一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用

文档序号:9680611阅读:1077来源:国知局
一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物肥料与微生物农药领域,特别是涉及一种应用于农场现场发酵 的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用。
【背景技术】
[0002] 随着现有农业政策的发展,农场规模化,大型化的趋势进一步加强,芽孢杆菌是目 前生物农药,生物肥料中研究最多的一种微生物,它具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力, 其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖,有效抑制病菌生长,因此,在控制病害发 生、促进植株生长,提高作物产量等方面显示出了广阔的应用前景。
[0003] 解淀粉芽孢杆菌的抑菌谱较广,代谢产物较丰富,能够产生多种抑菌物质。解淀粉 芽孢杆菌具有抑制植物病害的能力,可制成生物制剂用于植物花部、叶、枝干、根部以及果 蔬釆后病害防治上;使用解淀粉芽孢杆菌的发酵液,对农作物进行喷施、拌种、灌根等,对植 物都产生促进生长的功效。
[0004] 在生物防治领域,解淀粉芽孢杆菌应用很多。尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum) 引起的枯萎病可以被解淀粉芽孢杆菌Q12抑制(权春善等2006),菌株JK-JS3对松树线 虫具有杀灭活性,其活性物质是一种非蛋白类气体(朱丽梅等2009)。解淀粉LP-5菌株可 以显著抑制梨黑斑病菌(Alternariaalternata)的生长,活性物质是一种20.3kD的蛋白 (张宝俊等2010)。早起喷施Ba33菌株可以有效抑制烟草发生花叶病(TMV),枯斑数量明 显减少(申莉莉等2010)。在抑制真菌方面,解淀粉芽孢杆菌对大多数常见的真菌病害都有 一定的抑制作用。如水稻恶苗病(田洁萍等2010)、葡萄白腐病和小麦根腐病菌(葛平华等 2012)、香蕉枯萎病(卢娟等2013)等。此外,它还能抑制油菜核盘菌菌核的形成(陈士云等 2005)。本发明人分离的解淀粉芽孢杆菌可以防治多种土传病害与叶部病害,能起来促生防 病作用。
[0005] 虽然以芽孢杆菌为主制备的微生物农药产品不少,但总体说来,还存在包括研究 开发与生产脱节,制剂化困难,产品质量稳定性差、生产工艺落后,产品一致性不高,生产企 业规模小,应用推广难度大的问题,除些之外,目前芽孢杆菌以可湿性粉剂为主,这种剂型 虽然便于储存和运输,但在生产应用中存在很多制约因子。如施用的可湿性粉剂中大部份 以芽孢作为衡量产品中有效成分的惟一标准,若芽孢不能及时萌发,施用效果则不佳,如王 倩利用枯草芽孢杆菌TR21防治巴西蕉枯萎病时,前期试验利用TR21菌株NB发酵液灌根和叶 腋接种都能有效防治枯萎病,但是利用芽孢制备可湿性粉剂的灌根与叶腋效果却不理想, 显示了去掉发酵液后的纯芽孢可能因为萌发困难和缺少发酵液中有效成分而使防效下降。 此外,在生产实践中,随着作物的生长,需要定期不断的补充生防菌才能获得较好的防效, 但现有可湿性粉剂价格一般较高,而且可湿性粉剂的溶解需要使用大量的水,而随着植物 病害的蔓延,洁净水源也成为制约生防制剂使用的因子,与化学药剂不同的是芽孢溶解到 水中并不能直接杀死水中的病原菌,因而如果使用已被病原菌污染的水体施用生防菌,还 会促进病害的蔓延。
[0006]为了能够利于生产,运输,我们生产产品中的芽孢菌主要是以孢子的状态存在,但 其应用于作物,土壤,水体中,都需要的主要是营养态细胞,如在水产上使用芽孢杆菌制剂, 在使用前会经过活化,即使芽孢状态的芽孢杆菌转化为营养态细胞,但传统上的活化主要 是加入一些红糖,或葡萄糖,培养基之类的营养物质诱导其生长繁殖,如芽孢杆菌制剂:红 糖:水以1:1:10的比例进行"活化",但传统上的"活化"存在以下几个方面的问题: 一是高营养培养基加水后易使空气与水中的酵母菌,乳酸菌繁殖迅速,消耗培养基中 营养,迅速降低培养液中PH,抑制芽孢的萌发与生长; 二是芽孢萌发前期需要时间长,一般需要4小时,芽孢才会开始萌发,而此时,由于"活 化"液中酵母菌与乳酸菌的大量繁殖导致PH下降迅速,已经可以抑制芽孢的萌发与繁殖,从 而大大影响芽孢萌发; 三是高营养培养基中也易感染大肠杆菌,原著的植物病害菌等有害杂菌,导致施用后 效果差仍致有反作用; 四是芽孢菌用量大,效果不稳定。
[0007]然而到目前为止还没有公开过有关一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好控 制杂菌与促进芽孢快速萌发的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用的相关技术。

【发明内容】

[0008] 为了克服现有技术的缺点,本发明提供一种应用于农场现场发酵扩繁的能够较好 控制杂菌与促进芽孢快速萌发的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用,具体说是提供一种可应用 于农场现场发酵扩繁,利用纳他霉素与多粘菌素抑制病原真菌,酵母菌等真菌与大肠杆菌, 沙门氏菌等革兰氏阴性菌的生长,利用丙氨酸,果糖,天冬酰胺等芽孢萌发剂,能快速促进 芽孢的萌发,提高芽孢萌发效率,减少芽孢萌发时间,从而快速使解淀粉芽孢杆菌繁殖而 占据优势菌种,而更好的抑制其他的杂菌与有害菌。
[0009] 为了实现上述目的,本发明所采用的技术方案是:一种用于农场现场发酵的解淀 粉芽孢杆菌药肥,制备该解淀粉芽孢杆菌药肥的原料为:解淀粉芽孢杆菌菌粉50-200份,硫 酸粘杆菌素10-50份,纳他霉素1-2份,L-丙氨酸3-40份,天冬酰胺5-40份,酵母浸粉50-200 份,蛋白胨50-200份,磷酸氢二钠1-10份,氯化钠1-10份,葡萄糖20-200份,果糖20-50份,红 糖 20-200份。
[0010] 为了达到上述目的,用于农场现场发酵的解淀芽孢杆菌药肥的制备方法包含以下 步骤: 先将硫酸粘杆菌素10-50份,纳他霉素1-2份,L-丙氨酸3-40份,天冬酰胺5-40份,酵母 浸粉50-200份,蛋白胨50-200份,磷酸氢二钠1-10份,氯化钠1-10份,葡萄糖20-200份,果糖 20-50份,红糖20-200份,放置密封搅拌罐中搅拌20-30分钟,混合均匀,再将解淀粉芽孢杆 菌菌粉50-200份加入搅拌罐中搅拌均匀后,分装,抽真空包装,即得到用于现场发酵的解淀 粉芽孢杆菌药肥。
[0011] 其中,所述的一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用,包括以下步 骤:Φ此解淀粉芽孢杆菌药肥在农场现场进行发酵的方法为:先将制备的解淀粉芽孢杆菌 药肥加入其3-5倍重量的水润湿调匀,30分钟后再补足水,以达到解淀粉芽孢杆菌药肥与水 的比例为1:10至1:30的比例,调PH至8-8.2后,开始培养,前12小时每分钟通气量液气比为 1:0.6,12小时后通气量为1:1,培养温度为20-35°C,培养16-24小时后,即可得到现场发酵 的解淀粉芽孢杆菌药肥的发酵液; 通用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用是现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药 肥的发酵液在作物栽培中对土传病害,叶部病害的应用; 馨用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥的应用是现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药 肥的发酵液在作物栽培中作为底肥、追肥和叶面肥以及穴施和拌种的应用; 其中,对于土传病害如烟草青枯病,黑胫病,西瓜枯萎病,黄瓜枯萎病等,将步骤Φ制备 的发酵液稀释500-800倍后采用灌根的方法进行防治,在移栽时和发病初期用药,每次用发 酵液量为0.5-1公斤/亩; 其中,对于叶部病害如水稻稻瘟病,水稻纹枯病,草莓白粉病等,将步骤?制备的发酵 液稀释200-500倍采用喷雾的方法进行防治,在发病初期开始用药,每隔7天使用一次,共3-5次; 其中,作为底肥时,将步骤?制备的发酵液与其他有机肥与化肥配合使用,每次用发酵 液量为5-20公斤/亩; 其中,作为追肥时,将步骤您制备的发酵液稀释500-1000倍灌根,每次用发酵液量为 0.1-0.3公斤/亩; 其中,作为叶面肥,将步骤Φ制备的发酵液稀释300-800倍叶面喷施,正反叶面全部喷 湿为止,每次用发酵液量为0.3-0.8公斤/亩; 其中,用于拌种时,将步骤Φ制备的发酵液稀释200-500倍,拌种2-10小时。
[0012] 其中,所述的解淀粉芽孢杆菌菌粉的芽孢含量不低于100亿cfu/g。
[0013] 其中,所述的一种用于农场现场发酵的芽孢药肥的各组份原料的水份含量低于 5%〇
[0014] 其中,所述的解淀粉芽孢杆菌菌粉可采用现有技术,比如可湿性粉剂,普通菌粉, 水分分散剂都可,本发明提供以下方法: 取出解淀粉芽孢杆菌菌种保藏管,用LB固体培养基划平板进行复苏,37°C培养48小时。 在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中,在培养箱中37°C震荡培养24小时。种子采 用5%的接种量,接种至5L大三角瓶中,装液量为2L的LB培养基,37°C震荡培养20-28小时,检 测其菌液浓度,活菌含量超过40亿/毫升,即可作为芽孢杆
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