一种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食用菌培养基领域，尤其涉及一种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基及其制备方法。
【背景技术】
[0002]蜜环菌又名棒蘑，系伞菌目膨瑚菌科蜜环菌属的一种兼性寄生性真菌，是一种重要的食用真菌，同时是促进天麻和猪苓发育的主要营养源。蜜环菌不能直接利用培养基中的大分子营养误会，需要通过胞外酶降解成小分子物质吸收，CMC酶属于纤维素酶类分解纤维素，木聚糖酶可以分解半纤维素，蜜环菌胞外漆酶是蜜环菌次级生长代谢阶段产生的主要酶类，通过酶实现蜜环菌生长的调控是蜜环菌高效栽培的关键；不同培养基配方的营养成分对酶活性影响较大，因而研发提高蜜环菌胞外酶活性的培养基至关重要。
[0003]多孔结构的微球的微孔布满整个微球并由表面深入中心，用作载体的时候，具有，吸附位点多，大的比表面积和强的吸附能力等特点，能够起到改变被载物体溶解性、释放能力等特点，经常被用作缓释肥料的载体；在食用菌栽培的深层发酵高效培养基的制备过程中，培养基原料的分解和发酵直接决定着培养基的品质，进而决定栽培使用金的效果；相关酶和发酵菌活性的控制是制备深层发酵高效培养基的关键和难点，目前并没有多孔结构的微球作为培养基制作过程中相关酶和发酵菌活性的控制的报道，但是根据多孔微球的大的比表面积，有利于细胞的大量黏附，有利于营养物质的传输和代谢物质的排出和细胞间的相互作用这一性质，应该是可以被用于酶和发酵菌活性的控制的。
【发明内容】
[0004]本发明蜜环菌的特点以及高效栽培需求，提供一种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基及其制备方法。
[0005]本发明是通过以下技术方案实现的:
一种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基，包括以下重量份组分:聚己内酯微球2-3、生物活性磷酸钙多孔微球3-4、腐熟牛羊粪10-11、食用菌菌渣16-17、锯末14-16、花生叶粉15-16、松针粉17-19、枇杷叶粉16-17、苦瓜叶粉14-15、鸡骨粉6-7、黄豆渣8-9、南瓜蛋白4-5、山药蛋白3-4、鱼浆蛋白5_6、膨化米糠壳16-17、粳米芽粉18-10、穿心莲干粉2-3、酵母菌细胞壁1-2、纤维素酶2-3、复合氨基酸1-2、聚天门冬氨酸钠
1.5-2、三聚磷酸钠0.8-1、甜菜碱1-1.1、酵母菌2-3、适量的水。
[0006]—种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基制备方法，包括以下步骤:
(I)将生物活性磷酸钙多孔微球、一半酵母菌、酵母菌细胞壁混合，并加入总重量2-3倍的水，中速搅拌2-3h，得生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌备用；将聚己内酯微球、纤维素酶混合，并加入总重量3-4倍的水，在20-23°C下中速加热搅拌1-1.2h,得改性纤维素酶备用；
(2)将花生叶粉、松针粉、枇杷叶粉、苦瓜叶粉混合粉碎20-30min，得粉碎粉，将粉碎粉、改性纤维素酶混合，并加入总重量1-2倍的水，在38-40°C下加热低速搅拌2-3h，得粗酶解液备用；
(3)将复合氨基酸粉、聚天门冬氨酸钠、三聚磷酸钠、甜菜碱混合，并加入总重量2-3倍的水，在室温下搅拌至均匀，得营养液备用；
(4)将粗酶解液、腐熟牛羊粪、食用菌菌渣、锯末、鸡骨粉、黄豆渣、南瓜蛋白、山药蛋白、鱼浆蛋白、膨化米糠壳、粳米芽粉、穿心莲干粉、营养液混合，并加入总重量2-3倍的水混合搅拌均匀，分成两部分，一半放入通过密封阀连接的上下连接的上下发酵罐的上发酵罐中，并接入剩余一半活化的酵母菌，在23-24°C下无氧发酵12-14d，得发酵液一备用；另一半放入带搅拌装置的下发酵罐中，并接入活化的生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌，在21-22°C下无氧发酵12-14d，得发酵液二备用，打开密封阀，将发酵液一流入发酵液二中，并同时启动下发酵罐的搅拌装置搅拌至均匀，之后关闭密封阀，在下发酵罐中，22-23Γ下密闭发酵22-25d，在发酵过程中，每2-3d搅拌一次，每次搅拌30_40min，得发酵培养基备用；
(5)将发酵培养基倒出发酵罐，摊开晾晒5-10d，之后调整水分为总重量的60-62%，采用双层聚乙烯塑料袋装袋，然后放入双层水浴装置中，在100°C的水浴环境中100°C灭菌22_24h，即得。
[0007]本发明的优点是:
本发明采用花生叶粉、松针粉、枇杷叶粉、苦瓜叶粉经改性纤维素酶酶解后配合熟牛羊粪、食用菌菌渣、锯末、鸡骨粉、黄豆渣、南瓜蛋白、山药蛋白、鱼浆蛋白、膨化米糠壳、粳米芽粉、穿心莲干粉经发酵制备蜜环菌培养基，合理的搭配，丰富的营养，可以提高蜜环菌胞外酶活性，进而提高胞外酶栽培效率，采用的改性纤维素酶，在培养基中存在时间长，可以持续协同分解纤维素，给蜜环菌提供营养；采用生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌进行发酵，有效的提高了酵母菌的活性，促进了培养基原料的分解，使得培养基营养均衡，便于吸收和应用，为蜜环菌的高效栽培提供了基础。
【具体实施方式】
[0008]—种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基，包括以下重量份组分:聚己内酯微球2、生物活性磷酸钙多孔微球3、腐熟牛羊粪10、食用菌菌渣16、锯末14-16、花生叶粉15、松针粉17、枇杷叶粉16、苦瓜叶粉14、鸡骨粉6、黄豆渣8、南瓜蛋白4、山药蛋白3、鱼浆蛋白5、膨化米糠壳16、粳米芽粉18、穿心莲干粉2、酵母菌细胞壁1、纤维素酶2、复合氨基酸1、聚天门冬氨酸钠1.5、三聚磷酸钠0.8、甜菜碱1、酵母菌2、适量的水。
[0009]—种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基制备方法，包括以下步骤:
(1)将生物活性磷酸钙多孔微球、一半酵母菌、酵母菌细胞壁混合，并加入总重量2倍的水，中速搅拌2h，得生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌备用；将聚己内酯微球、纤维素酶混合，并加入总重量3倍的水，在20°C下中速加热搅拌lh，得改性纤维素酶备用；
(2)将花生叶粉、松针粉、枇杷叶粉、苦瓜叶粉混合粉碎20min，得粉碎粉，将粉碎粉、改性纤维素酶混合，并加入总重量I倍的水，在38°c下加热低速搅拌2h，得粗酶解液备用；
(3)将复合氨基酸粉、聚天门冬氨酸钠、三聚磷酸钠、甜菜碱混合，并加入总重量2倍的水，在室温下搅拌至均匀，得营养液备用；
(4)将粗酶解液、腐熟牛羊粪、食用菌菌渣、锯末、鸡骨粉、黄豆渣、南瓜蛋白、山药蛋白、鱼浆蛋白、膨化米糠壳、粳米芽粉、穿心莲干粉、营养液混合，并加入总重量2倍的水混合搅拌均匀，分成两部分，一半放入通过密封阀连接的上下连接的上下发酵罐的上发酵罐中，并接入剩余一半活化的酵母菌，在23°C下无氧发酵12d，得发酵液一备用；另一半放入带搅拌装置的下发酵罐中，并接入活化的生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌，在21°C下无氧发酵12d，得发酵液二备用，打开密封阀，将发酵液一流入发酵液二中，并同时启动下发酵罐的搅拌装置搅拌至均匀，之后关闭密封阀，在下发酵罐中，22°C下密闭发酵22d，在发酵过程中，每2d搅拌一次，每次搅拌30min，得发酵培养基备用；
(5)将发酵培养基倒出发酵罐，摊开晾晒5d，之后调整水分为总重量的60%，采用双层聚乙烯塑料袋装袋，然后放入双层水浴装置中，在100°C的水浴环境中100°C灭菌22h，即得。
【主权项】
1.一种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基，其特征在于，包括以下重量份组分:聚己内酯微球2-3、生物活性磷酸钙多孔微球3-4、腐熟牛羊粪10-11、食用菌菌渣16-17、锯末14-16、花生叶粉15-16、松针粉17-19、枇杷叶粉16-17、苦瓜叶粉14-15、鸡骨粉6-7、黄豆渣8-9、南瓜蛋白4_5、山药蛋白3_4、鱼浆蛋白5_6、膨化米糠壳16-17、粳米芽粉18-10、穿心莲干粉2-3、酵母菌细胞壁1-2、纤维素酶2-3、复合氨基酸1-2、聚天门冬氨酸钠1.5-2、三聚磷酸钠0.8-1、甜菜碱1-1.1、酵母菌2-3、适量的水。2.—种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将生物活性磷酸钙多孔微球、一半酵母菌、酵母菌细胞壁混合，并加入总重量2-3倍的水，中速搅拌2-3h，得生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌备用；将聚己内酯微球、纤维素酶混合，并加入总重量3-4倍的水，在20-23°C下中速加热搅拌1-1.2h,得改性纤维素酶备用； (2)将花生叶粉、松针粉、枇杷叶粉、苦瓜叶粉混合粉碎20-30min，得粉碎粉，将粉碎粉、改性纤维素酶混合，并加入总重量1-2倍的水，在38-40°C下加热低速搅拌2-3h，得粗酶解液备用； (3)将复合氨基酸粉、聚天门冬氨酸钠、三聚磷酸钠、甜菜碱混合，并加入总重量2-3倍的水，在室温下搅拌至均匀，得营养液备用； (4)将粗酶解液、腐熟牛羊粪、食用菌菌渣、锯末、鸡骨粉、黄豆渣、南瓜蛋白、山药蛋白、鱼浆蛋白、膨化米糠壳、粳米芽粉、穿心莲干粉、营养液混合，并加入总重量2-3倍的水混合搅拌均匀，分成两部分，一半放入通过密封阀连接的上下连接的上下发酵罐的上发酵罐中，并接入剩余一半活化的酵母菌，在23-24°C下无氧发酵12-14d，得发酵液一备用；另一半放入带搅拌装置的下发酵罐中，并接入活化的生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌，在21-22°C下无氧发酵12-14d，得发酵液二备用，打开密封阀，将发酵液一流入发酵液二中，并同时启动下发酵罐的搅拌装置搅拌至均匀，之后关闭密封阀，在下发酵罐中，22-23Γ下密闭发酵22-25d，在发酵过程中，每2-3d搅拌一次，每次搅拌30_40min，得发酵培养基备用； (5)将发酵培养基倒出发酵罐，摊开晾晒5-10d，之后调整水分为总重量的60-62%，采用双层聚乙烯塑料袋装袋，然后放入双层水浴装置中，在100°C的水浴环境中100°C灭菌22_24h，即得。
【专利摘要】本发明公开了一种通过提高蜜环菌胞外酶活性实现其高效栽培的高效培养基，包括以下重量份组分：聚己内酯微球、生物活性磷酸钙多孔微球、松针粉、食用菌菌渣、南瓜蛋白、膨化米糠壳、酵母菌细胞壁、酵母菌。本发明采用松针粉等经改性纤维素酶酶解后配合食用菌菌渣、南瓜蛋白。膨化米糠壳等经发酵制备蜜环菌培养基，合理的搭配，丰富的营养，可以提高蜜环菌胞外酶活性，进而提高胞外酶栽培效率，采用的改性纤维素酶，在培养基中存在时间长，可以持续协同分解纤维素，给蜜环菌提供营养；采用生物活性磷酸钙多孔微球吸附加载的发酵菌进行发酵，有效的提高了酵母菌的活性，促进了培养基原料的分解，便于吸收和应用，为蜜环菌的高效栽培提供了基础。
【IPC分类】C05G3/00, C05F17/00
【公开号】CN105130636
【申请号】CN201510533871
【发明人】殷铭, 费丹, 藏一健, 沈翔, 范和桥, 殷坤才
【申请人】马鞍山市安康菌业有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年8月27日