专利名称：银杏内酯的生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及中草药提取分离更确切地说涉及银杏内酯的生产工艺。
自60年代初科学家已对银杏内酯开始研究包括分离纯化、定出结构等基础研究。70年代中期银杏叶提取物(GBE)上市，世界各国食品及健康食品厂商都以极大的热情投入到银杏叶的开发中来，具有代表性的是用溶剂萃取方法制备银杏提取物，如德国的Schwabe,Flaschman药厂，主要为银杏干叶粗粉，60％丙酮抽提、压滤，滤液以CCl4脱脂，丙酮水层用硫酸铵饱和，用甲乙酮提取，提取液减压浓缩后配成一定浓度的乙醇溶液，加适量Pb(OH)2过滤，滤液浓缩后再以硫酸铵饱和，甲乙酮提取，提取液干燥浓缩后以乙醇精制再浓缩干燥得GBE(德国专利ED2117429、1767098)，法国的Beaufour-EPSEN制药集团，意大利的Indena等他们也都有各自的银杏叶提取物生产技术。从药理作用来看(1)银杏提取物对中枢神经赋活和早老性痴呆的防治具有特殊意义(Lancet 1992,340:1136)；(2)银杏具有独特的生理作用和治疗价值，特别是Braquet报导银杏内酯类为强血小板活化因子(PAF)拮抗剂，银杏混合内酯(代号NB 52063)即银杏内酯A∶B∶C=2∶2∶1，它为第一个进入临床试验的强血小板活化因子(PAF)拮抗剂，现已进入Ⅲ期临床试验(Drugs,1991,42(1):9；42(2):643)。银杏内酯的生产技术过去国外均采用层析方法分离，它们的质量指标为银杏内酯A∶B∶C=2∶2∶1(不含白果内酯)，银杏混合内酯主要含有银杏内酯A、B 银杏内酯A 银杏内酯B此种方法对在工业生产中会产生许多问题，质量不理想影响产品的市场供应，目前国内银杏叶提取物的生产技术主要采用大孔树脂的工艺，它的最高水平所生产的产品质量为黄酮甙≥24％，总内酯≥6％(其中白果内酯≥3％)银杏酸＜1ppm，而银杏内酯的生产方法目前采用层析方法分离对大规模生产银杏内酯带来诸多不便，且质量控制尚未找到一种理想方法。
本发明目的由于银杏内酯是有强血小板活化因子(PAF)拮抗剂，在临床主要作用益心敛肺，用于治疗咳嗽和心血管疾病，临床需求量大，而它的生产工艺尚不能适应临床需求，故寻找出一种工艺简便适合大量生产的生产工艺极为重要。
本发明是通过以下步骤实现1、银杏叶通过常规方法提取获得银杏提取物(GBE)2、从GBE生产银杏内酯a．粗提取 将粗产品用薄层层析作半定量测定，银杏内酯A和银杏内酯B的总量大于60％。
b．脱色 c．重结晶 从银杏提取物用酯溶性溶剂例乙酸乙酯、甲乙酮、氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷等作为提取溶剂，提取三次，提取液分别用NaNCO3,NaCl洗，洗涤后的提取液再用H2O洗、干燥、减压浓缩除去溶剂得残留物，再将残留物的热溶于35％-70％稀低级醇放置结晶析出(低级醇为C1-C5的醇)，过滤得粗制品，将粗制品乙醇热溶，待冷后上柱脱色，柱可以为氧化铝柱或硅胶柱或大孔树脂柱也可以为活性炭柱，通过柱脱色的溶液减压浓缩除去乙醇，浓缩物再用35-70％稀乙醇热溶(加入去离子水)得稀醇溶液，冰箱放置析出结晶，过滤，得结晶，所得之结晶再用乙醇热溶，滤膜过滤，过滤液加水，减压浓缩至一定体积，待冷放置冰箱，析出结晶，过滤，真空干燥得产品。
产品用高压液相外标法进行定量分析，采用ODSC18柱，甲醇∶水=26∶74为流动相，每分钟1ml RI(示差检测器检测)或UV 225nm检测，进样量10μl，进样浓度为约每ml 2mg，产品含银杏内酯是以银杏内酯A、B为主，基本上为A∶B=1∶1，B的含量不小于36％，A+B的总含量不小于95％。
本发明具有如下优点1、采用本生产工艺银杏内酯提取得率高；2、生产设备简单、工艺路线易操作；3、银杏内酯的成分主要是A和B而C几乎不存在；4、银杏内酯A的生物效价IC50为7.4×10-7MB的生物效价IC50为2.5×10-7M银杏内酯B最强，银杏内酯A、B混合产品生物效价比国外同类产品更佳。
以下是提供最佳实施例对本发明作进一步说明，但并非限制本发明。
实施例1取GBE(含银杏内酯6％以上)500克，以水饱和乙酸乙酯热萃取三次，每次20分钟，每次加乙酸乙酯1750ml，合并乙酸乙酯液，用500ml1％NaHCO3水溶液洗涤一次再用1％NaCl洗涤一次，考虑到NaHCO3和NaCl水溶液中可能带去内酯，继而用乙酸乙酯依次洗涤NaHCO3和NaCl水洗液，合并所有乙酸乙酯液，减压浓缩真空干燥，浓缩物用90ml 95％乙醇热溶，溶解后趁热加100ml热蒸馏水(60-70℃)，室温放置过夜，次日真空过滤此溶液，滤得的结晶以95％乙醇∶蒸馏水为9∶10溶液洗涤，真空干燥12小时，称重，粗产品TLC作半定量测定，银杏内酯A和B的总量大于60％。
脱色将粗产品转移至1000ml圆底烧瓶中，加20倍于粗品总量的95％乙醇热溶，等充分溶解后，再用95％乙醇稀释至40倍于粗品总量的体积，此溶液冷却到室温后逐渐通过100-150克Al2O3短柱，溶液通过后，柱用300ml95％乙醇洗涤，合并乙醇液，真空浓缩至干，加入10倍于粗品总量的95％乙醇热溶，溶解后边加热加入与乙醇相同体积的去离子水，在加完水时应没有固体析出。首先室温放置，然后转移至冰箱中过夜，待结晶完全析出，真空过滤(滤液仍可回收银杏内酯)，得半成品结晶。
重结晶将半成品用12倍粗品总量的95％乙醇热溶，溶解后趁热用滤膜过滤，滤液中加入4倍粗品重量的水，加完水后，加热真空浓缩，浓缩至瓶中溶液呈乳白色，停止浓缩，除去真空，继续加热至溶液成为半透明，室温放冷再移入冰箱，待结晶完全析出后，真空过滤(滤液仍可回收银杏内酯)结晶于105℃干燥1小时后即得成品。成品质量为含银杏内酯总量为≥90％其中银杏内酯A∶B=1∶1。
用由高压液相外标法进行定量分析，采用ODSC18柱，甲醇∶水=26∶74为流动相，每分钟1mlRI(示差检测器检测)或UV225nm检测，进样量10μl，进样浓度为约每ml 2mg，产品含银杏内酯是以银杏内酯A、B为主，基本上为A∶B=1∶1，B的含量不小于36％，A+B的总含量不小于95％。
实施例2取GBE(含银杏内酯6％以上)500克，用甲乙酮热萃取三次，每次20分钟，每次加甲乙酮1750ml，合并甲乙酮溶液，用500ml1％NaHCO3水溶液洗涤一次再用1％NaCl洗涤一次，洗涤液再用甲乙酮提取一次，合并全部的甲乙酮，减压浓缩，真空干燥得残留物。后面与实施例1相同。
实施例3取GBE(含银杏内酯6％以上)500克，用10％乙醇溶解，取乙醇溶液用氯仿或二氯甲烷或二氯乙烷萃取三次，合并萃取液，减压浓缩得残留物，残留物用乙醇溶解，溶液通过氧化铝柱脱色，所得的乙醇溶液减压浓缩至小体积，加入热水稀释，稀醇溶液放置析出结晶过滤得粗制品，再经重结晶纯化，重结晶与实施例1相同。
实施例4取GBE(含银杏内酯6％以上)500克，用甲醇热溶解，得甲醇溶液，溶液经氧化铝柱，得甲醇溶液，减压浓缩得残留物，用乙醇溶解得乙醇溶液，加入热水稀释所得稀乙醇溶液放置析出结晶，过滤得粗制品，再经重结晶纯化，重结晶部分与实施例1相同。
权利要求
1.一种混合银杏内酯的生产工艺包括有(1)从银杏提取物作原料以酯溶性溶剂作提取溶剂，提取液弱碱洗、浓缩，浓缩物热溶于含水低级醇放置得银杏内酯粗结晶；(2)银杏内酯粗结晶热溶于含水乙醇、稀释、溶液经柱脱色所得乙醇溶液浓缩，浓缩物稀乙醇热溶，冰箱放置结晶析出，过滤；(3)上述所得结晶稀乙醇热溶，趁热过滤，滤液加入一定量水减压浓缩至一定体积，待冷冰箱放置结晶析出。
2.根据权利要求1所述银杏内酯的生产工艺，其特征在于酯溶性溶剂为乙酸乙酯，甲乙酮，氯仿，二氯甲烷，二氯乙烷，甲醇。
3.根据权利要求1所述的银杏内酯的生产工艺，其特征在于含水乙醇浓度为35％-70％。
4.根据权利要求1所述的银杏内酯的生产工艺，其特征在于脱色柱为氧化铝柱、活性炭柱、大孔树脂柱、硅胶柱。
5.根据权利要求1所述的银杏内酯的生产工艺，其特征在于低级醇为C1-C5的醇。
全文摘要
本发明涉及银杏内酯的生产工艺,该工艺包括由银杏提取物为原料经酯溶性溶剂提取,提取液分别用弱碱,水洗,浓缩,浓缩物热溶于低级醇放置,结晶析出,粗品热溶于乙醇,经氧化铝,活性炭柱脱色等,再浓缩,浓缩物重结晶,真空干燥得产品。
文档编号C07D493/22GK1313287SQ0011198
公开日2001年9月19日 申请日期2000年3月10日 优先权日2000年3月10日
发明者殷梦龙, 陈仲良 申请人:中国科学院上海药物研究所