一种海藻寡糖复合微生物肥及其制备方法
【专利摘要】一种海藻寡糖复合微生物肥及其制备方法，涉及微生物肥料。所述海藻寡糖复合微生物肥各组分的体积百分比为：海藻寡糖溶液20％～80％、胶冻样芽孢杆菌发酵液20％～80％；其中，有效活菌数≥2亿/mL，海藻寡糖含量≥0.5g/kg，pH值为6.8～7.2。制备方法：将胶冻样芽孢杆菌用固体无氮培养基进行活化后，接种到种子培养基中，得到一级种子发酵液；将一级种子液接种至种子发酵罐中，培养得到二级种子液；将二级种子液接种到发酵培养基中，继续发酵培养后，制得胶冻样芽孢杆菌发酵液；将海藻寡糖溶液、胶冻样芽孢杆菌发酵液混合即得海藻寡糖复合微生物肥。具有改良土壤，增进肥效、调节作物生长、改善作物品质等功效。CGMCC No.399520100702
【专利说明】
一种海藻寡糖复合微生物肥及其制备方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及微生物肥料，尤其是涉及一种海藻寡糖复合微生物肥及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 2015年3月18日，中国农业部发布《到2020年化肥使用量零增长行动方案》，随着化 肥生产电费、增值税等优惠政策的取消，肥料行业正在由特殊商品向一般商品转变;氮肥、 磷肥产能过剩，化肥行业整体利润水平不高，面临着去产能化及进行结构调整的难题，这给 微生物肥料带来机会。国家保留了微生物肥料生产流通环节实行免征增值税优惠政策，这 意味着将促进微生物肥料的应用。2015年我国化肥平均利用率为35.2%，微生物肥料具有 提高化肥利用率的作用，可以满足化肥"零增长"的需要，未来微生物肥料将占肥料总量的 15 %左右，应用推广面积4亿亩以上。
[0003] 胶冻样芽孢杆菌(Bacillus Mucilaginosus)又称娃酸盐细菌，是芽孢杆菌属，其 菌落圆形、无色、透明、隆起，菌落光滑、湿润有光泽，边缘整齐。胶冻样芽孢杆菌能够通过其 菌体自身代谢产生有机酸、氨基酸、多糖、激素等物质促进植物的生长，并且能够分解含钾 矿物，释放出钾及其他应用元素，还具备溶磷和固氮功能(吴作为等，2004)，是广泛应用于 我国微生物肥料的生产菌种，在农业微生物制剂领域发挥了重要的作用。但是，由于土壤环 境的不同，特别在一些盐碱地或重金属污染等土壤，微生物往往因为耐受性不高而无法生 存，不能很好定殖于土壤，发挥其功效。
[0004] 海藻寡糖是由海藻多糖降解得到的聚合度在2~10的直链或支链化合物，广泛存 在于褐藻类、红藻类、绿藻类和蓝藻等海藻中。海藻寡糖具有提高化肥利用率(张朝霞等， 2014)、调节植物生长（Idrees et al.，2012)、提高植物抗逆性(Vera et al.，2011)、减少 植物病虫害发病率的作用，作为新型绿色环保生物肥在农业生产中起到重要作用。海藻寡 糖还能增加土壤微生物数量，促进土壤微生物群落结构的变化，将之用于微生物肥料中，对 于提高功能菌在土壤的定殖能力起到帮助作用。
[0005] 中国专利CN201410359147.X公开一种海藻寡糖生物肥的制备方法，将太平洋火色 杆菌(Flammeovirga Pacifica)H2接种入产糖培养基中，发酵后离心，收集上清液，将上清 液经过管式膜过滤后，收集滤出液，加入蛋白酶处理，即得海藻寡糖生物肥;该海藻寡糖生 物肥能明显提高土壤有效氮磷钾含量和土壤有机质含量，促进土壤中黄杆菌属的生长，但 对植物的促生效果未有体现。中国专利CN201010256317.3提供一种寡聚海藻酸肥，该寡聚 海藻酸能直接制备成植物促进剂，或辅以大量的元素和/或微量元素制成复合型海藻酸肥， 对黄瓜增产作用明显。可见海藻寡糖在改善土壤结构和土壤微生物系统，促进植物生长方 面都有很好的应用效果。
[0006] 中国专利CN201410154473.7公开一种双藻寡糖颗粒肥及其制备方法，其特点是： 双藻寡糖颗粒肥组分包括褐藻寡糖溶液与绿藻寡糖溶液混合液，同时还含尿素、硫酸铵、氯 化铵、磷酸一铵、硫酸钾、氯化钾、凹凸棒/膨润土、糠醛渣、有益菌中的至少2种组分组合;该 方法分别将褐藻碱解、绿藻酸解，然后将褐藻降解液与绿藻降解液中和，制备褐藻寡糖溶液 和绿藻寡糖溶液，混合后过胶体磨均质机，制得双藻寡糖活性溶液，然后将双藻混合液在搅 拌条件下直接加入颗粒肥生产过程中；该双藻寡糖颗粒肥中使用的海藻寡糖为褐藻寡糖和 绿藻寡糖混合液，具有抗逆防病、促根提质、增进肥效的作用。
[0007] 目前，海藻寡糖生物肥料大多复合大量元素和/或中微量元素，所用海藻寡糖的分 子量相差很大，影响了海藻寡糖作用效果。而且，多数以褐藻寡糖和绿藻寡糖为主，而红藻 寡糖，尤其是聚合度4~8的龙须菜寡糖与功能菌的结合在微生物肥料中的应用还未见相关 报道和研究。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于针对现有技术存在的上述问题，提供制备简单，可直接施于土 壤或叶面喷施，定殖土壤能力强，可有效改良土壤、增进肥效、促进植物生长、改善品质的一 种海藻寡糖复合微生物肥及其制备方法。
[0009] 所述海藻寡糖复合微生物肥各组分按体积百分比为:海藻寡糖溶液20%~80%、 胶冻样芽孢杆菌发酵液20 %~80 % ;其中海藻寡糖含量多0.5g/kg，有效活菌数多2亿/mL， pH值为6.8~7.2。
[0010] 所述胶冻样芽孢杆菌为胶冻样芽孢杆菌(Bacillus Mucilaginosus)三炬01号菌 株，已于2010年07月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址:北 京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏编号为CGMCC No.3995〇
[0011] 所述海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，包括以下步骤：
[0012] 1)将胶冻样芽孢杆菌用固体无氮培养基进行活化后，接种到种子培养基中，得到 一级种子发酵液;将一级种子液接种至种子发酵罐中，培养得到二级种子液;所述胶冻样芽 孢杆菌为胶冻样芽孢杆菌(Bacillus Mucilaginosus)三炬01号菌株，已于2010年07月02日 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.3995;
[0013] 2)将所得的二级种子液接种到发酵培养基中，继续发酵培养后，制得胶冻样芽孢 杆菌发酵液；
[0014] 3)将步骤2)收集的胶冻样芽孢杆菌发酵液与海藻寡糖溶液混合，即得海藻寡糖复 合微生物肥。
[0015] 在步骤1)中，所述固体无氮培养基的组成为蔗糖5~10g/L、磷酸氢二钾0.3~ 0.88凡、硫酸镁0.1~0.4〖凡、氯化钠0.15~0.35〖凡、碳酸| 150.5~1.2〖凡，琼脂20〖/匕灭菌 前pH值为7.0~7.5;所述活化培养的条件是于28~32 °C条件下培养48~72h;
[0016] 所述种子培养基的组成可为蔗糖5~10g/L、磷酸氢二钾0.3~0.8g/L、硫酸镁0.1 ~0.4g/L、氯化钠0.15~0.35g/L、碳酸|丐0.5~1.2g/L，灭菌前pH值为7.0~7.5。所述一级 种子培养的条件可于30~35°C，150~200rpm条件下培养24~36h;所述二级种子培养的条 件可于种子发酵罐中，30~35°C条件下，保持罐转速125~150rpm，培养24~48h。
[0017] 在步骤2)中，所述发酵培养基的组成为海藻寡糖溶液0~20mL/L、酵母膏1.0~ 1.88/1、淀粉5.0~7.58/1、豆柏粉5.0~7.(^/1、硫酸镁0.8~1.68/1、磷酸氢二钾1.0~ 1.88凡、碳酸| 155.0~10.(^凡、氯化钠0.1~0.48凡，灭菌前卩!1值为7.0~7.5;所述种子液接 种至发酵罐培养基中发酵的接种量按体积的百分比为种子液的10%;所述发酵条件可为： 转速控制在200~250rpm，通过调节转速和通气量使溶解氧控制在20% (V/V)，罐温控制在 30°C，罐压保持在0.05~0.06MPa，pH值通过10 %的氨水和10 %的盐酸控制在7.2，发酵时间 36~48h〇
[0018] 在步骤3)中，所述海藻寡糖是利用微生物直接降解龙须菜所得的聚合度为4~8的 寡糖;所述海藻寡糖溶液中海藻寡糖的质量百分浓度为4~5g/L;所述海藻寡糖溶液、步骤 2)所得的胶冻样芽孢杆菌发酵液按体积百分比可为(20%~80%) :(20%~80%)。
[0019] 所述海藻寡糖复合微生物肥，有效活菌数彡2亿/mL，海藻寡糖含量彡0.5g/kg，pH 值为6.8~7.2。
[0020] 本发明提供的一种海藻寡糖复合微生物肥由海藻寡糖溶液和胶冻样芽孢杆菌发 酵液复配而成，制备工艺简单。本发明采用的菌株为胶冻样芽孢杆菌CGMCC No. 3995，具有 解磷解钾功能，能分泌多种植物激素，促进植物生长。而海藻寡糖具有诱导植物抗逆、调节 植物生长代谢等活性，与胶冻样芽孢杆菌共同作用，能够改良土壤、增进肥效、增产提质。
[0021] 本发明具有以下有益效果：
[0022] 1、根据NY 882-2004的规定对本发明所用的功能菌进行解钾能力测定，该功能菌 含钾长石粉在培养基中，速效钾相对增加量达到25.1 %，具有较强解钾能力；
[0023] 2、根据NY/T 1847-2010的规定对本发明所用的功能菌进行解磷能力测定，该功能 菌在含有难溶性无机、有机磷培养液中，可溶性磷相对含量分别增加440mgAJP46.9mg/L， 该功能菌具有很强的解磷能力。
[0024] 3、根据NY/T 1847-2010的规定对本发明所用的功能菌进行产促进作物生长活性 物质能力测定，该功能菌能分泌植物激素，总量可达到194mg/L，具有很强的植物促生能力。 [0025] 4、本发明多用的功能菌具有极强的耐盐、耐重金属能力，在高浓度盐、高浓度镉的 固态培养基上生长良好，能适应多种土壤环境。
[0026] 5、本发明的海藻寡糖复合微生物肥具有改良土壤的作用;海藻寡糖有利于土壤有 益微生物活动，提高功能菌的定殖能力，同时能改良土壤结构，促进植物对肥料的吸收利 用。
[0027] 6、本发明的海藻寡糖复合微生物肥制备简单，对植物具有明显增产提质效果，安 全环保，具有很好的推广价值。
【附图说明】
[0028] 图1为不同施用量海藻寡糖复合微生物肥叶面喷施后土壤有效钾含量。
[0029] 图2为不同施用量海藻寡糖复合微生物肥叶面喷施后土壤有效磷含量。
[0030] 图3为不同施用量海藻寡糖复合微生物肥叶面喷施后土壤有机质含量。
[0031] 图4为不同施用量海藻寡糖复合微生物肥叶面喷施后生菜鲜重。
[0032] 在图1~4中，各标记为：对照组，即清水喷施；4mL表示实验组，每次喷施4mL稀释 800倍的海藻寡糖复合微生物肥m，共2次;6mL表示实验组，每次喷施6mL稀释800倍的海藻 寡糖复合微生物肥ΙΠ ，共2次;8mL表示实验组，每次喷施8mL稀释800倍的海藻寡糖复合微生 物肥ΙΠ ，共2次；10mL表示实验组，每次喷施10mL稀释800倍的海藻寡糖复合微生物肥ΙΠ ，共2 次。
【具体实施方式】
[0033] 为了进一步理解本发明，下面通过实施例和附图对本发明作详细说明，但本发明 并不局限于以下实施例。
[0034] 实施例1海藻寡糖复合微生物肥的制备
[0035] 1)将胶冻样芽孢杆菌用固体无氮培养基（蔗糖5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁 0. lg/L、氯化钠0.2g/L、碳酸钙0.6g/L、琼脂20g/L，蒸馏水配置，灭菌前pH值为7.0，121°C、 20min灭菌后使用）进行活化后，接种到种子培养基（10g/L、磷酸氢二钾0.8g/L、硫酸镁 0 · 4g/L、氯化钠0 · 35g/L、碳酸|丐1 · Og/L，蒸馏水配置，灭菌前pH值为7 · 2，121°C、20min灭菌 后使用）中，在30°C条件下，200rpm振荡培养24h，得到一级种子发酵液;将一级种子液接种 至种子发酵罐中，在30°C下，保持发酵罐搅拌转数150rpm，培养36h培养得到二级种子液。
[0036] 2)将步骤1)所得的二级种子液接种到发酵培养基（海藻寡糖溶液5mL/L、酵母膏 1. 〇g/L、淀粉5. Og/L、豆柏粉5. Og/L、硫酸镁0.8g/L、磷酸氢二钾1. Og/L、碳酸钙5. Og/L、氯 化钠0. lg/L，蒸馏水配置，灭菌前pH值为7.2，121°C，20min灭菌后使用）中，接种量按体积的 百分比为种子液的10%;发酵过程中，发酵罐转速控制在250rpm，通过调节转速和通气量使 溶解氧控制在20 % (V/V)，罐温控制在30°C，罐压保持在0.05~0.06MPa，pH值通过10 %的氨 水和10 %的盐酸控制在7.2，培养48h后发酵结束，制得胶冻样芽孢杆菌发酵液。
[0037] 3)将步骤2)收集的胶冻样芽孢杆菌发酵液与海藻寡糖溶液按体积百分比80%: 20%混合，即得海藻寡糖复合微生物肥I;将步骤2)收集的胶冻样芽孢杆菌发酵液与海藻寡 糖溶液按体积百分比60% :40%混合，即得海藻寡糖复合微生物肥Π ;将步骤2)收集的胶冻 样芽孢杆菌发酵液与海藻寡糖溶液按体积百分比40% :60%混合，即得海藻寡糖复合微生 物肥ΙΠ;将步骤2)收集的胶冻样芽孢杆菌发酵液与海藻寡糖溶液按体积百分比20% :80% 混合，即得海藻寡糖复合微生物肥IV。
[0038] 实施例2
[0039]试验设计7个试验组，分别为：
[0040] 阴性对照组CK:清水；
[0041 ]阳性对照组CK1:海藻寡糖溶液；
[0042]阳性对照组CK2:胶冻样芽孢杆菌发酵液；
[0043]试验组A:海藻寡糖复合微生物肥I;
[0044] 试验组B:海藻寡糖复合微生物肥Π ;
[0045] 试验组C:海藻寡糖复合微生物肥m;
[0046] 试验组D:海藻寡糖复合微生物肥IV。
[0047] 土壤过筛，去除杂物、石头等，拌匀，制成试验土样，每盆装土2kg。常规施肥，以尿 素0.7g/kg、KH2P〇4 0.5g/kg，KCl 0.085g/kg的添加量向土样添加氮磷钾肥溶液。挑选籽粒 饱满、大小一致的油菜种子用1%的次氯酸钠消毒15min，用去离子水冲洗干净，然后用去离 子水浸泡12h。将浸过水的小白菜种子播种于盆中，待发芽一周后，选择长势一致的幼苗进 行定苗，每盆5株，喷洒浇水，使得田间持水量约为60%~70%。将上述试验组海藻寡糖溶 液、胶冻样芽孢杆菌发酵液、海藻寡糖复合微生物肥分别用水稀释500倍。取10mL上述稀释 过的海藻寡糖溶液、胶冻样芽孢杆菌发酵液、海藻寡糖复合微生物肥在油菜定苗后7d进行 叶面喷施。在人工气候室培养40d，中期追肥一次。
[0048]结果如下所示：
[0049] 1)相比对照CK，不同处理组均能使土壤微生物数量、土壤有效磷、有效钾及有机质 含量有不同程度的提高，有机质含量最大提高了 22.8 % (处理B)，细菌数量最大提高了4倍 (阳性对照组CK1)，不同处理对土壤性质的影响见表1。
[0050] 表 1
[0051]
[0052] 2)相比对照CK，不同处理组均能使油菜鲜重、株高、根长、叶片数有不同程度的提 高，尤其处理D能使油菜鲜重增加54.8%，株高增加2.5%，根长增加29.3 %。而且，海藻寡糖 复合微生物肥还能增加油菜叶片数，普遍增加1~2片。不同处理对油菜产量的影响见表2。
[0053] 表 2
[0055] 实施例3
[0056] 土壤过筛，去除杂物、石头等，拌匀，制成试验土样，每盆装土2kg。常规施肥，以尿 素0.7g/kg、KH2P04 0.5g/kg，KCl 0.085g/kg的添加量向土样添加氮磷钾肥溶液。挑选籽粒 饱满、大小一致的生菜种子用1%的次氯酸钠消毒15min，用去离子水冲洗干净，然后用去离 子水浸泡12h。将浸过水的生菜种子播种于盆中，待发芽一周后，选择长势一致的幼苗进行 定苗，每盆5株，喷洒浇水，使得田间持水量约为60 %~70 %。
[0057] 将上述试验组海藻寡糖复合微生物肥用水稀释800倍。分别取4mL、6mL、8mL、10mL 上述稀释过的海藻寡糖复合微生物肥m在油菜定苗后7d进行叶面喷施，隔7d相同施用量再 进行喷施一次，共两次，以清水作为对照。在人工气候室培养40d，中期追肥一次。
[0058] 分析不同实验组的土壤成分及生菜生长情况，发现土壤中有机质含量、有效钾、有 效磷的含量及生菜的产量都有不同程度提高，具体结果见图1~4。
[0059] 实施例4
[0060]试验材料为铁观音，种植年限7年。
[0061]试验地点为福建漳州市南靖县书阳镇双峰村，试验地土壤为黄红壤，土壤有机质 19 · 4g/kg、全氮 0 · 96g/kg、碱解氮 49 · 7mg/kg、有效磷21 · 9mg/kg、速效钾76mg/kg、pH值4 · 9。 [0062]试验设4个处理。处理A海藻寡糖复合微生物肥ΙΠ +常规施肥;处理B海藻寡糖复合 微生物肥m+80 %常规施肥;处理C喷施等量清水+常规施肥;处理D喷施等量清水(不施肥）。 所述海藻寡糖复合微生物肥m中海藻寡糖多2g/kg、pH值为6.8、有效活菌数多2亿/mL。 [0063] 试验设3次重复，其中处理A和处理B两个示范片面积各30亩，其他设试验示范区面 积各1亩，样品采摘小区面积为30m2,采用随机区组排列。海藻寡糖复合微生物肥仔茶叶上 喷施方法：在夏茶芽萌发时喷施一次，15d后再喷施一次，共施2次，浓度为400倍，每次 666.7m2用海藻寡糖复合微生物肥500mL兑水200kg均匀喷施。处理C、D同期喷施等量清水。 生长期间其他管理方法一致。
[0064]于2〇15年6月14日 666.71112施茶叶配方肥0:?2〇5:1(2〇为21:6:13)751^。处理8 666.71112施茶叶配方肥0:?2〇5:1(2〇为21:6:13)6〇1^。处理厶、8于2〇15年6月14日和3〇日各喷 施海藻寡糖复合微生物肥ΙΠ 1次，使用400稀释液。处理C、D同期喷施等量清水。夏茶于2015 年8月17日采收，实测产量。
[0065] 结果如下所示：
[0066] 1)处理A茶叶叶片比处理B、C、D叶片较浓绿。处理A、B、C、D茶树平均芽头密度(个/ 0.11112)分别为64.9、63.8、60.2、46.6。处理厶、8比处理(：分别增加了4.7、3.6个/0.1111 2;处理八、 B、C、D茶树平均百芽重（1芽3叶）分别为269.38、270.(^、236.78、206.(^。处理4、8比处理(：分 别增加了 32.6g和33.3g。
[0067] 2)各小区不同处理对茶叶产量的影响见表3,处理A每666.7m2鲜茶产量比处理B、C 分别增加17.8kg和22.2kg，分别增产8.33 %、10.6 % ;按5:1折干毛茶计算，处理A没666.7m2 干毛茶产量比处理B、C分别增产3.56kg、4.44kg，分别增产8.33%和10.6%。处理B比处理C 增产2.13%，处理C比处理D增产42.4%。
[0068] 表 3
[0069]
[0070] 对试验处理小区产量方差分析(见表4)^ = 26.14冲0.01=9.78，说明处理间产量 差异达极显著水平。
[0071] 表4不同处理茶叶产量方差分析
[0073] 对试验处理小区产量进行LSD法多重比较(见表3)，结果表明：处理A与处理B、C、D 产量差异大极显著水平，处理B与处理C差异不明显，说明茶叶喷施海藻寡糖生物肥增产效 果达到极显著水平。同时，在常规施肥减少20%情况下茶叶喷施海藻寡糖复合微生物肥肥 效与常规施肥处理产量差异不显著。
[0074] 3)处理A鲜茶中茶多酚含量13.2% (以干基计）、Vc含量25.7mg/100g，处理C茶多酚 含量12.7% (以干基计）、Vc含量14. lmg/100g，处理A比C鲜茶中茶多酚含量增加0.5% (以干 基计）、Vc含量增加11.6mg/100g。茶叶喷施海藻寡糖复合微生物肥能促进鲜茶品质的提高。 [0075]以上试验验证了本发明的海藻寡糖复合微生物肥具有极显著的增产、增进肥效、 改善品质的效果。
[0076]此外，本发明各种不同实施方式中间可以任意组合。
【主权项】
1. 一种海藻寡糖复合微生物肥，其特征在于各组分按体积百分比为：海藻寡糖溶液 20%~80%、胶冻样芽孢杆菌发酵液20%~80% ;其中海藻寡糖含量彡0.5g/kg，有效活菌 数彡2亿/mL，pH值为6 · 8~7 · 2; 所述胶冻样芽孢杆菌为胶冻样芽孢杆菌(BaciIlus muci Iaginosus)三炬01号菌株，已 于2010年07月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No.3995〇2. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于包括以下步 骤： 1) 将胶冻样芽孢杆菌用固体无氮培养基进行活化后，接种到种子培养基中，得到一级 种子发酵液;将一级种子液接种至种子发酵罐中，培养得到二级种子液;所述胶冻样芽孢杆 菌为胶冻样芽孢杆菌(BaciIlus MuciIaginosus)三炬01号菌株，已于2010年07月02日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.3995; 2) 将所得的二级种子液接种到发酵培养基中，继续发酵培养后，制得胶冻样芽孢杆菌 发酵液； 3) 将步骤2)收集的胶冻样芽孢杆菌发酵液与海藻寡糖溶液混合，即得海藻寡糖复合微 生物肥。3. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述固体无氮培养基的组成为鹿糖5~10g/L、磷酸氢二钾0.3~0.8g/L、硫酸镁0.1~0.4g/ L、氯化钠0 · 15~0· 35g/L、碳酸钙0· 5~1 · 2g/L，琼脂20g/L，灭菌前pH值为7 · 0~7 · 5。4. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述活化培养的条件是于28~32 °C条件下培养48~72h。5. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述种子培养基的组成为蔗糖5~10g/L、磷酸氢二钾0.3~0.8g/L、硫酸镁0.1~0.4g/L、氯 化钠0 · 15~0 · 35g/L、碳酸钙0 · 5~1 · 2g/L，灭菌前pH值为7 · 0~7 · 5。6. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述一级种子培养的条件是于30~35°C，150~200rpm条件下培养24~36h;所述二级种子 培养的条件可于种子发酵罐中，30~35 °C条件下，保持罐转速125~150rpm，培养24~48h。7. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤2)中， 所述发酵培养基的组成为海藻寡糖溶液〇~20mL/L、酵母膏1.0~1.8g/L、淀粉5.0~7.5g/ 1-豆柏粉5.0~7.(^/1、硫酸镁0.8~1.68/1、磷酸氢二钾1.0~1.88/1、碳酸钙5.0~10.(^/ 1^、氯化钠0.1~0.48凡，灭菌前卩!1值为7.0~7.5。8. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤2)中， 所述种子液接种至发酵罐培养基中发酵的接种量按体积的百分比为种子液的10%;所述发 酵条件可为:转速控制在200~250rpm，通过调节转速和通气量使溶解氧控制在20 % (V/V)， 罐温控制在30°(：，罐压保持在0.05~0.0610^，？田直通过10%的氨水和10%的盐酸控制在 7.2,发酵时间36~48h。9. 如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤3)中， 所述海藻寡糖是利用微生物直接降解龙须菜所得的聚合度为4~8的寡糖;所述海藻寡糖溶 液中海藻寡糖的质量百分浓度为4~5g/L。10.如权利要求1所述一种海藻寡糖复合微生物肥的制备方法，其特征在于在步骤3) 中，所述海藻寡糖溶液、步骤2)所得的胶冻样芽孢杆菌发酵液按体积百分比为（20%~ 80%):(20% ~80%)。
【文档编号】C05F11/08GK105884415SQ201610249929
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年4月21日
【发明人】余劲聪, 何舒雅, 林克明, 尤越
【申请人】福建三炬生物科技股份有限公司