专利名称：皮肤护理组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗酶性皮肤炎所用的组合物。
背景人体中或皮肤上存在各种类型的酶类，包括来自细菌的酶类、来自饮食中的酶类以及机体产生的酶类。
已知这些酶类中一部分具有不希望存在的副反应。例如，机体排出物中存在脂酶，已知这些脂酶可引起皮肤炎或皮疹，这是如尿布、失禁用品、卫生巾、运动裤等一次性吸湿用品的使用者经常遇到的问题。当皮肤接触如机体排出物中的脂酶时，皮肤的含脂质的成分可被这些酶类损伤。因此而削弱了皮肤最表层(角质层)的保护或屏障作用。这有可能影响皮肤健康和／或使皮肤易于感染。因此能导致皮肤疹或尿布疹。
过去数十年来尿布和皮肤护理产品的生产商们已经开发出各种各样的有助于减少尿布疹(或皮疹)产生的产品。目前注意力已主要集中在减少皮肤与机体排出物的接触。这可以通过如在尿布中引入有吸湿能力或有较强吸湿能力的物质而实现。因此而减少了与皮肤接触的水量。
EP 0117632-B涉及含有脂酶抑制剂和载体物质的一次性用品，其中脂酶抑制剂优选为含锌组分。US 3，091，241涉及甘油三醋酸酯在阴道塞中抑制脂酶酶活性的应用。US 3，961，486指示可用己二酸降低脂酶酶活性并减少皮疹。
本发明的发明者们现已发现，酶类如与皮肤接触的脂酶的酶活性可因特异性抗体而有效地降低。因此，当抗体应用于皮肤时，皮肤上的酶类能被有效地抑制或失活，从而减少或避免酶性皮肤炎的形成。
发明概述本发明提供了抗体在制备治疗外皮的酶性皮肤炎的组合物中的应用。
本发明还涉及吸湿用品，该吸湿用品包括含有抗体的组合物。
发明详述本文中抗体用于制备一种组合物，该组合物用于治疗因排出物中存在的酶类如酯酶类(包括脂酶)的酶活性所致的外皮酶性皮肤炎。
脂酶、脂酶酶或脂溶酶是用于代表属于酯酶类的一组酶的常用或通用术语。它们的主要活性是水解以酯形式存在的脂肪(如人体皮肤中发现的甘油酯)，并由此产生脂肪酸和甘油。由于这组酶类在植物、霉菌、细菌、奶、奶制品以及几乎所有动物组织中广泛存在，并且因为人类脂酶存在于胰排出物中，因而它们几乎总是出现在机体排出物中。
脂酶的活性可引起几乎所有皮疹或者尤其是尿布疹，通过这些酶对皮肤自身的消化变性作用以及通过破坏脂质-皮肤组分而产生刺激，破坏了感染部位的皮肤屏障功能。这种对皮肤整体性的破坏使机体排出物(尤其是尿和粪便)中可能本身不具有刺激性的其它组分穿过受损的皮肤。此时通常无害的组分就可能变得具有刺激性。
“治疗”在本文中指改善人体或动物体中由酶活性所引起的感染状况。因此，这包括，使酶引起的酶性皮肤炎或皮肤疹减少或至少是稳定。
本发明中用于降低酶活性或在治疗中应用的组合物的量，根据待处理状况的具体部位、待处理状况的严重程度、治疗预计所需时间、具体使用者对每种组合物的特异性敏感性、使用者的状况、同时进行的治疗、使用者出现的其它情况而不同。
本发明中，优选含抗体组合物的最小抑制浓度优选在局部应用时为能抑制所存在的酶类的活性的量和形式。
抗体本发明的一个基本成分是针对酶的抗体，本文称之为抗体。
免疫球蛋白分为5类，分别是IgM、IgG、IgA、IgD和IgE。免疫球蛋白的优选类型为IgG和IgA。在人体分泌物如乳汁、唾液、呼吸道和肠道液体中发现的分泌型sIgA均特别地可在这些分泌物中存活，它们具有较强的结合特性，并且抗蛋白水解作用。
单克隆抗体或多克隆抗体或抗体片段可通过本领域常规技术产生，例如，通过应用重组DNA技术，产生具有新特性的抗体变体，新特性包括免疫原性降低、亲和性提高、大小改变。也可应用特异性结合。为本发明的目的，优选单克隆抗体，更优选其片段。这些片段可类似地通过常规技术如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化而产生，或用重组DNA技术产生。抗体片段也可通过常规的重组DNA技术产生。抗体以及抗体的片段可以是人源化的，如Meded．-Fac．Landbouwkd．Toegepast Biol．Wet．(Univ．Gent)(1995)，60(4a，Forum for Applied Biotechnology，1995，Part 1)，2057-63所述。
重链和轻链均由恒定区和可变区组成。在能产生天然状态的免疫球蛋白的生物体中，恒定区对于许多功能而言非常重要，但对于很多工业加工中及产品中的应用，它们的可变区已足够。因此已描述了很多产生抗体片段的方法。
在本文中能够优选抗体片段。通常，它们是Fab、Fv、scFv或具有类似结合特性的任何其它片段。产生抗体片段的优选途径是通过重组DNA技术，因此片段由遗传转化的生物体表达。
重组DNA技术产生的抗体和抗体片段不必与脊椎动物中产生的抗体片段相同，但通过它们的Km、Ki和Kcat评估，它们具有相同的结合特性。例如，它们可以包括与其它途径所产生的抗体中发现的那些相区别的氨基酸序列和／或糖基化作用，特别是片段末端的序列。多少有些类似地，重组DNA技术产生的抗体片段可能在它们的末端包括外源氨基酸序列，这些外源序列在其它途径产生的抗体中没有对应部分。
与此相关的一个可能性是，本文所用的结合剂是模仿天然抗体的互补区的特异性结合活性的天然或人工合成聚合物。这类聚合物例如是多肽或聚合物印记(Angew．Chem．Int．Ed．Engl．1995，34，1812-1832)。
产生抗体的常用方法可在用相应抗原免疫哺乳动物或家禽时应用。作为哺乳动物而被免疫的可以是小鼠、兔子、山羊、绵羊、马、奶牛等。抗体(免疫球蛋白部分)可从抗血清、牛奶或蛋类中，根据普通的抗体纯化方法分离，这些纯化方法包括脱盐法、Polson提取法、凝胶过滤层析法、离子交换层析法、亲和层析法等，脱盐法用硫酸铵产生沉淀，然后将沉淀物对生理盐水透析，以获得纯化的沉淀物作为抗体。
植物也能合成并装配各种类型的抗体分子，并且可以大量产生抗体，如Tibtech．Dec 1995，13卷，522-527页；Plant Mol．Biol．，26，1701-1710页，1994和Biotechnol．Proi．1991，7，455-461页以及US 5，202，422所述。抗体也可在微生物如大肠杆菌或酿酒酵母中通过如EP 667394所述的生物发酵过程产生。
产生抗体片段的技术在本领域中是公知的Saiki等人的Science 2301350-54(1985)；Orlandi等人的PNAS USA 86 3833-7(1989)；WO 89／09825；EP 368 684；WO 91／08482和WO 94／25591。
酶的延长的活性所带来的缺点可通过导入特异性对应抗体有效地控制酶活性而避免。这类抗体既可以是直接针对整个酶结构的多克隆抗体，也可以是直接针对酶结构中控制酶活性的特异性表位的单克隆抗体。针对具体酶产生的抗体可通过在活性位点上或非常接近活性位点处的抗体-抗原结合而有效使酶去活性。这类复合体的形成导致酶去活并可用三维结构的变形和／或底物裂口处的空间障碍来解释。
通常，组合物中抗体的用量为使应用时抗体与酶的分子比率为100∶1或更低，优选50∶1或更低的量。对于单克隆抗体或其片段而言，抗体与酶的分子比率通常为50∶1或更低，优选20∶1或更低。
制备组合物的方法组合物可用本领域制备美容组合物或药物的任何已知方法制备。具体方法取决于组合物的特性。抗体可加入组合物中，与美容组合物或药物中常用的其它组分组合，或先分散在或溶于水或油或油包水乳剂中，然后再加入组合物中。
应用组合物的方法本发明的组合物可以应用于与酶接触或与酶接近的皮肤上。
组合物优选(首先)应用于吸湿用品如尿布擦拭物或薄页纸上，这些用品然后再应用于皮肤。
吸湿用品本发明的组合物可包含在一种吸湿用品、优选一次性吸湿用品中。为此特别优选的吸湿用品是擦拭物或尿布。
如本文所用，“吸湿用品”指吸收和容纳机体排出物的用品，更具体地，指紧贴或靠近穿戴者的身体放置，以吸收和容纳机体排出的各种排出物的用品。术语“一次性”在本文中用以描述不打算洗涤或以其它方式恢复或再用作吸湿用品的吸湿用品(即它们将在使用一次后丢弃，优选以环保的方式回收、混合制肥或处理)。
一次性吸湿用品的结构对实施本发明并不是关键的。
通常，将组合物掺入吸湿用品或尿布中，具体的组合物的用量为带来所需的治疗或降低或抑制酶活性的量，优选通过频繁使用达到上述目的。
所述一次性吸湿用品优选包含本发明的组合物，且组合物的量使得其中的抗体占该用品重量的(以活性抗体物质为准)0．00001％-5％，更优选0．0001％-1％，最优选0．001％-0．5％。
附加组分本发明的组合物可包含附加组分。包括何种组分以及其含量为多少取决于组合物的特点及其应用。
优选组合物中包含一或多种可减少皮肤炎的其它组分，或有助于医治皮肤的化合物如维生素类(维生素E)和可的松，以及能软化皮肤的化合物如凡士林、甘油、三甘醇、羊毛脂、石蜡和制药以及美容品生产中广泛应用的别的类的聚合物，它们本文中也有描述。
一种有助于降低脂酶活性并适用于制备本发明的组合物或适于在组合物中应用的优选化合物可以是具有下式的酯化合物 其中，R1、R2和R3独立地是具有1-22个碳原子的烷基或链烯基或羟烷基基团，而R4、R5、R6、R7和R8独立地选自C1-C10的直链或支链的烷基、链烯基或羟烷基基团、羟基、氯化物、溴化物、胺或氢。
高度优选的上述化合物是其中所述化合物的R4、R5、R6、R7和R8为氢，并优选其中的R1、R2和R3独立地为C1-C4烷基基团的化合物。
这类优选化合物可以是甘油三醋酸酯。
已发现用于制备本发明组合物或用于本发明组合物中的另一高度优选的附加组分为某些阳离子化合物。
用于本发明组合物中或用于制备本发明组合物的另一优选的酯化合物具有下式 或 其中R1和每个R2独立地为具有2-22个碳原子的酰基，或具有1-24个碳原子的烷基、链烯基、芳烷基、羟烷基基团或氢，其中R1和R2中至少一个是这类酰基基团，R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9独立地为具有1-24个碳原子的烷基、链烯基、芳烷基、羟烷基、烷氧基，羟基或氢；R10和R11独立地为具有2-24个碳原子的烷基、链烯基、芳烷基、羟烷基、烷氧基，羟基或氢；A和B独立地为C1-C6直链或支链亚烷基、亚链烯基、亚烷氧基、羟基亚烷基基团；x值独立地为0-15；y值独立地为0或1，条件是当x=2和y=0时，至少一个R2为具有1-24个碳原子的烷基、链烯基、芳烷基、羟烷基基团或氢。
优选的上述酯化合物中x为1或2，y为0；R1和一个R2为C2-C16酰基，R10和一个或多个R11为C2-C16烷基；R3、R4、R5、R6、R7和R8为氢。
高度优选所述附加酯化合物为式(Ⅴ)的单酯或二酯，最优选为柠檬酸或酒石酸的单酯或二酯(或它们的盐类)，或柠檬酸的三酯。
某些阳离子化合物也可作为本发明组合物的附加组分使用，优选具有下式 或
或一种两性化合物，并优选为酸性来源，所述两性化合物在其等电点时具有下式 其中R1、R2、R3和R4独立地为C1-C22烷基、链烯基、芳基、芳烷基、酰氨烷基、(聚)烷氧基、羟烷基、或酰基基团，或R1、R2、R3和R4中的两个或多个基团共同形成一或多个环状结构；R5、R6和A独立地为C1-C22亚烷基、亚链烯基、(聚)亚烷氧基、亚羟烷基、亚芳烷基或酰氨亚烷基基团；R7和R8独立地为C1-C4烷基、链烯基、烷氧基基团或羟基基团或氢；R9和R10独立地为C1-C22直链或支链烷基、链烯基、芳基、芳烷基、酰氨烷基、(聚)烷氧基、羟烷基、或酰基基团，或R1、R9和R10中的两个或多个基团共同形成一或多个环状结构；BH是提供质子的基团；x为2-4；M-是抗衡离子。
应理解，对于本发明的目的，R1-R10的基团可由任何适当的取代基团取代。
R1、R2、R3和R9独立地优选为C1-C8，更优选C1-C4链烯基或烷氧基，更优选烷基，最优选甲基或乙基。
优选R4、R5和R10独立地为C8-C18，更优选C12-C16链烯基或烷氧基，更优选烷基或芳烷基，其中能够优选R4、R5和R9取代基中的一个是苄基。
或者，可优选所述阳离子化合物包含至少一个为聚烷氧基的R1、R2或R3或R9。
因此，R1、R2、R3和R9优选独立地为含有C2-C6，优选C2-C3烷氧基单元并且烷氧基化数为2-50，优选5-18的聚烷氧基。然后，R3、R4和R10独立地优选为C1-C8、更优选C1-C4链烯基或烷氧基，更优选烷基基团，最优选甲基或乙基基团。
A、R5和R6独立地优选为C1-C6亚链烯基或更优选亚烷基基团，最优选亚甲基或亚乙基。
优选的化合物可以是氯苄烷铵或Merquat 2200(商品名，为N，N-二甲基-N-2-丙烯基-1-氯化铵的2-丙烯酰胺聚合物)。
优选的上述式的阳离子化合物包括一或多个取代的R1、R2、R3、R4、R9或R10基团和／或取代的R5和／或取代的R6基团，其中取代基选自硅、葡萄糖、果糖和蔗糖的衍生物。
可优选Glucquat 125(商品名，为月桂基二甲基glucet-10-羟基二甲基氯化铵)。
附加的阳离子化合物或附加的三酯化合物均优选存在于本发明组合物中，占组合物重量的0．01％-20％，更优选0．05％-10％，最优选0．1％-5％。
乳液(lotion)、乳膏、油剂、泡沫剂、软膏剂、凝胶剂、粉剂、片剂等本发明可应用于任何适当的目的。尤其是，本组合物适于局部应用于皮肤或毛发上。具体的是，皮肤护理组合物可以是乳膏、喷洒剂、乳液、凝胶剂等形式。优选本文中的美容组合物为在连续水相中的一或多种油相的水包油乳液形式，每种油相包含单一油性组分或为混溶或均匀形式的多种油性组分的混合物，但所述不同的油相包含相互区别的不同物质或物质的组合。本发明组合物中油相组分的总量优选为约0．1％至约60％，优选约1％至约30％，更优选约1％至约10％(重量)。
本发明的组合物优选为可应用于皮肤为免洗产品的增湿乳膏或乳液形式。
评估抗体活性的方法脂酶的活性用SIGMA的试剂盒(产品目录号805A)测定。所述检验用稀释的粪便标本(1／10 w／v)进行。单甘油酯水解释放的甘油转化为甘油-3-磷酸酯，然后经氧化成为二羟丙酮磷酸酯和过氧化氢。所形成的过氧化物与4-氨基安替比林及钠-N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-间甲苯胺在有过氧化物酶存在时反应形成醌二亚胺染料。该染料吸收550nm的光。吸收值增加的速率与样品中的脂溶活性成正比。
检验在缺乏(对照物)和存在特异性抗体的情况下进行。将0．5ml抗体溶液(5％的水溶液)加入10ml对照物中并进一步在37℃温育。5分钟和120分钟后分别取样以测定酶活性。
脂酶(活性表示为酶单位／克)
权利要求
1．抗体在制备用于治疗外皮的酶性皮肤炎的组合物中的应用。
2．权利要求1的应用，其中所述组合物用于预防或治疗尿布疹。
3．权利要求1或2的组合物，其中所述抗体为单克隆抗体，优选为其片段。
4．包括含有抗体的组合物的一次性吸湿用品。
5．权利要求4的一次性吸湿用品，其中抗体的存在量为所述用品的0．00001％-5％，优选0．0001-1％。
6．权利要求4至5的一次性吸湿用品，为尿布形式。
7．权利要求4至6的一次性尿布，其包括其中包含所述组合物的顶片。
8．权利要求1-3中任一项的组合物，为美容性乳膏、乳液、凝胶剂、油剂、软膏剂或粉剂的形式，用于局部施用于外皮或施用于一次性吸湿用品。
9．一种降低外皮上存在的酶类的活性的方法，包括将权利要求1-3中任一项的组合物(局部)施用于外皮的步骤。
10．一种降低外皮上存在的酶类的酶活性的方法，包括将包括权利要求1-3中任一项组合物的吸湿用品施用于外皮的步骤。
全文摘要
本发明涉及抗体在制备治疗酶性皮肤炎的组合物中的应用,尤其是在制备在吸湿用品如尿布中的组合物中的应用。
文档编号A61Q19/00GK1291107SQ99803112
公开日2001年4月11日 申请日期1999年2月3日 优先权日1998年2月18日
发明者伊凡·M·A·J·赫博茨, 琼·韦弗斯, 蒂姆·J·范豪沃迈伦 申请人:宝洁公司