12小时后，得到对淋巴具有靶向作用的壳聚糖乳液。
[0035]e、在所得壳聚糖乳液中加入I份FC-3283，在60°C及惰性气氛下、以10000转/分钟的转速下搅拌30分钟，冷却至25 °C，静置24小时;然后离心分离；取上清液，即得到具有淋巴靶向作用的氟碳乳剂。
[0036]用该方法制备得到的氟碳乳剂的粒径为321nm，具有良好的CT成像效果。
【主权项】
1.一种具有具有淋巴靶向的氟碳乳剂的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，以下步骤中份数是指质量分数: a、将8?10份壳聚糖加入到4?5份的1%醋酸溶液中，搅拌至少I个小时，待壳聚糖完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸； b、将4?5份三聚磷酸钠加入到4?5份的去离子水中，搅拌至少30分钟，待三聚磷酸钠完全溶解后，将溶液依次通过0.45μπι和0.22μπι的滤纸； C、将I?2份三聚磷酸钠溶液缓慢滴加到4?5份的壳聚糖溶液中，搅拌至少30分钟形成壳聚糖纳米粒子;随后在10000转以上转速离心，离出物再在冻干机中冻干得到壳聚糖纳米粒子粉末； d、将8?10份壳聚糖纳米粒子分散在4?5份去离子水中，加入I?2份交联剂、0.5?I份透明质酸钠，搅拌至少12小时后，得到对淋巴具有靶向作用的壳聚糖乳液； e、在所得壳聚糖乳液中加入0.5?10份全氟碳化合物，0-5份增溶剂，在60°(:及惰性气氛下、以10000转/分钟的转速下搅拌30分钟，冷却至250C，静置24小时;然后离心分离;取上清液，即得到具有淋巴靶向作用的氟碳乳剂。2.根据权利要求1所述的一种具有淋巴靶向的氟碳乳剂的制备方法，其特征在于，所述的交联剂为四异氰酸酯、丙二胺、聚乙二醇、聚丙二醇、三羟甲基丙烷、聚丙二醇缩水甘油醚、a-甲基苯乙烯、丙烯腈、丙烯酸、甲基丙烯酸、乙二醛、正硅酸乙酯、正硅酸甲酯、三甲氧基硅烷、对甲苯磺酸、对甲苯磺酰氯、二丙烯酸-1，4_丁二醇酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、丙烯酸丁酯、过氧化二异丙苯、过氧化双2，4一二氯苯甲酰、丙烯酸、丙烯酸羟乙酯、丙烯酸羟丙酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸羟丙酯、二乙烯基苯、N-羟甲基丙烯酰胺、双丙酮丙烯酰胺中的至少一种。3.根据权利要求1所述的一种具有淋巴靶向的氟碳乳剂的制备方法，其特征在于，所述的氟碳化合物为FC-77(全氟环醚)，PFOB(全氟辛基溴)，PFD(全氟萘烷)或FC-3283(全氟三丙胺)的一种或几种混合物。4.根据权利要求1所述的具有淋巴靶向的氟碳乳剂及其制备方法，其特征在于，所述的增溶剂为Tu_80(聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯)，6501(椰油脂肪酸二乙醇酰胺)，AEO-9(脂肪醇聚氧乙稀醚)，Bri j-35(月桂醇聚氧乙稀醚)或Triton X_100(聚乙二醇辛基苯基醚)中的至少一种。5.一种具有淋巴靶向的氟碳乳剂，其特征在于，根据上述任一权利要求所述方法制备得到。
【文档编号】A61K49/04GK106075471SQ201610544518
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月12日
【发明人】何丹农, 朱君, 易帆, 乔宇, 王杰, 金彩虹
【申请人】上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司