专利名称：一种金耳发酵美白液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种金耳发酵美白液的制备方法。属生物工程技术应用领域。
背景技术：
金耳为担子菌纲，银耳目，银耳科，银耳属的干燥子实体，主要分布于我国西藏云南等地，野生资源稀有，古籍文献记载用于肺热、痰多、咳嗽、气喘等症的治疗，具有较高的药用价值。研究表明，金耳深层发酵液中含有人体必需的氨基酸，并且有钾、钠、钙、镁、铁、 锌等矿质元素。通过深层发酵获得发酵液再加上其他组分获得具有美白作用的发酵液是一种天然的，没有副作用的美白护肤品的成分，现在市面上还没有产品。发明内容
本发明的目的是提供一种金耳发酵美白液的制备方法。
本发明的技术方案为将金耳斜面保藏菌种活化，接种至摇瓶种子液体培养基中培养，将培养好的种子液接入摇瓶发酵液体培养基培养。发酵结束后，将发酵液浓缩，脱蛋白，透析后得到澄清的淡黄色液体。在加上其他组分，获得具有美白作用的液体。
具体来说，首先，我们将实验室金耳斜面保藏菌种活化，活化的菌丝体接入三角瓶发酵后离心，上清液经过浓缩，脱蛋白，透析后得到所需发酵液。以重量百分比计发酵液 60% -80% ;再加入VC曲酸脂5% -8% ;透明质酸O. 1% -O. 5% ;蒸馏水11.5% -34. 9%。
上述过程中，斜面培养基为PDA培养基，摇瓶种子培养基为PDAlL加磷酸二氢钾lg，硫酸镁O. 5g，牛肉膏2g,蛋白胨lg, pH6. O,发酵培养基为葡萄糖4g/100mL、酵母粉 lg/100mL、磷酸二氢钾O. 2g/100mL、硫酸镁O. 05g/100mL,培养条件为起始pH6. O, 250mL三角瓶装培养基IOOmL于25°C，120r/min，振荡培养7d，离心后上清液用Sevage法去除游离蛋白质，蒸懼水透析去除无机盐，得到金耳发酵液。浓缩后取60-80g,加入VC磷酸酯5g-8g ； 透明质酸O. lg-0. 5g ;蒸馏水补足100mL。滤过除菌。
所述用Sevage法去除游离蛋白，是按发酵液1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡过夜后4000rpm离心20min，收集上清液，反复操作5次至氯仿-正丁醇层不浑浊为止。
所述的透析是指将去除游离蛋白质的发酵液装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中,透析72h，中间每隔12小时换水一次。
具体实施方式
下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。
实例一
I.发酵液制备
出发菌种为实验室斜面保藏菌种；
(I)摇瓶种子培养
摇瓶种子培养基PDA1L加磷酸二氢钾lg，硫酸镁O. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg， ρΗ6· O ；
培养方法从活化的斜面菌种中取3 4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基IOOmL于25°C，120r/min，振荡培养7d ；
(2)摇瓶发酵培养
发酵培养基葡萄糖4g/100mL、酵母粉lg/100mL、磷酸二氢钾O. 2g/100mL、硫酸镁O.05g/100mL ；
培养方法将培养好的种子以15%的接种量接入摇瓶发酵培养基中25°C，120r/ min，振荡培养7d;
(3)发酵液浓缩，脱蛋白，透析
培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，即按发酵液 1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡过夜后4000rpm离心 20min,收集上清液，反复操作5次至氯仿-正丁醇层不浑浊为止。然后取上清液中装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析72h，中间每隔12小时换水一次，得发酵液。
2.其他组分的添加及滤过除菌
(I)其他组分的添加
发酵液浓缩后取60_80g，加入VC磷酸酯5g ;透明质酸O. Ig ;蒸馏水补足100mL。
(2)滤过除菌
上述液体通过O. 22 μ m的滤膜除菌。
实例二
对金耳发酵液样品进行了氨基酸组成测定，测定结果表明，所含氨基酸中甘氨酸占38%以上，缬氨酸占9%以上，苯丙氨酸占7%以上，酪氨酸占7%以上，亮氨酸占6%以上，用苯酚-硫酸法测得多糖含量为75.6%。金耳发酵液的氨基酸组成及含量见表I。
表I金耳发酵液的氨基酸组成及含量
权利要求
1.一种金耳发酵美白液的制备方法，其特征在于外观为淡黄色液体，是金耳通过深层发酵获得的发酵液经过浓缩，脱蛋白，透析后再加入VC磷酸酯，透明质酸和蒸馏水，滤过除菌后制得；其中发酵液所含氨基酸中甘氨酸占38%以上，缬氨酸占9%以上，苯丙氨酸占 7%以上，酪氨酸占7%以上，亮氨酸占6%以上；所述的美白液的制备方法，步骤如下(I)菌种培养出发菌种为实验室斜面保藏菌种；①摇瓶种子培养(1)摇瓶种子培养摇瓶种子培养基=PDAlL加磷酸二氢钾lg，硫酸镁O. 5g，牛肉膏2g，蛋白胨lg，pH6. O ； 培养方法从活化的斜面菌种中取3 4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基IOOmL于25°C，120r/min，振荡培养7d ；(2)摇瓶发酵培养发酵培养基葡萄糖4g/100mL、酵母粉lg/100mL、磷酸二氢钾O. 2g/100mL、硫酸镁 O.05g/100mL ；培养方法将培养好的种子以15%的接种量接入摇瓶发酵培养基中25°C，120r/min， 振荡培养7d ；(3)发酵液浓缩，脱蛋白，透析培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，即按发酵液1/5 的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡过夜后4000rpm离心20min， 收集上清液，反复操作5次至氯仿-正丁醇层不浑浊为止。然后取上清液中装入透析袋中， 扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析72h，中间每隔12小时换水一次，得发酵液；(2)发酵液浓缩，脱蛋白，透析培养后离心，取上清液旋转蒸发仪浓缩后用Sevage法去除游离蛋白，然后取上清液透析；(3)其他组分的添加及滤过除菌①其他组分的添加发酵液浓缩后加入VC磷酸酯、透明质酸和蒸馏水；取浓缩后的发酵液60g-80g,加入VC磷酸酯5g-8g ;透明质酸O. lg-0. 5g ;蒸懼水补足 IOOmL ；②滤过除菌上述液体通过O. 22 μ m的滤膜除菌。
2.如权利要求I所述的一种金耳发酵美白液的制备方法，其特征在于所述用Sevage 法去除游离蛋白，是按发酵液1/5的体积加入氯仿，然后加入氯仿体积1/5的正丁醇，混合后振荡过夜后4000rpm离心20min，收集上清液，反复操作5次至氯仿-正丁醇层不浑浊为止。
3.如权利要求I所述的一种金耳发酵美白液的制备方法，其特征在于所述的透析是指将去除游离蛋白质的发酵液装入透析袋中，扎紧袋口，悬浮于蒸馏水中，透析72h，中间每隔 12小时换水一次。
全文摘要
本发明属生物工程技术应用领域，具体涉及一种金耳发酵美白液的制备方法。该金耳发酵液为淡黄色澄清液体，是金耳深层发酵后的液体经过浓缩，脱蛋白，透析得到的。该发酵液所含氨基酸中甘氨酸占38％以上，缬氨酸占9％以上，苯丙氨酸占7％以上，酪氨酸占7％以上，亮氨酸占6％以上。除了发酵液组分外，包括其他组分VC磷酸脂，透明质酸。具有美白活性，可应用于制备具有美白作用的化妆品。
文档编号A61Q19/02GK102908303SQ201210464470
公开日2013年2月6日 申请日期2012年11月19日 优先权日2012年11月19日
发明者邓超, 王敏, 陈敬华, 滕丽萍 申请人:江南大学