本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及暗褐网柄牛肝菌的栽培方法。
背景技术：
暗褐网柄牛肝菌(phlebopusportentosus)属于牛肝菌目小牛肝菌科，脉柄牛肝菌属。最早描述见于斯里兰卡，现在斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚以及新西兰都有分布，国内主要分布于广西、海南和云南。目前该菌的利用方式主要是野生状态的人工采收，无法满足社会日益增长的需求，加之人为地高强度采收，使暗褐网柄牛肝菌资源减少，生态环境受到破坏。
现有技术中，栽培种经40-60天培养后，菌丝才能长满栽培瓶或栽培袋，培养时间偏长。另外，在采收完一茬暗褐网柄牛肝菌后，出菇周期即结束，没有采取有效措施对栽培种进行二次出菇培养，导致暗褐网柄牛肝菌产率偏低。
目前，如何提高暗褐网柄牛肝菌产率仍有待研究。
技术实现要素：
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了培养基以及暗褐网柄牛肝菌的栽培方法。利用本发明的培养基栽培暗褐网柄牛肝菌，能够有效地缩短栽培时间，提高栽培效率。另外，采用二次出菇培养方式，以便进一步获得大量暗褐网柄牛肝菌，适于规模化生产。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种培养基。根据本发明的实施例，所述培养基包括：干料；以及ms培养基，其中，基于所述干料的总质量，按照质量百分比计，所述ms培养基含量为1％～5％。发明人发现，利用含有ms培养基的栽培种培养基栽培暗褐网柄牛肝菌，可以缩短获得栽培种的时间，提高培养效率。添加ms培养基是发明人经过大量实验意外发现可以缩短获得栽培种的时间，添加其他有机碳、氮源(例如蛋白胨、酵母提取物或者硝酸铵)不能明显缩短培养时间，还会大幅度增加栽培种的污染率。
进一步地，发明人发现，ms培养基含量会影响栽培时间以及产率等。进而，发明人经过大量实验发现，ms培养基占干料总质量的1％～5％时，能够缩短栽培时间，同时保证暗褐网柄牛肝菌获得较高的产率。由此，利用本发明的培养基栽培暗褐网柄牛肝菌，能够有效地缩短栽培时间，提高栽培效率。
需要说明的是，本发明对于ms培养基成分不作严格限定，可以根据实际情况进行选择。根据本发明的优选实施例，ms培养基成分为：马铃薯200g，葡萄糖20g，酵母粉10g，kh2po410g，mgso410g，水1000ml。发明人发现，利用含有该ms培养基的栽培种培养基对菌种进行扩大培养，能够获得大量活性较高的栽培种。
还需要说明的是，本发明的培养基中还可以进一步包括水。
根据本发明的实施例，上述培养基还可以具有下列附加技术特征：
根据本发明的实施例，按照质量百分比计，所述干料包括：50％～70％的小麦、10％～30％的玉米粒以及10％～30％的杂木屑。在一些实施例中，所述干料包括：60％的小麦、20％的玉米粒以及20％的杂木屑。由此，以便实现暗褐网柄牛肝菌的栽培。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种暗褐网柄牛肝菌的栽培方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将液体菌种接种于前面所描述的培养基中，进行扩大培养，得到栽培种；以及将所述栽培种进行出菇培养，以便得到所述暗褐网柄牛肝菌。发明人通过在栽培种培养基中添加ms培养基，可以缩短扩大培养时间，提高培养效率。添加ms培养基是发明人经过大量实验意外发现可以缩短获得栽培种的时间，添加其他有机碳、氮源(例如蛋白胨、酵母提取物或者硝酸铵等)不能明显缩短培养时间，还会大幅度增加栽培种的污染率。
根据本发明的实施例，上述暗褐网柄牛肝菌的栽培方法还可以具有下列附加技术特征：
根据本发明的实施例，基于800g～1000g所述培养基，所述液体菌种的接种量为40ml～50ml。由此，以便获得大量活性较高的栽培种。
根据本发明的实施例，所述扩大培养是在28℃～30℃下进行20天～25天。发明人发现，通过向栽培种培养基中添加ms培养基，能够缩短扩大培养时间，在28℃～30℃下培养25～30天即可获得大量活力较高的栽培种。
根据本发明的实施例，所述出菇培养是在下列条件下进行的：菇房温度为25℃～28℃，湿度为85％～95％，光照强度为200lux～500lux，光照时长为8～10小时/天，二氧化碳浓度为600ppm～800ppm，时间为15天～25天。发明人发现，在此条件下能够获得大量暗褐网柄牛肝菌。
根据本发明的具体实施例，在出菇培养之前，将湿度为50～60％的腐殖土覆盖到装有所述栽培种的容器(例如栽培瓶、栽培袋)中，使得腐殖土与容器口平齐。由此，以便实现出菇。
根据本发明的实施例，所述方法进一步包括：采收所述暗褐网柄牛肝菌；以及向所述采收后的培养基中注入含有ms培养基的无菌水，进行二次出菇培养。采收经出菇培养获得的暗褐网柄牛肝菌，再向出菇培养后的培养基中注入含有ms培养基的无菌水，以便进一步提供营养，促进暗褐网柄牛肝菌二次生产繁殖，获得大量暗褐网柄牛肝菌。若仅补充无菌水，不能满足暗褐网柄牛肝菌生长需求，导致生长缓慢甚至凋亡。
需要说明的是，根据本发明的具体实施例，二次出菇培养所需的ms培养基与扩大培养所需的ms培养基的成分相同。由此，以便获得大量暗褐网柄牛肝菌。
根据本发明的实施例，基于所述无菌水的总质量，按照质量百分比计，所述ms培养基含量为0.1％～0.5％。发明人发现，ms培养基的添加量会影响暗褐网柄牛肝菌的最终产量。进而，发明人经过大量实验发现，注入含有0.1％～0.5％ms培养基的无菌水，能够促进暗褐网柄牛肝菌二次出菇，从而获得大量暗褐网柄牛肝菌。若ms培养基含量过高，反而会抑制暗褐网柄牛肝菌生长，影响产量。
根据本发明的实施例，基于800g～1000g所述培养基，所述含有ms培养基的无菌水注入量为40ml～50ml。由此，以便促进暗褐网柄牛肝菌二次出菇，从而获得大量暗褐网柄牛肝菌。
根据本发明的实施例，所述二次出菇培养时间为10天～15天。发明人经过大量实验得到较优的二次出菇培养时间，由此，以便获得大量暗褐网柄牛肝菌。
根据本发明的实施例，所述二次出菇培养是在下列条件下进行的：菇房温度为25℃～28℃，湿度为85％～95％，光照强度为200lux～500lux，光照时长为8～10小时/天，二氧化碳浓度为600ppm～800ppm。发明人经过大量实验得到较优的二次出菇培养条件，由此，以便获得大量暗褐网柄牛肝菌。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对培养基所描述的特征和优点，同样适用于该暗褐网柄牛肝菌的栽培方法，在此不再赘述。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
在该实施例中，研究栽培种培养基中ms培养基含量以及无菌水中ms培养基含量的影响。
具体步骤如下：
1、液体菌种制备
液体培养基(即ms培养基，1000ml)：马铃薯200g，葡萄糖20g，酵母粉10g，kh2po410g，mgso410g，余量水。
制备步骤：
1)将新鲜马铃薯去皮，称量后切成薄片，放入不锈钢锅中，加入适量的水煮沸30分钟后取滤液，按比例称量葡萄糖、酵母粉、kh2po4、mgso4，加入到滤液中，补足水至1000ml，充分溶解后得到液体培养基。将液体培养基分装至500ml三角瓶中，每瓶装量300ml，121℃灭菌30分钟。
2)将母种培养基切成2-4mm的方块，接种到液体培养基中，用高速匀浆机打碎，置于29℃，110rpm的恒温摇床中培养12天，得到液体菌种。
2、栽培种的制备
栽培种培养基：小麦60％，玉米粒20％，杂木屑20％，ms培养基(含量分别为干料重量的0％、1％、5％、6％)。
制备步骤：
小麦、玉米粒煮至无白心，杂木屑浸泡24小时。与ms培养基混匀后，装入1100ml的栽培瓶中，每瓶装量800g～1000g。121℃，灭菌2小时。
3、接种培养
将培养好的液体菌种接种到栽培种培养基中，每瓶栽培种接种50ml。置于28℃～30℃培养25天。
4、覆土出菇
将湿度为50～60％的腐殖土覆盖到栽培瓶中，与栽培瓶瓶口平齐。调整菇房温度26℃，湿度85％～95％，光照400lux，光照时长10小时/天，二氧化碳浓度600ppm～800ppm，20天后可以采收第一茬暗褐网柄牛肝菌。
配制含ms培养基(含量分别为0％、0.1％、0.5％和0.6％)的无菌水，用针管向每瓶栽培瓶中注入50ml的此含ms培养基无菌水，经上述第一茬出菇条件培养，15天可以采收第二茬暗褐网柄牛肝菌。
出菇情况如下表，其中平均产量是指每50瓶栽培瓶的平均产量。可以看出，当栽培种培养基中ms培养基含量为1～5％，无菌水中ms培养基含量为0.1％～0.5％时，暗褐网柄牛肝菌产量较高。
表1栽培种培养基中ms培养基含量以及无菌水中ms培养基含量的影响
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。