一种复合光合菌肥的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明是属于一种微生物菌肥技术范围，具体的说是设及到一种复合光合菌肥的 制备方法。
【背景技术】
[0002] 光合细菌列为细菌n，真细菌纲，红螺菌目，下分为红螺菌亚目和绿菌亚目，其中 红螺菌目下又分为红螺菌科(紫色非硫光合细菌)和着色菌科(紫硫光合细菌)。归属于红螺 菌目的光合细菌能在厌氧条件下进行光合作用，且不释放氧。细胞中含有细菌叶绿素和多 种类胡萝h素，及细胞色素、泛酬和铁氧化还原型的非血红素铁蛋白。根据《伯杰细菌手 册》第八版，红螺菌科的光合细菌能光合同化简单的有机物质，大多数种不能W硫化物作为 唯一光合电子供体而生长，当硫化物或硫代硫酸盐作为电子供体时，元素硫不是一个中间 的氧化产物。当由硫化物形成元素硫时，元素硫不能进一步氧化为硫酸盐。所有的种都不 能利用元素硫作为电子供体。主要包括=个属；红螺菌属，红假单胞菌属，红微菌属。红螺 菌属中比较有代表性的菌种为；深红红螺菌，纤细红螺菌，黄楊红螺菌，莫氏红螺菌，度光红 螺菌。红假单胞菌属中比较有代表性的菌种为：沼泽红假单胞菌，绿色红假单胞菌，嗜酸红 假单胞菌，胶质红假单胞菌，英膜红假单胞菌，球形红假单胞菌等。红微菌属主要代表菌种 为万巧氏红微菌。
[0003] 着色菌科(紫硫细菌）在光照下，能利用硫化氨、硫代硫酸盐、分子氨及其他无机或 有机还原剂把二氧化碳还原成有机物，同时能固定大气中的氮。大多数种是严格厌氧的（只 有一个种一桃红英硫菌能在黑暗中微好氧生长)，在有元素硫和硫化物时，具有光自养同化 二氧化碳的能力，元素硫在细胞内居中地W球状积累，有一个属(外硫红螺菌属积累在细胞 外面。硫酸盐是硫化合物的最终氧化产物。许多菌株能利用分子氨作为电子供体。所有的 菌株能光合同化一些简单的有机物质，其中最广泛被利用的是醋酸盐和丙酬酸盐。没有同 化型硫酸还原作用的菌株仅在有硫化物或其它还原的硫化合物作为细胞硫来源时，才能利 用有机物质，绝大多数菌株在无硫化氨或硫时，可利用有机物质，因此所有的类型都是潜在 的混合营养菌。
[0004] 着色园科内包括着色园属，囊硫园属，八球硫园属，硫螺旋园属，夹硫园属，闪囊园 属，板硫菌属，可变杆菌属，外硫红螺菌属。
[0005] 光合细菌是一类能利用光能作为能量来源的细菌。由于其既能促进±壤物质转 化，提高±壤肥力，又能促进作物生长，增强作物抗病防病能务，降解农药残留和固定有毒 有害重金属，所W农作物施用光合菌肥，能收到增产增质的效果。单一光合细菌其作用有 限，复合光合细菌成为了研究的趋势与热点。
[0006] 但现有有关光合细菌的研究主要是针紫色非硫光合细菌进行研究，尽管也有些是 一些复合光合细菌，但其主要是针对紫色非硫光合细菌(红螺菌科）内进行混合培养，如专 利号200910039525. 5 "-种农用光合细菌制剂的生产方法"使用的菌种为沼泽红假单胞菌 和球形红细菌。专利号201210255225. 2 "高活菌数光合细菌原代菌种的制种方法"使用的 菌种为沼泽红假单胞菌。专利号200410048678. 3 "高浓度光合细菌制剂的制备方法"使用 的菌种为沼泽红假单胞菌，英膜红假单胞菌和球形红假单胞菌；专利号201310734863. 7"- 种复合光合菌剂及其制备方法"使用的菌种为球形红假单胞菌，沼泽红假单胞菌及深红红 螺菌菌种；从现有文献上来看，大部份复合光合细菌只是对红螺菌科中的菌进行混合培养， 还未有报道红螺菌科与着色菌科的菌之间进行混合培养。
[0007]国内对紫硫光合细菌(着色菌科）的研究仅见于少数几篇文献，刘蔚等分离到一株 桃红英硫菌，认为其具有较好的净水能力及生物肥料的能力，特别可W解决我国大部份± 壤内因缺硫而影响农作物生长W至减产的问题。四川大学的冯疆对紫硫细菌中的桃红英硫 菌进行了研究，他认为桃红英硫菌适于应用到制作菌肥和处理含硫污染物方面。但要投入 实际运用，首要要解决的问题是，该菌的生长速度缓慢，一般要培养两周W后才会有明显的 生长趋势，培养20-40天才能做为菌剂使用，且0D650的值不高于1，活菌含量低于1亿/毫 升，较长的生长周期不利于大规模的应用。而到目前为止，还未见有关桃红英硫菌肥制备方 法技术方案公开。也未有着色菌科(较强硫化氨的降解能力，促进硫元素的物质循环）与红 螺菌科中的菌进行复合培养作为菌肥的技术方案进行公开。
【发明内容】
[000引针对现有技术的不足，本发明提供一种紫硫光合细菌中的桃红英硫菌与紫色非硫 光合细菌中的球形红假单胞菌两种菌混合培养，菌体生长速度快，菌含量高，培养时间短， 肥效活性高、稳定性高、作用效果快的复合光合细菌肥的制备方法。
[0009] 为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：采用紫硫光合细菌中的桃红英 硫菌菌种与紫色非硫光合细菌中的球形红假单胞菌按W下步骤进行培养： (1)、桃红英硫菌半固体种子活化培养；将桃红英硫菌种穿刺在半固体桃红英硫菌培养 基中，25-30°C光照培养7-10天，待穿刺的菌线变红并长出菌苔，即可为活化的桃红英硫菌 种； 口)、球形红假单胞菌平板活化；将球形红假单胞菌菌种在平板上划线活化，温度 25-35C活化培养3-5天，挑取大个菌落作为活化种子； 口 )、桃红英硫菌种子培养：将活化的菌种接种至桃红英硫菌种子液体培养基中，温度 25-35°C，光照强度为；1000-30001ux，光照厌氧培养7-10天，检测种子的0D650 > 1. 2,活 菌数> 6亿C化/ml即为种子培养液； (4)、球形红假单胞菌种子培养；将挑取大个球形红假单胞菌菌落作为活化种子接种到 种子培养基中，温度25-35°C，光照强度为；1000-30001UX，光照静置培养3-5天，检测种子 的0D660 > 2,活菌数> 15亿C化/ml即为种子培养液； 脚、发酵培养；将桃红英硫菌种子培养液与发酵培养基W 1 ;3-1 ;5的接种量接种，同时 将球形红假单胞菌种子培养液与发酵培养基按1 ; 10-1 ;20的接种量接入，在光照培养罐中 厌氧培养，培养温度25-35°C，光照强度为；1000-40001ux，揽拌速度为120转/分钟，待培 养至第二天，开始流加300 g/L的硫代硫酸钢至硫代硫酸钢的浓度至1-3 g/l，培养5-7天， 待检测其OD650 > 6,活菌数> 50亿C化/ml,其中桃红英硫菌不低于25亿C化/ml,球形红 假单胞菌含量不低于20亿C化/ml,即可放罐，灌装，包装成品。
[0010] 所述的半固体桃红英硫菌培养基为；氯化锭0. 4-1. 2g/l，磯酸二氨钟0. 5-lg/L， 二水氯化巧0. 05-0. 2g/l，氯化儀0. 1-0. 5g/l，苹果酸钢1-3 g/l，果糖2-5g/l，九水硫化钢 0. 1-lg/L，琼脂8-lOg/L，氯化钢0. 5-4g/L，121°C灭菌15分钟，用苹果酸调PH至7. 0-7. 2， 其中九水硫化钢先配制成0.1 g/mL单独灭菌； 所述的桃红英硫菌种子液体培养基为；氯化锭0. 4-1. 2g/l，磯酸二氨钟0. 5-lg/L， 二水氯化巧0. 05-0. 2g/L，氯化儀0. 1-0. 5g/l，果糖2-10 g/l，甘油l-3g/l，九水硫化钢 0. 1-lg/L，氯化钢0. 5-4g/L，121°C灭菌15分钟，用醋酸调PH至7. 0-7. 2,其中九水硫化钢 先配制成0.1 g/mL单独灭菌； 所述的球形红假单胞菌种子液体培养基为：氯化锭0. 8-1. 2g/l，磯酸二氨钟0. 5-l