专利名称：猴多动症动物模型的构建方法
技术领域：
本发明属于医疗评价、检测技术领域，具体涉及一种用于筛选治疗多动症药物，评价治疗多动症方法的动物模型的构建方法。
然而，ADHD病理机制仍然还有许多不明之处，有待于我们进行深入研究，特别是现阶段还没有理想的ADHD动物模型，给彻底了解ADHD病理机制以及完全治疗ADHD带来了很大的困难。如果建立起理想的ADHD猴的动物模型，将有利于我们研究ADHD病理机制，有利于我们大规模筛选治疗ADHD的新药(如筛选治疗ADHD的中草药)，评价治疗ADHD的方法，这不仅有重要的理论价值，也有着潜在的应用前景。
现在一般认为，ADHD的产生与人或动物的行为抑制功能低下有关。行为抑制功能为人或动物的行为(特别是较复杂行为)提供保护框架。如果抑制功能低下，人或动物将不能抑制不相关的信息(包括外来的和内在的)引起的行为，导致注意力不集中、活动增多等症状，严重时将导致ADHD。神经心理学的研究表明，前额叶皮层在行为抑制中起着关键的作用。在幼年猴前额叶注射去甲肾上腺素的α2受体拮抗剂yohimbine后，幼年猴在自由活动状态的活动显著增多，非常类似儿童多动症现象；通过单个神经元给药，发现α2受体拮抗剂yohimbine能抑制与NO-GO反应相关的前额叶神经元活动。这些现象提示前额叶的α2受体功能低下有可能是ADHD的内在机制之一。
动物和临床研究表明，α2受体激动剂有可能是治疗ADHD的有效药物。临床研究已开始用α2受体激动剂clonidine来治疗ADHD。应用选择性更强的α2A激动剂guanfacine，不仅能有效的控制ADHD的症状，还可以避免使患者产生低血压和镇静等由clonidine治疗所产生的副作用。
本发明提出的猴多动症动物模型构建方法，是通过在猴前额叶双侧埋泵注射α2受体的特异性拮抗剂yohimbine(育亨宾)，以阻断α2受体的功能，建立起ADHD猴的动物模型。具体步骤如下1、脑外科手术选取适当的猴，麻醉后通过脑外科手术，切除皮肤，清理颅骨表面，在其表面确定定位点，然后在颅骨表面均匀涂上一层牙科水泥。肌肉注射抗生素，静脉注射葡萄糖。
2、给药手术13-14天后，麻醉，在猴双侧前额叶的相对应位点的牙科水泥和颅骨上开孔，用渗透压泵微量给药，给药深度为硬脑膜下1.0-1.5mm，渗透压泵以每小时1μl速度，连续7-10天把药直接泵入前额叶皮层内，药的浓度为1.5-2.0μg/μl，用生理盐水配制；3、猴活动量记录在猴的身上佩带活动量记录表，记录猴给药前、给药期间和给药后自由状态下24小时的活动量。
根据上述猴多动症动物模型，对不同的猴进行分析对比，实际试验结果证明，猴的前额叶注射α2受体拮抗剂yohimbine期间，猴的活动量显著增加，一旦给药停止，猴的活动量又恢复到给药前的水平。从而说明本发明以实验手段建立了猴多动症的动物模型，该模型可以用于筛选治疗多动症的药物，评价治疗多动症的方法。
图2为本发明实施例中猴A给药前、给药期间和给药后在自由状态下的活动量状态图。
图3为本发明实施例中猴B给药前、给药期间和给药后在自由状态下的活动量状态图。
下面通过实施例进一步描述本发明。
选取幼年猕猴(Macaca Mulatta)2只，雌性，2～3岁左右，体重分别为2.2kg和2.5kg左右；未曾用于其它实验；单笼饲养，水和食物不限。
1.脑外科手术手术前一天，充分准备手术之中各类用品，将手术器械高压消毒，手术室紫外线照射30分钟左右。手术前猴禁食12小时左右，但给予充足的水。
用氯胺酮(肌肉注射，3～5mg/kg体重，诱导麻醉)和戊巴比妥钠(腹腔注射，35mg/kg体重)麻醉猴，将其头部固定于Narishige SN-2型立体定向仪上。用铅笔在手术切口部位的头皮上作标志线；用刀片沿标志线切开皮肤，清理颅骨表面；在颅骨上，用立体定位仪确定几个定位参考点(A0L0；A20L0；A20L20；A20R20)；在颅骨表面均匀涂上一层牙科水泥。肌肉注射抗生素，静脉注射葡萄糖。手术后，密切监视猴的状态。
2、给药手术二周后，用氯胺酮(肌肉注射，3～5mg/kg体重，诱导麻醉)和戊巴比妥钠(腹腔注射，35mg/kg体重)麻醉猴，将猴头部固定于Narishige SN-2型立体定向仪上。以AP0点作为参考点，向前25mm，然后，以中缝为基本点，向左右旁开15mm。用眼科钻将此位点的牙科水泥和颅骨打开一小洞，注意切勿刺穿硬脑膜。将渗透压泵针头插入此孔，深度为硬脑膜下1.0-1.5mm。把去甲肾上腺素α2受体拮抗剂育亨宾(yohimbine)溶于生理盐水(浓度1.5μg/μl)，灌入渗透压泵(200μl容量)中。在颅骨表面安装一不锈钢小室，其中盛满生理盐水，将渗透压泵泵体放在这一小室中。渗透压泵以每小时1μl的速度、连续8天把yohimbine溶液直接泵入前额叶皮层内。
3、猴活动量记录把Mini-Mitter公司生产的活动量记录表佩带在猴的身上，记录猴给药前、给药期间和给药后自由状态下24小时的活动量。
对上述模型的测试结果由图2-图3中猴给药前、给药期间和给药后在自由状态下的活动量状态图可见，通过对从上午600到下午600共12小时的猴活动状态观察，从中可以看出，在前额叶慢性施加育亨宾期间，猴的总活动量显著增加。一旦给药停止，猴的活动量又恢复到给药前的水平。
权利要求
1.一种猴多动症动物模型的构建方法，其特征在于通过在猴前额叶双侧埋泵注射α2受体的特异性拮抗剂育亨宾，以阻断α2受体的功能，建立ADHD猴的动物模型，具体步骤如下(1)脑外科手术选取适当的猴，麻醉后通过脑外科手术，切除皮肤，清理颅骨表面，在其表面确定定位点，然后在其表面均匀涂上一层牙科水泥；(2)给药手术13-14天后，在猴双侧的前额叶皮层相对应位点的牙科水泥和颅骨上开小孔，用渗透压泵微量给药，给药深度为硬脑膜下1.0-1.5mm，渗透压泵以每小时1μl速度，连续7-10天把药液直接泵入前额叶皮层内，药的浓度为1.5-2.0μg/μl，用生理盐水配制；(3)猴活动量记录在猴的身上佩带活动量记录表，记录猴给药前、给药期间和给药后自由状态下24小时的活动量。
全文摘要
本发明属于医疗评价、检测技术领域,具体涉及一种用于筛选治疗多动症药物、评价治疗多动症方法的猴动物模型的构建方法。通过在猴前额叶局部区域微量注射α
文档编号G09B23/36GK1380632SQ0211148
公开日2002年11月20日 申请日期2002年4月25日 优先权日2002年4月25日
发明者李葆明, 马朝林, 徐开静 申请人:复旦大学