本发明属于微生物肥料
技术领域：
，具体涉及一种防治病害的薯类专用微生物菌肥及其制备方法。
背景技术：
：甘薯是一种高产稳产、营养丰富、用途广泛的农作物，既是重要的粮食作物，又是良好的饲料作物，也是工业原料作物。近年来，国内外对甘薯的营养保健作用进行了深入的研究，其作为一种新型营养保健功能食品已日益引起人们的高度注重。甘薯在生产、储藏过程中无污染、无公害，有关专家们评价它是“21世纪最理想的食物”，甘薯食品在人类食物结构中所占的比重将会愈来愈大，其影响将愈加广泛，甘薯的产业化前景十分广阔。我国甘薯病虫害危害严重，已经发现报导的有30多种，其中甘薯黑斑病是发生比较广泛、为害比较严重的真菌性病害。黑斑病在甘薯苗期、大田生长期和贮藏期都能发生，造成烂种、死苗、生长发育迟缓等危害。甘薯病害的防治主要实行包括选用抗病品种、物理防治、农业防治、生物防治及化学防治等综合防治措施。选用抗病品种是一种最经济有效而又安全方便的防治方法，但由于甘薯抗病育种相当的困难，选育出一个产量高、品质优、抗病性好(兼抗多种病害)的甘薯品种非常不容易；物理防治和农业防治措施需要的时间长、见效慢、费工费时；化学农药所导致的土壤退化、农药残留、水源和环境的污染、生物链中断、生态失衡、病害产生抗性等一系列问题日益凸现。生物防治的方法受到越来越多的重视，但还没有相关将防治甘薯病害与肥料相结合的相关的发明进行公开。技术实现要素：本发明所要解决的问题是研制出一种防治病害的薯类专用微生物菌肥，制备该微生物菌肥的原料按重量份为：抗霉菌素链霉菌菌粉20-40份，湿链霉菌菌粉10-30份，饲料类芽孢杆菌菌粉10-30份，加米里类芽孢杆菌菌粉20-40份，黄腐酸钾原粉20-40份；在所述微生物菌肥中，抗霉菌素链霉菌，湿链霉菌，饲料类芽孢杆菌，加米里类芽孢杆菌，四种菌是从400多株微生物菌株中筛选得到的能共生共存，能产生多种抗菌素如内霉素的复合物，非多烯抗真菌抗菌素，双氢链霉素，湿菌素和钴氨素类来抑制甘薯黑斑病病原菌有特别强大的效果，从而达到防治甘薯黑斑病的作用；另一方面，本发明的菌种能够全面的利用微生物种间或种内的抗生、竞争、重寄生、溶菌作用，或者通过次级代谢产物诱导甘薯产生抗病性，增强其防病效果；再次，本发明中所使用的这4株菌株都是可从土壤中直接分离得到，具有固氮，解磷，解钾，并具有根迹促生作用，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时，并定向植物根际分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长起到肥料的效果；同时本发明中的黄腐酸钾也可作物提供钾肥与有机质。另一个目的，提供了一种防治病害的薯类专用微生物菌肥的制备方法，其具体制备方法，包括以下步骤：步骤一、抗霉菌素链霉菌菌粉的制备取出抗霉菌素链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为抗霉菌素链霉菌种子液；发酵：将上述制备的抗霉菌素链霉菌种子液以1%-3%的接种量接种至灭菌的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基上，菌种与抗霉菌素链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为3-6cm，控温28-32℃，第一天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵3-4天，检测其孢子含量不低于20亿CFU/g，即可低温风干至水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到抗霉菌素链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5，硫酸镁：0.5，氯化钠：0.5，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基：玉米酒糟80%，菜粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麸皮7%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤二，湿链霉菌菌粉的制备取出湿链霉菌菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为湿链霉菌种子液；发酵：将上述制备的湿链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的湿链霉菌固体发酵培养基上，菌种与湿链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的湿链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-8cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵4-6天，检测其孢子含量不低于10亿CFU/g，即可低温风干水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到湿链霉菌菌粉；其中，所述的PDA培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；其中，所述的湿链霉菌固体发酵培养基：稻壳粉80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麸皮15%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤三，加米里类芽孢杆菌菌粉的制备取出加米里类芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基的茄子瓶中，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L加米里类芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min，24小时后通气量为300L/min，30℃培养32-48小时，待总菌数含量不低于25亿cfu/ml，即可作为加米里类芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的加米里类芽孢杆菌种子液以10%-20%的比例接种至加米里类芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于60亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到加米里类芽孢杆菌菌粉；其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；其中，所述加米里类芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，木薯粉10g/L，菜粕粉40g/L，硫酸镁0.4g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，碳酸钙10g/L，pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；其中，加米里类芽孢杆菌固体培养基：玉米酒糟57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤四，饲料类芽孢杆菌菌粉的制备取出饲料类芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基的茄子瓶中，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前10小时通气量为200L/min，10小时后通气量为320L/min，30℃培养16-24小时，待总菌含量不低于30亿cfu/ml，即可作为饲料类芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的饲料类芽孢杆菌种子液以总接种量的10%-20%的接种量加至饲料类芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵36-48小时，待芽孢含量不低于80亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到饲料类芽孢杆菌菌粉；其中，所述营养肉汤固体培养基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述液体种子培养基：玉米粉35g/L，豆粕粉20g/L，鱼粉5g/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，碳酸钙5.0g/L，pH7.0；其中，饲料类芽孢杆菌固体发酵培养基：麸皮60%，DDGS（玉米酒糟）32%，棉粕5%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤五，将上面制成的各种菌粉按抗霉菌素链霉菌菌粉20-40份，湿链霉菌菌粉10-30份，饲料类芽孢杆菌菌粉10-30份，加米里类芽孢杆菌菌粉20-40份，黄腐酸钾原粉20-40份；混合均匀，即为防治病害的薯类专用微生物菌肥。其中，所述的防治病害的薯类专用微生物菌肥的施用方法为底施微生物菌肥5-10kg/亩。本发明具有的优点和有益效果：、本发明中包含的抗霉菌素链霉菌，湿链霉菌，饲料类芽孢杆菌，加米里类芽孢杆菌四种菌是从400多株微生物菌株中筛选得到的能共生共存，能在植株的根，茎，叶以及土壤中能够生长繁殖，能产生多种抗菌素能产生多种抗菌素如内霉素的复合物，非多烯抗真菌抗菌素，双氢链霉素，湿菌素和钴氨素类来抑制甘薯黑斑病病原菌有特别强大的效果，从而达到防治甘薯黑斑病的作用，其对甘薯黑斑病的药效高，平均防效在87.62%以上，且针对性强；、本发明的菌种能够全面的利用微生物种间或种内的抗生、竞争、重寄生、溶菌作用，或者通过次级代谢产物诱导甘薯产生抗病性，增强其防病效果；、本发明中所使用的这四株菌株都是可从土壤中直接分离得到，具有固氮，解磷，解钾，都具有根迹促生作用，可在作物表面、植株内部或土壤中繁殖生长的同时，并定向植物根际分泌某些次生代谢产物，能够提高植物对养分的吸收、刺激植株生长起到肥料的效果；(4)、本发明复合微生物菌肥对人、畜安全，属于环境友好型，利用本发明方法防治番茄灰霉病不易产生抗药性，本发明制备方法简单、菌种多，产生的拮抗物质广泛，肥效显著，成本低、使用简单。具体实施方式实施例1一种防治病害的薯类专用微生物菌肥，其特征在于，制备该微生物菌肥的原料按重量份为：抗霉菌素链霉菌菌粉30份，湿链霉菌菌粉20份，饲料类芽孢杆菌菌粉20份，加米里类芽孢杆菌菌粉30份，黄腐酸钾原粉30份；其具体制备方法，包括以下步骤：步骤一、抗霉菌素链霉菌菌粉的制备取出抗霉菌素链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为抗霉菌素链霉菌种子液；发酵：将上述制备的抗霉菌素链霉菌种子液以1%-3%的接种量接种至灭菌的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基上，菌种与抗霉菌素链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为3-6cm，控温28-32℃，第一天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵3天，检测其孢子含量为25亿CFU/g，低温风干至水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到抗霉菌素链霉菌菌粉；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0.5，硫酸镁：0.5，氯化钠：0.5，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的抗霉菌素链霉菌固体发酵培养基：玉米酒糟80%，菜粕2%，玉米芯粉1%，石粉10%，麸皮7%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤二，湿链霉菌菌粉的制备取出湿链霉菌菌种保藏管，用PDA固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为湿链霉菌种子液；发酵：将上述制备的湿链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的湿链霉菌固体发酵培养基上，菌种与湿链霉菌固体培养基混合均匀后，将接好种的湿链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上，物料高度为5-8cm，控温28-32℃，前两天空气湿度保持为60%-75%，过后空气湿度保持为40%-50%，发酵5天，检测其孢子含量为12亿CFU/g，即可低温风干水分低于8%，粉碎过40目筛，即得到湿链霉菌菌粉；其中，所述的PDA培养基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，琼脂20g；其中，所述的湿链霉菌固体发酵培养基：稻壳粉80%，棉粕2%，玉米粉1%，石粉2%，麸皮15%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁0.05%，固体培养基含水量为40%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤三，加米里类芽孢杆菌菌粉的制备取出加米里类芽孢杆菌保藏管，用无氮固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养72小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有无氮固体培养基的茄子瓶中，在30℃培养箱中培养72小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L加米里类芽孢杆菌种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前8小时通气量为100L/min，8-24小时后通气量为200L/min，24小时后通气量为300L/min，30℃培养32-48小时，待总菌数含量不低于25亿cfu/ml，即可作为加米里类芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的加米里类芽孢杆菌种子液以15%的比例接种至加米里类芽孢杆菌固体培养基上，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵40小时，检测芽孢含量为65亿cfu/g，晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到加米里类芽孢杆菌菌粉；其中，所述无氮固体培养基：蔗糖10g，磷酸氢二钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙0.1g，碳酸钙5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH7.2；其中，所述加米里类芽孢杆菌种子培养基：糖蜜20g/L，木薯粉10g/L，菜粕粉40g/L，硫酸镁0.4g/L，硫酸锰0.6g/L，磷酸二氢钾0.6g/L，碳酸钙10g/L，pH7.0。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；加米里类芽孢杆菌固体培养基：玉米酒糟57%，麸皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤四，饲料类芽孢杆菌菌粉的制备取出饲料类芽孢杆菌保藏管，用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L液体种子培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前10小时通气量为200L/min，10小时后通气量为320L/min，30℃培养16-24小时，待总菌含量不低于30亿cfu/ml，即可作为饲料类芽孢杆菌种子液；发酵：将上述制备的饲料类芽孢杆菌种子液以总接种量的10%-20%的接种量加至饲料类芽孢杆菌固体发酵培养基中，混匀，在浅盘上发酵，堆料厚度为5-10cm，控制发酵温度为30-40℃，发酵42小时，检测其芽孢含量为84亿cfu/g，即可晒干，待水分含量低于10%，粉碎过100目筛，即得到饲料类芽孢杆菌菌粉；其中，所述营养肉汤固体培养基：蛋白胨10.0g/L,牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂20g/L，pH7.2±0.2；其中，所述液体种子培养基：玉米粉35g/L，豆粕粉20g/L，鱼粉5g/L，硫酸镁0.6g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾0.3g/L，碳酸钙5.0g/L，pH7.0；其中，饲料类芽孢杆菌固体发酵培养基：麸皮60%，DDGS（玉米酒糟）32%，棉粕5%，石粉3%，尿素0.4%，磷酸氢二钾0.4%，硫酸镁0.05%，培养基含水量50%-60%。各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤五，将上面制成的各种菌粉按抗霉菌素链霉菌菌粉30份，湿链霉菌菌粉20份，饲料类芽孢杆菌菌粉20份，加米里类芽孢杆菌菌粉30份，黄腐酸钾原粉30份；混合均匀，即为防治病害的薯类专用微生物菌肥。实施例2微生物菌肥在甘薯大田中的应用效果1、试验选择在甘薯高产区中进行；2、试验地址选择在广东省湛江市徐闻县某农场；在前一年有明显的甘薯黑斑病的土地试验与对照；3、药剂用法与用量：试验组：底施实施例1生产的微生物菌肥5kg/亩，复合肥（15-15-15），10kg/亩；化肥组：复合肥（15-15-15），40kg/亩；有机肥组：农家肥600kg/亩；其它管理措施相同；4、试验结果：从表1可以看出，本发明的微生物菌肥相对于全施用化学复合肥与有机肥组在大田试验中具有明显的增产优势，使用本发明的微生物菌肥的平均亩产可以达到2432kg/亩，黑斑病指只有3.12，而全使用化肥组的产量也有2088kg，黑斑病指高达25.21；而使用有机肥的产量仅有1876kg，黑斑病也有明显的降低，只有12.45，本发明的微生物菌肥相对于有机肥组能够在大田上增产29.6%，而又相对于全用化肥组的对黑斑病的防效高达87.62%，具有显著的效果。表1微生物菌肥在甘薯大田中的应用效果平均亩产（kg）增产率(%)黑斑病病指相对防效（%）试验组243229.63.1287.62化肥组208811.325.21有机肥组187612.4550.61以上已将本发明做一详细说明，以上所述，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能限定本发明实施范围，即凡依本申请范围所作均等变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖范围内。当前第1页1 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