一种防治马铃薯疮痂病的微生物菌肥及其制备方法与流程

文档序号:11123595阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种防治马铃薯疮痂病的微生物菌肥,其特征在于,制备该微生物菌肥的原料按重量份为:阿氏芽孢杆菌菌粉10-30份,沙福芽孢杆菌菌粉10-30份,加德那链霉菌菌粉10-30份,焦土链霉菌菌粉10-30份,黄腐酸钾20-60份,棉粕粉10-30份;其具体制备方法,包括以下步骤:

步骤一、阿氏芽孢杆菌菌粉的制备

取出阿氏芽孢杆菌保藏管,用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏,30℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基,在30℃培养箱中培养48小时,用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱,接种至装有300L阿氏液体种子培养基的500L发酵罐中,开搅拌120r/min,前10小时通气量为200L/min,10小时后通气量为320L/min ,30℃培养16-24小时,待总菌含量不低于20亿cfu/ml,即可作为阿氏芽孢杆菌液体种子;

发酵:将上述制备的阿氏芽孢杆菌液体种子加至阿氏芽孢固体发酵培养基中,混匀,在浅盘上发酵,堆料厚度为5-10cm,翻料控制发酵温度为30-40℃,发酵36-48小时,待芽孢含量不低于100亿cfu/g,即可晒干,待水分含量低于10%,粉碎过40目筛,即得到阿氏芽孢杆菌菌粉;

其中,所述营养肉汁固体培养基:蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂,20 g,水1000mL,pH7.2;

其中,所述阿氏液体种子培养基:玉米淀粉20 g/L, 豆粉10 g/L,硫酸镁0.2 g/L,硫酸锰0.1 g/L,磷酸二氢钾0.5 g/L,磷酸氢二钠1.0 g/L,pH7.0;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

其中,所述的阿氏芽孢固体发酵培养基:甘蔗渣60%,麸皮35%,菜粕2%,石粉1%,粗玉米皮2%,尿素0.4%,磷酸氢二钾0.4%,硫酸镁0.05%,培养基含水量50%-60%;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤二、沙福芽孢杆菌菌粉的制备

取出沙福芽孢杆菌保藏管,用营养肉汁固体培养基分别划平板进行复苏,30℃培养48小时,在平板下挑取单个菌落接种至装有营养肉汁固体培养基,在30℃培养箱中培养48小时,用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱,接种至装有300L沙福液体种子培养基的500L发酵罐中,开搅拌120r/min,前12小时通气量为200L/min,12小时后通气量为320L/min ,30℃培养16-24小时,待总菌含量不低于10亿cfu/ml,即可作为沙福芽孢杆菌液体种子;

发酵:将上述制备的沙福芽孢杆菌液体种子加至沙福芽孢固体发酵培养基中,混匀,在浅盘上发酵,堆料厚度为5-10cm,控制发酵温度为30-40℃,发酵36-48小时,待芽孢含量不低于50亿cfu/g,即可晒干,待水分含量低于10%,粉碎过40目筛,即得到沙福芽孢杆菌菌粉;

其中,所述营养肉汁固体培养基:蛋白胨5g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂20 g,水1000mL,pH7.2;

其中,所述沙福液体种子培养基:葡萄糖8g/L,玉米粉10 g/L, 豆粉10 g/L,硫酸镁0.2 g/L,硫酸锰0.1 g/L,磷酸二氢钾0.5 g/L,磷酸氢二钠1.0 g/L,pH7.0;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

其中,所述的沙福芽孢固体发酵培养基:麸皮60%, 玉米皮35%,棉粕2%,石粉3%,尿素0.4%,磷酸氢二钾0.4%,硫酸镁0.05%,硫酸锰0.01%,培养基含水量50%-60%;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤三,加德那链霉菌菌粉的制备

取出加德那链霉菌菌种保藏管,用高氏一号固体培养基划平板进行复苏,30℃培养7天,在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中,在培养箱中30℃培养6-8天,待菌苔长满茄子瓶,产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱,调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml,即为加德那链霉菌种子液;

发酵:将上述制备的加德那链霉菌种子液以3%的接种量接种至灭菌的加德那链霉菌固体发酵培养基上,菌种与加德那链霉菌固体培养基混合均匀后,将接好种的加德那链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上,物料高度为3-6cm,控温28-32℃,第一天空气湿度保持为60%-75%,过后空气湿度保持为40%-50%,发酵3-4天,检测其孢子含量不低于20亿CFU/g,即可低温风干至水分低于8%,粉碎过40目筛,即得到加德那链霉菌菌粉;

其中,所述的高氏一号固体培养基:硝酸钾:1克,可溶性淀粉:20克,磷酸氢二钾:0.5克,硫酸镁:0.5克,氯化钠:0.5克,硫酸亚铁:0.01克,琼脂:20克,蒸馏水补足1000ml ,PH7.2~7.4;

其中,所述的加德那链霉菌固体发酵培养基:甘蔗渣80%,豆粕2%,玉米芯粉1%,石粉10%,麸皮7%,硫酸锰0.004%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸镁0.05%,固体培养基含水量为40%-60%;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤四,焦土链霉菌菌粉的制备

取出焦土链霉菌菌种保藏管,用高氏一号固体培养基划平板进行复苏,30℃培养7天,在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中,在培养箱中30℃培养6-8天,待菌苔长满茄子瓶,产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱,调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml,即为焦土链霉菌种子液;

发酵:将上述制备的焦土链霉菌种子液以5%的接种量接种至灭菌的焦土链霉菌固体发酵培养基上,菌种与焦土链霉菌固体培养基混合均匀后,将接好种的焦土链霉菌固体发酵培养基摊在发酵槽上,物料高度为5-8cm,控温28-32℃,前两天空气湿度保持为60%-75%,过后空气湿度保持为40%-50%,发酵4-6天,检测其孢子含量不低于10亿CFU/g,即可低温风干水分低于8%,粉碎过40目筛,即得到焦土链霉菌菌粉;

其中,所述的高氏一号固体培养基与步骤三中的高氏一号固体培养基相同;

其中,所述的焦土链霉菌固体发酵培养基:米糠80%,棉粕2%,玉米粉1%,石粉2%,麸皮15%,硫酸锰0.004%,磷酸氢二钾0.1%,硫酸镁0.05%,固体培养基含水量为40%-60%;各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa,121℃灭菌30分钟;

步骤五,将上面制成的各种菌粉按阿氏芽孢杆菌菌粉10-30份,沙福芽孢杆菌菌粉10-30份,加德那链霉菌菌粉10-30份,焦土链霉菌菌粉10-30份,黄腐酸钾20-60份,棉粕粉10-30份混合均匀,即为防治马铃薯疮痂病的微生物菌肥。

2.根据权利要求1所述的一种防治马铃薯疮痂病的微生物菌肥,其特征在于,所述的防治马铃薯疮痂病的微生物菌肥的施用方法为拌种,拌种的用量为马铃薯种薯重量的1/10-1/20。

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