一种防治番茄灰霉病的复合微生物菌肥及其制备方法与流程

文档序号:11123594阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种防治番茄灰霉病的复合微生物菌肥,其特征在于,该复合微生物菌肥的原料配比为:生绿链霉菌发酵液10-30份,昌帕瓦底链霉菌发酵液20-40份,印度芽孢杆菌发酵液10-30份,摩加夫芽孢杆菌发酵液10-30份, 卵孢木霉发酵液10-30份。

2.根据权利要求1所述的一种防治番茄灰霉病的复合微生物菌肥,其特征在于,其制备方法,包括以下步骤:

步骤一:生绿链霉菌发酵液的制备

取出生绿链霉菌菌种保藏管,用高氏一号固体培养基划平板进行复苏,30℃培养7天,在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中,在培养箱中30℃培养6-8天,待菌苔长满茄子瓶,产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱,调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml,即为生绿链霉菌种子液;

发酵:将上述制备的生绿链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的生绿链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中,控温28-32℃,开搅拌200r/min,前24小时,通气量为每分钟为200L空气,24-36小时,通气量为400L,36小时后,通气量为600L,培养40-48小时,待菌体含量达到60g/L,即可停罐,即得到生绿链霉菌发酵液;

其中,所述的高氏一号固体培养基:硝酸钾:1克,可溶性淀粉:20克,磷酸氢二钾:0.5克,硫酸镁:0.5克,氯化钠:0.5克,硫酸亚铁:0.01克,琼脂:20克,蒸馏水补足1000ml ,PH7.2~7.4;

其中,所述的生绿链霉菌发酵培养基:花生粕粉3%,葡萄糖1%,石粉1%,大豆糖蜜2%,磷酸氢二钾0.04%,硫酸镁0.05%,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤二:昌帕瓦底链霉菌发酵液的制备

取出昌帕瓦底链霉菌菌种保藏管,用高氏一号固体培养基划平板进行复苏,30℃培养7天,在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中,在培养箱中30℃培养6-8天,待菌苔长满茄子瓶,产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱,调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml,即为昌帕瓦底链霉菌种子液;

发酵:将上述制备的昌帕瓦底链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的昌帕瓦底链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中,控温28-30℃,开搅拌200r/min,前18小时,通气量为每分钟为300L空气,18-32小时,通气量为500L,32小时后,通气量为700L,培养40-48小时,待菌体含量达到80g/L,即可停罐,即得到昌帕瓦底链霉菌发酵液;

其中,所述的高氏一号固体培养基与步骤1中高氏一号固体培养基的相同;

其中,所述的昌帕瓦底链霉菌发酵培养基:芝麻粕粉3%,棉粕1%,玉米淀粉2%,石粉1%,甘蔗糖蜜3%,硫酸锰0.002%,磷酸氢二钾0.01%,硫酸镁0.02%,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤三,印度芽孢杆菌发酵液的制备

取出印度芽孢杆菌保藏管,用LB固体培养基分别划平板进行复苏,30℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种至装有LB固体培养基,在30℃培养箱中培养48小时,用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱,接种至装有300L印度芽孢杆菌发酵培养基的500L发酵罐中,开搅拌120r/min,前12小时通气量为200L/min,12小时后通气量为320L/min ,30℃培养26-36小时,待总芽孢含量不低于60亿cfu/ml,即可作为印度芽孢杆菌发酵液;

其中,所述LB固体培养基:酵母提取物5.0 g,蛋白胨10.0,NaCl10.0 g,琼脂20 g,水1000mL,pH7.2;

其中,所述印度芽孢杆菌发酵培养基:葡萄糖8g/L,玉米淀粉22 g/L, 豆粕粉50 g/L,硫酸镁0.4 g/L,硫酸锰0.5 g/L,磷酸二氢钾0.5 g/L,碳酸钙5 g/L, pH7.0;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤四,摩加夫芽孢杆菌发酵液的制备

取出摩加夫芽孢杆菌保藏管,用营养肉汤固体培养基分别划平板进行复苏,30℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汤固体培养基,在30℃培养箱中培养48小时,用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱,接种至装有300L摩加夫芽孢杆菌发酵培养基的500L发酵罐中,开搅拌120r/min,前8小时通气量为200L/min,8小时后通气量为300L/min ,30℃培养24-36小时,待总芽孢含量不低于80亿cfu/ml,即可作为摩加夫芽孢杆菌发酵液;

其中,所述营养肉汤固体培养基:蛋白胨10.0 g/L, 牛肉膏3.0 g/L,氯化钠5.0 g/L,琼脂20 g/L ,pH 7.2 ± 0.2;

其中,所述摩加夫芽孢杆菌发酵培养基:葡萄糖8g/L,木薯粉20 g/L, 菜粕粉30 g/L,硫酸镁0.4 g/L,硫酸锰0.5 g/L,磷酸二氢钾0.2 g/L,碳酸钙5 g/L, pH7.0;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤五,卵孢木霉发酵液的制备

取出卵孢木霉菌种保藏管,用PDA固体培养基划平板进行复苏,30℃培养7天,在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升PDA固体培养基的茄子瓶中,在培养箱中30℃培养6-8天,待菌苔长满茄子瓶,产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱,调节孢子浓度为0.05亿cfu/ml,即为卵孢木霉种子液;

发酵:将上述制备的卵孢木霉种子液以2%的接种量接种至装有300L卵孢木霉发酵培养基的500L发酵罐中,开搅拌200r/min,前8小时通气量为120L/min,8-24小时后通气量为240L/min ,24小时后通气量为360L/min ,30℃培养32-48小时,待菌体含量达到80g/L,即可停罐,即可作为卵孢木霉发酵液;

其中,所述的PDA固体培养基:土豆200g,蔗糖20g,水1000mL,琼脂20g;

其中,所述的卵孢木霉发酵培养基:菜粕2%,棉粕2%,甘薯粉2%,石粉1%,大豆糖蜜3%,硫酸锰0.001%,磷酸氢二钾0.04%,硫酸镁0.02%,各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤六,混合发酵液

将前五个步骤制备的菌液按生绿链霉菌发酵液10-30份,昌帕瓦底链霉菌发酵液20-40份,印度芽孢杆菌发酵液10-30份,摩加夫芽孢杆菌发酵液10-30份,卵孢木霉发酵液10-30份;混匀,即得到防治番茄灰霉病的复合微生物菌肥。

3.根据权利要求1所述的一种防治番茄灰霉病的复合微生物菌肥,其特征在于,该复合微生物菌肥在防治番茄灰霉病的方法为叶面喷施每次2-5L复合微生物菌肥/亩,其使用稀释的倍数为100-200倍,连续使用2-3次,每7-10天使用一次。

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