专利名称：源自菲律宾木桔叶的提取物的生产方法
技术领域：
本发明涉及从菲律宾木桔(Swinglea glutinosa)叶中获得提取物的方法,和所述提取物的用途。2.现有技术的说明源自菲律宾木桔的化合物已被描述为具有多种有益用途。Weniger B.等公开了来自菲律宾木桔的吖唳酮生物碱对抗原生动物恶性痕原虫
(Plasmodium falciparum)的可能用途,所述恶性痕原虫是痕疾的主要病因(见WenigerB.等，Bireactive Acridone Alkaloids from Swinglea glutinosa, J. Nat. Prod. ,2001,64(9) :1221-3)。Braga P. A. C.等教导了菲律宾木桔衍生物对癌细胞系的细胞毒作用(参见Braga P. A. C.等，In Vitro Citotoxicity Activity on Several Cancer Cell Linesof Acridone Alkaloids and N-Phenylethyl-Benzamide derivatives from Swingleaglutinosa，Natural Product Research，2007，21(I) :47-55)。Bueno-Sanchez J. G.等描述了来自菲律宾木桔的精油对抗结核病原体结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的潜力(见 Bueno-Sanchez J. G.等，Assesment ofAntimycobacterial Activity of Several Aromatic and Medicinal Plants that Growin Colombia, Memoirs of VI National Encounter of Investigation in InfectiousDiseases, Colombian Association of Infectology,2008,第 96 页)。遗憾的是，现有技术中没有对于获得良好产量的菲律宾木桔提取物的标准化方法的说明，所述提取物可以使用本身或可用来进一步获取有益的衍生物化合物。本申请的发明克服了这些现有技术的限制。
发明内容
本申请发明提供了获得提取物的标准化方法和来自菲律宾木桔叶的提取物，其中所述方法获得其量约为菲律宾木桔叶重量60%的提取物。更具体地，本申请的发明提供了一种分离自菲律宾木桔叶的提取物，其中所述提取物通过包括如下步骤的方法获得A.将亮深绿色菲律宾木桔叶暴露于干燥环境中，其中避免阳光直射所述叶，其中使所述叶暴露于空气流；B.将所述叶置于步骤A中所述环境中，直到所述叶变为不透明的绿色并且所述叶变脆；C.将所述叶破碎成小碎片；D.将所述菲律宾木桔叶碎片与溶剂至少接触一次；E.重复步骤D，直到所述溶剂富集源自所述叶碎片的物质；以及，
F.回收所述溶剂以释放提取物。一方面，本申请发明的方法获得的提取物用于杀真菌。另ー方面，本申请发明的方法获得的提取物用于杀昆虫和螨虫。另ー方面，本申请发明的方法获得的提取物用于驱除昆虫和螨虫。此外，本申请发明提供了一种用于生产源自植物菲律宾木桔的提取物的方法，其中所述方法包括A.将亮深緑色菲律宾木桔叶暴露于干燥环境中，其中避免阳光直射所述叶，其中
使所述叶暴露于空气流；B.将所述叶置于步骤A中所述环境中，直到所述叶变为不透明的绿色并且所述叶变脆；C.将所述叶破碎成小碎片；D.将所述菲律宾木桔叶碎片与溶剂至少接触一次；E.重复步骤D，直到所述溶剂富集源自所述叶碎片的物质；以及，F.回收所述溶剂以释放提取物。在本发明的详细描述和权利要求书中，本申请发明的目的和优点会更加明显。发明详述本发明提供了分离自菲律宾木桔叶的提取物，其中所述提取物通过包括如下步骤的方法获得A.将亮深緑色菲律宾木桔叶暴露于干燥环境中，其中避免阳光直射所述叶，其中使所述叶暴露于空气流；B.将所述叶置于步骤A中所述环境中，直到所述叶变为不透明的绿色并且所述叶变脆；C.将所述叶破碎成小碎片；D.将所述菲律宾木桔叶碎片与溶剂至少接触一次；E.重复步骤D，直到所述溶剂富集源自所述叶碎片的物质；以及，F.回收所述溶剂以释放提取物。在本发明的方法的另一方面中，以任何可能的方式避免所述叶直接暴露于阳光。在本发明的方法的又一方面中，弃去变成类黄色而非不透明緑色的叶。所述叶变脆和从亮绿色叶变为不透明的緑色叶所需的时间取决于最优地暴露于空气流(通风)。优选地，通风发生于25°C，尽管温度的变化可改变通风时间，例如，温度小幅増加可缩短通风时间。在本发明方法的另一方面中，所述叶必须不能碎成小于0. 05mm的叶碎片，因为更小的碎片会倾向于变为单个团块，这会限制利用溶剂进行最优提取。通过使溶剂再循环通过叶碎片所在的床而使叶碎片暴露接触所述溶剤。然而，所述叶碎片可以是随溶剂在容器中四处移动的那些。在前一种情况下，要求毎次之后，所述溶剂与所述叶碎片接触，以蒸发所述溶剂进入分离的空间，保留所得提取物，随后蒸发的溶剂再液化并重新用于新的循环。进行所需次数的循环，直到没有更多的所得提取物需要保留。根据本发明的方法，当剰余的碎片叶团块重量是第一次暴露于所述溶剂前的叶碎片重量的约40%吋，实现此要求。换句话说，获得的提取物占初始叶碎片重量的约60%。
在本发明的ー个方面中，可以使用的溶剂包括こ醇、甲醇、己烷、丙醇、异丙醇、CO2、丙酮、水、こ酸こ酯、腈-こ酸(nitrile-acetate)、甲苯、四氢呋喃、氯仿、ニ氯甲烧等。另ー方面，本申请发明的方法获得的提取物用于杀真菌。另ー方面，本申请发明的方法获得的提取物用于杀昆虫和螨虫。又一方面，本申请发明的方法获得的提取物用于驱除昆虫和螨虫。此外，本申请发明提供了一种用于生产源自植物菲律宾木桔的提取物的方法，其中所述方法包括A.将亮深緑色的菲律宾木桔叶暴露于干燥环境中，其中避免阳光直射所述叶，其中使所述叶暴露于空气流；B.将所述叶置于步骤A中所述环境中，直到所述叶变为不透明的绿色并且所述叶变脆；C.将所述叶破碎成小碎片；D.将所述菲律宾木桔叶碎片与溶剂至少接触一次；E.重复步骤D，直到所述溶剂富集源自所述叶碎片的物质；以及，F.回收所述溶剂以释放提取物。在本发明的ー个方面中，所述提取物可用于杀真菌，其中敏感真菌包括蔷薇单丝壳菌(Sphaerotheca pannosa)葡萄孢菌属(Botrityssp.)祿刀菌属(Fusariumsp.)炭疽菌属(Colletotrichumsp.)葡萄钩丝亮菌(Uncinolanecator)天花(Variolasp.)霜霉菌属(Peronosporasp.)禾柄镑菌属(Pucciniasp.)枝抱霉属(Cladosporiumsp.)/异抱霉菌属(Hetesroporium sp.)等。本发明的另一方面，所述提取物可用于杀昆虫和螨虫，其中敏感昆虫和螨虫包括斑潜蚬属(Liriomyzasp.)叶螨属(Tetranichussp.)微小牛蝶(Boophilusmicroplus)等。本发明的另一方面，所述提取物可用于驱除昆虫和螨虫，其中敏感昆虫和螨虫包括斑潜妮属(Liriomyzasp.)叶螨属(Tetranichussp.)微小牛蝶(Boophilusmicroplus)等。本发明的提取物可与樟脑和油类(其已被描述为杀真菌、杀灭和/或驱除昆虫和螨虫)联合使用，其中所述油类可增强菲律宾木桔提取物对抗真菌、昆虫和螨虫的作用，且其中所述油类可源自大蒜、橙、朽1檬、酸橙、香茅属(Cymbopogon sp.)、丁香(Eugeniacaryophyllata)、按属(Eucalyptus sp.)、互叶白千层(Melaleuca alternifolia)、甜澄(Citrus simensis)、其它柑桔属物种(Citrus sp.)、肉桂等。在本发明的详细描述和权利要求书中，本申请发明的目的和优点会更加明显。实施例收集带有深亮绿色的菲律宾木桔树叶，并在约25°C下置于室内空气自然流通处。定期移动所述带有叶的枝以确保所有的叶暴露于空气流。大约3天后，从所述枝收集所述已干燥并且变成不透明緑色的叶并用桨片粉碎机(blade mill)将所述干燥的不透明绿叶破碎成不超过0.05mm的碎片。将约30千克的叶碎片放入网孔径为0. 05mm的钢筛中。将320升こ醇和70升水的混合物装入承载盛有叶碎片的钢筛的容器中45分钟。回收所述こ醇-水混合物并通过加热蒸发所述こ醇-水。保留剰余的提取物，用冷凝器在単独的封闭空间内将所述蒸发的こ醇-水再次转变成液体。重新使用所述こ醇-水混合物再装入承载盛有叶碎片的钢筛的容器中六次，毎次25分钟至35分钟。所获得提取物的最終量大约为18升，其中所述提取物为深緑色的粘稠物。制备2ml提取物/升水的溶液并用于如下实验在该菌株的合适培养基中繁殖分离的病原真菌菌株。随后，以IX IO6孢子/ml的浓度制备水悬浮液。制备仅有培养基的培养皿和盛有用2ml提取物/升水溶液制备的培养基的培养皿。两个培养皿都用20iU孢子悬液浴洗。室温下孵育所述培养皿12天后，測量对每种真菌的抑制百分比，结果如下尖抱祿刀菌(Fusariumoxysporum) 72. 20%灰葡萄抱菌(Botrytiscinerea)80. 70%斐济球腔菌(Mycosphaerellafijiensis)68. 40%炭疽菌属(Colletotrichumsp. )90. 44%对于蔷薇单丝壳菌(Sphaerotheca pannosa)而言,将孢子悬液施用于用2ml提取物/升水溶液浴洗过的健康玫瑰植物的叶上和未浴洗过的健康玫瑰植物的叶上。随后，15天后现察两种玫瑰植物的叶的真菌脓疱形成。在用2ml提取物/升水溶液浴洗过的玫瑰植物的叶中，脓疱形成少了 65.7%。对于斑潜蚬属(Liriomyza sp.)而言,通过比较用2ml提取物/升水溶液浴洗过的豆类植物的叶和未浴过的豆类植物的叶进行了驱虫测试。将浴洗过的和未浴过的叶放入装有斑潜蝇的笼中。24小时后，比较两种植物的叶片上由斑潜蝇所引起的病变点。用2ml提取物/升水溶液浴洗过叶的植物的病变点比未浴洗过叶的植物的病变点少了 75. 3%。对于叶螨属(Tetranichus sp.)而言,通过比较从豆类植物叶上切下的5mm圆片进行了驱除测试，其中比较了用2ml提取物/升水溶液浴洗过的5mm叶片和未浴洗过的5mm叶片，并且其中将2mm未浴洗过的长有叶螨的叶片放到所述两片5mm叶片上。24小时后，用2ml提取物/升水溶液浴洗过的5mm叶片上的叶螨比未浴洗过的5mm叶片上的少了 78. 4%。对于微小牛蝶(Boophilus microplus)(壁風)而言,使用5ml提取物/升水溶液用于致死性实验，其中将用5ml提取物/升水溶液浴洗过的成年反刍壁虱与未浴洗过的壁虱进行了比较。将浴洗过的壁虱和未浴洗过的壁虱都放入培养皿中并观察。三天后，用5ml提取物/升水溶液浴洗过的壁虱与未浴洗过的壁虱相比，多死亡75%。
权利要求
1.一种分离自菲律宾木桔(Swinglea glutinosa)叶的提取物,其中所述提取物通过包括如下步骤的方法获得 A.将亮深绿色菲律宾木桔叶暴露于干燥环境中，其中避免阳光直射所述叶，其中使所述叶暴露于空气流； B.将所述叶置于步骤A中所述环境中，直到所述叶变为不透明的绿色并且所述叶变脆； C.将所述叶破碎成小碎片； D.使所述菲律宾木桔叶碎片与溶剂至少接触一次； E.重复步骤D，直到所述溶剂富集源自所述叶碎片的物质；以及， F.回收所述溶剂以释放提取物。
2.权利要求I的所述提取物，其中所述提取物用于杀真菌。
3.权利要求I的所述提取物，其中所述提取物用于杀昆虫和螨虫。
4.权利要求I的所述提取物，其中所述提取物用于驱除昆虫和螨虫。
5.一种用于生产源自植物菲律宾木桔的提取物的方法，其中所述方法包括 A.将亮深绿色菲律宾木桔叶暴露于干燥环境中，其中避免阳光直射所述叶，其中使所述叶暴露于空气流； B.将所述叶置于步骤A中所述环境中，直到所述叶变为不透明的绿色并且所述叶变脆； C.将所述叶破碎成小碎片； D.使所述菲律宾木桔叶碎片与溶剂至少接触一次； E.重复步骤D，直到所述溶剂富集源自所述叶碎片的物质；以及， F.回收所述溶剂以释放提取物。
全文摘要
本申请的发明提供了一种获取提取物的标准化方法和来自菲律宾木桔(Swinglea glutinosa)叶的提取物，其中所述方法获得其量约为菲律宾木桔叶重量60％的提取物。
文档编号A61Q17/02GK102791252SQ201080020959
公开日2012年11月21日 申请日期2010年5月14日 优先权日2009年5月15日
发明者山德拉·帕特里西亚·扎帕塔波拉斯, 詹姆斯·阿尔贝托·希门尼斯马丁内斯, 雅伊梅·特勒雷斯特雷波 申请人:伊蔻夫劳拉股份公司